牡蛎小分子肽的制备方法及其应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010148182.2 (22)申请日 2020.03.05 (71)申请人 吴伟 地址 100083 北京市海淀区东升园公寓宿 舍6号楼1门402号 (72)发明人 不公告发明人 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 陆惠中田欢 (51)Int.Cl. A23J 1/04(2006.01) A23J 3/34(2006.01) A23L 5/20(2016.01) A23L 5/40(2016.01) A23L 33/18(2016.0。

2、1) (54)发明名称 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 (57)摘要 本发明属于生物技术领域， 尤其涉及一种牡 蛎小分子肽的制备方法及其应用。 该制备方法包 括以下步骤： 将牡蛎预处理后， 进行提取得到牡 蛎提取液， 将牡蛎提取液分步酶解后进行脱色去 味处理， 接着纯化处理， 得到小分子肽溶液。 本发 明提供了一种工业化生产牡蛎小分子肽的制备 方法， 以新鲜的牡蛎为原料， 经过复合蛋白酶分 步酶解， 制得口感好、 肽含量高的牡蛎小分子肽。 且本发明还发现该牡蛎小分子肽具有改善男性 性功能的作用。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 111264677 A 2020.06.12 CN。

3、 111264677 A 1.一种从牡蛎中提取小分子肽的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 将牡蛎预处理后， 进行提取得到牡蛎提取液， 将牡蛎提取液分步酶解后进行脱色去味处理， 接着纯化处理， 得 到小分子肽溶液。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述预处理步骤包括： 将牡蛎肉浸泡后进 行多次清洗直至清洗液无咸味为止。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 提取步骤包括： 加入水后， 升温至80-90， 加入清洗干净的牡蛎肉， 边搅拌边浸泡， 浸泡1-3h后升温升压至120、 0.2MPa， 恒温恒压提 取3-4小时， 得到牡蛎提取液。 4.根据权利要求1所述的方法， 。

4、其特征在于， 所述分步酶解步骤包括： 将牡蛎提取液降 温至56-58； 先加入内切蛋白酶酶解3-4h， 再加入风味蛋白酶酶解0.5-1h， 在酶解过程中 定时进行搅拌， 酶解结束后将得到的酶解液灭酶活。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述脱色去味处理包括以下步骤： 将灭酶 活后的水解液降温至40-45， 加入料液固含量10-15的活性炭， 搅拌均匀后， 静置3-4h， 脱色并去除腥味。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 纯化处理依次包括； 离心脱渣、 膜处理、 浓 缩和分离步骤， 即得到小分子肽溶液。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述方法还包括对得。

5、到的分子肽溶液进行 浓缩干燥得到小分子肽粉的步骤。 8.权利要求1-7任一项所述方法制备得到的牡蛎小分子肽。 9.根据权利要求8所述的牡蛎小分子肽在制备改善男性性功能药物中的应用。 10.根据权利要求1-7任一项所述的方法或权利要求8所述的牡蛎小分子肽在医药和食 品领域中的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111264677 A 2 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 技术领域 0001 本发明属于生物技术领域， 尤其涉及一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用。 背景技术 0002 牡蛎别名又叫生蚝， 是所有食物中含锌最丰富的。 每100g牡蛎， 不包括壳的重量， 含水87.1， 含锌71。

6、.2mg， 富含蛋白锌， 是很好的补锌食物， 要补锌可以常吃牡蛎或蛋白锌。 其属于牡蛎科、 牡蛎属、 牡蛎种在亚热带、 热带沿海都适宜蚝的养殖， 我国分布很广， 北起鸭 绿江， 南至海南岛， 沿海皆可产蚝。 蚝乃软体有壳， 依附寄生的动物， 咸淡水交界所产尤为肥 美。 0003 生物活性肽是来源于蛋白质的多功能化合物， 是可以调节生物机体的生命活动或 具有生理活性作用的一类肽的总称。 牡蛎小分子肽又是生物活性肽的重要组成部分， 含有 丰富的蛋白质、 人体必需的8种氨基酸、 牛磺酸、 维生素以及锌、 硒、 铁、 铜、 碘等微量元素； 随 着现代生物技术和医学技术的发展， 制备牡蛎活性肽的方法多种。

7、， 且牡蛎小分子肽在抗氧 化、 降血糖、 抗肿瘤、 抑制血管紧张素转化酶(ACE)活性等方面具备特殊的生理活性。 0004 如今， 欧美、 日本等发达国家已成功开发多种有关牡蛎活性肽的工业化产品， 应用 于多个领域。 但是我国对牡蛎活性肽的研究起步较晚,有关牡蛎小分子肽的工业化产品很 少， 与发达国家之间存在很大的差距。 且现有的制备牡蛎小分子肽的方法具有产量低、 生产 过程繁琐等问题。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供工业化生产牡蛎小分子肽的制备方法， 以新鲜的牡蛎为原 料， 经过复合蛋白酶分步酶解， 制得口感好、 肽含量高的牡蛎小分子肽。 且本发明还发现该 牡蛎小分子肽具有改善男性。

8、性功能的作用。 0006 具体的， 本发明第一个方面公开了一种从牡蛎中提取小分子肽的方法， 包括以下 步骤： 0007 将牡蛎预处理后， 进行提取得到牡蛎提取液， 将牡蛎提取液分步酶解后进行脱色 去味处理， 接着纯化处理， 得到小分子肽溶液。 0008 应当理解， 本发明并不限于上述步骤， 还可以包含其他额外的步骤， 而不超出本发 明的保护范围。 0009 优选的， 所述预处理步骤包括： 将牡蛎肉浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味 为止。 0010 在本发明的一些优选实施例中， 所述预处理步骤包括： 将新鲜牡蛎肉用40的温 水浸泡1h， 多次清洗牡蛎肉中的盐， 直至清洗液无咸味为止。 0011。

9、 优选的， 提取步骤包括： 加入水后， 升温至80-90， 加入清洗干净的牡蛎肉， 边搅 拌边浸泡， 浸泡1-3h后升温升压至120、 0.2MPa， 恒温恒压提取3-4小时， 得到牡蛎提取液。 0012 提取步骤之前， 无需将牡蛎肉打碎， 操作更加简便。 说明书 1/6 页 3 CN 111264677 A 3 0013 在本发明的一些优选实施例中， 所述提取步骤包括： 采用高温高压蒸煮罐提取， 加 入原料重3-4倍纯净水， 升温至80-90， 加入清洗干净后的牡蛎， 边搅拌边浸泡， 浸泡2h后 升温升压至120、 0.2MPa， 恒温恒压提取3-4小时， 提取液排入水解罐， 牡蛎渣排出， 。

10、随后续 生产合并提取， 提高利用率。 0014 优选的， 所述分步酶解步骤包括： 将牡蛎提取液降温至56-58； 先加入内切蛋白 酶酶解3-4h， 再加入风味蛋白酶酶解0.5-1h， 在酶解过程中定时进行搅拌， 酶解结束后将得 到的酶解液灭酶活。 0015 在本发明的一些优选实施例中， 牡蛎提取液排入水解罐后， 降温至56-58， 先 加入内切蛋白酶酶解3-4h， 再加入风味蛋白酶酶解0.5-1h， 在酶解过程中每隔0.5小时搅拌 10分钟， 使酶解均匀充分的进行， 酶解结束后将得到的酶解液灭酶活。 0016 在本发明的一些优选实施例中， 内切蛋白酶添加量为原料重量的0.4-0.5， 风 味蛋。

11、白酶添加量为原料重量的0.1-0.2。 0017 优选的， 所述脱色去味处理包括以下步骤： 将灭酶活后的水解液降温至40-45， 加入料液固含量10-15的活性炭， 搅拌均匀后， 静置3-4h， 脱色并去除腥味。 0018 优选的， 纯化处理依次包括； 离心脱渣、 膜处理、 浓缩和分离步骤， 即得到小分子肽 溶液。 0019 在本发明的一些优选实施例中， 离心脱渣步骤包括经脱色去味的酶解液通过平板 式上部卸料洁净吊袋离心机进行脱渣， 把酶解液中的少量料渣和活性炭进行初步过滤。 0020 在本发明的一些优选实施例中， 膜分离步骤包括： 离心脱渣液经多功能无机陶瓷 膜分离设备超滤， 滤液过滤至清液。

12、储罐。 0021 在本发明的一些优选实施例中， 双效真空节能浓缩步骤包括： 过滤液经双效真空 节能浓缩设备浓缩， 一效真空度与温度分别控制为-0.06MPa、 60-70， 二效真空度与温 度分别控制在-0.08MPa、 50-60， 以可溶性固形物含量为指标， 综合控制浓缩温度、 真空度 及供气压力， 得到浓缩液。 0022 在本发明的一些优选实施例中， 高速管式分离步骤包括： 浓缩液经管式分离机进 行二次分离， 转速为16000r/min。 0023 优选的， 所述方法还包括对得到的分子肽溶液进行浓缩干燥得到小分子肽粉的步 骤。 0024 在本发明的一些优选实施例中， 高速离心喷雾干燥步骤。

13、包括： 经过升温至85达 到灭菌效果的浓缩液， 由高速离心喷雾干燥粒机喷粉干燥， 进风温度为180-190， 出风温 度为85-90。 0025 优选的， 上述方法还包括成品包装步骤。 在本发明的一些具体实施例中， 采用食品 级包装材料， 密封包装。 0026 本发明第二个方面公开了上述方法制备得到的牡蛎小分子肽。 0027 本发明第三个方面公开了上述的牡蛎小分子肽在制备改善男性性功能药物中的 应用。 通过小鼠实验发现， 当注射的牡蛎小分子肽剂量大于0.5g/kg的时候， 小鼠的射精潜 伏期显著缩短， 射精次数明显增加。 0028 本发明第四个方面公开了上述的方法或上述的牡蛎小分子肽在医药和食。

14、品领域 中的应用。 该方法得到的小分子肽具有极大的开发利用价值。 优选的， 所述食品领域包括保 说明书 2/6 页 4 CN 111264677 A 4 健品领域。 优选的， 所述医药领域包括用于改善男性性功能的药物。 0029 在符合本领域常识的基础上， 上述各优选条件， 可任意组合， 而不超出本发明的构 思与保护范围。 0030 本发明相对于现有技术具有如下的显著优点及效果： 0031 本发明以牡蛎肉为原料， 经过多次清洗， 大大降低了牡蛎的含盐量。 经内切蛋白酶 和风味蛋白酶进行酶解得到的牡蛎小分子肽具有其独特的优点： 小分子肽类比多肽类和氨 基酸更容易被机体吸收利用， 尤其是二肽和三肽。

15、， 且小肽在体内的吸收速度大于相应游离 的氨基酸， 当小分子肽进入血液后会以更快的速度被机体的细胞组织利用， 而且小分子肽 的高渗性要低于氨基酸， 故能够提高吸收率。 且本发明发现制备得到的牡蛎小分子肽对改 善男性性功能有显著效果。 附图说明 0032 图1为本发明实施例中从牡蛎中提取小分子肽的工艺流程示意图。 具体实施方式 0033 下面结合附图和实施例对本发明的技术方案进行详细描述， 但并不因此将本发明 限制在所述的实施例范围之中。 0034 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 按照常规方法和条件， 或按照商品说 明书选择。 本发明所用试剂和原料均市售可得。 0035 实施例1 003。

16、6 本实施例公开了一种从牡蛎中提取小分子肽的方法， 其工艺流程图如图1所示， 具 体包括以下步骤： 0037 (1)原料预处理： 将牡蛎肉用40的温水浸泡1h， 多次清洗牡蛎中的盐， 直至清洗 液无咸味为止。 0038 (2)高温高压提取： 采用高温高压蒸煮罐提取， 加入原料重3倍纯净水， 升温至80- 90， 加入清洗干净的完整的牡蛎肉， 边搅拌边浸泡， 浸泡2h后升温升压至120、 0.2MPa， 恒温恒压提取3小时， 提取液排入水解罐， 牡蛎渣排出， 随后续生产合并提取。 此设备在搅拌 的条件下进行提取， 液固接触充分， 更利于物料有效成分充分溶出。 0039 (3)分步酶解： 牡蛎提取。

17、液排入水解罐后， 降温至56-58， 先加入内切蛋白酶酶 解3h， 再加入风味蛋白酶酶解0.5h， 在酶解过程中每隔0.5小时搅拌10分钟， 使酶解均匀充 分的进行， 酶解结束后， 将得到的酶解液升温至85， 灭酶活15-20min。 其中， 内切蛋白酶添 加量为原料重量的0.4， 风味蛋白酶添加量为原料重量的0.1。 0040 (4)脱色去味： 将步骤(3)得到的灭酶后的水解液降温至40-45， 加入料液固含量 15的活性炭， 搅拌均匀后， 静置3-4h， 脱色并去除腥味。 0041 (5)离心脱渣： 将脱色去味后的酶解液降温至65-70通过平板式上部卸料洁净吊 袋离心机进行脱渣， 把酶解液。

18、中的少量料渣和活性炭进行初步过滤。 此种设备适合固相颗 粒粒径在15微米以上的固液混合物， 装料、 出料方便， 通过吊袋一次性将分离后的物料卸 出， 分离脱水效果好， 以使固液最大程度分离进而提高产品收率， 并为膜分离工序提高膜分 离速度及延长膜设备使用寿命提供基础， 特别适合固液黏性高、 组织结构松散的物料。 说明书 3/6 页 5 CN 111264677 A 5 0042 (6)膜分离： 离心脱渣液经过多功能无机陶瓷膜分离设备进行超滤， 过滤温度为 50-60， 压力为0.1MPa-0.2MPa。 滤液过滤至清液储罐。 其分离过程中无需加额外助剂， 物 料无变相、 常(低)温低压操作、 。

19、能耗小， 且物料分离精度高、 滤液澄清透明， 适于分离对热敏 性以及高纯度等要求高的物质。 0043 (7)双效真空节能浓缩： 过滤液经双效真空节能浓缩设备浓缩， 一效真空度与温度 分别控制为-0.06MPa、 60-70， 二效真空度与温度分别控制在-0.08MPa、 50-60， 以可 溶性固形物含量为指标， 综合控制浓缩温度、 真空度及供气压力。 在真空条件下可降低液体 沸点， 料液在低温下即可达到浓缩， 避免高温对产品活性的影响， 适于热敏性及小分子物料 的浓缩。 此外， 浓缩过程全封闭且无泡沫产生， 其蒸发速度快、 浓缩比重大。 0044 (8)高速管式分离： 浓缩液降温至50-60。

20、后通过管式分离机， 在转速为16000r/ min下进行二次分离， 保证最后的产品中无杂质残留。 0045 (9)高速离心喷雾干燥： 经过升温至85达到灭菌效果的浓缩液， 由高速离心喷雾 干燥粒机喷粉干燥， 进风温度180-190， 出风温度： 85-90。 0046 (10)成品包装： 采用食品级包装材料， 密封包装。 0047 将得到的牡蛎小分子肽制备成饮品， 发现其口感好。 且进行其成分分析检测， 发现 得到的小分子肽成品含肽量高。 0048 实施例2 0049 本实施例公开了一种从牡蛎中提取小分子肽的方法， 具体包括以下步骤： 0050 (1)原料预处理： 将牡蛎肉用40的温水浸泡1h。

21、， 多次清洗牡蛎中的盐， 直至清洗 液无咸味为止。 0051 (2)高温高压提取： 采用高温高压蒸煮罐提取， 加入原料重4倍纯净水， 升温至80- 90， 加入清洗干净的完整的牡蛎肉， 边搅拌边浸泡， 浸泡2h后升温升压至120、 0.2MPa， 恒温恒压提取3小时， 提取液排入水解罐， 牡蛎渣排出， 随后续生产合并提取。 此设备在搅拌 的条件下进行提取， 液固接触充分， 更利于物料有效成分充分溶出。 0052 (3)分步酶解： 牡蛎提取液排入水解罐后， 降温至56-58， 先加入内切蛋白酶酶 解3h， 再加入风味蛋白酶酶解0.5h， 在酶解过程中每隔0.5小时搅拌10分钟， 使酶解均匀充 分。

22、的进行， 酶解结束后， 将得到的酶解液升温至85， 灭酶活15-20min。 其中， 内切蛋白酶添 加量为原料重量的0.5， 风味蛋白酶添加量为原料重量的0.1。 0053 (4)脱色去味： 将步骤(3)得到的灭酶后的水解液降温至40-45， 加入料液固含量 15的活性炭， 搅拌均匀后， 静置3-4h， 脱色并去除腥味。 0054 (5)离心脱渣： 将脱色去味后的酶解液降温至65-70通过平板式上部卸料洁净吊 袋离心机进行脱渣， 把酶解液中的少量料渣和活性炭进行初步过滤。 此种设备适合固相颗 粒粒径在15微米以上的固液混合物， 装料、 出料方便， 通过吊袋一次性将分离后的物料卸 出， 分离脱水。

23、效果好， 以使固液最大程度分离进而提高产品收率， 并为膜分离工序提高膜分 离速度及延长膜设备使用寿命提供基础， 特别适合固液黏性高、 组织结构松散的物料。 0055 (6)膜分离： 离心脱渣液经过多功能无机陶瓷膜分离设备进行超滤， 过滤温度为 50-60， 压力为0.1MPa-0.2MPa。 滤液过滤至清液储罐。 其分离过程中无需加额外助剂， 物 料无变相、 常(低)温低压操作、 能耗小， 且物料分离精度高、 滤液澄清透明， 适于分离对热敏 性以及高纯度等要求高的物质。 说明书 4/6 页 6 CN 111264677 A 6 0056 (7)双效真空节能浓缩： 过滤液经双效真空节能浓缩设备浓。

24、缩， 一效真空度与温度 分别控制为-0.06MPa、 60-70， 二效真空度与温度分别控制在-0.08MPa、 50-60， 以可 溶性固形物含量为指标， 综合控制浓缩温度、 真空度及供气压力。 在真空条件下可降低液体 沸点， 料液在低温下即可达到浓缩， 避免高温对产品活性的影响， 适于热敏性及小分子物料 的浓缩。 此外， 浓缩过程全封闭且无泡沫产生， 其蒸发速度快、 浓缩比重大。 0057 (8)高速管式分离： 浓缩液降温至50-60后通过管式分离机， 在转速为16000r/ min下进行二次分离， 保证最后的产品中无杂质残留。 0058 (9)高速离心喷雾干燥： 经过升温至85达到灭菌效。

25、果的浓缩液， 由高速离心喷雾 干燥粒机喷粉干燥， 进风温度180-190， 出风温度： 85-90。 0059 (10)成品包装： 采用食品级包装材料， 密封包装。 0060 实施例3 0061 本实施例研究实施例1得到的牡蛎小分子肽粉的增强性功能效果。 具体包括以下 步骤： 0062 试验用清洁级ICR小鼠， 体重1822g， 60只雄鼠， 120只雌鼠。 雄鼠随机分为6组， 10 只/组， 于SPF级动物房适应环境57d。 雌鼠于实验结束前2周进入SPF级动物房适应环境， 并于实验前3d连续皮下注射乙烯雌酚， 1mg/kg剂量给药， 使之进入动情期。 0063 牡蛎小分子肽粉对雄性小鼠交配。

26、实验的影响设计五个不同剂量组、 一个空白对照 组， 共计6组。 根据牡蛎小分子肽人体的推荐量3g/d(即0.05g/kg)， 设计五个梯度的牡蛎小 分子肽剂量， 分别为0.125g/kg、 0.25g/kg、 0.50g/kg、 1g/kg、 1.5g/kg， 相当于人体推荐量的 2.5、 5、 10、 20、 30倍量。 受试样品经口灌胃， 给予时间为6周。 实验动物每周称量体重1次； 记 录受试雄鼠对雌鼠的捕捉潜伏期(即投入雌鼠后， 雄鼠第一次捕捉雌鼠的时间间隔)、 捕捉 次数(即雄鼠捕捉雌鼠的次数)、 射精潜伏期(即放入雌鼠后， 雄鼠第一次舔阴茎的时间间 隔)、 射精次数(即雄鼠舔阴茎的。

27、次数)等性行为。 结果如下表1和表2所示。 0064 表1： 牡蛎小分子肽对雄性小鼠体重的影响 0065 组别初始体重(g)给药4周体重(g)给药6周体重(g) 空白对照组21.250.8235.652.1836.493.36 0.125g/kg21.011.0634.042.3334.793.11 0.25g/kg20.901.0136.122.3038.761.97 0.50g/kg21.011.2033.702.0837.092.08 1.0g/kg20.720.8533.972.1936.472.69 1.5g/kg21.130.7037.193.6939.223.81* 0066 表。

28、2： 牡蛎小分子肽对交配实验中小鼠性行为的影响 0067 组别捕捉潜伏期捕捉次数射精潜伏期射精次数 空白对照组445.068.085.12.60605.472.982.301.06 0.125g/kg428.868.2111.63.13*609.282.853.300.95 0.25g/kg272.660.57*12.55.58*563.883.933.101.60 0.50g/kg230.238.10*20.37.04*527.942.03*4.101.37* 1.0g/kg212.925.92*23.17.65*436.928.51*5.501.27* 1.5g/kg178.945.89*。

29、27.45.38*381.252.50*6.101.73* 说明书 5/6 页 7 CN 111264677 A 7 0068 由表1可以看出， 牡蛎小分子肽粉给予6周， 各组实验动物的体重增长无显著差异， 样品给予6周后， 高剂量组1.5g/kg剂量组小鼠的体重增加略微明显。 0069 由表2可以看出， 牡蛎小分子肽粉给予6周后， 各组实验动物分笼适应环境10min， 分别给予2只处于动情期的雌小鼠， 于黑暗、 安静环境中继续观察20min。 与空白对照组相比 较， 0.25g/kg、 0.5g/kg、 1g/kg、 1.5g/kg剂量组的捕捉潜伏期线性缩短(P0.05， P0.01)， 各。

30、 个剂量组雄小鼠对雌性小鼠的捕捉次数也显著增加(P0.05， P0.01)。 在实验观察的20min 内， 0.5g/kg、 1g/kg、 1.5g/kg剂量组的射精潜伏期显著缩短， 射精次数有明显增加， 与空白 对照组相比， 结果差异显著(P0.05， P0.01)。 而0.125g/kg、 0.25g/kg组雄小鼠的射精潜伏 期与射精次数与空白对照组无明显差异。 0070 可知， 本发明制备得到的牡蛎小分子肽未来有潜力可用于制备用于改善男性性功 能的药物， 为性功能障碍的患者带来福音。 0071 上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说明书 6/6 页 8 CN 111264677 A 8 图1 说明书附图 1/1 页 9 CN 111264677 A 9 。