白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法及其制剂和在防治稻瘟病中的应用.pdf

《白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法及其制剂和在防治稻瘟病中的应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法及其制剂和在防治稻瘟病中的应用.pdf（8页完成版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010271745.7 (22)申请日 2020.04.08 (71)申请人 哈尔滨职业技术学院 地址 150040 黑龙江省哈尔滨市香坊区哈 平路217号 (72)发明人 王磊刘贵栋张向辉 (74)专利代理机构 南京灿烂知识产权代理有限 公司 32356 代理人 赵丽 (51)Int.Cl. A01N 65/36(2009.01) A01N 25/12(2006.01) A01P 3/00(2006.01) (54)发明名称 白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取 分离方法。

2、及其制剂和在防治稻瘟病中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种白鲜皮中总挥发油和总 生物碱的联合提取分离方法， 该提取分离方法包 括： S1， 粉碎白鲜皮； S2， 提取总挥发油： 将S1所得 粉末加入多功能提取罐， 收集相对密度1.0以下 的挥发油得白鲜皮总挥发油； S3， 制备总挥发油 颗粒剂； S4， 提取总生物碱； S5， 制备总生物碱颗 粒剂； 并且本发明采用上述提取分离方法获得白 鲜皮中总挥发油和总生物碱制剂， 该制剂中总挥 发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂的重量比为 （2 3） :1； 该制剂对稻瘟病菌具有明显的抑制作用， 并且其抑菌效果与三环唑相当。 本发明筛选得到 具有防治稻瘟病的。

3、中药， 从而为稻瘟病的中药治 疗提供理论依据。 权利要求书1页 说明书6页 CN 111264569 A 2020.06.12 CN 111264569 A 1.白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征在于， 包括如下步骤： S1， 粉碎： 取白鲜皮适量， 粉碎， 过6080目筛； S2， 提取总挥发油： 将S1所得粉末加入多功能提取罐， 加入粉末重量1013倍量的水， 浸泡过夜使粉末充分溶胀， 然后在8090水蒸气蒸馏提取36h， 收集相对密度1.0以下 的挥发油得白鲜皮总挥发油； S3， 将S2所得白鲜皮总挥发油与医药学上可接受的药用辅料混合制成总挥发油颗粒 剂， 其中， 每。

4、100g总挥发油颗粒剂可释放510mL白鲜皮总挥发油； S4， 提取总生物碱： 排出多功能提取罐中的水液， 向药渣中加入5070乙醇热回流 提取23次， 每次5070乙醇的用量为粉末重量的58倍量， 每次热回流提取的时间 为12h， 合并提取液， 浓缩， 得浓缩浸膏， 将上述浓缩浸膏加水混悬后， 加水量为浓缩浸膏 重量的46倍量， 加稀酸将pH值调节至24， 超声助溶， 超声完毕后放置过夜， 取上清液过 滤， 用碱溶液将上述滤液pH调至910后， 用中等极性有机溶剂萃取38次， 合并中等极性 有机溶剂， 浓缩后得到白鲜皮总生物碱； S5， 将S4所得白鲜皮总生物碱与医药学上可接受的药用辅料混合。

5、制成总生物碱颗粒 剂， 其中， 每100g总生物碱颗粒剂可释放1020g白鲜皮总生物碱； S6， 混合总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂， 其中， 总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂 的重量比为(23):1。 2.根据权利要求1所述的白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征 在于， 所述中等极性有机溶剂包括二氯甲烷、 氯仿、 乙酸乙酯或者丙酮。 3.根据权利要求1所述的白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征 在于， 超声温度控制在5055， 超声频率为2040kHz， 超声时间为至少4h。 4.根据权利要求1所述的白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征 在。

6、于， 所述稀酸为0.52的硫酸或盐酸溶液。 5.根据权利要求1所述的白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征 在于， 所述碱溶液包括1020的NaOH或者KOH溶液。 6.根据权利要求1所述的白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征 在于， 所述医药学上可接受的药用辅料包括填充剂、 粘合剂、 润湿剂、 崩解剂和润滑剂。 7.根据权利要求6所述的白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 其特征 在于， 所述填充剂包括淀粉、 乳糖、 糊精、 糖粉、 蔗糖、 微晶纤维素中的任意一种； 所述粘合剂 包括聚维酮、 乙基纤维素、 羟丙基纤维素、 糊精中的任意一种； 润湿剂。

7、包括蒸馏水或者乙醇 中的任意一种； 崩解剂包括羧甲基淀粉钠、 微晶纤维素、 枸橼酸或者聚山梨酯80中的任意一 种； 所述润滑剂包括聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠、 滑石粉、 微粉硅胶、 硬脂酸中的任意一种或 几种。 8.根据权利要求17任一项所述的方法制得的白鲜皮中总挥发油和总生物碱制剂。 9.根据权利要求8所述的制剂在防治稻瘟病中的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111264569 A 2 白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法及其制剂 和在防治稻瘟病中的应用 技术领域 0001 本发明涉及一种白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法及其制剂和 应用， 属于中药技术领域。 背。

8、景技术 0002 白鲜皮， 别名： 白藓皮、 八股牛、 山牡丹、 羊鲜草， 为芸香科多年生草本植物白鲜和 狭叶白鲜的根皮。 主产于辽宁、 河北、 四川、 江苏等地。 主要成分： 白鲜内酯、 黄柏酮酸、 胡芦 巴碱、 胆碱、 白鲜碱、 黄柏酮、 崖椒碱、 前黄柏酮、 异斑沸林草碱、 柠檬苦素、 黄柏酮、 梣酮、 菜 油甾醇、 梣皮酮以及谷甾醇、 酸性物质和皂甙等。 0003 功能主治： 1， 清热解毒， 除湿止痒： 用于湿热疮疹， 多脓或黄水淋漓， 肌肤湿烂， 皮 肤瘙痒及风疹疥癣。 2， 清热解毒除湿： 用于治湿热黄疸及湿热痹证。 0004 由于白鲜皮为芸香科植物， 芸香科植物中普遍含有大量挥。

9、发油，本草钢目 指出 “鲜者， 羊之气也。 此草根白色， 作羊腹气， 其子累累如椒” ， 这也说明了白鲜皮具有特殊气 味， 这种特殊气味也说明了白鲜皮中含有大量挥发油。 0005 而目前对白鲜皮的研究方向主要为其柠檬苦素类成分(如柠檬苦素、 黄柏酮、 梣 酮、 梣皮酮和前黄柏酮等)和生物碱类成分(如白鲜碱、 茵芋碱、 白鲜明碱、 r-崖椒碱和前茵 芋碱等)， 而未对其挥发油类成分进行深入研究。 发明内容 0006 本发明所要解决的技术问题是， 提供一种白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提 取分离方法， 该法可制得白鲜皮中总挥发油和总生物碱制剂， 该制剂具有显著的抗稻瘟病 活性。 0007 为解决。

10、上述技术问题， 本发明采用的技术方案为： 0008 本发明公开了一种白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 包括如下 步骤： 0009 S1， 粉碎： 取白鲜皮适量， 粉碎， 过6080目筛； 0010 S2， 提取总挥发油： 将S1所得粉末加入多功能提取罐， 加入粉末重量1013 倍量 的水， 浸泡过夜使粉末充分溶胀， 然后在8090水蒸气蒸馏提取36h， 收集相对密度1.0 以下的挥发油得白鲜皮总挥发油； 0011 S3， 将S2所得白鲜皮总挥发油与医药学上可接受的药用辅料混合制成总挥发油颗 粒剂， 其中， 每100g总挥发油颗粒剂可释放510mL白鲜皮总挥发油； 0012 S4，。

11、 提取总生物碱： 排出多功能提取罐中的水液， 向药渣中加入5070乙醇热 回流提取23次， 每次5070乙醇的用量为粉末重量的58倍量， 每次热回流提取的 时间为12h， 合并提取液， 浓缩， 得浓缩浸膏， 将上述浓缩浸膏加水混悬后， 加水量为浓缩 浸膏重量的46倍量， 加稀酸将pH值调节至24， 超声助溶， 超声完毕后放置过夜， 取上清 说明书 1/6 页 3 CN 111264569 A 3 液过滤， 用碱溶液将上述滤液pH调至910后， 用中等极性有机溶剂萃取38次， 合并中等 极性有机溶剂， 浓缩后得到白鲜皮总生物碱； 0013 S5， 将S4所得白鲜皮总生物碱与医药学上可接受的药用辅。

12、料混合制成总生物碱颗 粒剂， 其中， 每100g总生物碱颗粒剂可释放1020g白鲜皮总生物碱； 0014 S6， 混合总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂， 其中， 总挥发油颗粒剂和总生物碱颗 粒剂的重量比为(23):1。 0015 优选地， 所述中等极性有机溶剂包括二氯甲烷、 氯仿、 乙酸乙酯或者丙酮。 0016 优选地， 超声温度控制在5055， 超声频率为2040kHz， 超声时间为至少4h。 0017 优选地， 所述稀酸为0.52的硫酸或盐酸溶液。 0018 优选地， 所述碱溶液包括1020的NaOH或者KOH溶液。 0019 优选地， 所述医药学上可接受的药用辅料包括填充剂、 粘合剂、 润。

13、湿剂、 崩解剂和 润滑剂。 0020 优选地， 所述填充剂包括淀粉、 乳糖、 糊精、 糖粉、 蔗糖、 微晶纤维素中的任意一种。 0021 优选地， 所述粘合剂包括聚维酮、 乙基纤维素、 羟丙基纤维素、 糊精中的任意一种。 0022 优选地， 润湿剂包括蒸馏水或者乙醇中的任意一种。 0023 优选地， 崩解剂包括羧甲基淀粉钠、 微晶纤维素、 枸橼酸或者聚山梨酯80 中的任 意一种。 0024 优选地， 所述润滑剂包括聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠、 滑石粉、 微粉硅胶、 硬脂酸中 的任意一种或几种。 0025 本发明还公开了白鲜皮中总挥发油和总生物碱制剂， 该制剂为挥发油颗粒剂和总 生物碱颗粒剂的混。

14、合物。 0026 本发明还公开了上述制剂在防治稻瘟病中的应用。 0027 稻瘟病又名稻热病、 火烧瘟、 磕头瘟， 是世界性真菌病害， 黑龙江省是水稻种植大 省， 曾经， 黑龙江省的稻瘟病发病面积为12.83万公顷， 约占种植面积的20， 全省稻谷损失 达4.3万吨。 0028 现有的抗稻瘟病的防治方法一般为药剂防治， 具体方法为： 水稻9.19.5 叶期 (11叶品种)是防治水稻叶瘟的最佳时期， 孕穗末期和齐穗期是防治穗茎瘟的最佳时期， 枝 梗瘟和粒瘟的最佳防治时期是水稻抽穗后15天20天， 选用2加收米(春日霉素)液剂80 100毫升/亩， 或75戊唑醇肟菌酯水分散粒剂1520克/亩， 或2。

15、5咪鲜胺乳油100毫 升/亩， 或40稻瘟灵乳油100毫升/亩， 或20稻瘟酰胺悬浮剂50毫升/亩， 或75三环唑可 湿性粉剂25克/ 亩， 或2加收米液剂80毫升/亩和25咪鲜胺乳油80毫升/亩混配进行喷 雾。 0029 上述药剂均为化学药物， 而水稻植株上的真菌病害易对化学药物产生耐药性、 从 而数次喷雾后水稻植株上的病斑经常未见好转， 并且化学药物具有易残留等问题。 故本发 明筛选具有抗稻瘟病的中药， 从而为稻瘟病的中药治疗提供理论依据。 本发明的有益效果 是： 0030 本发明的供试品溶液对稻瘟病菌具有一定的抑制作用， 其中， 尤其是制剂 2:1和制剂3:1对稻瘟病菌具有明显的抑制作用。

16、， 并且其抑菌效果与三环唑相当。 说明书 2/6 页 4 CN 111264569 A 4 具体实施方式 0031 下面对本发明作更进一步的说明。 0032 实施例1： 0033 本实施例公开了白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 包括如下步 骤： 0034 S1， 粉碎： 取白鲜皮适量， 粉碎， 过60目筛； 0035 S2， 提取总挥发油： 将S1所得粉末加入多功能提取罐， 加入粉末重量10 倍量的水， 浸泡过夜使粉末充分溶胀， 然后在80水蒸气蒸馏提取3h， 收集相对密度1.0以下的挥发油 得白鲜皮总挥发油； 0036 S3， 将S2所得白鲜皮总挥发油与医药学上可接受的药用辅料。

17、混合制成总挥发油颗 粒剂， 其中， 每100g总挥发油颗粒剂可释放5mL白鲜皮总挥发油； 0037 S4， 提取总生物碱： 排出多功能提取罐中的水液， 向药渣中加入50乙醇热回流提 取2次， 每次50乙醇的用量为粉末重量的5倍量， 每次热回流提取的时间为1h， 合并提取 液， 浓缩， 得浓缩浸膏， 将上述浓缩浸膏加水混悬后， 加水量为浓缩浸膏重量的4倍量， 加 0.5硫酸溶液将pH值调节至2， 超声助溶， 超声温度控制在50， 超声频率为20kHz， 超声时 间为4h， 超声完毕后放置过夜， 取上清液过滤， 用10的NaOH溶液将上述滤液pH调至9后， 用 二氯甲烷萃取3次， 合并二氯甲烷萃取。

18、液， 浓缩后得到白鲜皮总生物碱； 0038 S5， 将S4所得白鲜皮总生物碱与医药学上可接受的药用辅料混合制成总生物碱颗 粒剂， 其中， 每100g总生物碱颗粒剂可释放10g白鲜皮总生物碱； 0039 S6， 混合总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂， 其中， 总挥发油颗粒剂和总生物碱颗 粒剂的重量比为2:1。 0040 所述医药学上可接受的药用辅料包括填充剂、 粘合剂、 润湿剂、 崩解剂和润滑剂。 0041 所述填充剂包括淀粉、 乳糖、 糊精、 糖粉、 蔗糖、 微晶纤维素中的任意一种； 所述粘 合剂包括聚维酮、 乙基纤维素、 羟丙基纤维素、 糊精中的任意一种； 润湿剂包括蒸馏水或者 乙醇中的任意一。

19、种； 崩解剂包括羧甲基淀粉钠、 微晶纤维素、 枸橼酸或者聚山梨酯80中的任 意一种； 所述润滑剂包括聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠、 滑石粉、 微粉硅胶、 硬脂酸中的任意一 种或几种。 0042 本实施例还公开了上述S6中混合的总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂即为白鲜 皮中总挥发油和总生物碱制剂。 0043 本实施例还公开了上述制剂在防治稻瘟病中的应用。 0044 本实施例防治稻瘟病的试验如下： 0045 1试验材料与设备 0046 1.1试验材料： 0047 总挥发油颗粒剂； 0048 总生物碱颗粒剂； 0049 本实施例中的总挥发油和总生物碱制剂(简称制剂2:1)； 0050 总挥发油颗粒剂和总。

20、生物碱颗粒剂1:1的混合物(简称制剂1:1)； 0051 总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂4:1的混合物(简称制剂4:1)； 0052 总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂3:1的混合物(简称制剂3:1)。 说明书 3/6 页 5 CN 111264569 A 5 0053 1.2供试菌株： 采用震落分离方法， 从稻瘟病植株中分离稻瘟病菌。 0054 2方法 0055 2.1供试品溶液的制备： 取上述试验材料， 备用。 0056 2.2配制CPDA培养基(固体培养基)， CPDA培养基的制法为： 称取琼脂40g， 马铃薯 400g， 葡萄糖40g， KH2PO46g， MgSO43g， 柠檬酸0.2g。

21、， 维生素B120mg， 溶解于1000mL蒸馏水中， 121高压灭菌20min， 冷至5060， 备用。 0057 2.3菌种的活化： 0058 将上述CPDA培养基分装于试管中， 每管均5mL， 121高压灭菌15min 后取出并倾 斜放置， 自然冷却凝固成斜面； 再于无菌条件下用接种针于稻瘟病菌斜面挑取菌种， 划线于 上述晾好的斜面上， 再于培养箱中37活化48h， 即为供试菌， 置4冰箱保存备用。 0059 2.4菌悬液的制备： 0060 取上述活化好的供试菌， 接种于200mL液体培养基中， 于37、 150rpm 摇床培养 48h至菌液浓度均匀， 再将浓度均匀的菌悬液与45的CPD。

22、A培养基(固体培养基)以1:50的 体积比混合均匀， 即得菌悬液。 0061 液体培养基的制法为： 称取马铃薯400g， 葡萄糖40g， KH2PO46g， MgSO43g， 柠檬酸 0.2g， 维生素B120mg， 溶解于1000mL蒸馏水中， 121高压灭菌20min， 冷至5060， 备用。 0062 2.5对照药品溶液、 供试品溶液的制备 0063 2.5.1阳性对照药品为： 三环唑， 用甲醇溶解三环唑， 配制成2048 g/mL 的储备液， 采用2倍稀释法稀释储备液， 得到一系列浓度对照溶液， 即 1024 g/mL， 512 g/mL， 256 g/ mL， 128 g/mL， 6。

23、4 g/mL， 32 g/mL， 16 g/mL， 8 g/mL， 4 g/mL， 2 g/mL， 1 g/mL的三环唑药液， 放入离心管架中， 置4冰箱保存备用。 0064 2.5.2将各供试品溶液分别以甲醇配制成4096 g/mL的药液， 高压灭菌后分 别采用2倍稀释法稀释， 得一系列浓度供试品溶液， 即2048 g/mL， 1024 g/mL， 512 g/mL， 256 g/mL， 128 g/mL， 64 g/mL， 32 g/mL， 16 g/mL， 8 g/mL， 4 g/mL； 0065 2.6MIC的测定 0066 2.6.1将对照药品溶液、 供试品溶液及96孔板放置于超净工。

24、作台上， 紫外灯照射 30min。 0067 2.6.2移取100 L菌悬液加到96孔板中。 0068 2.6.3分别移取20 L对照药品溶液、 供试品溶液加到96孔板中， 每个浓度设两个平 行， 即未加供试品溶液只含菌悬液的为阴性对照， 只含培养基的为空白对照。 0069 2.6.4将96孔板放置于37培养箱中培养48h， 肉眼观察没有稻瘟病菌生长的最小 的供试品溶液浓度即为MIC值。 0070 3结果 0071 表1各供试品溶液以及对照药品溶液的MIC值( g/mL) 说明书 4/6 页 6 CN 111264569 A 6 0072 0073 上述试验结果表明， 本实施例的供试品溶液对稻。

25、瘟病菌均具有一定的抑制 作用， 其中， 尤其是制剂2:1和制剂3:1对稻瘟病菌具有明显的抑制作用， 并且其抑菌效果与 三环唑相当。 0074 实施例2： 0075 本实施例提供了一种白鲜皮中总挥发油和总生物碱的联合提取分离方法， 包括如 下步骤： 0076 S1， 粉碎： 取白鲜皮适量， 粉碎， 过80目筛； 0077 S2， 提取总挥发油： 将S1所得粉末加入多功能提取罐， 加入粉末重量13 倍量的水， 浸泡过夜使粉末充分溶胀， 然后在90水蒸气蒸馏提取6h， 收集相对密度1.0以下的挥发油 得白鲜皮总挥发油； 0078 S3， 将S2所得白鲜皮总挥发油与医药学上可接受的药用辅料混合制成总挥。

26、发油颗 粒剂， 其中， 每100g总挥发油颗粒剂可释放10mL白鲜皮总挥发油； 0079 S4， 提取总生物碱： 排出多功能提取罐中的水液， 向药渣中加入70乙醇热回流提 取3次， 每次70乙醇的用量为粉末重量的8倍量， 每次热回流提取的时间为2h， 合并提取 液， 浓缩， 得浓缩浸膏， 将上述浓缩浸膏加水混悬后， 加水量为浓缩浸膏重量的6倍量， 加2 的盐酸溶液将pH值调节至4， 超声助溶， 超声温度控制在55， 超声频率为40kHz， 超声时间 为6h， 超声完毕后放置过夜， 取上清液过滤， 用20的KOH溶液将上述滤液pH调至10后， 用丙 酮萃取8次， 合并丙酮萃取液， 浓缩后得到白鲜。

27、皮总生物碱； 0080 S5， 将S4所得白鲜皮总生物碱与医药学上可接受的药用辅料混合制成总生物碱颗 粒剂， 其中， 每100g总生物碱颗粒剂可释放20g白鲜皮总生物碱； 0081 S6， 混合总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂， 其中， 总挥发油颗粒剂和总生物碱颗 粒剂的重量比为3:1。 0082 所述医药学上可接受的药用辅料包括填充剂、 粘合剂、 润湿剂、 崩解剂和润滑剂。 0083 所述填充剂包括淀粉、 乳糖、 糊精、 糖粉、 蔗糖、 微晶纤维素中的任意一种； 所述粘 合剂包括聚维酮、 乙基纤维素、 羟丙基纤维素、 糊精中的任意一种； 润湿剂包括蒸馏水或者 乙醇中的任意一种； 崩解剂包括羧甲。

28、基淀粉钠、 微晶纤维素、 枸橼酸或者聚山梨酯80中的任 意一种； 所述润滑剂包括聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠、 滑石粉、 微粉硅胶、 硬脂酸中的任意一 说明书 5/6 页 7 CN 111264569 A 7 种或几种。 0084 本实施例还提供了上述总挥发油颗粒剂和总生物碱颗粒剂的混合物即为白鲜皮 中总挥发油和总生物碱制剂。 0085 本实施例还提供了上述制剂在防治稻瘟病中的应用。 0086 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出： 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。 说明书 6/6 页 8 CN 111264569 A 8 。