白地霉在饲料制备中的应用、免疫增强剂、饲料及其制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010078161.8 (22)申请日 2020.01.22 (71)申请人 中国科学院水生生物研究所 地址 430072 湖北省武汉市武昌区东湖南 路7号 (72)发明人 刘昊昆罗媉鹄达金俊琰 解绶启朱晓鸣韩冬杨云霞 聂光汉 (74)专利代理机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通合伙) 11463 代理人 付兴奇 (51)Int.Cl. A23K 10/18(2016.01) A23K 20/163(2016.01) A23K 50/80(2016.01) A23K。

2、 50/75(2016.01) C12N 1/14(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 白地霉在饲料制备中的应用、 免疫增强剂、 饲料及其制备方法 (57)摘要 白地霉在饲料制备中的应用、 免疫增强剂、 饲料及其制备方法， 涉及饲料领域。 本申请提供 了白地霉作为促进宿主生长、 提高免疫力、 提高 代谢能力及提高抗病力的益生菌在饲料制备中 应用， 利用该性质， 制备添加有白地霉免疫增强 剂和饲料， 以预防或抑制动物疾病的爆发， 提高 抗病能力， 且使用后无化学残留， 更为安全有效。 权利要求书1页 说明书10页 附图4页 CN 111280299 A 2。

3、020.06.16 CN 111280299 A 1.白地霉作为促进宿主生长、 提高免疫力、 提高代谢能力或提高抗病力的益生菌在饲 料制备中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述白地霉保藏于湖北省工业微生物菌种 保藏与研究中心， 保藏编号HBCICC71016。 3.一种免疫增强剂， 其特征在于， 包括白地霉， 所述白地霉保藏于湖北省工业微生物菌 种保藏与研究中心， 保藏编号HBCICC71016。 4.根据权利要求3所述的免疫增强剂， 其特征在于， 所述白地霉的生产方法包括： 将所述白地霉的种子接种于灭菌后的白地霉培养基， 调节接种后的所述白地霉培养基 的pH至5.3-。

4、5.8后， 在26-30的条件下进行培养， 至接种后的所述白地霉培养基的pH升至 6-6.3时停止培养。 5.根据权利要求4所述的免疫增强剂， 其特征在于， 所述白地霉培养基包括： 1.8-2.2 w/v的葡萄糖、 0.8-1.2w/v的酵母膏、 0.8-1.2w/v的蛋白胨以及0.01-0.037v/v的消 泡剂； 可选地， 所述消泡剂包括纯聚醚消泡剂。 6.根据权利要求3所述的免疫增强剂， 其特征在于， 所述免疫增强剂还包括寡糖； 可选地， 所述寡糖包括低聚果糖。 7.一种饲料， 其特征在于， 包括权利要求1-2任一项所述的应用中的白地霉和/或权利 要求3所述的免疫增强剂， 其中， 所述白。

5、地霉在所述饲料中的含量不低于106CFU/kg； 可选地， 所述白地霉在所述饲料中的含量为106CFU/kg-1011CFU/kg； 可选地， 所述白地霉在所述饲料中的含量为106CFU/kg-108CFU/kg； 可选地， 所述白地霉在所述饲料中的含量为106CFU/kg。 8.根据权利要求7所述的饲料， 其特征在于， 所述免疫增强剂包括寡糖， 所述寡糖在所 述饲料中的含量为1.5-6g/kg。 9.根据权利要求7所述的饲料， 其特征在于， 所述饲料为畜牧饲料、 家禽饲料或水产动 物饲料； 可选地， 所述饲料为鱼饲料。 10.如权利要求7-9任意一项所述的饲料的制备方法， 其特征在于， 所述。

6、饲料包括基础 日粮； 所述制备方法包括： 将所述基础日粮与所述免疫增强剂混合和/或将所述基础日粮与 所述白地霉混合， 造粒。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111280299 A 2 白地霉在饲料制备中的应用、 免疫增强剂、 饲料及其制备方法 技术领域 0001 本申请涉及饲料领域， 具体而言， 涉及一种白地霉在饲料制备中的应用、 免疫增强 剂、 饲料及其制备方法。 背景技术 0002 水产养殖过程中不可避免会出现水产动物的疾病爆发， 常用的抑制或预防疾病爆 发的方式为疫苗接种、 抗生素、 化学消毒剂以及免疫增强剂。 0003 其中， 抗生素在水产养殖中的应用促进了水产养殖业的发展， 但抗。

7、生素在水产品 中的残留、 对环境的破坏以及耐药菌的出现和抗生素通过食物链传递给人类， 这些问题已 成为公众关心的热点。 抗生素导致的细菌耐药性已成为 “当今世界面临的最紧迫的公共卫 生问题之一” 。 疫苗接种是预防水产动物疾病最直接有效的方法， 由于免疫反应的特异性， 一种疫苗只能特异性地预防相应的某种疾病， 同时疫苗的注射耗时耗力， 且如操作不甚可 能会引起水产动物的应激反应， 造成一定的死亡率， 所以疫苗注射的实际用处比较有限。 化 学消毒剂一方面在大水体中的作用效果有限， 同时也会对养殖动物造成急性应激， 如果选 择不当会造成严重的化学物质残留影响消费者的食品安全。 0004 免疫增强剂。

8、例如益生菌， 有效解决上述问题， 其中益生菌(Probiotics)一般被认 为是食入后对宿主(如动物或人类)有正面效益的活性微生物， 其具有在调控养殖用水、 促 进生长、 提高免疫力、 调节肠道菌群和抑制微生物生长等多种作用， 益生菌在水产领域得到 了较为广泛的应用。 但是常用的益生菌主要为细菌， 包括枯草芽孢杆菌、 丁酸梭菌和粪肠球 菌等， 真菌中一般只有酵母作为益生菌， 实际目前可用的益生菌的种类较少。 0005 基于上述问题， 特此提出本申请。 发明内容 0006 本申请提供一种本申请实施例提供白地霉在饲料制备中的应用、 免疫增强剂、 饲 料及其制备方法， 以改善上述技术问题。 000。

9、7 本申请第一方面实施例提供了白地霉作为促进宿主生长、 提高免疫力、 提高代谢 能力或提高抗病力的益生菌在饲料制备中应用。 0008 本申请第二方面实施例的一种免疫增强剂， 其包括作为益生菌的白地霉， 白地霉 保藏于湖北省工业微生物菌种保藏与研究中心， 保藏编号HBCICC71016。 0009 通过白地霉的添加， 促进宿主生长、 提高免疫力、 提高代谢能力及提高抗病力。 0010 本申请第三方面实施例的一种饲料， 其日粮包括免疫增强剂和/或白地霉， 白地霉 在饲料中的含量不低于106CFU/kg。 0011 根据本申请第三方面实施例的饲料， 利用白地霉作为益生菌能够有效促进宿主生 长、 提高。

10、免疫力、 提高代谢能力及提高抗病力的特点， 将其与基础日粮混合， 通过调节动物 的免疫以及抗病能力等， 进而预防并解决动物的疾病的爆发， 且使用后无化学残留， 更为安 全有效。 说明书 1/10 页 3 CN 111280299 A 3 0012 本申请第四方面实施例的提供了本申请第三方面实施例提供的饲料的制备方法， 饲料包括基础日粮， 制备方法包括将基础日粮与本申请第二方面提供的免疫增强剂混合 和/或将所述基础日粮与本申请第一方面提供的白地霉混合， 造粒。 0013 根据本申请第四方面实施例的饲料的制备方法， 操作简单， 同时有效保证白地霉 的活性， 能够使其被食入后对宿主有正面效益。 附图。

11、说明 0014 为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案， 下面将对实施例中所需要使用的附 图作简单地介绍， 应当理解， 以下附图仅示出了本申请的某些实施例， 因此不应被看作是对 范围的限定， 对于本领域普通技术人员来讲， 在不付出创造性劳动的前提下， 还可以根据这 些附图获得其他相关的附图。 0015 图1为本申请采用的白地霉的菌落照片； 0016 图2为本申请采用的白地霉不同位置的菌体形态照片； 0017 图3为试验例1异育银鲫肝脏中免疫相关基因(IL-I 、 TNF- 、 HSP70、 TLR-2)在攻毒 后的表达量； 0018 图4为试验组1异育银鲫的呼吸爆发活力(RBA)、 免疫球蛋白。

12、M(IgM)含量和溶菌酶 活力(P0.05)的示意图； 0019 图5为异育银鲫的累积存活率示意图； 0020 图6为异育银鲫肝脏中SOD、 CAT、 GR和MDA的在攻毒前后的表达量示意图； 0021 图7为异育银鲫肝脏中血清溶菌酶活力和IgM在攻毒前后的含量示意图。 具体实施方式 0022 为使本申请实施例的目的、 技术方案和优点更加清楚， 下面将对本申请实施例中 的技术方案进行清楚、 完整地描述。 实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造商建 议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通过市售购买获得的常规产 品。 0023 在本申请中， 术语 “第一” 、“第二”。

13、 等仅用于区分描述， 而不能理解为指示或暗示相 对重要性。 0024 白地霉菌体蛋白营养价值高， 可作为蛋白质的来源供食用及饲料用， 也可用于提 取核酸。 白地霉应用于发酵工业和食品加工业等的有机废水等， 通过发酵作用生产药用、 食 用或饲用单细胞蛋白。 0025 也即是， 现有的白地霉添加在饲料中， 是作为蛋白质的直接提供者以及用于发酵 饲料以产生蛋白质的作用。 0026 下面对本申请实施例的白地霉在饲料中的应用、 饲料及其制备方法进行具体说 明。 0027 需要说明的是， 本申请(包括本申请试验例)涉及的白地霉保藏于湖北省工业微生 物菌种保藏与研究中心， 保藏编号HBCICC71016， 。

14、其可以直接购买于湖北省工业微生物菌种 保藏与研究中心。 0028 其中， 本申请涉及的白地霉在麦芽汁琼脂培养基上生长的菌落照片如图1所示， 白 说明书 2/10 页 4 CN 111280299 A 4 地霉的菌落为类似酵母的奶白色的菌落， 且表面呈粉末状。 本申请涉及的白地霉的菌体形 态如图2所示， 菌丝无色， 分支， 无隔， 产生无色光滑的圆柱状分生节孢子。 0029 可选地， 本申请提供了上述的白地霉的生产方法包括： 将白地霉的种子接种于灭 菌后的白地霉培养基， 调节接种后的白地霉培养基的pH至5.3-5.8后， 在26-30的条件下 进行培养， 至接种后的白地霉培养基的pH升至6-6.。

15、3时停止培养。 0030 通过上述方式， 可批量化生产获得本申请所需的白地霉。 0031 其中， 由于培养期间起泡较多， 因此， 可选地， 白地霉培养基包括： 1.8-2.2w/v的 葡萄糖、 0.8-1.2w/v的酵母膏、 0.8-1.2w/v的蛋白胨以及0.01-0.037v/v的消泡剂。 0032 其中， 消泡剂包括矿物油类、 有机硅类和聚醚类， 本申请中， 可选地， 消泡剂包括纯 聚醚消泡剂(也即是全部为聚醚消泡剂， 不含有矿物油类、 有机硅类)， 其具有抑泡时间长、 效果好、 消泡速度快、 热稳定性好等特点。 其中， 纯聚醚消泡剂例如为聚氧丙烯氧化乙烯甘 油醚等。 0033 具体地，。

16、 在能够通风且具有搅拌功能的发酵罐内培养， 罐压为0.03-0.05Mpa， 同时 培养期间， 发酵罐内需要通风输氧， 起始风量为2.0m3/h， 最大风量为6.0m3/h， 起始转速为 200rpm， 最大转速600rpm。 0034 培养过程中， 当发酵罐内的培养基中溶氧量(DO)20， 开始交替升风升转， 以 100rpm/次的升转方式升转至600rpm， 在此期间交替升风至6.0m3/h， 保证培养期间对于氧 气的需求。 0035 本申请试验例中， 采用具体培养方式为： 灭菌后pH为4.50， 发酵开始， 用氨水调pH 至5.50； 培养至11.5h， pH升至6.10， 停止发酵。 。

17、本批共消耗氨水178g。 培养至6h， 溶氧降至 18， 开始升转， 其后分别于7.8h、 8.0h、 10.5h逐步升完转速至600rpm， 在此期间交替升风 至6.0m3/h； 其采用的白地霉培养基为含有2w/v的葡萄糖、 1w/v的酵母膏、 1w/v的蛋 白胨以及0.033v/v的消泡剂的白地霉培养基， 也即是在灭菌水中添加有1200g葡萄糖、 600g酵母膏、 600g蛋白胨以及20ml聚醚消泡剂， 总体积为60L的白地霉培养基。 0036 需要说明的是， 为了便于加工以及便于运输等， 白地霉可能为白地霉冻干粉。 也即 是， 生产获得的白地霉可进行冻干处理。 0037 本申请第一方面实。

18、施例提供了白地霉作为促进生长、 提高免疫力、 提高代谢能力 及提高抗病力的益生菌在饲料制备中应用。 0038 也即是， 本申请第一方面实施例提供的白地霉在饲料中是作为益生菌， 食入后对 宿主有正面效益的活性微生物， 促进有效促进动物生长、 提高免疫力、 提高代谢能力及提高 抗病力。 0039 本申请第二方面实施例提供一种免疫增强剂， 其包括作为益生菌的白地霉， 其中， 该白地霉保藏于湖北省工业微生物菌种保藏与研究中心， 保藏编号HBCICC71016。 0040 可选地， 免疫增强剂还包括寡糖； 寡糖与白地霉协同作用， 促进宿主生长， 提高抗 病能力等， 也进一步从侧面说明白地霉能够作为益生菌。

19、。 0041 其中， 寡糖包括但不局限于低聚果糖、 低聚麦芽糖、 低聚乳果糖、 异麦芽低聚糖、 壳 寡糖等。 可选地， 寡糖包括低聚果糖。 0042 可选地， 免疫增强剂为粉剂。 0043 本申请第三方面实施例提供一种饲料， 日粮包括本申请第一方面提供的白地霉 说明书 3/10 页 5 CN 111280299 A 5 和/或本申请第二方面提供的免疫增强剂。 0044 也即是利用白地霉作为益生菌能够有效促进宿主生长、 提高免疫力、 提高代谢能 力及提高抗病力的特点， 将其与基础日粮混合， 通过调节动物的免疫以及抗病能力等， 进而 预防并解决动物的疾病的爆发， 且使用后无化学残留， 更为安全有效。

20、。 0045 其中， 需要说明的是， 基础日粮为现有的常规日粮， 其既可以为申请日前的， 也可 以为申请日后的， 只要添加有本申请提供的免疫添加剂或白地霉， 利用白地霉作为促进宿 主生长、 提高免疫力、 提高代谢能力或提高抗病力的益生菌的特性， 均属于本申请所限定的 基础日粮。 其可自行搭配， 也可以直接购买。 0046 其中， 白地霉在饲料中的含量不低于106CFU/kg， 不低于106CFU/kg的添加量， 保证 了白地霉能够对宿主产生较佳的有益效果。 0047 可选地， 白地霉在饲料中的含量为106CFU/kg-1011CFU/kg； 例如白地霉在饲料中的 含量为106CFU/kg、 1。

21、07CFU/kg、 108CFU/kg、 109CFU/kg、 1010CFU/kg、 1011CFU/kg等中的任一值 或任意两个值之间的范围值。 可选地， 白地霉在饲料中的含量为106CFU/kg-108CFU/kg； 可选 地， 白地霉在饲料中的含量为106CFU/kg。 上述设置条件下， 白地霉能够对动物产生较佳的 有益效果。 0048 可选地， 免疫增强剂包括寡糖， 寡糖在饲料中的含量为1.5-6g/kg； 例如寡糖在饲 料中的含量为1.5g/kg、 2g/kg、 2.5g/kg、 3g/kg、 3.5g/kg、 4g/kg、 4.5g/kg、 5g/kg、 5.5g/kg、 6g/。

22、kg中的任一点或两点之间的范围值。 此范围内， 其能够与白地霉协同作用， 共同促进宿 主生长， 提高宿主的免疫力、 提高代谢能力及提高抗病力。 0049 可选地， 寡糖在饲料中的含量为2-5g/kg。 0050 其中， 上述饲料可以为畜牧饲料、 家禽饲料或水产动物饲料； 例如为羊饲料、 鸡饲 料、 猪饲料、 鱼饲料、 乌龟饲料等。 0051 可选地， 饲料为鱼饲料， 具体例如为鲫鱼饲料， 更具体为异育银鲫饲料。 0052 本申请第四方面提供上述饲料的制备方法， 其中， 所述饲料包括基础日粮； 上述饲 料的制备方法包括： 将基础日粮与本申请第二方面提供的免疫增强剂混合和/或将基础日 粮与本申请第。

23、一方面提供的白地霉混合， 造粒。 该制备方法操作简单， 同时有效保证白地霉 的活性， 能够使其被食入后对宿主有正面效益。 0053 以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。 0054 以下试验例中， 所采用的白地霉为购买于湖北省工业微生物菌种保藏与研究中 心， 保藏编号HBCICC71016， 并利用本申请的培养方法培养获得。 0055 其中， 试验例中， 增重率100(末重-初重)/初重； 饲料系数()(100新 鲜体重增加)/干饲料摄入量； 存活率()(最终鱼数/初始鱼数)100。 0056 饲料的化学分析按AOAC方法(AOAC,2003)按标准方法进行分析。 将饲料样品在。

24、105 下烘烤24小时以确定干物质含量。 采用Kjeltec体系(Kjeltec-8400,FOSS)， 采用凯氏定 氮法测定粗蛋白。 使用Soxhlet萃取器(Soxtec-2055,FOSS)测定粗脂。 总能量由氧弹量热计 (美国Parr仪器公司Moline量热计)测定。 0057 试验例1 0058 1.1配置七组实验饲料， 作为1组对照组饲料(仅含有基础饲料， C组)和六组添加不 同浓度的白地霉(保藏编号为HBCICC71016)的试验组饲料(含有基础饲料及白地霉， 试验组 说明书 4/10 页 6 CN 111280299 A 6 具体为T1组、 T2组、 T3组、 T4组、 T5组。

25、、 T6组)。 其中， T1组中白地霉在饲料中的添加量为 106CFU/kg， T2组中白地霉在饲料中的添加量为107CFU/kg， T3组中白地霉在饲料中的添加量 为108CFU/kg， T4组中白地霉在饲料中的添加量为109CFU/kg， T5组中白地霉在饲料中的添加 量为1010CFU/kg， T6组中白地霉在饲料中的添加量为1011CFU/kg。 0059 其中， 基础饲料配方如表1所示。 0060 表1基础饲料配方 0061 0062 其中， 维生素预混物(mg kg-1饲料):维生素B1， 20； 维生素B2， 20； 维生素B6， 20； 维 生素B12， 20； 叶酸， 5； 。

26、泛酸钙， 50； 肌醇， 100； 烟酸， 100； 生物素， 5； 淀粉， 3226； 维生素C， 110； 维生素A， 110； 维生素D， 20； 维生素E， 100； 维生素K， 10； 氯化胆碱， 1100； 淀粉， 3227。 0063 矿物盐预混物(mg kg-1饲料)： 氯化钠， 500.0； 硫酸镁， 4575.0； 磷酸二氢钠， 12500.0； 磷酸二氢钾， 16000.0； 磷酸二氢钙， 6850.0； 硫酸亚铁， 1250.0； 乳酸钙， 1750.0； 硫 酸锌， 111.0； 硫酸锰， 61.4； 硫酸铜， 15.5； 硫酸钴， 0.5； 碘化钾， 1.5； 淀粉。

27、， 6385.1。 0064 1.2选取420尾健康的实验鱼： 初始均重： 7.090.02g的异育银鲫(中科3号)随机 平均分为7个处理组， 每个处理设置3个重复， 每个缸20尾鱼， 每天3次表观饱食投喂。 实验在 流水养殖系统中进行(鱼缸尺寸： 526746cm)。 养殖期间每天8： 00、 14： 00和19： 00进行表 观饱食投喂。 进行为期60d的养殖实验。 0065 养殖实验结束后， 饥饿6h称重取样， 获得如表2所示的白地霉不同添加水平对鲫鱼 生长性能的影响。 取样期间， 每个鱼缸中选取5条鱼， 立即在冰上采集鱼体组织样本， 收集其 肠道和肠道内容物， 用于测定异育银鲫的消化酶。

28、， 结果如表3所示。 其余鱼称重后放回鱼缸。 0066 表2饲料中白地霉不同添加水平对鲫鱼生长性能的影响 说明书 5/10 页 7 CN 111280299 A 7 0067 0068 0069 表3饲料中添加白地霉提高异育银鲫的消化酶 0070 0071 根据表2以及表3的试验数据， 饲料中白地霉的添加提高了异育银鲫的增重率、 饲 料效率和消化酶活性， 饲料中白地霉添加量为106和108CFU/kg时显著提高了异育银鲫的增 重率和饲料效率(P0.05)。 添加高浓度的白地霉并未对异育银鲫的生长产生负面影响。 0072 1.3在对照组(C组)、 T1组、 T3组、 T5组以及T6组对应的鱼缸中。

29、， 每缸选10尾鱼腹腔 注射106CFU/mL的嗜水气单胞菌进行攻毒实验， 在嗜水气单胞菌感染后12小时， 每缸任选2 条鱼， 用MS-222麻醉， 采肝素钠浸润过的注射器从尾侧血管提取血液样本， 在1000g(4)下 离心15min， 获得血清样本， 用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对血清IgM进行检测。 在冰上快 速取每箱2条鱼的肝组织样品， 冷冻于液氮中， -80保存， 用于测定鲫鱼肝脏HSP-70、 TNF - 1、 IL-1 和TLR2的免疫相关基因mRNA表达， 进而评定提高鱼类抵抗嗜水气单胞菌的作用， 结 果如图3以及图4所示。 0073 结果如图3所示， 与对照组相比， 各治。

30、疗组肝脏IL-I 、 TLR-2、 TNF- 、 HSP-70和TLR- 2表达均显著上调(P0.05)， 也即是饲料中添加白地霉显著影响异育银鲫肝脏中免疫相关 说明书 6/10 页 8 CN 111280299 A 8 基因(图3中A所示的HSP-70、 B所示的TNF- 、 C所示的IL-I 、 以及D所示的TLR-2)在攻毒后的 表达量。 0074 如图4所示， 饲喂106和108cfu/kg白地霉组IgM水平均显著高于对照组(P0.05)， 而 对照组最低(P0.05)， 同样饲喂106和108cfu/kg白地霉组呼吸爆发活性显著高于对照组(P0.05)。 0075 其中， 异育银鲫的。

31、呼吸爆发活力的测定方法为： 将血样置于Percoll不连续分离液 (上层1.033g/ml， 下层1.067g/ml)上， 4下使用离心机速度为400g进行离心， 收集两层密 度梯度交界面的白细胞。 收集后的细胞使用Hanks平衡盐溶液洗3次， 调节白细胞悬液密度 至1106CFU/ml。 白细胞悬液与1mmol/ml的DCFH(二乙酸二氯荧光素)探针在37下孵育20 分钟。 在探针植入后， 在加入100 l酵母多糖悬液， 继续孵育40分钟， 然后置于冰上停止反 应。 荧光强度通过流式细胞仪(Beckman Coulter EPICS XL)测定。 呼吸爆发(活性氧的产 生)定义为所划白细胞门。

32、内的荧光强度的几何平均数。 0076 如图5所示， 攻毒实验后， 饲喂T1组的白地霉组的累积生存率最高， 其次为饲喂T5 组饲料白地霉组， 其略低于T1组， 其次分别饲喂T2、 T3、 T6组的累积生存率较高且最终结果 相似。 饲料中添加106和1010CFU/kg白地霉可提高异育银鲫的存活率。 0077 实验结果显示， 白地霉可以作为益生菌促进异育银鲫的饲料利用、 代谢状态、 免疫 力和细菌攻毒后的存活率， 并且对生长无负面影响。 0078 试验例2 0079 配制6组等氮等能的饲料， 包括： 对照饲料(D1)， 同时添加白地霉和低聚果糖 (106CFU/kg+2g/kg、 106CFU/k。

33、g+4g/kg)的饲料(D2、 D3)， 单独添加低聚果糖(2g/kg、 4g/kg)的 饲料(D4、 D5)， 单独添加白地霉(106CFU/kg)的饲料(D6)。 各组饲料的配比具体如表4所示。 0080 表4饲料配方和化学组成(g/kg) 说明书 7/10 页 9 CN 111280299 A 9 0081 0082 其中， 多维预混物(mg kg-1饲料):维生素B1， 20； 维生素B2， 20； 维生素B6， 20； 维生 素B12， 20； 叶酸， 5； 泛酸钙， 50； 肌醇， 100； 烟酸， 100； 生物素， 5； 淀粉， 3226； 维生素C， 110； 维 生素A， 。

34、110； 维生素D， 20； 维生素E， 100； 维生素K， 10； 氯化胆碱， 1100； 淀粉， 3227。 0083 多矿预混物(mg kg-1饲料):氯化钠， 500.0； 硫酸镁， 4575.0； 磷酸二氢钠， 12500.0； 磷酸二氢钾， 16000.0； 磷酸二氢钙， 6850.0； 硫酸亚铁， 1250.0； 乳酸钙， 1750.0； 硫酸锌， 111.0； 硫酸锰， 61.4； 硫酸铜， 15.5； 硫酸钴， 0.5； 碘化钾， 1.5； 淀粉， 6385.1。 0084 选取450尾健康的实验鱼(初始均重： 5.510.06g)随机分为18个养殖缸(鱼缸尺 寸： 526。

35、746cm)， 每处理组设置3个平行， 每缸25尾鱼， 进行为期60d的养殖实验。 0085 养殖实验结束后， 饥饿6h称重取样， 每个鱼缸中选取5条鱼， 用MS-222(100mg/L的 三卡因甲烷磺酸盐， Argent化学实验室公司， 华盛顿州Red-mond,USA)麻醉。 采用肝素钠润 过的注射器从尾静脉抽取血液样本， 在1000g(4)下离心15min， 获得血清样本， 并立即在 冰上采集鱼类样本， 以收集其肠道和肠道内容物， 组织快速冷冻于液氮中， 然后保存于-80 冰箱中。 其余鱼称重后放回鱼缸。 分析鱼体的摄食生长、 生化组成、 免疫力作用。 其中， 饲 料中添加白地霉和低聚果。

36、糖对鲫鱼生长性能的影响如表5所示， 饲料中添加白地霉对异育 银鲫的消化酶的影响如表6所示。 0086 表5饲料中添加白地霉和低聚果糖对鲫鱼生长性能的影响 说明书 8/10 页 10 CN 111280299 A 10 0087 0088 0089 结果表明， 各处理间增重率和特定生长率无显著性差异(P0.05)。 D6组饲料效率 和摄食率最高(P0.05)， D6组纤维素酶活力相对较 高(P0.05)， 而D4、 D5和D6组的胰蛋白酶活力显著高于其他组(P0.05)。 0093 每缸选10尾鱼腹腔注射106CFU/mL嗜水气单胞菌进行攻毒实验， 用MS-222麻醉， 采 肝素钠润过的注射器从。

37、尾侧血管提取血液样本， 在1000 xg(4)下离心15min， 获得血清样 本， 并立即在冰上采集鱼类样本， 以收集其肠道和肠道内容物， 组织快速冷冻于液氮中， 然 后保存于-80冰箱。 取样测定攻毒前后肝脏抗氧化能力和血清的非特异免疫指标， 评定提 高鱼类抵抗嗜水气单胞菌的作用， 结果如图6和图7所示。 0094 其中， 根据图6， 攻毒前， D3组和D6组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活力较高(P 0.05)， D2组过氧化氢酶(CAT)活力显著高于对照组(P0.05)， 各处理组在攻毒前后有显著性差 异(P0.05)， 各处理组补体C3含量高于对照组(P0.05)， 各处理组在攻毒前后有。

38、显著性差异 (P0.05)。 0096 上述结果表明， 单独添加白地霉或者低聚果糖都可以促进异育银鲫生长和饲料利 用， 同时添加白地霉和低聚果糖能够产生一定的协同作用。 0097 综上， 本申请提供了白地霉作为促进宿主生长、 提高免疫力、 提高代谢能力及提高 说明书 9/10 页 11 CN 111280299 A 11 抗病力的益生菌在饲料制备中应用， 利用白地霉的此特性， 将其制备为免疫增强剂以及饲 料， 以促进宿主生长、 提高免疫力、 提高代谢能力及提高抗病力， 同时提供上述饲料的制备 方法， 操作简单， 有效保证白地霉的活性。 0098 以上仅为本申请的优选实施例而已， 并不用于限制本申请， 对于本领域的技术人 员来说， 本申请可以有各种更改和变化。 凡在本申请的精神和原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本申请的保护范围之内。 说明书 10/10 页 12 CN 111280299 A 12 图1 图2 说明书附图 1/4 页 13 CN 111280299 A 13 图3 说明书附图 2/4 页 14 CN 111280299 A 14 图4 图5 说明书附图 3/4 页 15 CN 111280299 A 15 图6 图7 说明书附图 4/4 页 16 CN 111280299 A 16 。