不含桔霉素的水溶性功能红曲及其制备方法和应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010042931.3 (22)申请日 2020.01.15 (71)申请人 广东天益生物科技有限公司 地址 524300 广东省湛江市遂溪县民营科 技工业园工业南路1号 (72)发明人 许世锦胡文林陈影妮陈玲娟 聂增宇陈晓锋 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 代理人 刘瑶云陈伟斌 (51)Int.Cl. C12P 1/02(2006.01) A61K 36/899(2006.01) A61K 36/062(2006.01) A61P 3/0。

2、6(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲及其制 备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种不含桔霉素的水溶性功 能红曲及其制备方法和应用， 所述制备方法为： 将紫色红曲霉诱变株在发酵培养基中进行液态 深层发酵， 得到所述水溶性功能红曲； 所述紫色 红曲霉诱变株保藏编号： CCTCCNO:M2018586； 所 述发酵培养基包括碳源、 米糠提取物、 糖醇、 氮源 和无机盐； 所述碳源包括大米。 本申请突破性地 只采用大米为碳源， 配合糖醇和米糠提取物， 通 过发明人原有紫色红曲霉诱变株进行液态深层 发酵制备得到高开环、 高含。

3、量莫纳可林K， 不含桔 霉素的水溶性功能红曲， 无甘油残留的安全隐 患， 符合QB/T2847-2007、 GB2760-2014标准的 要求， 应用前景广阔。 权利要求书1页 说明书8页 CN 111139267 A 2020.05.12 CN 111139267 A 1.一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 其特征在于， 将紫色红曲霉诱变株 在发酵培养基中进行液态深层发酵， 得到所述水溶性功能红曲； 所述紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养物保藏中心， 保藏编 号： CCTCC NO:M2018586； 所述发酵培养基包括碳源、 米糠提取物、 糖醇、 氮源和无机。

4、盐； 所述碳源包括大米。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述大米为大米粉， 所述大米粉为籼 米粉和/或粳米粉。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 所述碳源按重量体积比计的含量 为620kg/m3。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述米糠提取物为米糠全提取物。 5.根据权利要求1或4所述的制备方法， 其特征在于， 所述米糠提取物按重量体积比计 的含量为0.22.0kg/m3。 6.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述糖醇为碳原子数小于等于6的糖 醇。 7.根据权利要求1或6所述的制备方法， 其特征在于， 所述糖醇为山梨糖醇。

5、、 甘露糖醇、 木糖醇或赤藓糖醇的一种或几种。 8.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述糖醇按重量体积比计的含量为 112kg/m3。 9.权利要求18任一项所述制备方法制得的不含桔霉素的水溶性功能红曲。 10.权利要求9所述不含桔霉素的水溶性功能红曲在制备降血脂制剂中的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111139267 A 2 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域， 更具体地， 涉及一种不含桔霉素的水溶性功能红曲及 其制备方法和应用。 背景技术 0002 以大米为原料， 由红曲霉发酵生成的含发酵自然产生的莫纳可林。

6、K等生物活性物 质的红曲称为功能红曲。 功能红曲对合成胆固醇的限速酶HMG-CoA还原酶具有特异性的抑 制作用， 在临床上具有降血脂、 降血压及抗肿瘤等功效。 0003 红曲菌株发酵会合成开环结构与闭环结构的MonacolinK类物质， 但只有开环结构 的酸式结构的MonacolinK才具有活性， 其可直接与合成胆固醇的限速酶HMG-CoA还原酶结 合， 抑制该酶的活性。 闭环结构的内脂结构的MonacolinK无活性， 需经人体肝脏分泌的羟基 酸脂酶参与水解成开环结构的MonacolinK才具活性， 肝脏分泌羟基酸脂酶会损害肝脏功 能， 增加肝脏的负担， 从而造成肝脏的慢性中毒， 患者需定期。

7、进行肝功能的检查， 这就是通 常所言的功能红曲毒性问题的所在。 同时， 红曲菌株发酵过程会合成次级代谢产物桔霉素， 桔霉素对人体的肝肾均有损害， 并可导致致畸、 致癌和诱发突变,另外功能红曲国家标准 QB/T2847-2007规定桔霉素含量小于等于50ppb。 0004 功能红曲的工业化生产可分为固态发酵和液态发酵两种方式。 目前， 功能红曲的 生产全部采用大米为原料， 以三角瓶进行固态发酵， 产品中开环结构的MonacolinK只有 20左右， 普遍含有少量的桔霉素， 产品味苦， 不溶于水， 副作用大， 严重影响了产品的使 用。 此外固态发酵还存在发酵过程代谢物难于调控、 易染菌、 周期长、。

8、 产量低、 劳动强度大、 生产效率低等弊端。 0005 现有技术中， 单独使用大米粉作碳源进行功能红曲的液态发酵， 所产生的活性物 质成分较低， 发酵醪液MonacolinK含量通常在530mg/L， 含少量的桔霉素， 无经济价值， 无 法批量生产及应用。 目前在实验室， 功能红曲的液态发酵大多采用大米粉、 葡萄糖与甘油作 复合碳源， 或单独使用甘油作碳源进行液态发酵。 采用摇瓶发酵试验， 发酵醪液MonacolinK 含量可达10001600mg/L， 15L试验罐发酵， 发酵醪液MonacolinK含量可达889mg/L。 但甘油 为化工原料， 非食品添加剂， 既不符合功能红曲的中国轻工行。

9、业标准QB/T2847-2007的原 料要求， 也不符合食品安全国家标准-食品添加剂使用标准GB2760-2014的规定， 上述技 术无法应用于生产。 0006 因此， 需要开发出能够单独采用大米作为碳源的液态发酵方法， 从而生产出符合 QB/T2847-2007、 GB2760-2014标准且具有高开环、 高含量MonacolinK， 不含桔霉素的水溶 性功能红曲。 发明内容 0007 本发明为克服上述现有技术所述的缺陷， 提供一种不含桔霉素的水溶性功能红曲 的制备方法， 提供的制备方法能够单独采用大米作为碳源， 不使用甘油作为发酵原料， 符合 说明书 1/8 页 3 CN 11113926。

10、7 A 3 QB/T2847-2007、 GB2760-2014标准， 而且， 制得的水溶性功能红曲中莫纳可林K开环比例 高、 含量高， 不含桔霉素， 应用前景广阔。 0008 本发明的另一目的在于提供上述制备方法制得的水溶性功能红曲。 0009 本发明的又一目的在于提供上述水溶性功能红曲在制备降血脂制剂中的应用。 0010 为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案是： 0011 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 所述制备方法为： 将紫色红曲霉 诱变株在发酵培养基中进行液态深层发酵， 得到所述水溶性功能红曲； 0012 所述紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养。

11、物保藏中心， 保藏 编号： CCTCC NO:M2018586； 0013 所述发酵培养基包括碳源、 米糠提取物、 糖醇、 氮源和无机盐； 所述碳源包括大米。 0014 上述紫色红曲霉诱变株已在中国专利申请CN109517740A中公开。 该紫色红曲霉诱 变株能够生产高开环、 高含量莫纳可林K,不含桔霉素的水溶性功能红曲， 经鉴定能够用于 食品、 保健品、 药品生产。 0015 所述发酵培养基以大米为碳源， 不包括甘油。 0016 现有技术的制备方法一般使用含有甘油的培养基， 甘油在红曲霉发酵过程中具有 重要作用， 是现有技术制备功能红曲的液态发酵培养基中不可缺少的成分。 0017 本申请突破。

12、性地只采用大米为碳源， 配合糖醇和米糠提取物， 得到一种全新的发 酵培养基， 上述紫色红曲霉诱变株在该培养基中竟然能够通过液态深层发酵能够制备得到 高开环、 高含量莫纳可林K且不含桔霉素的水溶性功能红曲。 0018 其中， 糖醇和米糠提取物在发酵培养基中具有重要作用。 发明人研究发现， 糖醇能 够增加紫色红曲霉诱变株的胞外代谢物的分泌， 最大限度地降低胞内代谢物的反馈抑制。 发明人研究发现， 米糠提取物能够有效提高该紫色红曲霉诱变株中酶的活性， 能明显增强 该诱变株MonacolinK的合成能力， 实现以大米为碳源的条件下， 大幅提高开环莫纳可林K的 产量。 发明人研究发现， 糖醇和米糠提取物。

13、亦能最大限度地抑制红曲菌诱变株合成桔霉素 的能力。 0019 本发明通过上述技术创新， 在发明人原有的紫色红曲霉诱变株基础上， 实现只采 用大米作为碳源， 不采用甘油作为发酵原料， 通过上述紫色红曲霉诱变株液态深层发酵生 产具有高开环、 高含量MonacolinK且不含桔霉素的水溶性功能红曲。 0020 由于发酵培养基以大米为碳源、 不使用甘油， 无甘油残留的安全隐患， 符合中国轻 工行业标准QB/T2847-2007和食品安全国家标准-食品添加剂使用标准GB2760-2014的 要求， 产品的应用范围大大增加， 可广泛用于食品、 保健品、 药品的生产。 而且， 上述制备方 法工艺简单、 易于。

14、规模化生产、 绿色环保。 0021 发酵结束后， 进行固液分离， 得到发酵滤液和滤渣。 发酵滤液通过真空低温浓缩制 成液态产品； 滤渣经洗涤得菌丝体， 后经真空低温干燥粉碎制成固态产品。 液态产品中开环 结构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的比例能够达到9095， 固态产品中开环结 构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的比例能够达到8590， 两产品中开环、 闭环 结构的莫纳可林K的质量含量能够达到0.81.5， 两产品均无异味、 苦味， 具功能红曲 特有的香味， 水溶性好， 不含桔霉素。 0022 液态产品中的莫纳可林K为胞外莫纳可林K， 本发明提供的方法制得产品中胞外莫 说明书 2/8 。

15、页 4 CN 111139267 A 4 纳可林K占总莫纳可林K含量的75以上。 0023 尤其突出的是， 本发明提供的方法制得的产品在后续浓缩或干燥的后处理过程 中， 莫纳可林K中开环与闭环的比例不会减小， 所以， 本发明制得的功能红曲产品中可能存 在有利于稳定开环莫纳可林K的成分。 而现有技术在制备莫纳可林K时， 经过同样的后处理， 莫纳可林K中开环与闭环的比例会大幅减小。 0024 优选地， 所述大米为大米粉。 0025 更优选地， 所述大米粉为籼米粉和/或粳米粉。 0026 优选地， 所述碳源按重量体积比计的含量为620kg/m3。 0027 更优选地， 所述碳源按重量体积比计的含量为。

16、812kg/m3。 0028 优选地， 所述米糠提取物为米糠全提取物。 0029 优选地， 所述米糠提取物按重量体积比计的含量为0.22.0kg/m3。 0030 更优选地， 所述米糠提取物按重量体积比计的含量为1.01.5kg/m3。 0031 优选地， 所述糖醇为碳原子数小于等于6的糖醇。 0032 更优选地， 所述糖醇为山梨糖醇、 甘露糖醇、 木糖醇或赤藓糖醇的一种或几种。 0033 优选地， 所述糖醇按重量体积比计的含量为112kg/m3。 0034 更优选地， 所述糖醇按重量体积比计的含量为26kg/m3。 0035 优选地， 所述氮源为大豆水解物和/或玉米浆。 所述大豆水解物和玉米。

17、浆为本领域 常用的氮源。 0036 优选地， 所述无机盐包括MgSO47H2O、 (NH4)2SO4、 NaNO3、 K2HPO43H2O和ZnSO4 7H2O。 0037 优选地， 所述发酵培养基包括如下按重量体积比计算的组分： 碳源620， 米 糠提取物0.22.0， 糖醇112， 大豆水解物512， 玉米浆0.52， MgSO47H2O 0.050.20， K2HPO43H2O 0.050.20， (NH4)2SO4,0.050.20， NaNO3 0.10.4， ZnSO47H2O 0.10.3； 所述重量体积比的单位为kg/m3。 0038 优选地， 所述发酵培养基的pH值为3.05。

18、.0。 所述发酵培养基一般需要在121温 度下灭菌处理30min。 0039 发酵过程中， 可以采用本领域中常用的接种量。 优选地， 接种量按体积比为6 15。 0040 优选地， 所述液态深层发酵条件为， 前3天温度为3035， 3天后的温度为2326 ； 转速120180rpm； 罐压0.030.07Mpa； 通风比1:0.72.5。 发酵培养1622天即可。 0041 优选地， 所述液态产品的浓缩温度为4060。 0042 优选地， 所述固态产品的干燥温度为4060。 0043 上述方法中， 发酵时接种用的种子液可以采用本领域常用的方法培养得到。 0044 优选地， 所述不含桔霉素的水溶。

19、性功能红曲的制备方法在发酵前进行种子液的制 备， 所述种子液由上述紫色红曲霉诱变株在种子培养基中培养得到。 0045 优选地， 所述种子培养基包括如下按重量体积比计算的组分： 葡萄糖412， 蛋白胨2.05.0， 玉米浆0.52.0， NaNO3 0.10.4， MgSO47H2O 0.05 0.20， K2HPO43H2O 0.050.25， 余量为水； 所述重量体积比的单位为kg/m3。 所述种 子培养基的pH值为自然。 说明书 3/8 页 5 CN 111139267 A 5 0046 优选地， 所述种子液的培养条件为， 3035， 120200rpm， 通风比1:1.22.0， 罐压0。

20、.040.06Mpa， 在种子培养基中培养1042h。 0047 优选地， 所述种子液的培养是先培养一级种子， 再将一级种子培养成二级种子。 培 养一级种子时， 接种量为510， 可以在80L的种子罐中进行。 培养二级种子时， 接种量 为612， 可以在240L的种子罐中进行。 0048 上述制备方法制得的不含桔霉素的水溶性功能红曲也在本发明的保护范围内。 0049 所述不含桔霉素的水溶性功能红曲包括液态产品和固态产品， 所述液态产品中开 环结构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的9095； 所述固态产品中开环结构的莫 纳可林K含量占莫纳可林K总含量的8590； 液态产品和固态产品的桔霉素含量。

21、均为0。 0050 所述不含桔霉素的水溶性功能红曲中莫纳可林K的质量含量为0.81.5。 0051 本发明还保护上述不含桔霉素的水溶性功能红曲在制备降血脂制剂中的应用。 0052 本发明还保护一种降血脂制剂， 所述降血脂制剂含有上述不含桔霉素的水溶性功 能红曲。 0053 与现有技术相比， 本发明的有益效果是： 0054 本申请突破性地只采用大米为碳源， 配合糖醇和米糠提取物， 通过原有紫色红曲 霉诱变株进行液态深层发酵制备得到高开环、 高含量莫纳可林K,不含桔霉素的水溶性功能 红曲， 无甘油残留的安全隐患， 符合QB/T2847-2007、 GB2760-2014标准的要求。 该方法制 得的。

22、高开环、 高含量莫纳可林K， 不含桔霉素的水溶性功能红曲， 符合食品、 保健品、 药品的 安全质量要求， 其中液态产品可作为生产食品、 保健品、 药品口服液的原料， 固态产品亦可 作为生产食品、 保健品、 药品的原料， 应用前景广阔。 具体实施方式 0055 下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。 0056 实施例中的原料均可通过市售得到； 0057 本发明中的紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养物保藏中 心， 保藏编号： CCTCC NO:M2018586； 保藏地址： 中国武汉， 中国典型培养物保藏中心。 实施例 中使用的紫色红曲霉诱变株即为该诱变株。 0058。

23、 除非特别说明， 本发明采用的试剂、 方法和设备为本技术领域常规试剂、 方法和设 备。 0059 实施例1 0060 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 具体如下： 0061 (1)种子液的制备 0062 一级种子液的制备： 0063 采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went)诱变株TY02作为生产种子。 以摇瓶 种液按5接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖4,蛋白胨2.0,玉米浆 0.5,NaNO3 0.1,MgSO47H2O 0.05,K2HPO43H2O 0.05， 组分按重量体积比计， 单 位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 30。

24、， 150rpm， 通风比1:1.2， 罐压0.04Mpa， 培养 36h， 使菌体处于对数生长期。 0064 二级种子液的制备： 说明书 4/8 页 6 CN 111139267 A 6 0065 以处于对数生长期的一级种子液按6接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养 基(葡萄糖5,蛋白胨2.5,玉米浆0.7,NaNO3 0.15,MgSO47H2O 0.05， K2HPO4 3H2O 0.05， 组分按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 30， 120rpm， 通风比1:1.3， 罐压0.04Mpa， 培养25h， 使菌体处于对数生长期。 0066 (2)发。

25、酵： 采用液态深层发酵 0067 以处于对数生长期的二级种子液按6接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养 基(碳源6， 米糠提取物0.2， 糖醇1， 大豆水解物5， 玉米浆0.5， MgSO47H2O 0.05,K2HPO43H2O 0.05， (NH4)2SO4 0.05,NaNO3 0.1,ZnSO47H2O 0.1,组分按 重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值3.0， 其中碳源为按质量比40 60混合的籼米粉和粳米粉； 糖醇为按质量比35:65混合的甘露糖醇、 赤藓糖醇)。 发酵在1.5T发酵罐中进行， 发酵培养基 于03天， 30； 420天， 23； 120rpm； 罐压： 。

26、0.03Mpa， 通风比： 1:0.7， 培养20天。 0068 后处理： 发酵结束， 进行固液分离， 发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品， 液态产 品固含物含量为58； 滤渣经洗涤得菌丝体， 后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。 其中： 发酵滤液浓缩温度为45， 菌丝体干燥温度为45。 0069 实施例2 0070 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 具体如下： 0071 (1)种子液的制备 0072 一级种子液的制备： 0073 采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went)诱变株TY02作为生产种子。 以摇瓶 种液按6接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄。

27、糖5,蛋白胨2.5,玉米浆 0.7,NaNO3 0.15,MgSO47H2O 0.09,K2HPO43H2O 0.10， 组分按重量体积比计， 单 位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 31， 160rpm， 通风比1:1.5， 罐压0.05Mpa， 培养 30h， 使菌体处于对数生长期。 0074 二级种子液的制备： 0075 以处于对数生长期的一级种子液按7接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养 基(葡萄糖7,蛋白胨2.8,玉米浆0.9,NaNO3 0.20,MgSO47H2O 0.08， K2HPO4 3H2O 0.08， 组分按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值自然。

28、)中进行培养增殖， 31， 130rpm， 通风比1:1.5， 罐压0.04Mpa， 培养22h， 使菌体处于对数生长期。 0076 (2)发酵： 采用液态深层发酵 0077 以处于对数生长期的二级种子液按8接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养 基(碳源9， 米糠提取物0.8， 糖醇3， 大豆水解物6.5， 玉米浆0.8， MgSO47H2O 0.08,K2HPO43H2O 0.08， (NH4)2SO4 0.08,NaNO3 0.15,ZnSO47H2O 0.12,， 组 分按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值3.5， 其中碳源为按质量比50 50混合的籼米粉和粳 米粉； 糖醇为。

29、按质量比30:70混合的山梨糖醇、 赤藓糖醇)， 发酵在1.5T发酵罐中进行， 发酵 培养基于03天， 31； 420天， 24； 135rpm； 罐压： 0.04Mpa， 通风比： 1:1.2， 培养20天。 0078 后处理： 发酵结束， 进行固液分离， 发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品， 液态产 品固含物含量为56； 滤渣经洗涤得菌丝体， 后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。 其中： 发酵滤液浓缩温度为50， 菌丝体干燥温度为50。 0079 实施例3 说明书 5/8 页 7 CN 111139267 A 7 0080 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 具体如下： 0081 (1。

30、)种子液的制备 0082 一级种子液的制备： 0083 采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went)诱变株TY02作为生产种子。 以摇瓶 种液按8接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖8,蛋白胨3.0,玉米浆 1.2,NaNO3 0.2,MgSO47H2O 0.1,K2HPO43H2O 0.15， 组分按重量体积比计， 单位 为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 32， 180rpm， 通风比1:1.8， 罐压0.04Mpa， 培养26h， 使菌体处于对数生长期。 0084 二级种子液的制备： 0085 以处于对数生长期的一级种子液按8接种量(V/V)接。

31、种于灭菌降温的种子培养 基(葡萄糖8.5,蛋白胨3.2,玉米浆1.0,NaNO3 0.25,MgSO47H2O 0.10， K2HPO4 3H2O 0.15， 组分按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 32， 150rpm， 通风比1:1.8， 罐压0.05Mpa， 培养18h， 使菌体处于对数生长期。 0086 (2)发酵： 采用液态深层发酵 0087 以处于对数生长期的二级种子液按10接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养 基(碳源12， 米糠提取物1.5， 糖醇5， 大豆水解物9， 玉米浆1.0， MgSO47H2O 0.1,K2HPO43H2O 0.1，。

32、 (NH4)2SO4 0.1,NaNO3 0.2,ZnSO47H2O 0.15， 组分按重 量体积比计， 单位为kg/m3； pH值4.0， 其中碳源为按质量比60 40混合的籼米粉和粳米粉； 糖 醇为按质量比70:30混合的山梨糖醇、 木糖醇)， 发酵在1.5T发酵罐中进行， 发酵培养基于0 3天， 32； 421天， 24.5； 140rpm； 罐压： 0.04Mpa， 通风比： 1:1.6， 培养21天。 0088 后处理： 发酵结束， 进行固液分离， 发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品， 液态产 品固含物含量为55； 滤渣经洗涤得菌丝体， 后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。 其中： 发酵。

33、滤液浓缩温度为48， 菌丝体干燥温度为48。 0089 实施例4 0090 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 具体如下： 0091 (1)种子液的制备 0092 一级种子液的制备： 0093 采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went)诱变株TY02作为生产种子。 以摇瓶 种液按10接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖12,蛋白胨5,玉米浆 2.0,NaNO3 0.4,MgSO47H2O 0.2,K2HPO43H2O 0.25， 组分按重量体积比计， 单位 为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 35， 200rpm， 通风比1:2.0， 罐压。

34、0.06Mpa， 培养18h， 使菌体处于对数生长期。 0094 二级种子液的制备： 0095 以处于对数生长期的一级种子液按12接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养 基(葡萄糖12,蛋白胨5.0,玉米浆2.0,NaNO3 0.4,MgSO47H2O 0.20， K2HPO4 3H2O 0.25， 组分按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 35， 200rpm， 通风比1:2.0， 罐压0.06Mpa， 培养10h， 使菌体处于对数生长期。 0096 (2)发酵： 采用液态深层发酵 0097 以处于对数生长期的二级种子液按15接种量(V/V)接种于灭菌降温的发。

35、酵培养 说明书 6/8 页 8 CN 111139267 A 8 基(碳源20， 米糠提取物2.0， 糖醇12， 大豆水解物12， 玉米浆2.0， MgSO47H2O 0.20,K2HPO43H2O 0.20， (NH4)2SO4 0.20,NaNO3 0.4,ZnSO47H2O 0.3,组分按 重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值5.0， 其中碳源为按质量比80 20混合的籼米粉和粳米粉； 糖醇为按质量比50:50混合的木糖醇、 甘露糖醇)， 发酵在1.5T发酵罐中进行， 发酵培养基于 03天， 35； 418天， 26； 180rpm； 罐压： 0.07Mpa， 通风比： 1:2.5。

36、， 培养18天。 0098 后处理： 发酵结束， 进行固液分离， 发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品， 液态产 品固含物含量为57； 滤渣经洗涤得菌丝体， 后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。 其中： 发酵滤液浓缩温度为52， 菌丝体干燥温度为52。 0099 实施例5 0100 一种不含桔霉素的水溶性功能红曲的制备方法， 具体如下： 0101 (1)种子液的制备 0102 一级种子液的制备： 0103 采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went)诱变株TY02作为生产种子。 以摇瓶 种液按7接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖6,蛋白胨3.5,玉米浆 1.0,N。

37、aNO3 0.25,MgSO47H2O 0.12,K2HPO43H2O 0.12， 组分按重量体积比计， 单 位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 33， 140rpm， 通风比1:1.6， 罐压0.05Mpa， 培养 22h， 使菌体处于对数生长期。 0104 二级种子液的制备： 0105 以处于对数生长期的一级种子液按9接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养 基(葡萄糖10,蛋白胨3.5,玉米浆1.2,NaNO3 0.12,MgSO47H2O 0.12， K2HPO4 3H2O 0.15， 组分按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值自然)中进行培养增殖， 33， 135r。

38、pm， 通风比1:1.6， 罐压0.05Mpa， 培养15h， 使菌体处于对数生长期。 0106 (2)发酵： 采用液态深层发酵 0107 以处于对数生长期的二级种子液按9接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养 基(碳源10， 米糠提取物1.0， 糖醇4， 大豆水解物8， 玉米浆1.2， MgSO47H2O 0.12,K2HPO43H2O 0.15， (NH4)2SO4 0.12,NaNO3 0.25,ZnSO47H2O 0.18,组分 按重量体积比计， 单位为kg/m3； pH值4.5， 其中碳源为按质量比30 70混合的籼米粉和粳米 粉； 糖醇为按质量比25:75混合的木糖醇、 赤藓糖醇。

39、)， 发酵在1.5T发酵罐中进行， 发酵培养 基于03天， 33； 421天， 25； 130rpm； 罐压： 0.04Mpa， 通风比： 1:1.8， 培养21天。 0108 后处理： 发酵结束， 进行固液分离， 发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品， 液态产 品固含物含量为54； 滤渣经洗涤得菌丝体， 后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。 其中： 发酵滤液浓缩温度为55， 菌丝体干燥温度为52。 0109 实施例6 0110 本实施例提供不含桔霉素的水溶性功能红曲在制备降血脂制剂中的应用。 0111 具体地， 实施例1制得的液态产品和固态产品均可作为活性成分， 用于制备口服液 或胶囊， 作为降血。

40、脂制剂。 0112 对比例1 0113 与实施例1相比区别在于， 本对比例的发酵培养基中未添加米糠提取物； 0114 其他原料和步骤与实施例1相同。 说明书 7/8 页 9 CN 111139267 A 9 0115 测试方法 0116 (1)产品中莫纳可林K的开环比例测试方法： 依据QB/T 2847-2007测试。 0117 (2)产品中莫纳可林K的含量测试方法： 依据QB/T 2847-2007测试。 0118 (3)桔霉素含量的测试方法： 依据QB/T 2847-2007测试。 0119 实施例15制得的功能红曲的测试结果如表1所示， 本发明采用发明人原有的紫 色红曲霉诱变株， 只采用。

41、大米作为碳源， 不使用甘油作为发酵原料， 配合特殊的发酵培养基 组分， 通过液态深层发酵方法， 获得高开环、 高含量莫纳可林K， 不含桔霉素的水溶性功能红 曲。 该功能红曲中莫纳可林K的开环比例达到8595， 能最大限度地减少人体分泌羟基 酸脂酶而造成肝脏的负担， 也就是常言的功能红曲的毒性， 即能产生降脂作用。 同时该功能 红曲中莫纳可林K的质量含量能够达到0.81.5， 不含桔霉素， 为高开环、 高含量莫纳可 林K， 不含桔霉素的水溶性功能红曲， 制成的功能红曲产品， 无苦味， 具有功能红曲的特有香 味， 水溶性好。 高开环、 高含量莫纳可林K,不含桔霉素的水溶性功能红曲在食品、 保健品、。

42、 药 品上的应用十分广泛， 市场潜力极大。 0120 而对比例1则无法获得高含量MonacolinK和不含桔霉素的水溶性功能红曲， 其液 态产品和固态产品中MonacolinK的质量含量分别为0.36和0.43， 桔霉素的质量含量分 别为12ppb和8ppb。 0121 表1实施例15制得的功能红曲的测试结果 0122 项目实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5 液态产品开环比例90.8092.7096.3091.6097.10 固态产品开环比例85.4091.3092.5088.9093.60 液态产品MonacolinK0.891.321.621.121.73 固态产品Monacolin。

43、K0.921.381.751.261.81 液态产品桔霉素含量00000 固态产品桔霉素含量00000 液态产品风味红曲香红曲香红曲香红曲香红曲香 固态产品风味红曲香红曲香红曲香红曲香红曲香 固态产品水溶性速溶于水速溶于水速溶于水速溶于水速溶于水 0123 显然， 本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例， 而并非是对 本发明的实施方式的限定。 对于所属领域的普通技术人员来说， 在上述说明的基础上还可 以做出其它不同形式的变化或变动。 这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。 凡在本 发明的精神和原则之内所作的任何修改、 等同替换和改进等， 均应包含在本发明权利要求 的保护范围之内。 说明书 8/8 页 10 CN 111139267 A 10 。