通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010473250.2 (22)申请日 2020.05.29 (71)申请人 鲁赫利亚达尼科莱 地址 俄罗斯圣彼得堡市列斯诺伊大街4-74 (72)发明人 鲁赫利亚达尼科莱 茹孜古丽阿布都外力 (74)专利代理机构 青岛博展利华知识产权代理 事务所(普通合伙) 37287 代理人 张弥 (51)Int.Cl. A61K 35/54(2015.01) A61P 15/12(2006.01) A01N 1/02(2006.01) (54)发明名称 一种通过冷冻保存部分卵巢组织来。

2、延缓女 性更年期的方法 (57)摘要 本发明公开了一种通过冷冻保存部分卵巢 组织来延缓女性更年期的方法， 包括以下步骤： S1、 通过腹腔镜手术取得在40-45岁的绝经前女 性中部分卵巢的皮质和髓质层； S2、 无菌条件下 处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层 放入液氮内保存、 冷冻； S3、 当女性进入绝经期 时， 按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓 质层； S4、 将取出的卵巢皮质和髓质层， 在室温下 解冻后， 立即在无菌条件下机械压碎以形成细碎 的悬浮液； S5、 在围绝经期与绝经期采用激素疗 法一起每2-4个月皮下植入一次； 本发明通过以 2-4个月的间隔皮下植入的卵巢移。

3、植组织使移植 物连续起作用以产生足够的激素， 移植技术和更 年期激素疗法相结合达到最佳效果， 通过这些特 征的组合可以使女性在绝经期维持长期的卵巢 功能， 从而延长其预期寿命。 权利要求书1页 说明书6页 CN 111419878 A 2020.07.17 CN 111419878 A 1.一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： S1、 通过腹腔镜手术取得在40-45岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层； S2、 无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、 冷冻； S3、 当女性进入绝经期时， 按标准阶段性取出冷冻保。

4、存的卵巢皮质和髓质层； S4、 将取出的卵巢皮质和髓质层， 在室温下解冻后， 立即在无菌条件下机械压碎以形成 细碎的悬浮液； S5、 在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每2-4个月皮下植入一次。 2.根据权利要求1所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 在S1中， 取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时， 确定待取出部分卵巢组织女性 的身体状况， 确定待切除女性正常的月经周期不受干扰， 抗苗勒管激素的水平不低于1.5- 0.8ng/ml， 卵泡刺激素的水平不高于25mU/l， 同时， 确定当前待取出卵巢组织女性处于未绝 经期间， 切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层。

5、， 优选为楔形切除。 3.根据权利要求1所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 在S2中， 在无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液 氮内冷冻时， 包括以下步骤： S21、 在无菌条件下， 将其立即切成条状或条带状中的任意一种： 整个卵巢长度为8- 10mm， 截面不超过2x2mm； S22、 将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中， 并以每 分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度； S23、 在零温度下暴露60-62分钟后， 继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度； S24、 冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到。

6、液氮中， 在其中被储存无限的时间。 4.根据权利要求3所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间不少于三年， 保存装罐的卵巢皮质和髓 质层时， 对保存时间进行记录。 5.根据权利要求3所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 在S4中， 将取出的卵巢皮质和髓质层制备为细悬浮液时， 包括以下步骤： 在室温下解冻后， 当一个或多个胶囊被打开时， 立即在无菌条件下将卵巢组织机械粉 碎， 直到获得细碎片， 可将其通过具有2mm内腔直径的注射器针头按压， 单次植入的组织体 积为3-4立方毫米。 6.根据权利要。

7、求1所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的25-30。 7.根据权利要求1所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 当取出部分卵巢组织的女性进入围绝经期时， 开始绝经激素治疗， 并与含雌二 醇的制剂一起服用， 将由解冻的含有髓质和皮质物质的卵巢碎片制成的小碎片悬浮液定期 给予取出部分卵巢组织的女性皮下植入。 8.根据权利要求7所述的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于： 取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时间为2-4个月， 并配 合更年。

8、期激素药物替代疗法。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111419878 A 2 一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法 技术领域 0001 本发明属于医学领域， 尤其涉及妇科， 内分泌学， 老年医学领域， 具体涉及一种通 过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法。 背景技术 0002 卵巢， 解剖名。 位于女性盆腔内， 为成对的实质性器官。 其主要功能是产生和排出 卵细胞， 分泌性激素， 以促进女性性征的发育并维持之。 0003 围绝经期综合征又称更年期综合征(MPS)， 指妇女绝经前后出现性激素波动或减 少所致的一系列以自主神经系统功能紊乱为主， 伴有神经心理症状的一组症。

9、候群。 绝经可 分为自然绝经和人工绝经两种。 自然绝经指卵巢内卵泡用尽， 或剩余的卵泡对促性腺激素 丧失了反应， 卵泡不再发育和分泌雌激素， 不能刺激子宫内膜生长， 导致绝经。 人工绝经是 指手术切除双侧卵巢或用其他方法停止卵巢功能， 如放射治疗和化疗等。 单独切除子宫而 保留一侧或双侧卵巢者， 不作为人工绝经。 0004 随着社会的飞速发展， 人们越来越重视对于身体的养护， 其中， 对于女性人群而 言， 随着年龄的增长， 女性更年期的到来， 深刻影响着女性的正常生活， 严重者即被称为更 年期综合征， 如今， 对于女性更年期的延缓方法有多种， 有的采用药物延缓， 比如中国公开 授 权 发 明 。

10、一 种 治 疗 女 性 更 年 期 综 合 症 及 延 缓 衰 老 的 药 物 组 合 物 (公 开 号 ： CN200710302041.6)， 以中药补肾为主， 用于女性更年期， 其特征是具有 “药食同源” 、“防治 同步” 纯中药复方、 对提高女性更年期健康质量、 改善女性更年期症候群、 骨质疏松、 提高免 疫功能、 抗衰老、 改善心血管功能方面均具明显的作用， 然而， 由于每个人的身体状况不同， 有的人群会对其中一种药物产生排斥反应， 对本人更年期延缓的效果不佳， 同时， 还有的人 群对药物治疗进行排斥， 因此该发明局限性较大， 还有的女性更年期患者进行卵巢组织的 自体移植方法， 来延。

11、缓更年期， 然而此种方法采用她人卵巢却会引起道德以及法律的问题， 为此， 提出一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方 法， 以解决上述背景技术中提出的问题。 0006 为实现上述目的， 本发明采用了如下技术方案： 0007 一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征在于， 包括以 下步骤： 0008 S1、 通过腹腔镜手术取得在40-45岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层； 0009 S2、 无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、 冷冻。

12、； 0010 S3、 当女性进入绝经期时， 按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层； 0011 S4、 将取出的卵巢皮质和髓质层， 在室温下解冻后， 立即在无菌条件下机械压碎以 说明书 1/6 页 3 CN 111419878 A 3 形成细碎的悬浮液； 0012 S5、 在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每2-4个月皮下植入一次。 0013 优选的： 在S1中， 取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时， 确定待取出部分卵巢组织 女性的身体状况， 确定待切除女性正常的月经周期不受干扰， 抗苗勒管激素的水平不低于 1.5-0.8ng/ml， 卵泡刺激素的水平不高于25mU/l， 同时， 确定当前待。

13、取出卵巢组织女性处于 未绝经期间， 切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层， 优选为楔形切除。 0014 优选的： 在S2中， 在无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放 入液氮内冷冻时， 包括以下步骤： 0015 S21、 在无菌条件下， 将其立即切成条状或条带状中的任意一种： 整个卵巢长度为 8-10mm， 截面不超过2x2mm； 0016 S22、 将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中， 并 以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度； 0017 S23、 在零温度下暴露60-62分钟后， 继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度； 0018 S24。

14、、 冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中， 在其中被储存无限的时间。 0019 优选的： 装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间不少于三年， 保存装罐的卵巢皮质 和髓质层时， 对保存时间进行记录。 0020 优选的： 在S4中， 将取出的卵巢皮质和髓质层制备为细悬浮液时， 包括以下步骤： 0021 在室温下解冻后， 当一个或多个胶囊被打开时， 立即在无菌条件下将卵巢组织机 械粉碎， 直到获得细碎片， 可将其通过具有2mm内腔直径的注射器针头按压， 单次植入的组 织体积为3-4立方毫米。 0022 优选的： 取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的25-30。 0023 优选的： 当取。

15、出部分卵巢组织的女性进入围绝经期时， 开始绝经激素治疗， 并与含 雌二醇的制剂一起服用， 将由解冻的含有髓质和皮质物质的卵巢碎片制成的小碎片悬浮液 定期给予取出部分卵巢组织的女性皮下植入。 0024 优选的： 取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时间为2-4个月， 并配合更年期激素药物替代疗法。 0025 本发明的技术效果和优点： 本发明提出的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓 女性更年期的方法， 与现有技术相比， 具有以下优点： 0026 一、 在本发明的方法中， 进行卵巢组织的自体移植， 这排除了接受移植者发生排斥 反应的可能性， 并且还排除了与组织和器官同种异体移植有关的许多。

16、道德和法律问题， 同 时， 由于卵巢移植为从自身移植出去的， 使得本发明方法不具备局限性， 只需要每个女性在 进入绝经期前采用本发明方法即可； 0027 二、 在绝经前取得和保存自体移植物可以保存仍然活跃的卵巢组织， 可以确保在 保存过程中尤其是髓质层负责抑制细胞凋亡和组织存活； 0028 三、 采用以氙气装罐液氮保存卵巢组织的冷冻保存允许在无限时间后重新植入( return)； 0029 四、 通过将卵巢移植物存储在单独的胶囊中， 可以逐渐解冻碎片以进行移植； 移植 时不需要解冻整个体积的组织。 0030 五、 本发明通过以2-4个月的间隔皮下植入的卵巢移植组织使移植物连续起作用 说明书 2。

17、/6 页 4 CN 111419878 A 4 以产生足够的激素， 移植技术和更年期激素疗法相结合达到最佳效果， 通过这些特征的组 合可以使女性在绝经期维持长期的卵巢功能， 从而延长其预期寿命。 具体实施方式 0031 下面将结合本发明实施例中的附图， 对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完 整地描述， 显然， 所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。 此处 所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并不用于限定本发明。 基于本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例， 都属于本发 明保护的范围。 0032 实施例一 0033 。

18、本发明提供了一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征 在于， 包括以下步骤： 0034 S1、 通过腹腔镜手术取得在40岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层； 0035 S2、 无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、 冷冻； 0036 S3、 当女性进入绝经期时， 按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层； 0037 S4、 将取出的卵巢皮质和髓质层， 在室温下解冻后， 立即在无菌条件下机械压碎以 形成细碎的悬浮液； 0038 S5、 在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每2个月皮下植入一次。 0039 本实施例中， 具体的： 在S1中，。

19、 取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时， 确定待取出 部分卵巢组织女性的身体状况， 确定待切除女性正常的月经周期不受干扰， 抗苗勒管激素 的水平不低于1.5ng/ml， 卵泡刺激素的水平为25mU/l， 同时， 确定当前待取出卵巢组织女性 处于未绝经期间， 切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层， 优选为楔形切除。 0040 本实施例中， 具体的： 在S2中， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时， 包 括以下步骤： 0041 S21、 在无菌条件下， 将其立即切成条状或条带状中的任意一种： 整个卵巢长度为 8mm， 截面为1.8x1.8mm； 0042 S22、 将这些条状物质以1.5个标准大。

20、气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中， 并 以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度； 0043 S23、 在零温度下暴露60分钟后， 继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度； 0044 S24、 冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中， 在其中被储存无限的时间。 0045 本实施例中， 具体的： 装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间不少于三年， 保存装罐 的卵巢皮质和髓质层时， 对保存时间进行记录； 可以确保冷冻时间达到三年以上。 0046 本实施例中， 具体的： 取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的 25。 0047 本实施例中， 具体的： 当取出部分卵巢组织的女性进入围绝经期时。

21、， 开始绝经激素 治疗， 并与含雌二醇的制剂一起服用， 将由解冻的含有髓质和皮质物质的卵巢碎片制成的 小碎片悬浮液定期给予取出部分卵巢组织的女性皮下植入； 由于髓质物质功能性片段的存 在会增加外源性雌二醇衍生物的生物利用度， 所以和更年期激素疗法相结合可以达到最佳 说明书 3/6 页 5 CN 111419878 A 5 效果。 0048 本实施例中， 具体的： 取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时 间为60天， 并配合更年期激素药物替代疗法。 0049 通过采用上述技术方案， 0050 实施例二 0051 本发明还提供了一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特。

22、 征在于， 包括以下步骤： 0052 S1、 通过手术取得在42岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层； 0053 S2、 无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、 冷冻； 0054 S3、 当女性进入绝经期时， 按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层； 0055 S4、 将取出的卵巢皮质和髓质层， 在室温下解冻后， 立即在无菌条件下机械压碎以 形成细碎的悬浮液； 0056 S5、 在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每3个月皮下植入一次。 0057 本实施例中， 具体的： 在S1中， 取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时， 确定待取出 部分卵巢组织女性的身体状况。

23、， 确定待切除女性正常的月经周期不受干扰， 抗苗勒管激素 的水平不低于1.2ng/ml， 卵泡刺激素的水平为24mU/l， 同时， 确定当前待取出卵巢组织女性 处于未绝经期间， 切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层， 优选为楔形切除。 0058 本实施例中， 具体的： 在S2中， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时， 包 括以下步骤： 0059 S21、 在无菌条件下， 将其立即切成条状或条带状中的任意一种： 整个卵巢长度为 9mm， 截面为1.9x1.9mm； 0060 S22、 将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中， 并 以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏。

24、度； 0061 S23、 在零温度下暴露61分钟后， 继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度； 0062 S24、 冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中， 在其中被储存无限的时间。 0063 本实施例中， 具体的： 装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间为四年， 保存装罐的卵 巢皮质和髓质层时， 对保存时间进行记录。 0064 本实施例中， 具体的： 取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的 27。 0065 本实施例中， 具体的： 取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时 间为90天， 并配合更年期激素药物替代疗法。 0066 实施例三 0067 本发明提供了一种通过冷。

25、冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法， 其特征 在于， 包括以下步骤： 0068 S1、 通过手术取得在45岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层； 0069 S2、 无菌条件下处置， 以氙气装罐， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、 冷冻； 0070 S3、 当女性进入绝经期时， 按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层； 说明书 4/6 页 6 CN 111419878 A 6 0071 S4、 将取出的卵巢皮质和髓质层， 在室温下解冻后， 立即在无菌条件下机械压碎以 形成细碎的悬浮液； 0072 S5、 在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每4个月皮下植入一次。 0073 本实。

26、施例中， 具体的： 在S1中， 取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时， 确定待取出 部分卵巢组织女性的身体状况， 确定待切除女性正常的月经周期不受干扰， 抗苗勒管激素 的水平不低于0.8ng/ml， 卵泡刺激素的水平为25mU/l， 同时， 确定当前待取出卵巢组织女性 处于未绝经期间， 切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层， 优选为楔形切除。 0074 本实施例中， 具体的： 在S2中， 将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时， 包 括以下步骤： 0075 S21、 在无菌条件下， 将其立即切成条状或条带状中的任意一种： 整个卵巢长度为 10mm， 截面为2x2mm； 0076 S22、 将这些。

27、条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中， 并 以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度； 0077 S23、 在零温度下暴露62分钟后， 继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度； 0078 S24、 冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中， 在其中被储存无限的时间。 0079 本实施例中， 具体的： 装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间为五年， 保存装罐的卵 巢皮质和髓质层时， 对保存时间进行记录。 0080 本实施例中， 具体的： 取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的 30。 0081 本实施例中， 具体的： 取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时。

28、 间为120天， 并配合更年期激素药物替代疗法。 0082 工作原理： 在本发明的方法中， 进行卵巢组织的自体移植。 这排除了接受移植者发 生排斥反应的可能性， 并且还排除了与组织和器官同种异体移植有关的许多道德和法律问 题， 在绝经前取得和保存自体移植物可以保存仍然活跃的卵巢组织， 制备和保存皮质层和 髓质层组织复合物的原因是： 在保存过程中尤其是髓质层负责抑制细胞凋亡和组织存活。 与髓-皮质层的复合物相比， 仅皮质层冷冻保存的特征在于较差的移植物存活， 卵巢组织的 冷冻保存允许在无限时间后重新植入(return)， 因为液氮中移植物的保存期限为数十 年。 在取卵巢组织与返还之间， 时间间隔。

29、应不少于三年， 因为返还时间是在绝经期开始时(1 年没有月经)进行的， 并且该方法中必须在出现性激素标志物围绝经期样改变之前进行采 取卵巢组织(AMH降低， FSH和LH增长)。 最佳做法是开始分阶段移植时间在绝经期开始时并 和更年期激素替代治疗一起开始。 将卵巢移植物存储在单独的胶囊中， 可以逐渐解冻碎片 以进行移植； 移植时不需要解冻整个体积的组织。 0083 为了将碎片解冻后进行移植(返回)， 将其机械压碎以形成细碎的悬浮液， 然后通 过粗厚针将其皮下植入。 这种返回方法无需进行剖腹手术或其他腹腔内干预， 操作很简单 且不需要全身麻醉； 极为重要的是移植组织的返回频率， 众所周知， 冷冻。

30、保存， 解冻和移植 后的卵巢移植组织在体内的维持作用有限， 通常， 它限制在2-6个月， 因此， 以2-4个月的间 隔皮下植入的卵巢移植组织使移植物连续起作用以产生足够的激素； 移植技术和更年期激 素疗法相结合是最佳的， 因为髓质物质功能性片段的存在会增加外源性雌二醇衍生物的生 物利用度， 本方法这些特征的组合可以使女性在绝经期维持长期的卵巢功能， 从而延长其 说明书 5/6 页 7 CN 111419878 A 7 预期寿命。 0084 最后应说明的是： 以上所述仅为本发明的优选实施案例而已， 并不用于限制本发 明， 尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明， 对于本领域的技术人员来说， 其依然 可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改， 或者对其中部分技术特征进行等同替 换， 凡在本发明的精神和原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明 的保护范围之内。 说明书 6/6 页 8 CN 111419878 A 8 。