IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010246594.X (22)申请日 2020.03.31 (71)申请人 天津大学 地址 300072 天津市南开区卫津路92号 (72)发明人 郑斌彭文畅明东甘霖 (74)专利代理机构 天津市北洋有限责任专利代 理事务所 12201 代理人 程小艳 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 47/34(2017.01) A61K 38/48(2006.01) A61K 38/20(2006.01) A61P 13/12(2006.01) 。

2、(54)发明名称 一种IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法 (57)摘要 一种IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法。 本 发明公布一种IgA肾病治疗纳米颗粒的合成方 法。 主要步骤包括:1)PEG水溶液的制备； 2)PLGA 有机溶液的制备； 3)薄膜水化法合成IL-10蛋白 酶纳米颗粒。 其中IgA蛋白酶免疫球蛋白A1蛋白 酶(IgA蛋白酶)是一系列病原微生物产生的可以 特异降解IgA1蛋白分子的蛋白裂解酶， 可以用来 清除IgA1免疫复合物。 白介素-10(IL-10)(是一 类非类固醇激素类的能够消除疼痛、 肿胀、 四肢 僵直及炎症的药物。 白介素-10(IL-10)是一种多 细胞源、 多功能的。

3、细胞因子， 调节细胞的生长与 分化， 参与炎性反应和免疫反应， 是目前公认的 炎症与免疫抑制因子。 PLGA-PEG无毒， 生物相容 性好， 具有良好的成囊和成膜的性能。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 111450080 A 2020.07.28 CN 111450080 A 1.一种IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法， 其特征是， 通过PEG-PLGA包裹IgA蛋白酶和 IL-10的策略,具体步骤如下： 1)称取PLGA材料， 加入L二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有机溶 液； 2)称取PEG材料， 加入水后超声溶解， 得到浓度为0.25-1mg/。

4、ml的PEG水溶液； 3)称取IL-10材料， 加入二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为0.5-2mg/ml的IL-10有机溶 液； 4)利用薄膜水化法合成蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 2.根据权利要求1所述的IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法， 其特征是,所述步骤4)具 体如下： (1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上， 开始超声， 时间设定为12min， 温 度为0， 超声频率为4s， 2s； (2)边超声边逐滴加入IL-10溶液和2ml PEG水溶液， 继续超声直至完全混匀； (3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中， 在旋转蒸发器上进行旋蒸， 直至直至二氯甲烷 和。

5、水全部蒸干， 瓶底形成一层薄膜； (4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的蛋白酶， 吹悬搅拌至均匀混合， 最终得 到蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111450080 A 2 一种IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法 技术领域 0001 本发明涉及凝胶制剂的合成技术领域,具体涉及一种通过PLGA-PEG包裹IgA蛋白 酶和白介素-10(IL-10)的策略,合成蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米制剂的方法。 背景技术 0002 IgA肾病是世界上许多地区最常见的原发性肾小球肾炎， 发病前常有上呼吸道和/ 或消化道感染存在。 发病时青少年常表现为无。

6、痛性肉眼血尿和蛋白尿； 成人则表现为镜下 血尿、 蛋白尿、 高血压和不同程度的慢性肾病。 该疾病最典型的特征是肾小球系膜中含有完 全属于IgA1亚型的IgA免疫沉积物。 经过多年的研究， 目前人们普遍认为， IgA肾病由 “多重 打击” 进展而来。 第一重打击指铰链区异常O-糖基化的循环IgA1水平升高。 这些分子在铰链 区的一些O-聚糖中缺乏半乳糖(半乳糖缺乏型IgA1， Gd-IgA1)， 因此暴露N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)作为末端聚糖； 第二重打击指聚糖特异性IgG或IgA1自身抗体的形成， 其靶向作用 位点为Gd-IgA1含有GalNAc的铰链区末端； 第三重打击指含有Gd-I。

7、gA1和IgG自身抗体的循 环免疫复合物形成； 第四重打击指一些循环免疫复合物通过肾小球毛细血管中的窗孔进入 系膜区， 引起系膜细胞增殖和细胞外基质、 细胞因子及趋化因子的过量产生， 最终导致慢性 肾小球损伤。 0003 免疫球蛋白A1蛋白酶(IgA蛋白酶)是一系列病原微生物产生的可以特异降解IgA1 蛋白分子的蛋白裂解酶。 人体呼吸道、 消化道、 泌尿道、 口腔中的正常菌群， 如表皮葡萄球 菌、 甲型链球菌、 丙型链球菌、 肺炎链球菌、 乳棒菌、 棒状杆菌、 类杆菌、 梭杆菌、 奈瑟菌、 大肠 埃希菌等中的部分细菌可以在不同条件下产生IgA蛋白酶。 本专利采用来源于嗜血流感菌 的分泌性IgA。

8、蛋白酶来清除IgA1免疫复合物。 0004 白介素10是一种多细胞源、 多功能的细胞因子， 调节细胞的生长与分化， 参与炎性 反应和免疫反应， 是目前公认的炎症与免疫抑制因子。 避免肾小球中免疫因子过量产生， 阻 止免疫系统对肾小球造成损伤。 0005 PLGA-PEG是一种两嵌段聚合物。 其中PLGA由两种单体乳酸和羟基乙酸随机聚 合而成， 是一种可降解的功能高分子有机化合物， 其降解产物是乳酸和羟基乙酸， 同时也是 人代谢途径的副产物， 所当它应用在医药和生物材料中时不会有毒副作用， 具有良好的生 物相容性、 无毒、 良好的成囊和成膜的性能。 PEG具有良好的水溶性， 赋予了聚合物生物相容。

9、 性。 发明内容 0006 本发明为克服现有技术的不足， 提供一种通过PLGA-PEG包裹IgA蛋白酶和白介素- 10(IL-10)的策略,合成IgA肾病治疗纳米颗粒制剂的方法。 利用IgA蛋白酶清除IgA1免疫复 合物， 利用IL-10抑制免疫过激反应， 防止免疫系统攻击自身肾小球组织， 以达到治疗IgA肾 病的目的。 0007 本发明的技术方案是一种IgA肾病治疗纳米制剂的合成方法， 通过PLGA-PEG包裹 说明书 1/3 页 3 CN 111450080 A 3 IgA蛋白酶和白介素-10(IL-10)的策略,具体步骤如下： 0008 1)称取PLGA材料， 加入L二氯甲烷后超声溶解，。

10、 得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有 机溶液； 0009 2)称取PEG材料， 加入水后超声溶解， 得到浓度为0.25-1mg/ml的PEG水溶液； 0010 3)称取IL-10材料， 加入二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为0.5-2mg/ml的IL-10有 机溶液； 0011 4)利用薄膜水化法合成蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0012 (1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上， 开始超声， 时间设定为 12min， 温度为0， 超声频率为4s， 2s； 0013 (2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液， 继续超声直至完全。

11、混 匀； 0014 (3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中， 在旋转蒸发器上进行旋蒸， 直至直至二氯 甲烷和水全部蒸干， 瓶底形成一层薄膜； 0015 (4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的IgA蛋白酶， 吹悬搅拌至均匀混合， 最终得到蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0016 本发明的优势在于： 0017 1)IgA蛋白酶是一系列病原微生物产生的可以特异降解IgA1蛋白分子的蛋白裂解 酶,可以用来来清除IgA1免疫复合物。 0018 2)白介素-10(IL-10)白介素10是一种多细胞源、 多功能的细胞因子， 调节细胞的 生长与分化， 参与炎性反应和免疫反应， 是目前公认的炎。

12、症与免疫抑制因子。 0019 3)PLGA-PEG具有良好的生物相容性、 无毒、 良好的成囊和成膜的性能。 附图说明 0020 图1： 纳米颗粒TEM图像。 具体实施方式 0021 以下结合附图和具体实施例来对本发明作进一步的说明。 0022 实施例1： 0023 1)称取10mg PLGA材料， 加入20ml二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为0.5mg/ml的 PLGA有机溶液； 0024 2)称取10mg PEG材料， 加入20ml水后超声溶解， 得到浓度为0.5mg/ml的PEG水溶 液； 0025 3)称取20mg IL-10材料， 加入20ml二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为1mg/m。

13、l的IL- 10有机溶液； 0026 4)利用薄膜水化法合成蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0027 (1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上， 开始超声， 时间设定为 12min， 温度为0， 超声频率为4s， 2s； 0028 (2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液， 继续超声直至完全混 匀； 说明书 2/3 页 4 CN 111450080 A 4 0029 (3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中， 在旋转蒸发器上进行旋蒸， 直至直至二氯 甲烷和水全部蒸干， 瓶底形成一层薄膜。 0030 (4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释。

14、后的IgA蛋白酶， 吹悬搅拌至均匀混合， 最终得到蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0031 实施例2： 0032 1)称取5mg PLGA材料， 加入20ml二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为0.25mg/ml的 PLGA有机溶液； 0033 2)称取5mg PEG材料， 加入20ml水后超声溶解， 得到浓度为0.25mg/ml的PEG水溶 液； 0034 3)称取10mg IL-10材料， 加入20ml二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为0.5mg/ml的 IL-10有机溶液； 0035 4)利用薄膜水化法合成蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0036 (1)将盛有2ml P。

15、LGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上， 开始超声， 时间设定为 12min， 温度为0， 超声频率为4s， 2s； 0037 (2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液， 继续超声直至完全混 匀； 0038 (3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中， 在旋转蒸发器上进行旋蒸， 直至直至二氯 甲烷和水全部蒸干， 瓶底形成一层薄膜。 0039 (4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的IgA蛋白酶， 吹悬搅拌至均匀混合， 最终得到蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0040 实施例3： 0041 1)称取20mg PLGA材料， 加入20ml二氯甲烷后超声溶解， 。

16、得到浓度为1mg/ml的PLGA 有机溶液； 0042 2)称取20mg PEG材料， 加入20ml水后超声溶解， 得到浓度为1mg/ml的PEG水溶液； 0043 3)称取30mg IL-10材料， 加入20ml二氯甲烷后超声溶解， 得到浓度为1.5mg/ml的 IL-10有机溶液； 0044 4)利用薄膜水化法合成蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 0045 (1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上， 开始超声， 时间设定为 12min， 温度为0， 超声频率为4s， 2s； 0046 (2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液， 继续超声直至完全混 匀； 0047 (3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中， 在旋转蒸发器上进行旋蒸， 直至直至二氯 甲烷和水全部蒸干， 瓶底形成一层薄膜。 0048 (4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的IgA蛋白酶， 吹悬搅拌至均匀混合， 最终得到蛋白酶IL-10PEG-PLGA纳米颗粒。 图1为纳米颗粒TEM图像。 说明书 3/3 页 5 CN 111450080 A 5 图1 说明书附图 1/1 页 6 CN 111450080 A 6 。