焦山楂饮片特殊呈色成分含量的测定.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010246483.9 (22)申请日 2020.03.31 (71)申请人 安庆莲 地址 211800 江苏省南京市新浦路105号 (72)发明人 安庆莲 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) (54)发明名称 一种焦山楂饮片特殊呈色成分含量的测定 (57)摘要 一种焦山楂饮片特殊呈色成分含量的测定， 属于中药检测技术领域。 山楂作为药食两用植 物， 具有多种的药物活。

2、性， 作为饮片被广泛应用 于中药方剂中。 同时山楂也是我国独有的物种之 一， 被许多学者研究， 具有重要的经济价值。 焦山 楂是一种被炮制后的山楂饮片， 其药理作用也发 生变化， 对于多种痢疾都有抑制作用， 临床上用 于治疗细菌肠炎及小儿腹泻都获得较好的效果。 但是我国药典中对于山楂饮片的质量标准并未 将焦山楂饮片与未经炮制后的山楂饮片加以区 分， 形成了两种饮片同一个标准， 与后续医师依 医理用药脱节。 为此本发明将焦山楂与山楂的不 同之处加以研究， 并发明一种测定焦山楂中发生 美拉德反应产物的方法， 测定焦山楂中发生美拉 德反应后的物质， 进而为后续药理作用提供依 据。 权利要求书2页 说。

3、明书2页 附图1页 CN 111398455 A 2020.07.10 CN 111398455 A 1.本专利所述焦山楂的炮制品如下： 供试品样品 （焦山楂） 的炮制方法： 山楂 （拉丁名， CRATAEGI FRUCTUS） 产地为山东泰安， 秋季果实成熟时采收， 切片， 干燥。 2.取净山楂， 照清炒法炒至表面焦褐色， 内部黄褐色。 3.供试品样品的制备方法： 取2中的饮片研粉， 取粉末1.00g， 精密称定， 用甲醇30mL， 25超声处理30min， 减压滤过， 药渣加甲醇30mL再超声一次， 过滤， 合并两次滤液， 真 空旋蒸蒸干， 残渣加甲醇溶解， 定容至10mL， 作为供试品溶。

4、液， 并过0.45 m滤膜待测。 4.以上样品在高效液相色谱 （HPLC） 中， 420nm处得到其特征吸收峰。 5.对于权利4中的特征峰吸收情况， 取0min-20min处的特征吸收， 进行条件优化， 测定 其中的特殊呈色成分类黑素系列物质， 并选用四烷基硅烷键合硅胶为填充剂进行纯度测 定， 提高检测条件的稳定性。 6.对于以上权利要求5的检测方法， 本专利优选乙腈在纯水的体积含量范围0%10%， 进 行梯度洗脱， 检测出焦山楂中类黑素系列物质的纯度。 7.所述4中的检测方法为： 权利要求4、 5、 6中的检测使用色谱柱为: 四烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 色谱柱规格 （2504.6mm， 5。

5、 m， 12nm） 。 8.二极管阵列检测器 （PDA） 200-800nm全波长检测， 柱温2535， 流速1mL每分钟， 进 样体积5L。 9.上述权利要求18中优选高效液相色谱仪 （HPLC） 的仪器条件为， 日本岛津公司 Shimadzu LC-20AB高效液相色谱系统， 包括在线脱气机， 自动进样器Prominence SIL-20A， 二极管阵列捡测器SPD-M20A和柱温箱CTO-20A。 10.或不限于日本岛津公司的高效液相色谱仪。 11.对于以上所述5中的呈色成分类黑素系列物质为分子量在1KDa-10KDa区间的大分 子混合物。 12.所述大分子混合物的粒径范围在微-纳米区间。

6、。 13.对于所述11中的类黑素的纯化方式有两种分别为：（1） 采用生物透析袋截取分子量 范围在1KDa-10KDa的呈色成分；（2） 采用无水乙醇作纯化试剂， 0-8沉淀结晶， 得米黄色 絮状沉淀。 14.对于13中的絮状沉淀， 可真空60或冷冻干燥。 权利要求书 1/2 页 2 CN 111398455 A 2 15.对于8中的检测波长优选420nm。 16.对于13中的类黑素系列物质可用蒸馏水溶解， 检测类黑素系列物质的浓度范围在 10ppm-100ppm区间。 权利要求书 2/2 页 3 CN 111398455 A 3 一种焦山楂饮片特殊呈色成分含量的测定 0001 技术领域 000。

7、2 本发明属于中药检测技术领域， 具体地说， 涉及一种焦山楂饮片特殊呈色成分含 量的测定。 0003 焦山楂的历史背景 山楂始载于唐 新修本草 ， 记为 “赤抓实” ， 主要记为外用药， 南北朝 本草经集注 中被 称为 “鼠楂” ， 在宋 本草图经 中称之为 “棠棣子。 ” 至金元时代逐渐发展为消食化积的常用 药。 明代李时珍编集 本草纲目 ， 收集了诸多别名， 归于山楂项下， 其炮制方法包括净制、 切 制及不加辅料制蒸等。 0004 本品选择净山楂， 切片， 干燥。 清炒法炒至表面焦褐色， 内部黄褐色。 目前对于山楂 的化学成分研究中介绍， 山楂中富含各类有机酸 （如： 枸橼酸、 齐墩果酸、。

8、 熊果酸等） ， 即而生 山楂味酸、 甘， 其性温， 归脾胃， 肝经。 擅活血化淤， 消食作用亦强。 临床上生山楂多用于不同 的药物配伍治疗高血脂症、 高血压、 冠心病等心血管疾病。 0005 净山楂被炒焦后， 其酸味减弱， 苦味增强， 长于消食止泻， 多用于消食止痢及食积 腹泻。 代表方剂有 中国药典 2010年版收载的小儿化食丸、 保和丸等。 焦山楂对于多种痢疾 都有抑制作用， 临床上用于治疗细菌肠炎及小儿腹泻都获得较好的效果。 0006 该专利的技术背景 高效液相图谱是国际公认的控制中药质量的一种研究模式和技术手段。 目前已见文献 上对山楂高效液相 （HPLC） 图谱进行研究， 如学者龙。

9、凤的 山楂HPLC指纹图谱研究 。 2015年 版 中国药典 上已经对其中的有效成分中的熊果酸、 枸橼酸进行含量的限定， 但至今仍未 对其中的其它成分进行测定。 0007 美拉德反应又称为 “非酶棕色化学反应” ， 是法国化学家L.C.Maillard在1912年提 出的广泛存在于食品工业的一种非酶褐变， 是羰基化合物 （还原糖类） 和氨基化合物 （氨基 酸和蛋白质） 间的反应， 其经过缩合、 重排、 Strecker反应、 环合、 脱氢、 Retro-Aldol反应、 重 排、 异构化、 进一步缩合等最终形成棕褐色甚至是黑褐色的大分子物质， 其被称为类黑素 （melanoidin） 或拟黑素。

10、， 或有色的小分子化合物， 并伴有焦香气味的产生。 0008 景亚凤等研究员应用美拉德反应来解释山楂炒焦后的化学变化和药效学关系。 并 完成硕士论文 基于传统功效的山楂炒焦物质基础及相关药效学研究 。 系统阐述了焦山楂 中 “美拉德反应” 的产物， 和其相关疗效的关系。 0009 原则上说， 美拉德反应的基础反应是具有氧化性的羰基 （如醛基） 和具有还原性的 氨基 （如氨基酸等） 化学物质发生的一种氧化还原反应， 并发生重排， 生成具有一定聚合度 的N-C聚合物， 并使物质呈现焦黄到综褐色。 焦山楂在入药时， 主要用于消食导滞。 该方法选用甲醇超声为提取剂， 对其中的有效成 分进行提取。 可能。

11、会有部分山楂饮片炮制过程中Maillard产物被提取出来。 所以应用该种 检测方法可以评价出焦山楂和山楂的不同处。 并定位出有特征的药效成分： 类黑素系列呈 说明书 1/2 页 4 CN 111398455 A 4 色成分。 发明内容 0010 在本发明的优选实施方案中， 本发明提供的一种焦山楂的特殊呈色成分图谱检测 方法， 还包括以下步骤： 焦山楂的加工炮制： 取山东泰安的山楂， 秋季成熟后的果实， 切片、 干燥。 取净山楂， 照 清炒法炒至表面焦褐色， 内部黄褐色。 0011 样品制备方法： 将以上焦山楂剪至最大直径不大于0.5cm的大小， 研磨制成粉末， 取粉末1.00g， 精密称定， 。

12、用甲醇30mL， 25超声处理30min， 滤过， 药渣加甲醇30mL， 再25 超声一次， 过滤， 合并滤液， 蒸干， 残渣加甲醇溶解， 定容至10mL， 作为供试品溶液。 过0.45 m 的滤膜， 待测。 0012 测定其中的特殊成分类黑素系列成分纯度， 碳四烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 色 谱柱规格为 （2504.6mm， 5 m， 12nm） 流动相为乙腈-纯水溶液。 乙腈的体积浓度范围010%。 0013 通过该种方法可以定位到类黑素的位置， 取0min-20min处的吸收情况， 进行条件 优化， 并分别选用420nm处的波长进行纯度测定， 提高检测条件的稳定性。 0014 类黑素系列。

13、物质的纯化具体方法： 取0011的供试品溶液5ml， 均分两份A、 B， 将A 置于可截取分子量为1KDa-10KDa的生物透析袋中， 用去离子水透析。 将B用体积比1:10的无 水乙醇进行结晶纯化， 得米黄色絮状沉淀。 离心静置， 吸取上层清液， 旋蒸掉溶剂得固体。 再 次加2.5ml蒸馏水溶解， 重复以上对B的操作， 得固体。 0015 将以上0014中的类黑素固体进行真空加热60、 或冷冻干燥24h， 称重。 配制 10ppm100ppm的待测溶液A、 B， 过0.45 m滤膜， 待测。 0016 本专利中焦山楂饮片中类黑素系列物质的纯度测定： 供试品溶液各5l， 按以下检 测方法， 如下表(一)： 表 （一） 一种焦山楂饮片中呈色部分的纯度测试方法 附图1： 一种焦山楂饮片的类黑素系列物质的纯度图谱。 通过以上可测得最终的分子量范围在1KDa-10KDa类黑素系列物质的纯度在98%。 折合 计算可以反算出其在此种焦山楂饮片中的含量。 说明书 2/2 页 5 CN 111398455 A 5 图1 说明书附图 1/1 页 6 CN 111398455 A 6 。