胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用.pdf

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1、10申请公布号CN104096234A43申请公布日20141015CN104096234A21申请号201310111593422申请日20130402A61K47/28200601A61K31/122200601A61P35/0020060171申请人江苏省中医药研究院地址210028江苏省南京市红山路十字街100号72发明人倪以成张健孙自平吉云蒋翠花江骁方志军高萌李玥姚楠54发明名称胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用57摘要本发明属于药物制剂领域，特别是涉及萘并二蒽酮类药物制剂领域。针对目前萘并二蒽酮类物质在药用领域中存在的问题，发现并证明了胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂。

2、中的应用。51INTCL权利要求书1页说明书7页附图3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页附图3页10申请公布号CN104096234ACN104096234A1/1页21胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用。2根据权利要求1所述的胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用，其特征是所述的胆酸盐溶液优选胆酸钠水溶液。3根据权利要求1或2中所述的胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用，其特征是所述萘并二蒽酮类制剂是将萘并二蒽酮类原药溶解于胆酸盐溶液中制得。权利要求书CN104096234A1/7页3胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用。

3、技术领域0001本发明属于药物制剂领域，特别是涉及萘并二蒽酮类药物制剂领域。背景技术0002金丝桃素是提取自贯叶连翘中的活性成分，可用于抗抑郁症治疗，并具有抗包膜病毒的作用，对AIDS、乙型和丙型肝炎、单纯疱疹病毒、水痘病毒、流感等病毒感染性有治疗作用。另外，研究表明金丝桃素对人体无基因毒性和系统毒性，是一种毒副作用较小的抗肿瘤药物。最新研究表明，人们将131IHYP131I标记金丝桃素用于肿瘤内照射方面。金丝桃素具有坏死亲和性，核素131I可发射短射程粒子，可对肿瘤进行放射治疗，从而达到肿瘤的治愈作用。采用这种方法，发现金丝桃素对胰腺癌、膀胱癌、淋巴癌、前列腺癌、基体细胞癌、喉癌、乳腺癌、肺。

4、癌等均有较好的疗效。0003因此，为了更好、更准确的对肿瘤进行治疗，就要提高金丝桃素在其药物制剂中的溶解性。但是金丝桃素水溶性差，因此现实应用中多将其溶解于有机溶剂DMSO中。然而，DMSO具有极易渗透皮肤的特殊性质，可引起使用者出现恶心、呕吐、皮疹等不良反应。并且，DMSO存在一定毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。因此，DMSO并不是一个最为理想的金丝桃素溶解剂。发明内容0004本发明针对目前萘并二蒽酮类物质在药用领域中存在的问题，发现并证明了胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用。0005本发明中所指的胆酸盐溶液优选胆酸钠水溶液。0006在本。

5、发明中还特别公开了优选的胆酸盐为胆酸钠，由于胆酸钠是人体内胆汁的主要成分，所以对人体完全无毒，同时，经过与其他的胆酸盐对比，溶解于胆酸钠中的萘并二蒽酮类药物靶向性好，肿瘤治疗效果好。0007为了更进一步地说明胆酸盐溶液在制备萘并二蒽酮类药物制剂中的应用，本发明公开了所述萘并二蒽酮类药物制剂是将萘并二蒽酮类原药溶解于胆酸盐溶液中制得。附图说明0008图1为胆酸钠溶液浓度与金丝桃素溶解度的线性关系图；0009图2为胆酸钠溶液浓度与伪金丝桃素溶解度的线性关系图；0010图3为DMSO金丝桃素药物与胆酸钠金丝桃素药物治疗肿瘤效果对比图；0011图4为DMSO金丝桃素药物与脱氧胆酸钠金丝桃素药物治疗肿瘤。

6、效果对比图；0012图5为DMSO金丝桃素药物与牛黄脱氧胆酸钠金丝桃素药物治疗肿瘤效果对比图。具体实施方式说明书CN104096234A2/7页40013下面对本发明进行进一步的说明和阐述。0014实施例组1萘并二蒽酮类原药在胆酸盐溶液中的溶解度与胆酸盐溶液浓度的关系0015缓冲溶液配制精密称取磷酸氢二钠10744MG，置于50ML容量瓶中，加入适量蒸馏水溶解，定容，并用磷酸调节PH为7，配成终浓度为0006MOL/L的标准溶液。0016实施例11金丝桃素在胆酸盐溶液中的溶解度与胆酸盐溶液浓度的关系0017胆酸钠溶液的配制精密称取一定量的胆酸钠，加入磷酸缓冲液，分别配制形成终浓度为134MG/。

7、ML、251MG/ML、377MG/ML、482MG/ML、577MG/ML、858MG/ML、1065MG/ML、1309MG/ML、1798MG/ML、2374MG/ML、3554MG/ML的11份不同浓度的胆酸钠溶液。0018溶解度向11个EP管15ML离心管中分别放入5MG金丝桃素，并依次加入200UL上述浓度的胆酸钠溶液，在15超声5MIN，于离心机15下以4000RPM离心15MIN，精密吸取上清液100UL，加入900UL胆酸钠稀释，涡旋混均，045UM的微孔膜过滤，然后进行HPLC含量分析，胆酸钠溶液浓度与金丝桃素溶解度的线性关系图谱见图1。0019由图1线性曲线，可以看出，在。

8、低浓度时随着胆酸盐溶液浓度的提高，金丝桃素溶解度快速升高，之后增长趋势趋于平缓。0020用药中可以根据金丝桃素药量的不同，在胆酸盐的允许临床用药量的范围内，选择不同浓度的胆酸盐溶液浓度。0021实施例12伪金丝桃素在胆酸盐溶液中的溶解度与胆酸盐溶液浓度的关系0022胆酸钠溶液的配制精密称取一定量的胆酸钠，加入磷酸缓冲液，分别配制形成终浓度为134MG/ML、251MG/ML、377MG/ML、482MG/ML、577MG/ML、858MG/ML、1065MG/ML、1309MG/ML、1798MG/ML、2374MG/ML、3554MG/ML的11份不同浓度的胆酸钠溶液。0023溶解度取5MG。

9、伪金丝桃素置于EP管15ML离心管中，加入200UL的胆酸钠溶液，在15超声5MIN，于离心机15下以4000RPM离心15MIN，精密吸取上清液100UL，加入900UL胆酸钠稀释，涡旋混均，045UM的微孔膜过滤，然后进行HPLC含量分析，胆酸钠溶液浓度与金丝桃素溶解度的线性关系图谱见图2。0024用药中可以根据伪金丝桃素药量的不同，在临床胆酸盐允许用药量的范围内，选择不同浓度的胆酸盐溶液浓度。0025分别选取不同的金丝桃素类药物与胆酸盐，进行上述溶解度实验，溶解度结果类似，因此得到金丝桃素类药物溶解度与胆酸盐浓度之间为正比关系，且随着胆酸盐浓度的增高，金丝桃素类药物溶解度的增长速度趋于平。

10、缓。0026实施例组2金丝桃素胆酸盐溶液药物制备0027实施例21金丝桃素胆酸钠溶液药物制备0028首先取5MG金丝桃素置于EP管中，加入200L的胆酸钠溶液，在15超声5MIN，于离心机15下以4000RPM离心15MIN，得到金丝桃素胆酸钠溶液药物。0029实施例22金丝桃素脱氧胆酸钠溶液药物制备0030首先取5MG金丝桃素置于EP管中，加入200L的脱氧胆酸钠溶液，在15超声5MIN，于离心机15下以4000RPM离心15MIN，得到金丝桃素脱氧胆酸钠溶液药物。0031实施例23金丝桃素牛黄脱氧胆酸钠溶液药物制备0032首先取5MG金丝桃素置于EP管中，加入200L的牛黄脱氧胆酸钠溶液，。

11、在15超说明书CN104096234A3/7页5声5MIN，于离心机15下以4000RPM离心15MIN，得到金丝桃素牛黄脱氧胆酸钠溶液药物。0033实施例24伪金丝桃素胆酸钠溶液药物制备0034首先取5MG伪金丝桃素置于EP管中，加入200L的胆酸钠溶液，在15超声5MIN，于离心机15下以4000RPM离心15MIN，得到伪金丝桃素胆酸钠溶液药物。0035实施例3溶血性对比实验0036实验方法0037取试管3支，分别加入新鲜配制的2大鼠血液生理盐水混悬液10ML；然后在第一个试管中加入生理盐水10ML作为对照管，第二个试管中加入溶解于DMSO的金丝桃素稀释液10ML，第三个试管中加入溶解于。

12、胆酸钠的金丝桃素稀释液10ML，摇匀，置37静置，观察。0038实验结果0039半小时后，我们发现第一个试管内液体无明显改变；第二个试管内血样因药液引起红细胞全部破裂，呈现红色澄清液；第三个试管内液体无明显改变。0040分别采用脱氧胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠等其他胆酸盐按照上述试验方法进行溶血性实验，发现溶解于胆酸盐的金丝桃素药液不会造成红细胞破裂，不具有溶血性。0041实施例组4131IHYP的生物分布及肿瘤治疗效果对比实验0042131IHYP是放射性131I标记的金丝桃素的缩写。0043模型建立0044皮下种植实体瘤鼠，将含小鼠H22肝癌细胞的腹腔液注射到种植小鼠的皮下各01ML，5天后肿瘤。

13、块形成，表示建模成功。0045说明，以下CI为以活度来描述放射源大小的单位，居里。0046实施例41胆酸钠金丝桃素药物相关实验0047实施例411DMSO金丝桃素药物与胆酸钠金丝桃素药物生物分布对比实验0048选取肿瘤最大直径在05CM15CM之间的荷瘤小鼠24只，按肿瘤大小随机分为2组，12只/组。0049分别尾静脉注射20CI溶解于DMSO的131IHYP和20CI溶解于胆酸钠的131IHYP，于注射后4H、24H摘眼球取血并处死，取心、肝、脾、肺、肾、甲状腺等主要脏器及组织，称重并测量其放射性计数，经衰变校正后，计算每克脏器或组织的放射性摄取量占总注射剂量的百分数ID/G，获得其在荷瘤鼠。

14、体内的生物学分布结果，结果如表1所示，P0005。0050表10051说明书CN104096234A4/7页60052实施例412DMSO金丝桃素药物与胆酸钠金丝桃素药物治疗肿瘤效果对比实验0053选取肿瘤最大直径在05CM15CM之间的荷瘤小鼠24只，按肿瘤大小随机分为3组，8只/组。0054其中一组作为对照组；另外2组治疗组分别静脉注射150CI溶解于DMSO的131IHYP和150CI溶解于胆酸钠的131IHYP进行治疗。分别于开始治疗前及治疗后每天用游标卡尺测量肿瘤长径、短径，计算肿瘤体积体积短径2长径/2，共观察13天，计算体积变化见图3，P005。0055结果分析0056体内生物学。

15、分布数据显示，药物在血液中的清除较快，主要通过肝脏代谢，与正常鼠生物分布结果一致。溶解于DMSO的131IHYP的治疗组，注射后24H，标记物在其他非靶组织的放射性摄取下降很快，而在肿瘤组织的放射性摄取可达到532040ID/G。溶解于胆酸钠的131IHYP的治疗组，注射后24H，在肿瘤部位的放射性摄取可达到657019ID/G，其它器官或组织的放射性均呈下降趋势。从整体数据中，我们可以看出，溶于胆酸钠中的131IHYP在肝、肾中的代谢快，而且在毛细血管丰富的肺中滞留少。溶解于胆酸钠的131IHYP的治疗组的肿瘤摄取情况优于溶解于DMSO的131IHYP的治疗组。0057治疗后不同组别肿瘤体积。

16、增长速度比较，对照组肿瘤体积呈8倍增长，DMSO制剂组缓慢增长约2倍，胆酸钠剂型组肿瘤体积缓慢下降。由此，我们可以得出，治疗组体积增长速度明显慢于对照组，131IHYP有明显的抗肿瘤作用。其中治疗组中，溶解于胆酸钠的131IHYP剂型组对肿瘤的抑制效果明显优于溶解于DMSO的131IHYP剂型组。0058为此，我们可以得出结论，溶解于胆酸钠的131IHYP治疗效果优于溶解于DMSO的131IHYP治疗效果，并且代谢较快。说明书CN104096234A5/7页70059实施例42脱氧胆酸钠金丝桃素药物相关实验0060实施例421DMSO金丝桃素药物与脱氧胆酸钠金丝桃素药物生物分布对比实验0061。

17、选取肿瘤最大直径在05CM15CM之间的荷瘤小鼠24只，按肿瘤大小随机分为2组，12只/组。0062分别尾静脉注射20CI溶解于DMSO的131IHYP和20CI溶解于脱氧胆酸钠的131IHYP，于注射后4H、24H摘眼球取血并处死，取心、肝、脾、肺、肾、甲状腺等主要脏器及组织，称重并测量其放射性计数，经衰变校正后，计算每克脏器或组织的放射性摄取量占总注射剂量的百分数ID/G，获得其在荷瘤鼠体内的生物学分布结果，结果如表2所示，P005。0063表200640065实施例422DMSO金丝桃素药物与脱氧胆酸钠金丝桃素药物治疗肿瘤效果对比实验0066选取肿瘤最大直径在05CM15CM之间的荷瘤小。

18、鼠24只，按肿瘤大小随机分为3组，8只/组。0067其中一组作为对照组，以生理盐水注射；另外2组治疗组分别静脉注射150CI溶解于DMSO的131IHYP和150CI溶解于脱氧胆酸钠的131IHYP进行治疗。分别于开始治疗前及治疗后每天用游标卡尺测量肿瘤长径、短径，计算肿瘤体积体积短径2长径/2，共观察13天，计算体积变化见图4，P005。0068结果分析0069体内生物学分布数据显示在血液中的清除较快，主要通过肝脏代谢，与正常鼠生说明书CN104096234A6/7页8物分布结果一致。溶解于DMSO的131IHYP的治疗组，注射后24H，标记物在其他非靶组织的放射性摄取下降很快，而在肿瘤组织。

19、的放射性摄取可达到532040ID/G。溶解于脱氧胆酸钠的131IHYP的治疗组，注射后24H，在肿瘤部位的放射性摄取可达到576013ID/G，其它器官或组织的放射性均呈下降趋势。从整体数据中，我们可以看出，溶于脱氧胆酸钠中的131IHYP在肝、肾中的代谢快，而在毛细血管丰富的肺中滞留少。溶解于脱氧胆酸钠的131IHYP的治疗组的肿瘤摄取情况优于溶解于DMSO的131IHYP的治疗组。0070治疗后不同组别肿瘤体积增长速度比较，对照组肿瘤体积呈8倍增长，DMSO制剂组缓慢增长约2倍，脱氧胆酸钠剂型组肿瘤体积缓慢下降。由此，我们可以得出，治疗组体积增长速度明显慢于对照组，131IHYP有明显的。

20、抗肿瘤作用。其中治疗组中，溶解于脱氧胆酸钠的131IHYP剂型组对肿瘤的抑制效果明显优于溶解于DMSO的131IHYP剂型组。0071为此，我们可以得出结论，溶解于脱氧胆酸钠的131IHYP治疗效果优于溶解于DMSO的131IHYP治疗效果，并且代谢较快。0072实施例43牛黄脱氧胆酸钠金丝桃素药物相关实验0073实施例431DMSO金丝桃素药物与牛黄脱氧胆酸钠金丝桃素药物生物分布对比实验0074挑选肿瘤最大直径在05CM15CM之间的荷瘤小鼠24只供实验所用，先按0075肿瘤大小随机分为2组，12只/组。0076分别尾静脉注射20CI溶解于DMSO的131IHYP和20CI溶解于牛黄脱氧胆酸。

21、钠的131IHYP，于注射后4H、24H摘眼球取血并处死，取心、肝、脾、肺、肾、甲状腺等主要脏器及组织，称重并测量其放射性计数，经衰变校正后，计算每克脏器或组织的放射性摄取占总注射剂量的百分数ID/G，获得其在荷瘤鼠体内的生物学分布结果，结果如表3所示，P005。0077表300780079说明书CN104096234A7/7页90080实施例432DMSO金丝桃素药物与牛黄脱氧胆酸钠金丝桃素药物治疗肿瘤效果对比实验0081选取肿瘤最大直径在05CM15CM之间的荷瘤小鼠24只，按肿瘤大小随机分为3组，8只/组。0082其中一组作为对照组，以生理盐水注射；另外2组治疗组分别静脉注射150CI溶。

22、解于DMSO的131IHYP和150CI溶解于牛黄脱氧胆酸钠的131IHYP进行治疗。分别于开始治疗前及治疗后每天用游标卡尺测量肿瘤长径、短径，计算肿瘤体积体积短径2长径/2，共观察13天，计算体积变化见图5，P005。0083结果分析0084体内生物学分布数据显示在血液中的清除较快，主要通过肝脏代谢，与正常鼠生物分布结果一致。溶解于DMSO的131IHYP的治疗组，注射后24H，标记物在其他非靶组织的放射性摄取下降很快，而在肿瘤组织的放射性摄取可达到532040ID/G。溶解于牛黄脱氧胆酸钠的131IHYP的治疗组，注射后24H，在肿瘤部位的放射性摄取可达到598021ID/G，其它器官或组。

23、织的放射性均呈下降趋势。从整体数据中，我们可以看出，溶于牛黄脱氧胆酸钠中的131IHYP在肝、肾中的代谢快，而在毛细血管丰富的肺中滞留少。溶解于牛黄脱氧胆酸钠的131IHYR的治疗组的肿瘤摄取情况优于溶解于DMSO的131IHYP的治疗组。0085治疗后不同组别肿瘤体积增长速度比较，对照组肿瘤体积呈8倍增长，DMSO制剂组缓慢增长约2倍，牛黄脱氧胆酸钠剂型组肿瘤体积缓慢下降。由此，我们可以得出，治疗组体积增长速度明显慢于对照组，131IHYP有明显的抗肿瘤作用。其中治疗组中，溶解于牛黄脱氧胆酸钠的131IHYP剂型组对肿瘤的抑制效果明显优于溶解于DMSO的131IHYP剂型组。0086为此，我们可以得出结论，溶解于牛黄脱氧胆酸钠的131IHYP治疗效果优于溶解于DMSO的131IHYP治疗效果，并且代谢较快。说明书CN104096234A1/3页10图1图2说明书附图CN104096234A102/3页11图3图4说明书附图CN104096234A113/3页12图5说明书附图CN104096234A12。