木质纤维素热解液的制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910261082.8 (22)申请日 2019.04.02 (71)申请人 康之源 （天津） 科技发展有限公司 地址 300000 天津市南开区华苑产业区工 华道壹号D座2门1101、 1102、 1103、 1104、 1105 （入驻天津清联网络孵化器 有限公司） (72)发明人 张博侯圣盼王志国刘群英 (51)Int.Cl. A61K 31/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C08H 7/00(2012.01) (54)发明名称 一种木。

2、质纤维素热解液的制备方法 (57)摘要 本发明属于保健品技术领域， 尤其涉及一种 木质纤维素热解液的制备方法， 包括以下步骤： 第一步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及400-500条件下， 保持3-6 h； 第二步， 在升温和加热过程中， 将产生的烟气 导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤维素热 解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一 级蒸馏收集98的馏分， 再进行二级蒸馏收集96 的馏分后， 收集97的馏分命名为TCM004， 即 为木质纤维素热解液。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 109966273 A 2019.07.05 CN 10。

3、9966273 A 1.一种木质纤维素热解液的制备方法， 其特征在于： 包括以下步骤： 第一步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及400-500条件下， 保持3-6 h； 第二步， 在升温和加热过程中， 将产生的烟气导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤 维素热解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一级蒸馏收集98的馏分， 再进行二级蒸馏收集 96的馏分后， 收集97的馏分命名为TCM 004， 即为木质纤维素热解液。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109966273 A 2 一种木质纤维素热解液的制备方法 技术领域 0001 本发明属于保健品技术领域， 尤。

4、其涉及一种木质纤维素热解液的制备方法。 背景技术 0002 据世界卫生组织(WHO)调查数据表明， 全球每年有1100多万新发癌症患者。 在治疗 癌症中， 药物治疗是必不可少的。 目前治疗癌症疾病的中西药存在一些问题： 选择性差， 疗 效较低； 毒副作用大， 在抑制肿瘤细胞活性的同时杀伤正常细胞， 使患者机体无法承受， 不 能持续用药。 故寻找和开发疗效明显、 毒副作用低的抗癌药物日趋成为一项重要研究课题。 0003 由于木质纤维素热解液中的有些成分具有抗菌、 消炎、 提高免疫力等功能， 早在 1970年日本、 韩国民间尝试使用木质纤维素热解液治疗癌症， 在治疗过程中， 木质纤维素热 解液显示。

5、了确切的疗效， 明显改善了患者的症状， 同时延长了晚期或乏术患者的生命， 提高 了患者的生存质量。 0004 然而， 木质纤维素热解液的制作工艺一直处于不完善状态， 以至于在抗癌领域的 研究没能得到发展， 从而使得应用受到限制。 目前的制造工艺主要有： 高温热解、 干馏、 回转 炉烧炭和平炉法， 实验室制备通常以干馏法为主。 通过以上几种方法制备得到热解液， 其中 一些化学成分中容易氧化和变色， 所以具有不稳定的理化性质； 在制备中会产生以漂浮或 沉淀状态存在的木焦油， 该组分和甲醇、 甲醛等会对生物体造成伤害， 因此得到的粗产物不 能直接应用在化妆品、 食品和药品等行业。 所以粗制木质纤维素。

6、热解液还需进一步精制， 从 而进一步得到实际无毒级适合于人类服用的精提液。 发明内容 0005 本发明提供一种木质纤维素热解液的制备方法， 以解决上述背景技术中提出的制 备工艺不完善的问题。 0006 本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现： 一种木质纤维素热解液的制备方法， 包括以下步骤： 第一步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及400-500条件下， 保持3-6 h； 第二步， 在升温和加热过程中， 将产生的烟气导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤 维素热解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一级蒸馏收集98的馏分， 再进行二级蒸馏收集 96的馏分。

7、后， 收集97的馏分命名为TCM 004， 即为木质纤维素热解液。 0007 本发明的有益效果为： 通过本技术方案制成的木质纤维素热解液， 经实验证明木质纤维素热解液对腹水瘤和 肺癌具有显著的效果。 因此， 通过本技术方案制得的木质纤维素热解液可用于制备治疗腹 水瘤和肺癌的药物。 说明书 1/5 页 3 CN 109966273 A 3 附图说明 0008 图1表示TCM004对各种细胞株增殖的影响； 图2表示TCM004对小鼠S180腹水瘤的影响； 图3表示TCM004对小鼠S180腹水瘤的影响； 图4表示TCM004对裸鼠Lewis 肺癌的影响； 图5表示TCM004对裸鼠Lewis 肺癌。

8、的影响； 图6表示TCM004对裸鼠A549肺癌异种移植瘤的影响； 图7表示TCM004对裸鼠A549肺癌异种移植瘤的影响； 图8表示小细胞肺癌晚期患者服用木质纤维素热解液前后指标比较； 图9表示原发肺癌晚期患者服用木质纤维素热解液前后指标比较。 具体实施方式 0009 一种木质纤维素热解液的制备方法， 包括以下步骤： 第一步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及400-500条件下， 保持3-6 h； 第二步， 在升温和加热过程中， 将产生的烟气导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤 维素热解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一级蒸馏收集98的馏分， 再进行二。

9、级蒸馏收集 96的馏分后， 收集97的馏分命名为TCM 004， 即为木质纤维素热解液。 0010 实施例一： 一种木质纤维素热解液的制备方法， 包括以下步骤： 第一步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及400条件下， 保持 3-6 h； 第二步， 在升温和加热过程中， 将产生的烟气导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤 维素热解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一级蒸馏收集98的馏分， 再进行二级蒸馏收集 96的馏分后， 收集97的馏分命名为TCM 004， 即为木质纤维素热解液。 0011 实施例二： 一种木质纤维素热解液的制备方法， 包括以下步骤： 第一。

10、步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及450条件下， 保持 3-6 h； 第二步， 在升温和加热过程中， 将产生的烟气导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤 维素热解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一级蒸馏收集98的馏分， 再进行二级蒸馏收集 96的馏分后， 收集97的馏分命名为TCM 004， 即为木质纤维素热解液。 0012 实施例三： 说明书 2/5 页 4 CN 109966273 A 4 一种木质纤维素热解液的制备方法， 包括以下步骤： 第一步， 将壳类或者核类置入烟道气炭化炉内， 于无水、 空气供氧及500条件下， 保持 3-6 h； 第二步， 。

11、在升温和加热过程中， 将产生的烟气导入冷气管液化， 收集液体， 得到木质纤 维素热解原液； 第三步， 取木质纤维素热解原液进行一级蒸馏收集98的馏分， 再进行二级蒸馏收集 96的馏分后， 收集97的馏分命名为TCM 004， 即为木质纤维素热解液。 0013 实验一： TCM004对各种细胞株增殖的抑制作用 将对数生长期的人肝癌细胞系 （SMMC-7721、 PLC、 HepG2） 、 人大细胞肺癌细胞 （H460） ； 人 非小细胞肺癌细胞 （A549） ； 人结肠癌细胞 （DLD-1） ； 人神经母胶质瘤细胞 （SH-SY5Y） ； 人宫颈 癌细胞 （HELA） 接种于96孔细胞培养板中，。

12、 每孔100 L， 放入细胞培养箱中孵育过夜， 使细胞 贴壁。 分为空白组和实验组， 实验组的TCM 004的9个浓度分别为0.39%、 0.78%、 1.56%、 3.125%、 6.25%、 12.5%、 25%、 50%、 100%， 干预24 h。 基于MTT法测定的OD值计算IC50值， 评价木 质纤维素热解液的抑制活性。 0014 结果： 由图1所示的结果可知， TCM004对SMMC-7721， PLC， HepG2， H460， A549， DLD- 1， SH-SY5Y及HELA细胞体外增殖有不同程度的抑制作用， 其中， A549对TCM004最为敏感， IC50值最低。 由。

13、此可知， TCM004对以上肿瘤细胞的增殖均有较好的抑制作用。 0015 实验二： TCM 004 对小鼠的急性口服毒性实验研究 为了评价TCM 004是否对小鼠存在毒性作用， 在参考药理学实验方法上我们设计了急 性口服毒性试验。 急性口服毒性是指动物一次经口接受单剂量或在24h内接受多次剂量受 试物， 在短期内动物出现毒性反应的试验。 当受试物在无其他参考资料的情况下， 急性口服 毒性试验为进行临床研究的剂量和长期毒性试验设置提供参考。 0016 具体实验流程为： 取昆明种小鼠20只 （18-20 g） ， 雌雄各半， 分为空白对照组和给 药组， 称量体重并编号。 然后给药组进行一次性灌胃T。

14、CM 004 0.2mL/10g， 空白组则给予相 同剂量的生理盐水， 持续观察一周， 记录小鼠给药后出现的情况以及生存状态和体重变化 等。 0017 实验结果： 实验动物一次经口接受单剂量 0.2mL/10g后， 个别小鼠出现打嗝现象， 经过30-60min后逐渐恢复正常， 1周内动物没有死亡发生， 并且未见其他明显中毒症状。 在 急性毒性受试期间， 受试药物组小鼠未见有死亡， 小鼠毛色和食欲均正常， 行为活动无异常 情况， 活跃度良好， 对外界刺激反应灵敏。 0018 结论： 通过小鼠急性口服毒性实验研究发现， TCM 004干预期间， 小鼠未出现死亡， 毛色、 食欲、 行为活动无异常情况。

15、， 可初步得出TCM 004对小鼠毒性作用低， 甚至无毒， 这需 要后期LD50实验的进一步验证。 0019 试验三： TCM004对小鼠S180腹水瘤的治疗作用 （1） S180细胞悬液的制备： S180细胞悬液的制备： 收集状态良好的S180细胞悬液， 将其 腹腔注射入备用的KM小鼠体内。 取接种5-6天的S180腹水型荷瘤小鼠， 用75%乙醇擦拭荷瘤 鼠的腹部皮肤， 用5 mL一次性无菌注射器穿过腹部抽取腹腔内的腹水 （即内含S180 细胞） ， 接着将抽取的腹水用PBS洗涤离心3次。 采用细胞计数板对细胞进行计数， 然后用PBS稀释成 说明书 3/5 页 5 CN 109966273 。

16、A 5 所需浓度的瘤细胞悬液 （瘤细胞含量约为5106/mL） 放置于冰盒上。 0020 （2） 荷瘤小鼠模型的建立： 将制备好的S180细胞悬液皮下注射接种于KM 小鼠右前 肢腋下， 每只小鼠0.2 mL。 0021 （3） 动物分组与给药： 当荷瘤小鼠瘤体体积长到90mm3 时开始给药， 将荷瘤小鼠随 机分成模型组 （Model） 、 阳性药组 （CTX） 和实验组 （TCM 004） ， 其中实验组又分为低、 中、 高剂 量组， TCM 004浓度分别为6.25%、 12.5%和25%， 每组10只。 实验组给药剂量为0.1mL/10g， 模 型组给予同样剂量的生理盐水， 灌胃给药每天1。

17、次； 阳性药组给予环磷酰胺溶液 （CTX） ， 腹腔 注射， 给药剂量为20mg/kg， 隔日给药1次。 连续给药33天。 0022 （4） 评价指标： 用游标卡尺测量荷瘤小鼠瘤体长径、 短径， 每3天一次， 计算瘤体 体积； 实验结束后， 处死动物剥离瘤体称量其质量， 计算抑瘤率； 瘤体体积=长径短径2/2； 抑瘤率 （TI） = （模型组瘤重-实验组瘤重） /模型组瘤重100 % 结果： 由图2可知， 不同浓度的TCM 004 均可抑制体内肿瘤的生长。 从小鼠瘤体体积看， 阳性药组小鼠的瘤体体积与模型组相比有所降低， 差异具有显著性(P 0. 05 )， 而实验 组小鼠的瘤体体积与模型组比。

18、较降低更为明显， 差异具有极显著性(P 0.01)。 图3显示， 与 模型组相比， 阳性药组和实验组的瘤体质量均有明显的显著性差异(P 0.01)。 根据瘤体质 量计算抑瘤率， 阳性药组抑瘤率为28.52%， 实验组抑瘤率高达65%以上。 由此可以说明TCM 004对S180 移植瘤具有治疗性抑制作用。 0023 试验四： TCM004对裸鼠Lewis肺癌的治疗作用 （1） Lewis肺癌小鼠模型的建立： 将Lewis 肺癌细胞 （LLC） 冻存细胞复苏传代， 然后收 集状态良好的细胞悬液， 采用细胞计数板计数， 然后用PBS稀释成瘤细胞悬液(瘤细胞含量 约为5106/mL)， 放置于冰盒上，。

19、 接种于BALB/c裸鼠右侧翼 （皮下注射） ， 每只0.2 mL细胞悬 液。 0024 （2） 动物分组与给药： 接种24h后， 将BALB/c裸鼠随机分为模型组、 阳性药组和实验 组， 其中实验组又分为低、 中、 高剂量组， TCM 004浓度分别为6.25%、 12.5%和25%， 每组5只。 实验组给药剂量为0.1mL/10g， 模型组给予同样剂量的生理盐水， 灌胃给药每天1次； 阳性药 组给予紫杉醇注射液 （PTX） ， 腹腔注射， 给药剂量为10mg/kg， 隔日给药1次。 连续给药30天。 0025 （3） 评价指标： 用游标卡尺测量BALB/c裸鼠瘤体长径、 短径， 每4天一次。

20、， 计算瘤 体体积； 实验结束后， 处死动物剥离瘤体称量其质量， 计算抑瘤率； 瘤体体积=长径短径2/2； 抑瘤率 （TI） = （模型组瘤重-实验组瘤重） /模型组瘤重100 % 结果： 由图4可知， 与模型组比较， 阳性药组和实验组裸鼠的瘤体体积显著减小， 其中实 验组的高剂量组有更显著性差异 (P 0.01)， 肿瘤直观图中也验证了上述结果。 在肿瘤直 观图中观察到肿瘤数目不一致， 原因是有个别小鼠在整个实验过程中并未出现肿瘤块。 图5 显示， 与模型组相比， 阳性药组和实验组的瘤体质量均有明显的显著性差异， 其中实验组的 高剂量组有更显著性差异 (P 0.01)。 根据瘤体质量计算抑瘤。

21、率， 阳性药组抑瘤率为 35.42%， 实验组抑瘤率均高于阳性药组， 实验组抑瘤率最高达到64.91%。 由此可以说明TCM 004对Lewis 肺癌具有治疗性抑制作用。 0026 试验五： TCM004对裸鼠A549肺癌异种移植瘤的治疗作用 说明书 4/5 页 6 CN 109966273 A 6 （1） 荷瘤裸鼠模型的建立： 首先将A549 冻存细胞复苏传代， 然后收集状态良好的细胞 悬液， 采用细胞计数板计数， 然后用PBS 稀释成瘤细胞悬液 （瘤细胞含量约为1108/mL） ， 放置于冰盒上， 接种于裸鼠右侧翼 （皮下注射） ， 每只0.1 mL 细胞悬液。 0027 （2） 动物分组。

22、与给药： 裸鼠接种24h 后将接种小鼠随机分成模型组、 阳性药组和实 验组， 其中实验组又分为低、 中、 高剂量组， TCM 004浓度分别为6.25%、 12.5%和25%， 每组6 只。 实验组给药剂量为0.1mL/10g， 模型组给予同样剂量的生理盐水， 灌胃给药每天1次； 阳 性药组给予紫杉醇注射液 （PTX） ， 腹腔注射， 给药剂量为10mg/kg， 隔日给药1次。 连续给药30 天。 0028 （3） 指标测定： 同实验四。 0029 结果： 由图6可知， 与模型组比较， 阳性药组(P 0. 05 )和实验组的低(P 0.01)、 中(P 0.01)、 高(P0.001)剂量组瘤。

23、体体积均有显著性差异。 图7显示， 与模型组相 比， 阳性药组和实验组的瘤体质量均有明显的显著性差异。 根据瘤体质量计算抑瘤率， 阳性 药组抑瘤率为36.71%， 实验组抑瘤率均高于阳性药组， 最高达到63.30%。 由此可以说明TCM 004对A549肺癌异种移植瘤具有治疗性抑制作用。 0030 试验六： 木质纤维素热解液对晚期癌症患者放化疗期间的增白、 增免功效 患者一： 孙xx,64岁。 2018年10月经天津市肿瘤医院诊断确诊为小细胞肺癌广泛期， 已 无手术可能。 于2018年10月进行化疗， 第一疗程结束后机体免疫细胞被摧毁。 服用木质纤维 素热解液后免疫指标恢复正常， 顺利进入第二。

24、化疗期。 图8为患者服用木质纤维素热解液前 后指标比较。 0031 患者二： 刘xx， 73岁。 2016年3月查肺腺癌、 原发肺癌纵隔淋巴癌转移。 卧床数月， 靶 向药物配对失败。 日本国立癌症研究中心建议采用放化疗。 患者服用木质纤维素热解液前 2016年11月24日经天津胸科医院检查， 报告单显示： 评价小细胞肺癌治疗效果的重要指标- 神经元特异性烯醇化酶指标为18.68； 评价免疫力的重要指标-红细胞3.60、 血红蛋白111、 红细胞压积34.5。 图9为此患者服用木质纤维素热解液前后指标比较。 0032 综上所述， 本发明的木质纤维素热解液对腹水瘤和肺癌具有显著的效果。 因此， 本 发明的木质纤维素热解液可用于制备治疗腹水瘤和肺癌的药物。 0033 以上对本发明的实施例进行了详细说明， 但所述内容仅为本发明的较佳实施例， 不能被认为用于限定本发明的实施范围， 凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等， 均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。 说明书 5/5 页 7 CN 109966273 A 7 图1 图2 图3 说明书附图 1/3 页 8 CN 109966273 A 8 图4 图5 图6 说明书附图 2/3 页 9 CN 109966273 A 9 图7 图8 图9 说明书附图 3/3 页 10 CN 109966273 A 10 。