五指毛桃提取物的制备方法及在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910408069.0 (22)申请日 2019.05.15 (71)申请人 广东省微生物研究所 （广东省微生 物分析检测中心） 地址 510070 广东省广州市越秀区先烈中 路100号大院 申请人 广东粤微食用菌技术有限公司 (72)发明人 雍天乔梁丹灵刁雪谢意珍 吴清平 (74)专利代理机构 广州弘邦专利商标事务所有 限公司 44236 代理人 张钇斌 (51)Int.Cl. A61K 36/60(2006.01) A61P 19/06(2006.01) A61P 13。

2、/12(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A23L 33/105(2016.01) A61K 125/00(2006.01) (54)发明名称 五指毛桃提取物的制备方法及在制备治疗/ 预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用 (57)摘要 本发明涉及一种植物提取物的制备方法及 其在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保 健品方面的应用， 尤其涉及五指毛桃提取物的制 备方法及其在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的 药物/保健品方面的应用。 本发明的有益效果在 于： 1、 本发明所述五指毛桃提取物的制备工艺简 洁， 成本低； 2、 本发明采。

3、用乙醇、 水或者乙醇和水 的混合溶剂作为溶剂提取五指毛桃， 不存在有机 溶剂污染或残留的问题， 安全环保； 3、 本发明五 指毛桃提取物具有显著的降尿酸作用， 且副作用 小， 能够用于制备缓解痛风病症的药物， 为改善 目前痛风病药物副作用大的现象提供了新的方 向。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 109999079 A 2019.07.12 CN 109999079 A 1.一种五指毛桃提取物的制备方法， 其特征在于， 包含： (1)将五指毛桃子实体粉碎； (2)在0-75的水浴中用1-40L/(100g五指毛桃)的乙醇萃取0.5-6小时， 后过滤分离滤 渣和滤液， 重复一至三次；。

4、 (3)将步骤(2)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干得到 五指毛桃醇提物； (4)在0-100的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的五指毛桃残渣0.5-6小时， 后过滤 分离滤渣和滤液， 重复一至三次； (5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干得到 五指毛桃水提物。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中的提取温度为65； 和/或， 所述步骤(4)中的提取温度为85。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 包含： (1)将干燥的五指毛桃子实体粉碎； (2)在65的水浴。

5、中用2L/(100g五指毛桃)的乙醇萃取3小时， 后减压过滤分离滤渣和 滤液， 重复三次； (3)将步骤(2)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干得到 五指毛桃醇提物； (4)在85的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的五指毛桃残渣3小时， 后减压过滤分离 滤渣和滤液， 重复三次； (5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干得到 五指毛桃水提物。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)的萃取为超声提取； 和/ 或， 所述步骤(4)的萃取为超声提取。 5.一种权利要求1至4中任一所述的制备。

6、方法制备得到的五指毛桃提取物， 其特征在 于， 包括五指毛桃醇提物和五指毛桃水提物。 6.一种权利要求1至4中任一所述的五指毛桃提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病 的药物/保健品方面的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 一种权利要求5所述的五指毛桃提取物在 制备治疗/预防高尿酸相关疾病而且不影响小鼠体重且对肾无毒性的药物/保健品方面的 应用； 进一步优选的， 一种权利要求5所述的五指毛桃提取物在制备治疗/预防高尿酸相关 疾病而且对肾功能具有恢复效果的药物/保健品方面的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 五指毛桃醇提物的浓度为5-400mg/kg； 和/ 或。

7、， 五指毛桃水提物的浓度为50-200mg/kg。 9.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述高尿酸相关疾病包括但不限于高尿酸 血症、 高尿酸血症肾炎、 高尿酸血症高血压、 高尿酸血症心脏病、 痛风肾结石、 痛风。 10.一种治疗/预防高尿酸相关疾病的药物， 其特征在于， 包括权利要求5所述的五指毛 桃提取物及辅料。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109999079 A 2 五指毛桃提取物的制备方法及在制备治疗/预防高尿酸相关 疾病的药物/保健品方面的应用 技术领域 0001 本发明涉及一种植物提取物的制备方法及在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药 物/保健品方面的应用， 尤其涉及五。

8、指毛桃提取物的制备方法及在制备治疗/预防高尿酸相 关疾病的药物/保健品方面的应用。 背景技术 0002 尿酸是嘌呤代谢分解的最终产物。 由于某些原因产生尿酸过多或由于肾脏排泄尿 酸减少都可引起血中尿酸含量增高。 高尿酸相关疾病是体内尿酸的产生增加， 肾尿酸的排 泄减少， 使得体内尿酸浓度高于血液溶解能力(360 mol/L)的一类疾病。 随着现代生活习 惯和饮食结构的改变， 高尿酸相关疾病的发病率升高。 血中尿酸过多对人体危害巨大。 例 如， 尿酸以晶体形式在关节中沉积， 并导致反复发作导致痛风和尿酸性肾结石。 此外， 这些 沉积结晶引起软组织、 关节和骨组织反复发炎性剧烈疼痛， 严重降低患者。

9、生活质量。 0003 高尿酸相关疾病的治疗需要降低体内血尿酸浓度。 目前， 主要是从尿酸生成抑制 或者促进尿酸排泄两方面来治疗或预防高尿酸相关疾病。 首先， 从促进尿酸排泄方面， 在肾 单位的细胞上的特定转运蛋白(如肾尿酸转运蛋白URAT1)是高尿酸血症的重要靶点。 阿片 类药物， 如丙磺舒， 磺吡酮和苯溴马隆均是直接作用于肾小管靶点的药物， 它们通过与一种 或多种转运蛋白相互作用来抑制尿酸盐重吸收， 增加尿酸的肾排泄， 但是由于过敏反应等 不良副作用而使其使用受限。 其次， 从抑制尿酸生成方面， 黄嘌呤氧化酶(XOD)是另一个重 要的靶标， 主要分布在肝脏和肠道， 并在嘌呤代谢途径中将次黄嘌。

10、呤和黄嘌呤氧化成尿酸。 现抑制XOD的降尿酸药物可分为嘌呤和非嘌呤类。 别嘌呤醇是最常用的临床XOD嘌呤类抑制 剂， 但由于它可引起史蒂文斯约翰逊综合征和肾毒性等毒副作用而备受争议。 非布索坦 是一种非嘌呤XOD抑制剂， 因其会导致心血管并发症， 食品和药物管理局(FDA)也要补充该 药物的警示性声明。 0004 因此， 迫切需要开发有效和安全的新型降尿酸药物。 0005 植物提取物作为一种治疗药物候选物， 由于其可能的副作用较小的优点而受到广 泛关注， 但是植物提取物作为药物候选物， 通常存在治疗效果较差以及提取率太低而无法 工业化的问题。 发明内容 0006 针对以上不足， 本发明提供一种。

11、有效的可以实用化的植物五指毛桃提取物用于治 疗/预防高尿酸相关疾病。 0007 本发明通过以下方案达到上述目的： 0008 在第一方面， 提供一种五指毛桃提取物的制备方法， 包含： 0009 (1)将五指毛桃子实体粉碎； 0010 (2)在0-75的水浴中用1-40L/(100g五指毛桃)的乙醇萃取0.5-6小时， 后过滤分 说明书 1/5 页 3 CN 109999079 A 3 离滤渣和滤液， 重复一至三次； 0011 (3)将步骤(2)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干 得到五指毛桃醇提物； 0012 (4)在0-100的水浴中用水作为溶剂萃取醇提。

12、后的五指毛桃残渣0.5-6小时， 后 过滤分离滤渣和滤液， 重复一至三次； 0013 (5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干 得到五指毛桃水提物。 0014 优选的， 所述步骤(2)中的提取温度为65。 0015 优选的， 所述步骤(4)中的提取温度为85。 0016 一种优选的五指毛桃提取物的制备方法， 包含： 0017 (1)将干燥的五指毛桃子实体粉碎； 0018 (2)在65的水浴中用2L/(100g五指毛桃)的乙醇萃取3小时， 后减压过滤分离滤 渣和滤液， 重复三次； 0019 (3)将步骤(2)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-。

13、35mL/(100g五指毛桃)， 冻干 得到五指毛桃醇提物； 0020 (4)在85的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的五指毛桃残渣3小时， 后减压过滤 分离滤渣和滤液， 重复三次； 0021 (5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g五指毛桃)， 冻干 得到五指毛桃水提物。 0022 进一步优选的， 所述步骤(2)的萃取为超声提取。 0023 进一步优选的， 所述步骤(4)的萃取为超声提取。 0024 使用上述方法和参数， 五指毛桃水提物提取率能够达到5左右， 而五指毛桃醇提 物的提取率能够达到10左右， 这样的提取物率使得工业化成为可能。 0025 本发明制备五。

14、指毛桃提取物的方法简洁、 安全、 有效且能有效控制成本。 制备方法 使用资源丰富、 价格便宜、 环境友好的乙醇、 水或者乙醇和水混合物作为溶剂， 达到降低生 产成本、 避免有机溶剂污染的目的。 0026 五指毛桃为桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vahl.的干燥根， 分布于广东及我国西 南部至东南部各地， 含挥发油、 氨基酸、 糖类、 甾类、 香豆精、 生物碱及有机酸等， 常用治肺虚 痰喘咳嗽、 脾胃气虚之肢倦无力、 食少腹胀、 脾虚水肿、 带下、 风湿痹痛、 腰腿痛。 0027 在第二方面， 提供一种上述制备方法制备得到的五指毛桃提取物， 包括五指毛桃 醇提物和五指毛桃水提物。 002。

15、8 在第三方面， 提供一种上述五指毛桃提取物在治疗/预防高尿酸相关疾病方面的 应用。 0029 在第四方面， 提供一种上述五指毛桃提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的 药物/保健品方面的应用。 0030 在第五方面， 提供一种治疗/预防高尿酸相关疾病的药物， 包括上述的五指毛桃提 取物及辅料。 0031 优选的， 所述辅料包括可药用的载体。 0032 在上述应用和药物中， 五指毛桃醇提物的优选浓度为5-400mg/kg。 说明书 2/5 页 4 CN 109999079 A 4 0033 在上述优选的5-400mg/kg浓度范围内， 五指毛桃醇提物对降尿酸百分率可以达到 20以上。 0034。

16、 在上述应用和药物中， 五指毛桃水提物的优选浓度为50-200mg/kg。 0035 在上述优选的50-200mg/kg浓度范围内， 五指毛桃水提物对降尿酸百分率可以达 到20以上。 0036 在上述应用和药物中， 高尿酸相关疾病包括但不限于高尿酸血症、 高尿酸血症肾 炎、 高尿酸血症高血压、 高尿酸血症心脏病、 痛风肾结石、 痛风。 0037 利用上述方法制得的五指毛桃提取物进行小鼠体内降尿酸试验， 结果表明用五指 毛桃提取物连续灌胃7天， 可将高尿酸小鼠的血液尿酸浓度降低到低于正常小鼠尿酸水平。 0038 因此， 本发明中的五指毛桃提取物具有良好的可药用的降尿酸效果， 通过药理实 验验证其。

17、降尿酸效果可能由促进尿酸排泄所介导。 0039 进一步发现， 五指毛桃提取物不影响小鼠体重且对肾无毒性， 还对肾功能具有恢 复效果， 特别是五指毛桃醇提物的恢复效果非常明显， 特别是在一定给药浓度范围内具有 更加显著的效果。 0040 因此， 进一步地， 本发明还提供一种上述五指毛桃提取物在制备治疗/预防高尿酸 相关疾病而且不影响小鼠体重且对肾无毒性的药物/保健品方面的应用。 0041 因此， 进一步地， 本发明还提供一种上述五指毛桃提取物在制备治疗/预防高尿酸 相关疾病而且对肾功能具有恢复效果的药物/保健品方面的应用。 0042 因此， 进一步地， 本发明还提供一种上述五指毛桃醇提物在制备治。

18、疗/预防高尿酸 相关疾病而且不影响小鼠体重且对肾无毒性的药物/保健品方面的应用。 0043 因此， 进一步地， 本发明还提供一种上述五指毛桃醇提物在制备治疗/预防高尿酸 相关疾病而且对肾功能具有恢复效果的药物/保健品方面的应用。 0044 本发明的有益效果在于： 0045 1、 本发明所述五指毛桃提取物的制备工艺简洁， 成本低； 0046 2、 本发明采用乙醇、 水或者乙醇和水的混合溶剂作为溶剂提取五指毛桃， 不存在 有机溶剂污染或残留的问题， 安全环保； 0047 3、 本发明五指毛桃提取物具有显著的降尿酸作用， 且副作用小， 能够用于制备缓 解痛风病症的药物， 为改善目前痛风病药物副作用大。

19、的现象提供了新的方向。 附图说明 0048 图1为各组小鼠血清尿酸水平。 0049 图2为各组小鼠尿液尿酸水平。 0050 图3为各组小鼠血清尿素氮水平。 0051 图4为各组小鼠血清肌酐水平。 0052 图5为各组小鼠体重增长情况。 具体实施方式 0053 以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。 0054 实施例1： 说明书 3/5 页 5 CN 109999079 A 5 0055 五指毛桃乙醇提物的制备 0056 取五指毛桃子实体100g， 使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中， 并加入2L乙醇， 将混合 物在65下水浴提取3小时后使用400目滤网过滤。 提取实验重复三次， 将所得滤液合并后。

20、 减压蒸馏浓缩并冻干得到五指毛桃乙醇提物(FHE)4.15g， 产率为4.15。 0057 实施例2 0058 五指毛桃水提物的制备 0059 在85的水浴中用2L水作为溶剂萃取醇提后的五指毛桃残渣3小时， 后减压过滤 分离滤渣和滤液， 提取实验重复三次， 将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩并冻干得到水提物 (FHW)7.13g， 产率为7.13。 0060 试验例1 0061 五指毛桃提取物降尿酸药理实验 0062 (1)取48只雄性SPF昆明小鼠(202g)， 随机分为6组： 正常对照组， 高尿酸血症模 型组， 别嘌呤醇和苯溴马隆对照以及五指毛桃醇提物实验组和五指毛桃水提物实验组给药 组。 除正。

21、常对照组腹腔注射和灌胃蒸馏水外， 其他组按照100mg/kg/d的剂量腹腔注射氧嗪 酸钾盐， 同时灌胃600mg/kg/d剂量的次黄嘌呤造模。 造模前一个小时禁食不禁水， 造模后1 小时， 用别嘌呤醇(5mg/kg)和苯溴马隆(7.8mg/kg)灌胃给药予别嘌呤醇和苯溴马隆对照的 小鼠。 对于药物组， 五指毛桃醇提物实验组(FHE)以100mg/kg浓度的实施例1制得的五指毛 桃醇提物按100mg/kg/d的剂量进行灌胃给药； 五指毛桃水提物实验组(FHW)以100mg/kg浓 度的实施例2制得的五指毛桃水提物按100mg/kg/d的剂量进行灌胃给药， 正常对照组和高 尿酸血症模型对照组则灌胃。

22、相同体积的纯水， 连续7天， 并在第1， 3， 5， 7天对小鼠称重记录。 0063 (2)第7天灌胃给药1小时后， 处死取血和尿液使用离心机在3500r/min速度下离心 10min所得的血液样本分离得到血清存于-20。 0064 (3)取(2)中所得血清和尿液分别测定血清尿酸水平， 尿液尿酸水平， 血清尿素和 肌酐水平以及尿液尿素和肌酐水平。 0065 (4)统计分析使用专业数据处理程序SPSS(Release 11.5， SPSS Inc.， 2001)进行。 所有数据表示为平均值标准误差(S.D.)， 并通过单因素方差分析(ANOVA)进行分析， 并通 过双尾Students t检验比。

23、较组平均值。 差异有统计学意义(P0.05或P0.01)的用以下符 号表示： 与正常组对照有差异： *P0.05，*P0.01； 与PO和HX诱导的高尿酸血症模型组对照 有差异， #P0.05，#P0.01； 与别嘌呤醇组对照有差异，P0.05， P0.01。 0066 血尿酸是评价降尿酸效果的直接指标， 结果如图1所示。 氧嗪酸钾和次黄嘌呤联合 给药导致高尿酸血症模型组血清尿酸水平升高， 与正常小鼠(126 mol/L)相比， 高尿酸血症 小鼠显著升高至439 mol/L(P0.01)， 说明造模成功。 别嘌呤醇(251mol/L， P0.01)和苯溴 马隆(137 mol/L， P0.01。

24、)对照组的血尿酸水平下降也证实了高尿酸血症造模的成功。 重要 的是， 在FHE和FHW给药组中， 高尿酸血小鼠的血尿酸水平分别下降到137和140 mol/L(P0.01)中观察到尿尿酸水平的 显著升高， 通过别嘌呤醇给药(2672 mol/L)无显著改变。 7.8mg/kg的苯溴马隆尿尿酸含量 说明书 4/5 页 6 CN 109999079 A 6 升高至2922(P0.05)， FHE和FHW的尿酸表达分别为1534和3464 mol/L， FHW起到明显升高尿 尿酸含量的作用(P0.05)。 FHW可能通过促进尿酸排泄实现降低尿酸效果。 0068 为研究FHE和FHW对肾功能的影响， 。

25、我们还测定高尿酸血症小鼠肾功能参数。 尿素 氮(BUN)是肾功能主要指标之一。 尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物， 主要由肾小球 (肾脏的重要组成部分)滤过排出体外。 在肾功能损害早期， 血尿素氮可在正常范围。 当肾小 球滤过率下降到正常的50以下时， 血尿素氮的浓度才迅速升高。 因此， 血尿素氮水平反映 了肾功能的状况： 血尿素氮的水平越高， 肾功能的损伤程度越严重。 结果如图3所示， 由于氧 嗪酸钾与次黄嘌呤组合给药的部分替代氧嗪酸钾纯给药模型的肾损伤作用， 高尿酸模型组 (2.72mmol/L)比正常小鼠(2.53mmol/L， P0.05)的BUN水平更高。 别嘌呤醇组的BUN (。

26、7.14mmol/L， P0.01)比模型组显著增高， 表明别嘌呤醇使高尿酸血症小鼠的肾功能受损。 与别嘌呤醇组相比， 苯溴马隆、 FHE和FHW给药， FHE血清BUN参数分别为2 .59， 2 .50和 2.98mmol/L， 显著低于别嘌醇的对照且差异有统计学意义。 FHE和FHW都没有表现出肾功能 毒性。 0069 肌酐， 是含氮有机代谢物的代谢终产物， 由肾小球滤过， 随尿液排出。 但肾功能受 损失， 肌酐含量上升。 因此肌酐值成为评价肾功能的主要指标之一。 如图4所示， 氧嗪酸钾和 次黄嘌呤的给药能使正常小鼠的血清肌酸酐水平(51.82 mol/L)升高至(60.30 mol/L，。

27、 P 0.01)。 别嘌呤醇组的肌酐(65.18 mol/L， P0.05)。 0071 上述结果说明， 本发明五指毛桃的乙醇(FHE)和水(FHW)提取物使高尿酸血症小鼠 的血清尿酸水平显著降低， 降尿酸效果优于阳性药别嘌呤醇。 FHE和FHW显示对尿酸排泄有 促进作用。 另外， 五指毛桃提取物对肾无毒性， 并且还对肾功能恢复有一定效果， 特别是五 指毛桃醇提取物表现出值得关注的恢复效果。 0072 以上所述， 仅为本发明的较佳的具体实施例， 但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内， 根据本发明的技术方案及其 构思加以等同替换或改变， 都应涵盖在本发明的保护范围内。 说明书 5/5 页 7 CN 109999079 A 7 图1 图2 说明书附图 1/3 页 8 CN 109999079 A 8 图3 图4 说明书附图 2/3 页 9 CN 109999079 A 9 图5 说明书附图 3/3 页 10 CN 109999079 A 10 。