高纬度地区马铃薯原原种繁育方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910348170.1 (22)申请日 2019.04.28 (71)申请人 大兴安岭地区农业林业科学研究院 （大兴安岭林业集团公司农业林业 科学研究院） 地址 165000 黑龙江省大兴安岭地区加格 达奇区光辉路10号 (72)发明人 张雅奎吴凌娟赵光磊董传民 徐学谱刁琢梁杰温福军 李功义 (74)专利代理机构 北京君泊知识产权代理有限 公司 11496 代理人 李丹 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) A01G 22/25(2018.01) (。

2、54)发明名称 一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法 (57)摘要 本发明一种高纬度地区马铃薯原原种繁育 方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 茎尖脱毒组织 获得， 病毒检测， 脱毒试管苗快速繁殖， 网棚起垄 生产原原种。 本发明的有益效果在于： 相比常规 无土栽培繁育技术， 本发明可以直接在大田起垄 扣上网棚繁育原原种， 不需要购买基质及固定设 备， 生产资料成本低、 繁育方式简单易行； 本发明 可以实现田间机械化作业， 极大地降低了人工成 本， 效率得到极大提高； 本发明的单株脱毒苗和 单位面积的原原种产量高； 本发明的方法从源头 上解决了马铃薯 “退化” 的问题， 实现了高纬度地 区马铃薯。

3、原原种的繁育， 在推动高纬度地区马铃 薯脱毒种薯的工厂化繁育进程和马铃薯产业的 健康持续发展中可发挥重要作用。 权利要求书2页 说明书6页 序列表3页 CN 110073975 A 2019.08.02 CN 110073975 A 1.一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 包括以下步骤： (1)茎尖脱毒组织获得： 在田间根据植株长势， 选择高纬度地区马铃薯的健康单株； 之 后将所述健康单株的薯块在36条件下进行催芽46周， 待所述薯块催芽萌发至芽长1.0 2.0cm时， 剥离所述芽直到只保留一个叶原基生长点， 且所述叶原基生长点大小为0.1 0.3mm； 之后将所述叶原基生长点。

4、切下， 置于装有基本培养基的1号培养瓶中， 封严所述1号 培养瓶的瓶口放于培养室内培养， 直至长出小植株； (2)病毒检测： 采用RT-PCR法对步骤(1)中制备的所述小植株进行病毒检测， 筛选得到 不含病毒的小植株， 称为脱毒小植株； (3)脱毒试管苗快速繁殖： 将所述脱毒小植株在无菌条件下按茎节切段， 获得茎节段； 之后将所述茎节段置于装有快速繁殖培养基的2号培养瓶内， 在2325、 光照强度 3000Lx、 光照时间16h/d条件下培养1520d， 获得具备移栽条件的试管苗； 所述快速繁殖培 养基的成分组成是Ms大量元素、 微量元素、 铁盐、 20g/L蔗糖或白糖， pH值5.8， 不含。

5、有机物和 植物激素； 每个所述2号培养瓶内培养1530个所述茎节段； (4)网棚起垄生产原原种： 移栽前57d， 将培养试管苗的所述2号培养瓶瓶盖打开， 置 于培养室内进行炼苗； 之后移栽至整理好的苗床上培养1015d， 之后将其假植于育苗钵里 培养1015d， 得到假植苗； 之后根据所述假植苗的长势， 及时移栽定植于整理好的大棚内， 进行微喷灌溉， 扣上防虫网， 并在生长过程中进行34次中耕培土、 23次人工除草、 及时 灌溉、 病害防治； 成熟后进行机械杀秧和收获， 之后进行包装贮藏。 2.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (1)所述剥离芽直到只。

6、保留一个叶原基生长点的操作过程为： 取粗壮的芽段用无菌水冲洗 40min， 再用75的酒精浸蘸3s， 放入无菌杯内用0.1的HgCl水浸泡30s， 然后用无菌水冲 洗4次， 之后将茎尖放在无菌滤纸上吸干水分， 在3040倍解剖镜下用解剖针由外向里逐层 将生长点的小叶片和叶原基剥离， 直到只保留一个叶原基生长点； 步骤(1)中所述封严1号 培养瓶的瓶口放于培养室内培养的条件为： 温度2325、 光照强度20003000Lx， 光照时 间16h/d， 培养周期120140d。 3.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (2)中所述RT-PCR法的检测过程为：。

7、 提取纯化所述小植株的RNA为模板， 加入Oligo(dT)， 进 行反转录生成cDNA； 之后以所述cDNA为模板， 用特异性引物， 进行PCR扩增得到扩增产物； 之 后对所述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测， 电泳条带中不含病毒特异条带的样品对应的 小植株即为脱毒小植株。 4.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (2)中所述病毒检测的病毒种类为马铃薯常见的六种病毒PVX、 PVY、 PLRV、 PVS、 PVM、 PVA， 使 用的特异性引物序列分别为： PVX上游引物5-AGTGGTATGGAACTGGATG-3， PVX下游引物5-TTATGGT。

8、GGTGGTAGAGTGA-3； PVY上游引物5-CATGGGAAATGACACAATCG-3， PVY下游引物5-TCACATGTTCTTGACTCCAAG-3； PLRV上游引物5-CGCGCTAACAGAGTTCAGCC-3， PLRV下游引物5-GCAATGGGGGTCCAACTCAT-3； 权利要求书 1/2 页 2 CN 110073975 A 2 PVS上游引物5-AATGCCGCCTAAACCAGATC-3， PVS下游引物5-AACGGTCTGCCTTCATTGGT-3； PVM上游引物5-CGCATACAATATCTGGACTTACAC-3， PVM下游引物5-CTACT。

9、CCAGTAATGCAACTCATC-3； PVA上游引物5-GAACTCTTGATGCAGGCG-3， PVA下游引物5-ACATCCGTTGCTGTGTGTCC-3。 5.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (4)中所述炼苗的培养条件为湿度75， 白天温度控制在20、 夜间10， 控制光照强 度； 所述苗床的组成成分为黑土和草炭土， 质量配比为黑土： 草炭土5:1； 移栽苗床时的脱 毒苗的株行距为1cm10cm。 6.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (4)中所述假植所用营养钵的尺寸为9cm9cm； 营养。

10、钵里土壤的组成成分为黑土和草炭土， 配比为黑土： 草炭土5:1； 假植过程中的培养条件为湿度50， 白天温度控制在20、 夜 间10， 控制光照强度， 及时喷施药剂进行病虫害防控。 7.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (4)中所述移栽定植于大棚前假植苗要浇透水； 定植前要在大棚内用机械进行起垄施肥， 垄 宽65cm， 施用撒克富马铃薯专用复合肥50kg/亩， 假植苗定植的株距为12cm。 8.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (4)中所述病害防治包括马铃薯早疫病和晚疫病的防治， 具体为依据 “中国马铃薯早。

11、、 晚疫 病监测预警系统” 和 “预警系统简报” 的防控建议进行化学药剂防治； 其中所述马铃薯早疫 病药剂防治的方案为： 在马铃薯现蕾期前开始喷施， 共喷3遍药， 每隔710d喷一次， 喷药顺 序和喷药量为10世高80g/亩、 25阿米西达30mL/亩、 可杀得3000为30g/亩； 所述马铃薯 晚疫病防治的方案为： 从出苗后20天开始喷药， 共喷7遍药， 每隔710d喷一次， 喷药顺序和 喷药量为克露100g/亩、 福帅得30ml/亩、 银法利80ml/亩、 科佳60ml/亩、 升银法利80ml/亩、 瑞凡40ml/亩、 金雷120g/亩。 9.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种。

12、繁育方法， 其特征在于， 步骤 (4)中所述机械杀秧是指在收获前57d， 利用4QP-2型马铃薯打秧机进行机械杀秧， 以加速 块茎成熟、 薯皮老化， 增强耐贮性； 所述收获是指利用4KJW型马铃薯收获机进行机械收获。 10.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 其特征在于， 步骤 (4)中所述包装贮藏的要求为： 用塑料筐或网袋作为包装材料， 贮藏窖采取棚窖、 永久式砖 窖， 入窖前要对所述贮藏窖进行高锰酸钾和甲醛薰蒸消毒， 之后通风； 入窖后控制温度13 、 湿度8590、 适当通风。 权利要求书 2/2 页 3 CN 110073975 A 3 一种高纬度地区马铃薯原原种。

13、繁育方法 技术领域 0001 本发明属于植物繁殖技术领域， 具体涉及一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方 法。 背景技术 0002 马铃薯属茄科一年生草本植物， 是世界第四大粮食作物， 可作为粮菜兼用和工业 原料， 在保证我国粮食安全和脱贫致富中发挥了重要的作用。 然而由于马铃薯是无性繁殖 作物， 病毒侵染进植株体内后， 随着种植代数增加， 病毒会逐代传递并积累， 最终会导致马 铃薯种性退化从而导致产量降低和品质变劣。 为解决马铃薯生产中退化问题， 国内外学者 进行了大量研究， 结果发现繁育马铃薯脱毒种薯是解决该问题的有效途径， 而繁育马铃薯 脱毒种薯的核心就是马铃薯原原种的繁育。 0003 目前。

14、国内开展马铃薯原原种繁育技术研究的学者很多， 大多数是采用无土栽培技 术， 例如采用基质(蛭石)繁育或者水培繁育， 但该技术存在一定缺点， 繁育技术要求高， 生 产投入成本较高， 单株脱毒苗的产量较低， 单位面积产量有限。 针对目前无土栽培繁育马铃 薯原原种的这些缺点， 大兴安岭地区农林科学院马铃薯研究团队从20世纪90年代开始， 就 开展了高纬度地区马铃薯脱毒种薯研究， 根据大兴安岭地区所属高纬度地区的特点， 利用 茎尖脱毒技术、 分生组织培养技术、 分子生物学病毒检测技术、 组培苗切段扩繁技术、 脱毒 苗假植技术及网棚起垄栽培技术， 研究出了一套适于高纬度地区马铃薯原原种的繁育技 术， 该。

15、技术可以直接在大田起垄扣上网棚繁育原原种， 不需要购买基质及固定设备， 不仅生 产成本低、 繁育方式简单易行， 而且单株脱毒苗和单位面积的原原种产量高。 该技术实现了 本区域马铃薯脱毒种薯的工厂化繁育， 开创了大兴安岭地区冷凉型农业发展的新模式 脱毒马铃薯产业化， 具有重要的学术价值和经济价值。 发明内容 0004 针对现有技术的不足， 解决马铃薯生产中退化问题， 本发明提供了一种高纬度地 区马铃薯原原种繁育方法。 0005 一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 包括以下步骤： 0006 (1)茎尖脱毒组织获得： 在田间根据植株长势， 选择高纬度地区马铃薯的健康单 株； 之后将前述健康单株的薯。

16、块在36条件下进行催芽46周， 待前述薯块催芽萌发至芽 长1.02.0cm时， 剥离前述芽直到只保留一个叶原基生长点， 且前述叶原基生长点大小为 0.10.3mm； 之后将前述叶原基生长点切下， 置于装有基本培养基的1号培养瓶中， 封严前 述1号培养瓶的瓶口放于培养室内培养， 直至长出小植株； 0007 (2)病毒检测： 采用RT-PCR法对步骤(1)中制备的前述小植株进行病毒检测， 筛选 得到不含病毒的小植株， 称为脱毒小植株； 0008 (3)脱毒试管苗快速繁殖： 将前述脱毒小植株在无菌条件下按茎节切段， 获得茎节 段； 之后将前述茎节段置于装有快速繁殖培养基的2号培养瓶内， 在 2325。

17、、 光照强度 说明书 1/6 页 4 CN 110073975 A 4 3000Lx、 光照时间16h/d条件下培养1520d， 获得具备移栽条件的试管苗； 前述快速繁殖培 养基的成分组成是Ms大量元素、 微量元素、 铁盐、 20g/L蔗糖或白糖， pH值5.8， 不含有机物和 植物激素； 每个前述2号培养瓶内培养1530个前述茎节段； 0009 (4)网棚起垄生产原原种： 移栽前57d， 将培养试管苗的前述2号培养瓶瓶盖打 开， 置于培养室内进行炼苗； 之后移栽至整理好的苗床上培养1015d， 之后将其假植于育 苗钵里培养1015d， 得到假植苗； 之后根据前述假植苗的长势， 及时移栽定植于。

18、整理好的 大棚内， 进行微喷灌溉， 扣上防虫网， 并在生长过程中进行34次中耕培土、 23次人工除 草、 及时灌溉、 病害防治； 成熟后进行机械杀秧和收获， 之后进行包装贮藏。 0010 作为一种优选的方案， 步骤(1)前述剥离芽直到只保留一个叶原基生长点的操作 过程为： 取粗壮的芽段用无菌水冲洗40min， 再用75的酒精浸蘸3s， 放入无菌杯内用0.1 的HgCl水浸泡30s， 然后用无菌水冲洗4次， 之后将茎尖放在无菌滤纸上吸干水分， 在3040 倍解剖镜下用解剖针由外向里逐层将生长点的小叶片和叶原基剥离， 直到只保留一个叶原 基生长点； 步骤(1)中前述封严1号培养瓶的瓶口放于培养室内。

19、培养的条件为： 温度2325 、 光照强度 20003000Lx， 光照时间16h/d， 培养周期120140d。 0011 更为优选的是， 步骤(2)中前述RT-PCR法的检测过程为： 提取纯化前述小植株的 RNA为模板， 加入Oligo(dT)， 进行反转录生成cDNA； 之后以前述 cDNA为模板， 用特异性引 物， 进行PCR扩增得到扩增产物； 之后对前述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测， 电泳条带 中不含病毒特异条带的样品对应的小植株即为脱毒小植株。 0012 更为优选的是， 步骤(2)中前述病毒检测的病毒种类为马铃薯常见的六种病毒 PVX、 PVY、 PLRV、 PVS、 PVM、 。

20、PVA， 使用的特异性引物序列分别为： 0013 PVX上游引物5-AGTGGTATGGAACTGGATG-3， 0014 PVX下游引物5-TTATGGTGGTGGTAGAGTGA-3； 0015 PVY上游引物5-CATGGGAAATGACACAATCG-3， 0016 PVY下游引物5-TCACATGTTCTTGACTCCAAG-3； 0017 PLRV上游引物5-CGCGCTAACAGAGTTCAGCC-3， 0018 PLRV下游引物5-GCAATGGGGGTCCAACTCAT-3； 0019 PVS上游引物5-AATGCCGCCTAAACCAGATC-3， 0020 PVS下游引物。

21、5-AACGGTCTGCCTTCATTGGT-3； 0021 PVM上游引物5-CGCATACAATATCTGGACTTACAC-3， 0022 PVM下游引物5-CTACTCCAGTAATGCAACTCATC-3； 0023 PVA上游引物5-GAACTCTTGATGCAGGCG-3， 0024 PVA下游引物5-ACATCCGTTGCTGTGTGTCC-3。 0025 更为优选的是， 步骤(4)中前述炼苗的培养条件为湿度75， 白天温度控制在20 、 夜间10， 控制光照强度； 前述苗床的组成成分为黑土和草炭土， 质量配比为黑土： 草 炭土5:1； 移栽苗床时的脱毒苗的株行距为1cm10c。

22、m。 0026 更为优选的是， 步骤(4)中前述假植所用营养钵的尺寸为9cm9cm； 营养钵里土壤 的组成成分为黑土和草炭土， 配比为黑土： 草炭土5:1； 假植过程中的培养条件为湿度 50， 白天温度控制在20、 夜间10， 控制光照强度， 及时喷施药剂进行病虫害防控。 0027 更为优选的是， 步骤(4)中前述移栽定植于大棚前假植苗要浇透水； 定植前要在大 说明书 2/6 页 5 CN 110073975 A 5 棚内用机械进行起垄施肥， 垄宽65cm， 施用撒克富马铃薯专用复合肥 50kg/亩， 假植苗定植 的株距为12cm。 0028 更为优选的是， 步骤(4)中前述病害防治包括马铃薯。

23、早疫病和晚疫病的防治， 具体 为依据 “中国马铃薯早、 晚疫病监测预警系统” 和 “预警系统简报” 的防控建议进行化学药剂 防治； 其中前述马铃薯早疫病药剂防治的方案为： 在马铃薯现蕾期前开始喷施， 共喷3遍药， 每隔710d喷一次， 喷药顺序和喷药量为10世高80g/亩、 25阿米西达30mL/亩、 可杀得 3000为30g/亩； 前述马铃薯晚疫病防治的方案为： 从出苗后20天开始喷药， 共喷7遍药， 每隔 710d喷一次， 喷药顺序和喷药量为克露100g/亩、 福帅得30ml/亩、 银法利80ml/亩、 科佳 60ml/ 亩、 升银法利80ml/亩、 瑞凡40ml/亩、 金雷120g/亩。。

24、 0029 更为优选的是， 步骤(4)中前述机械杀秧是指在收获前57d， 利用4QP-2 型马铃 薯打秧机进行机械杀秧， 以加速块茎成熟、 薯皮老化， 增强耐贮性； 前述收获是指利用4KJW 型马铃薯收获机进行机械收获。 0030 更为优选的是， 步骤(4)中前述包装贮藏的要求为： 用塑料筐或网袋作为包装材 料， 贮藏窖采取棚窖、 永久式砖窖， 入窖前要对前述贮藏窖进行高锰酸钾和甲醛薰蒸消毒， 之后通风； 入窖后控制温度13、 湿度8590、 适当通风。 0031 本发明的有益效果在于： 本发明提供的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法具 有以下优点： 0032 相比常规无土栽培繁育技术， 本发。

25、明可以直接在大田起垄扣上网棚繁育原原 种， 不需要购买基质及固定设备， 生产资料成本低、 繁育方式简单易行。 0033 相比常规无土栽培繁育技术， 本发明可以实现田间机械化作业， 极大地降低了 人工成本， 效率得到极大提高。 0034 相比常规无土栽培繁育技术， 本发明的单株脱毒苗和单位面积的原原种产量 高。 0035 本发明的方法从源头上解决了马铃薯 “退化” 的问题， 实现了本区域马铃薯原原 种的繁育， 在推动本区域马铃薯脱毒种薯的工厂化繁育进程和马铃薯产业的健康持续发展 中可发挥重要作用。 具体实施方式 0036 为使本发明实施例的目的、 技术方案和优点更加清楚， 下面将对本发明实 施例。

26、中 的技术方案进行清楚、 完整地描述， 显然， 所描述的实施例是本发明一 部分实施例， 而不是 全部的实施例。 基于本发明中的实施例， 本领域普通技术 人员在没有作出创造性劳动前提 下所获得的所有其他实施例， 都属于本发明保 护的范围。 0037 一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法， 包括以下步骤： 0038 (1)茎尖脱毒组织获得： 在田间根据植株长势， 选择高纬度地区马铃薯的健康单 株； 之后将健康单株的薯块在36条件下进行催芽46周， 待薯块催芽萌发至芽长1cm 2cm时， 剥离芽直到只保留一个叶原基生长点， 且叶原基生长点大小为0.10.3mm； 之后将 叶原基生长点切下， 置于装有基。

27、本培养基的1 号培养瓶中， 封严1号培养瓶的瓶口放于培养 室内培养直至长出小植株， 具体培养的条件为： 温度2325、 光照强度20003000Lx， 光 照时间16h/d， 培养周期120140d； 说明书 3/6 页 6 CN 110073975 A 6 0039 剥离芽直到只保留一个叶原基生长点的操作过程为： 取粗壮的芽段用无菌水冲洗 40min， 再用75的酒精浸蘸3s， 放入无菌杯内用0.1的HgCl水浸泡 30s， 然后用无菌水冲 洗4次， 之后将茎尖放在无菌滤纸上吸干水分， 在3040 倍解剖镜下用解剖针由外向里逐 层将生长点的小叶片和叶原基剥离， 直到只保留一个叶原基生长点。 。

28、0040 (2)病毒检测： 采用RT-PCR法对步骤(1)中制备的小植株进行病毒检测， 筛选得到 不含病毒的小植株， 称为脱毒小植株； 0041 采用RT-PCR法进行病毒检测的过程为： 0042 提取纯化小植株的RNA： 在研钵中加入300mg新鲜小植株叶片， 用液氮研磨后移 入预冷的离心管中， 加入1mL提取缓冲液， 在冰上冷却至少10min； 之后加入200uL水饱和苯 酚和200uL水饱和氯仿， 震荡混匀， 之后在4、 12000rpm条件下离心5min， 以便充分沉淀蛋 白质； 之后将离心获得的上清液转移到-70预冷20min的离心管中， 加入50uL醋酸钠和1mL 乙醇， 在20条。

29、件下沉淀10-15min； 之后4、 12000rpm离心15min， 之后倾出上清液， 以 1mL75乙醇浸泡沉淀30min， 之后倒出乙醇， 晾干RNA到胶状， 将RNA溶解于25uL 的DEPC处 理水， -70贮藏备用。 提取缓冲液组成为0.1mol/L NaCl、 2SDS、 50mmol/L Tris-HCl、 pH9.0的10mmol/L EDTA。 0043 反转录生成cDNA： 取1ug步骤制备得到的RNA为模板加入EP管中， 再加入1uL的 1.15umol/L的Oligo(dT)， DEPC处理的H2O， 之后70保湿 10min， 充分变性， 去除RNA内部的 二微结构。

30、； 之后立即置于冰上， 依次加入 4ul 5AMV缓冲液， 0.5uL的20U的RNA酶抑制剂， 8uL的2.5mmol/L dNTPs， 并用枪头混匀， 之后42平衡2min， 再加入1uL反转录酶， 42反应 90min生成cDNA； 之后70灭活反转录酶15min。 0044 PCR扩增： 取1ug反转录产物cDNA加入PCR管中， 再加入2uL的 10PCR缓冲液， 1.5uL的25mmol/L MgCl2、 0.2uL的Tap酶、 2uL的2mmol/L dNTPs以及特异性引物， 之后加入 双蒸水至总体积为20uL； 将PCR管放到PCR 仪中进行PCR扩增， 并设置PCR反应条件。

31、为94预 变性5min， 94变性45Sec、 57退火45Sec、 72延伸90Sec、 40个循环， 72再延伸10min。 0045 病毒检测的病毒种类为马铃薯常见的六种病毒PVX、 PVY、 PLRV、 PVS、 PVM、 PVA， 使 用的特异性引物序列见表1。 0046 表1 RT-PCR技术检测马铃薯病毒所用特异性引物序列 0047 0048 说明书 4/6 页 7 CN 110073975 A 7 0049 对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测： 取5uL的PCR扩增产物， 加入由0.25溴 酚蓝、 0.25二甲苯腈FF、 30甘油水溶液组成的上样缓冲液， 在2的琼脂糖凝胶上电泳 。

32、检测， 电泳缓冲液为1TAE， 电泳条件为4V/cm直流电场电泳时间为90min， 之后对电泳结果 进行凝胶成像检测， 电泳条带中不含病毒特异条带的样品对应的小植株即为脱毒小植株。 0050 (3)脱毒试管苗快速繁殖： 将脱毒小植株在无菌条件下按茎节切段， 获得茎节段； 之后将茎节段置于装有快速繁殖培养基的2号培养瓶内， 在2325、 光照强度3000Lx、 光 照时间16h/d条件下培养1520d， 获得具备移栽条件的试管苗； 快速繁殖培养基的成分组 成是Ms大量元素、 微量元素、 铁盐、 20g/L蔗糖或白糖， pH值5.8， 不含有机物和植物激素； 每 个2号培养瓶内培养1530 个茎节。

33、段。 0051 (4)网棚起垄生产原原种： 移栽前57d， 将培养试管苗的2号培养瓶瓶盖打开， 置 于培养室内进行炼苗； 之后移栽至整理好的苗床上培养1015d， 之后将其假植于育苗钵里 培养1015d， 得到假植苗； 之后根据假植苗的长势， 及时移栽定植于整理好的大棚内， 进行 微喷灌溉， 扣上防虫网， 并在生长过程中进行34次中耕培土、 23次人工除草、 及时灌溉、 病害防治； 成熟后进行机械杀秧和收获， 之后进行包装贮藏。 0052 炼苗的培养条件为： 湿度75， 白天温度控制在20、 夜间10， 控制光照强 度， 以防强光或高温灼烧试管苗； 0053 苗床的组成成分为黑土和草炭土， 配。

34、比为黑土： 草炭土5:1。 0054 移栽苗床时的脱毒苗的株行距为： 1cm10cm。 0055 假植所用营养钵的尺寸为： 9cm9cm， 营养钵里土壤的组成成分为黑土和草炭土， 配比为黑土： 草炭土5:1。 0056 假植的培养条件为： 湿度50， 白天温度控制在20、 夜间10， 控制光照强 度以防强光或高温灼烧试管苗， 及时喷施药剂进行病虫害防控。 0057 移栽定植于大棚前假植苗要浇透水。 0058 定植前要在大棚内用机械进行起垄施肥， 垄宽65cm， 施肥量为： 撒克富马铃薯专用 复合肥50kg/亩。 0059 假植苗定植的株距为12cm。 0060 病害防治包括马铃薯早疫病和晚疫病。

35、的防治， 具体为依据 “中国马铃薯早、 晚疫病 监测预警系统” 和 “预警系统简报” 的防控建议进行化学药剂防治， 具体内容如下： 0061 早疫病防治是指在马铃薯现蕾期前开始喷施， 共喷3遍药， 每遍药剂名称及计量见 表2。 0062 表2马铃薯早疫病防治措施 0063 0064 晚疫病防治是指在从出苗后20d开始喷药， 每隔1周喷施一遍， 共用7遍药， 每遍药 说明书 5/6 页 8 CN 110073975 A 8 剂名称及计量见表3。 0065 表3马铃薯晚疫病防治措施 0066 0067 机械杀秧是指在收获前57d， 利用4QP-2型马铃薯打秧机进行机械杀秧， 以加速 块茎成熟、 薯。

36、皮老化， 增强耐贮性； 收获是指利用4KJW型马铃薯收获机进行机械收获。 0068 包装贮藏的要求为： 用塑料筐或网袋作为包装材料， 贮藏窖采取棚窖、 永久式砖 窖， 入窖前要对贮藏窖进行高锰酸钾和甲醛薰蒸消毒， 之后通风； 入窖后控制温度13、 湿度8590、 适当通风。 0069 应当理解， 以上所描述的具体实施例仅用于解释本发明， 并不用于限定本发明。 由 本发明的精神所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。 说明书 6/6 页 9 CN 110073975 A 9 序列表 大兴安岭地区农业林业科学研究院 （大兴安岭林业集团公司农业林业科学研 究院） 一种高纬度地区马铃。

37、薯原原种繁育方法 2019 12 SIPOSequenceListing 1.0 1 19 DNA 人工序列(Artificial sequence) 1 agtggtatgg aactggatg 19 2 20 DNA 人工序列(Artificial sequence) 2 ttatggtggt ggtagagtga 20 3 20 DNA 人工序列(Artificial sequence) 3 catgggaaat gacacaatcg 20 4 21 DNA 人工序列(Artificial sequence) 4 tcacatgttc ttgactccaa g 21 5 20 DNA 人。

38、工序列(Artificial sequence) 5 cgcgctaaca gagttcagcc 20 6 序列表 1/3 页 10 CN 110073975 A 10 20 DNA 人工序列(Artificial sequence) 6 gcaatggggg tccaactcat 20 7 20 DNA 人工序列(Artificial sequence) 7 aatgccgcct aaaccagatc 20 8 20 DNA 人工序列(Artificial sequence) 8 aacggtctgc cttcattggt 20 9 24 DNA 人工序列(Artificial sequence) 9 cgcatacaat atctggactt acac 24 10 23 DNA 人工序列(Artificial sequence) 10 ctactccagt aatgcaactc atc 23 11 18 DNA 人工序列(Artificial sequence) 11 gaactcttga tgcaggcg 18 12 20 DNA 人工序列(Artificial sequence) 序列表 2/3 页 11 CN 110073975 A 11 12 acatccgttg ctgtgtgtcc 20 序列表 3/3 页 12 CN 110073975 A 12 。