沉香化气片气相指纹图谱的建立方法及其指纹图谱.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910494419.X (22)申请日 2019.06.06 (71)申请人 重庆医科大学 地址 400016 重庆市渝中区医学院路1号 (72)发明人 何丹青旺旺张景勍施宇涛 张芮腾杨林 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 沉香化气片气相指纹图谱的建立方法及其 指纹图谱 (57)摘要 本发明公开了一种沉香化气片气相指纹图 谱的建立方法及其指纹图谱， 该方法采用气相色 谱法建立沉香化气片的指纹图谱， 以正十八烷为 参照峰， 包括。

2、如下步骤： 内标溶液的制备； 对照品 溶液的制备； 供试品溶液的制备； 以正十八烷的 色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保 留时间， 得到指纹图谱， 并限定了所述气相的色 谱条件。 本发明提供的方法建立的沉香化气片的 气相指纹图谱， 确立了沉香化气片中11个特征 峰， 并通过对照品比对和GC-MS法指认其中10个 峰， 20批样品指纹图谱相似度在0.95以上， 建立 的指纹图谱避免了沉香化气片质量控制的单一 性和片面性， 保证了沉香化气片质量的稳定性、 一致性和可控性， 从而确保沉香化气片使用的安 全性和有效性。 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 CN 110187029 A 201。

3、9.08.30 CN 110187029 A 1.本发明提供了一种沉香化气片气相指纹图谱的建立方法， 包括如下步骤： 内标溶液的制备； 对照品溶液的制备； 供试品溶液的制备； 气相色谱检测： 分别取所述供试品和所述对照品进行气相色谱检测， 获得指纹图谱； 其中， 气相色谱的柱温采用程序升温， 所述程序升温为初温4060， 保持13min， 以 2.55/min升温至180250， 保持310min。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述程序升温为初温60， 保持2min， 以2.5/min升温至250， 保持10min。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 。

4、所述气相色谱柱的进样口温度： 250； 压力100kPa； 自动进样， 进样量1 L， 分流进样， 分流比5 1； 柱流量： 1.32mL/min。 4.根据权利要求1至3任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述检测器为FID检测器， 所述检测器的温度250， H2流量40mL/min， 空气流量400mL/min， N2流量30mL/min， 总流量 10.9mL/min。 5.根据权利要求1至4任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述色谱柱为DB-5毛细管 柱， 30m0.25mm0.25 m， 载气为氮气。 6.根据权利要求1至5任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述内标溶液的制。

5、备方法 为取正十八烷与甲醇混合， 获得内标溶液。 7.根据权利要求1至6任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述供试品溶液的制备方 法为取沉香化气片， 加乙醇， 称重， 超声提取， 用乙醇补足失重， 摇匀， 静置， 滤过， 将滤液过 0.22 m微孔滤膜， 续滤液加内标溶液， 再加乙醇至刻度， 摇匀， 获得供试品溶液。 8.根据权利要求1至7任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述对照品溶液的制备方 法为取D-柠檬烯、 乙酸龙脑酯、 百秋李醇与甲醇混合， 获得对照品溶液。 权利要求书 1/1 页 2 CN 110187029 A 2 沉香化气片气相指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 技术领域 。

6、0001 本发明涉及中药质量的检测领域， 具体涉及沉香化气片气相指纹图谱的建立方法 及其指纹图谱。 背景技术 0002 沉香化气片全方由沉香、 木香、 广藿香、 香附、 砂仁、 陈皮等10味药组成， 具有理气 疏肝、 消积和胃的功效， 用于治疗肝胃气滞、 脘腹胀痛、 胸膈痞满、 不思饮食、 嗳气泛酸， 其中 木香、 广藿香、 砂仁和陈皮4味药材蒸馏提取挥发油后入药。 广藿香其性微温， 味辛， 归脾、 胃、 肺经， 广藿香挥发油具有抗炎、 抗菌、 镇咳及调节胃肠道的功能， 百秋李醇为广藿香的主 要挥发性成分， 也是广藿香质量评价的指标成分； 砂仁其性温， 味辛， 归脾、 胃、 肾经， 砂仁挥 发。

7、油具有明显的消炎镇痛、 抗氧化、 促进胃肠运动等多方面的功效， 其主要成分为樟脑和乙 酸龙脑酯； 陈皮其性温， 味苦、 辛， 归肺、 脾经， 陈皮挥发油具有很好的促胃动力作用。 0003 中药复方制剂具有组成药材多、 组成成分复杂的特点， 致使现有中药制药技术难 以确保中药产品质量稳定性， 中药指纹图谱能够充分提取中药制剂中的化学成分信息， 通 过指纹图谱方法能在一定程度上反映复方的内在质量。 现阶段， 中药的有效成分绝大多数 没有明确， 采用中药指纹图谱的方式将有效地表征中药质量。 沉香化气片收载于 中华人民 共和国卫生部药品标准中药成方制剂 第七册， 标准中未涉及任何针对药味的定性定量控 。

8、制项目， 沉香化气片全方中挥发性组分起着重要作用， 为此， 有必要基于挥发性组分建立一 种稳定、 精密度高的多成分和特征指纹图谱， 用以科学、 有效、 全面地检测中药复方制剂沉 香化气片的质量。 发明内容 0004 本发明提供一种沉香化气片气相指纹图谱的建立方法及其指纹图谱， 该方法可以 保证沉香化气片质量的稳定性、 一致性和可控性， 从而确保沉香化气片使用的安全性和有 效性。 0005 为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技术方案： 0006 本发明提供了一种沉香化气片指纹图谱的制备方法， 包括如下步骤： 0007 内标溶液的制备； 0008 供试品溶液的制备； 0009 对照品溶液的制备。

9、； 0010 气相色谱检测： 分别取所述供试品溶液和所述对照品溶液进行气相色谱检测， 获 得指纹图谱； 0011 其中， 气相色谱的柱温采用程序升温， 所述程序升温为初温4060， 保持1 3min， 以2.55/min升温至180250， 保持310min。 0012 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中所述程序升温为初温60， 保 持2min以2.5/min升温至250， 保持10min。 说明书 1/6 页 3 CN 110187029 A 3 0013 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中所述气相色谱柱的进样口温度 250， 压力100kPa； 自动进样， 进样量1。

10、 L， 分流进样， 分流比5 1； 柱流量： 1.32mL/min。 0014 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中所述检测器为FID检测器， 所述 检测器的温度250， H2流量40mL/min， 空气流量400mL/min， N2流量30mL/min， 总流量 10.9mL/min。 0015 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中所述色谱柱为DB-5(固定液为 5二苯基95二甲基聚硅氧烷)毛细管柱， 30m0.25mm0.25 m， 载气为氮气。 0016 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中所述内标溶液的制备方法为取 正十八烷与甲醇混合， 获得内标溶液。 0。

11、017 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中所述供试品溶液的制备方法为 取沉香化气片， 加乙醇， 超声提取， 用乙醇补足失重， 摇匀， 静置， 滤过， 将滤液过0.22 m微孔 滤膜， 续滤液加内标溶液， 再加乙醇至刻度， 摇匀， 获得供试品溶液。 0018 在本发明的一些具体实施方案中， 所述制备方法中对照品溶液的制备方法为取D- 柠檬烯、 乙酸龙脑酯、 百秋李醇与甲醇混合， 获得对照品溶液。 0019 本发明公开了采用上述方法建立的沉香化气片气相指纹图谱， 所述指纹图谱中有 11个共有峰， 并通过GC-MS法指认了其中10个峰。 0020 与现有技术相比， 本发明具有以下有益的技。

12、术效果： 0021 本发明公开的沉香化气片气相指纹图谱的建立方法， 以正十八烷作为参照， 采用 气相色谱法测定其指纹图谱， 指纹图谱中确定了11个共有峰， 并通过GC-MS法指认了其中10 个峰。 20批沉香化气片气相指纹图谱相似度均在在0.95以上， 能有效的表征其质量， 有利于 全面监控产品的质量， 避免了沉香化气片质量控制的单一性和片面性， 保证沉香化气片质 量的稳定性、 一致性和可控性， 从而确保沉香化气片使用的安全性和有效性。 附图说明 0022 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案， 下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。 0023 图1示色谱。

13、条件1下样品色谱图； 0024 图2示色谱条件2下样品色谱图； 0025 图3示色谱条件3下样品色谱图； 0026 图4示色谱条件4下样品色谱图； 0027 图5示乙醇超声提取样品的气相色谱图； 0028 图6示甲醇超声提取样品的气相色谱图； 0029 图7示沉香化气片指纹图谱和3个混合对照品的色谱图； 0030 图8示沉香化气片对照指纹图谱； 0031 图9示20批沉香化气片气相色谱图的叠加图； 0032 图10示沉香化气片的GC-MS总离子流图； 具体实施方式 0033 下面结合实施例， 对本发明做进一步地详细说明， 但本发明的实施方式并不局限 说明书 2/6 页 4 CN 1101870。

14、29 A 4 于此。 若未特别指明， 实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。 0034 本发明提供的指纹图谱的制备方法如下： 0035 2.1色谱条件 0036 色谱柱： DB-5(固定液为5二苯基95二甲基聚硅氧烷)毛细管柱， 30m0.25mm 0.25 m， 载气： 氮气； 进样口温度： 250； 压力100kPa； 自动进样， 进样量1 L， 分流进样， 分 流比5 1； 柱流量： 1.32mL/min； FID检测器， 检测器温度250； H2流量40mL/min， 空气流量 400mL/min， N2流量30mL/min， 总流量10.9mL/min。 柱温采取程。

15、序升温， 初温60(4060 )， 保持2min(25min)， 以2.5/min(2.510/min)升温至250， 保持10min(2 10min)。 0037 2.2内标溶液的制备 0038 取正十八烷适量， 加甲醇配成每1mL含0.03mg的溶液， 作为内标溶液。 0039 2.3对照品溶液的制备 0040 取D-柠檬烯、 乙酸龙脑酯、 百秋李醇对照品适量， 加甲醇分别制成每1mL含 0.06154mg、 0.0069mg、 0.0375mg、 0.0533mg的溶液， 作为对照品溶液。 0041 2.4供试品溶液的制备 0042 取沉香化气片10片， 研匀， 精密称定0.5g， 置于。

16、具塞锥形瓶中， 加入乙醇10mL， 称 量， 超声处理30min， 放冷， 再称定质量， 用乙醇补足失重， 摇匀， 静置， 滤过， 将滤液过0.22 m 微孔滤膜， 取续滤液1mL置于5mL量瓶中， 精密加入内标溶液0.5mL， 加乙醇至刻度， 摇匀， 作 为供试品溶液。 0043 本发明提供的沉香化气片指纹图谱的制备方法及获得的指纹图谱中所用原料及 试剂均可由市场购得。 0044 仪器： GC2010型气相色谱仪， FID检测器。 D-柠檬烯对照品(纯度98， 批号 Z28D8H51809， 上海源叶生物科技有限公司)， 乙酸龙脑酯对照品、 百秋李醇对照品(纯度 98， 批号分别为MUST-。

17、18022605， MUST-17073111， 成都曼斯特生物科技有限公司)， 正十八 烷(纯度99， 批号G9814， 山东西亚化学股份有限公司)， 甲醇为色谱纯； 乙醇为分析纯。 0045 沉香化气片来自太极集团， 批号为： 18030026、 18020015、 18010007、 18020013、 18030029、 18030024、 18020012、 18030019、 18030023、 17120095、 18040031、 18020016、 18030022、 18030027、 17070058、 18040033、 18010006、 18040030、 1803。

18、0021、 17060049， 依次 标记为S1-S20。 0046 实施例1气相色谱条件的筛选 0047 考察4种不同的色谱条件： 0048 色谱条件1： 总流量11.8mL/min， 分流比5 1， 升温程序： 初温40， 保持1min， 以5 /min升温至180， 保持5min， 其他条件同2.1色谱条件。 0049 色谱条件2： 总流量11.4mL/min， 分流比5 1， 升温程序： 初温50， 保持3min， 以3 /min升温至200， 保持3min， 其他条件同2.1色谱条件。 0050 色谱条件3： 总流量10.9mL/min， 分流比5 1， 升温程序： 初温60， 保持。

19、5min， 以5 /min升温至250， 保持5min， 运行总时间48min， 其他条件同2.1色谱条件。 0051 色谱条件4： 总流量10.9mL/min， 分流比5 1， 升温程序： 初温60， 保持2min， 以2.5 /min升温至250， 保持10min， 运行总时间88min， 其他条件同2.1色谱条件。 说明书 3/6 页 5 CN 110187029 A 5 0052 考察结果如图4所示。 由图1可以看出， 当为色谱条件4时， 色谱峰的峰形、 分离效果 及出峰数目最佳， 因此选择色谱条件4作为最终的色谱条件。 0053 实施例2提取溶剂的筛选 0054 考察2种不同的提取溶。

20、剂： 0055 取批号为17060049的沉香化气片10片， 研细， 精密称定约0.5g， 置于具塞锥形瓶 中， 加入乙醇10mL， 称量， 超声处理30min， 放冷， 再称定质量， 用乙醇补足失重， 摇匀， 静置， 滤过， 将滤液过0.22 m微孔滤膜， 取续滤液1mL置于5mL量瓶中， 精密加入内标溶液0.5mL， 加 乙醇至刻度， 摇匀， 作为供试品溶液， 取其供气相色谱仪分析， 测试图谱如图5所示。 0056 取批号为17060049的沉香化气片10片， 研细， 精密称定约0.5g， 置于具塞锥形瓶 中， 加入甲醇10mL， 称量， 超声处理30min， 放冷， 再称定质量， 用甲醇。

21、补足失重， 摇匀， 静置， 滤过， 将滤液过0.22 m微孔滤膜， 取续滤液1mL置于5mL量瓶中， 精密加入内标溶液0.5mL， 加 甲醇至刻度， 摇匀， 作为供试品溶液， 取其供气相色谱仪分析， 测试图谱如图6所示。 0057 通过比较乙醇和甲醇提取后的色谱图， 可以看出， 发现乙醇作为提取溶剂对各色 谱峰的提取较好， 基线也更平稳， 因此选用乙醇作为提取溶剂。 0058 实施例3内标溶液的制备 0059 取正十八烷适量， 加甲醇配成每1mL含0.03mg的溶液， 作为内标溶液。 0060 实施例4对照品溶液的制备 0061 取D-柠檬烯、 乙酸龙脑酯、 百秋李醇3种对照品适量， 以适量甲。

22、醇溶解， 分别配置成 储备液后， 再混合制得混合对照品溶液。 0062 实施例5供试品溶液的制备 0063 取批号为17060049的沉香化气片10片， 研细， 精密称定约0.5g， 置于具塞锥形瓶 中， 加入乙醇10mL， 称量， 超声处理30min， 放冷， 再称定质量， 用乙醇补足失重， 摇匀， 静置， 滤过， 将滤液过0.22 m微孔滤膜， 取续滤液1mL置于5mL量瓶中， 精密加入内标溶液0.5mL， 加 乙醇至刻度， 摇匀， 即得。 0064 实施例6建立沉香化气片气相指纹图谱的方法 0065 1)制备内标溶液(同实施例3)； 0066 2)制备混合对照品溶液(同实施例4)； 00。

23、67 3)制备沉香化气片的供试品溶液(同实施例5)； 0068 4)采用气相色谱仪进行色谱分析， 记录色谱图； 0069 5)以正十八烷的色谱保留时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间， 得到指 纹图谱； 0070 所述气相色谱仪的色谱条件： 采用DB-5(固定液为5二苯基95二甲基聚硅氧 烷)毛细管柱(30m0.25mm0.25 m)， 载气： 氮气； 进样口温度： 250； 压力100kPa； 自动进 样， 进样量1 L， 分流进样， 分流比5 1； 柱流量： 1.32mL/min； FID检测器， 检测器温度250； H2流量40mL/min， 空气流量400mL/min， N2流量3。

24、0mL/min， 总流量10.9mL/min。 柱温采取程序 升温， 初温60， 保持2min， 以2.5/min升温至250， 保持10min。 0071 具体指纹图谱如图7所示， 该图谱含有11个色谱峰。 以正十八烷(S)峰的色谱保留 时间为1计算得到的各色谱峰的相对保留时间如表1所示。 0072 表1 各峰的相对保留时间 说明书 4/6 页 6 CN 110187029 A 6 0073 0074 实施例7沉香化气片气相指纹图谱的建立 0075 分别取20批不同批号的沉香化气片， 按实施例6分别测定。 将20批沉香化气片指纹 图谱导入 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统” (2012版)软。

25、件中进行处理， 对照图谱的生成 方法为中位数法， 时间窗宽度设定为0.1， 运用多点校正方法对色谱图进行全峰匹配， 生成 对照指纹图谱， 如图8， 共标定11个共有峰， 其中正十八烷为参照峰(S)， 20批沉香化气片的 叠加图谱如图9所示， 对20批沉香化气片进行相似度评价， 结果如表2所示， 20批沉香化气片 的指纹图谱均不低于0.95。 0076 表2 20批沉香化气片气相色谱指纹图谱相似度结果 0077 0078 0079 实施例8 GC-MS指认各色谱峰 0080 应用气相色谱-质谱联用技术， 对沉香化气片指纹图谱中的峰进行了初步定性， 沉 香化气片样品总离子流图见图10。 0081 。

26、通过计算机内系统解卷积检索出图谱中可能存在的化合物， 并根据NIST系统质谱 说明书 5/6 页 7 CN 110187029 A 7 图库检索匹配， 确认结构。 最终经对照品比对、 NIST14谱库检索和文献检索， 对其中了10个 成分进行了指认， 见表3。 0082 表3 气相色谱指纹图谱中10个共有峰的指认 0083 0084 综上所述本发明具有以下优点： 0085 1.本发明所提供的方法建立的沉香化气片气相指纹图谱相似度均大于0.95， 能有 效的表征其质量， 有利于全面监控产品的质量。 0086 2.本发明建立了一种沉香化气片特征指纹图谱共有模式， 标定了11个共有峰， 并 通过对照。

27、品比对和GC-MS法指认了其中10个峰， 建立的指纹图谱技术含量高， 避免了该制剂 质量控制的单一性和片面性， 从而确保沉香化气片的安全性和有效性。 0087 本发明公开了沉香化气片气相指纹图谱的建立方法及其指纹图谱， 本领域技术人 员可以借鉴本文内容， 适当改进工艺参数实现。 特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动 对本领域技术人员来说是显而易见的， 它们都被视为包括在本发明。 本发明的方法及应用 已经通过较佳实施例进行了描述， 相关人员明显能在不脱离本发明内容、 精神和范围内对 本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合， 来实现和应用本发明技术。 说明书 6/6 页 8 CN 110187029 A 8 图1 图2 图3 说明书附图 1/4 页 9 CN 110187029 A 9 图4 图5 图6 说明书附图 2/4 页 10 CN 110187029 A 10 图7 图8 说明书附图 3/4 页 11 CN 110187029 A 11 图9 图10 说明书附图 4/4 页 12 CN 110187029 A 12 。