神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1作为生物标志物在诊断阿尔茨海默病中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911069276.4 (22)申请日 2019.11.05 (71)申请人 常州中科脂典生物技术有限责任公 司 地址 213000 江苏省常州市新北区梅山路3 号科技转化楼6楼北楼 (72)发明人 税光厚林茜雯 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 闫书宁 (51)Int.Cl. G16H 10/60(2018.01) G16H 50/20(2018.01) G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 神经酰胺三己糖苷d1。

2、8:0/24:1作为生物标 志物在诊断阿尔茨海默病中的应用 (57)摘要 本发明公开了神经酰胺三己糖苷d18:0/24: 1作为生物标志物在诊断阿尔茨海默病中的应 用。 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷 d18:0/24:1的含量和/或活性显著低于健康人红 细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量 和/或活性， 则该待测者为或疑似为阿尔茨海默 病患者； 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖 苷d18:0/24:1的含量和/或活性不显著低于健康 人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的 含量和/或活性， 则该待测者不为或疑似不为阿 尔茨海默病患者。 本发明具有重要的应用价值。

3、。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 110853719 A 2020.02.28 CN 110853719 A 1.用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质的应用， 为X1)或X2)或X3)或X4)： X1)制备用于诊断阿尔茨海默病的产品； X2)诊断阿尔茨海默病； X3)评价阿尔茨海默病发病风险性； X4)制备用于评价阿尔茨海默病发病风险性的产品。 2.神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1作为生物标志物的应用， 为X1)或X2)或X3)或X4)： X1)制备用于诊断阿尔茨海默病的产品； X2)诊断阿尔茨海默病； X3)评价阿尔茨海默病发病风险性； X4)制备用于评价阿尔。

4、茨海默病发病风险性的产品。 3.提高神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质在制备产品中的应用； 所 述产品的功能为A1)和/或A2)： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默病。 4.神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1在制备产品中的应用； 所述产品的功能为A1)-A4)中 的至少一种： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默病； A3)诊断阿尔茨海默病； A4)评 价阿尔茨海默病发病风险性。 5.神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的应用， 为A1)-A4)中的至少一种： A1)预防阿尔茨海 默病； A2)治疗阿尔茨海默病； A3)诊断阿尔茨海默病； A4)。

5、评价阿尔茨海默病发病风险性。 6.产品甲或产品乙或产品丙： 所述产品甲含有神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1； 所述产品甲的功能为A1)-A4)中的至 少一种： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默病； A3)诊断阿尔茨海默病； A4)评价阿 尔茨海默病发病风险性； 所述产品乙含有用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质； 所述产品乙的功能为 A3)和/或A4)： A3)诊断阿尔茨海默病； A4)评价阿尔茨海默病发病风险性； 所述产品丙含有提高红细胞膜上神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物 质； 所述产品丙的功能为A1)和/或A2)： A1)预防阿尔茨海。

6、默病； A2)治疗阿尔茨海默病。 7.如权利要求1所述的应用或权利要求6所述的产品， 其特征在于： 所述 “用于检测神经 酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质” 为用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活 性的物质。 8.如权利要求6或7所述的产品， 其特征在于： 所述产品甲或所述产品乙还包括装置甲 和/或装置乙和/或装置丙； 所述装置甲包括数据输入设备1、 数据记录模块1、 数据比较模块1和结论输出模块1； 数据输入设备1用于输入神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性数值； 数据记录模块1用于存储神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性数值； 数据。

7、比较模块1用于将 “待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或 活性” 和 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” 进行比较； 结论输出模块1用于显示结论， 即如果 “待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/ 24:1的含量和/或活性” 低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/ 或活性” ， 则结论输出模块1显示待测者为阿尔茨海默病患者； 如果 “待测者红细胞膜中神经 酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” 不低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷 权利要求书 1/2 页 2 CN 1108。

8、53719 A 2 d18:0/24:1的含量和/或活性” ， 则结论输出模块1显示待测者为非阿尔茨海默病患者； 所述装置乙包括所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 所述数据比较模块1和结论 输出模块2； 结论输出模块2用于显示结论， 即如果 “待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/ 24:1的含量和/或活性” 低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/ 或活性” ， 则结论输出模块2显示待测者阿尔茨海默病发病风险性较高； 如果 “待测者红细胞 膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” 不低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺 三己糖苷d18。

9、:0/24:1的含量和/或活性” ， 则结论输出模块2显示待测者阿尔茨海默病发病 风险性较低； 所述装置丙包括所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 数据比较模块3和结论输出 模块3； 数据比较模块3用于将待测者甲和待测者乙的红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/ 24:1的含量和/或活性进行比较； 结论输出模块3用于显示结论， 即如果 “待测者甲红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/ 24:1的含量和/或活性低于待测者乙” ， 则结论输出模块3显示待测者甲阿尔茨海默病发病 风险性较高。 9.评价待测者发生阿尔茨海默病的风险性的方法， 为F1)或F2)： F1)检测待测者红细胞膜中神经酰胺。

10、三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性；“红细胞 膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性较低” 的待测者阿尔茨海默病发病风 险性高于 “红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性较高” 的待测者； F2)检测待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷的含量和/或活性； 如果待测者红细胞膜 中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性低， 则待测者阿尔茨海默病发病风险性 较高； 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性高， 则待测者 阿尔茨海默病发病风险性较低。 10.一种诊断待测者是否为或疑似为阿尔茨海默病患者的方法，。

11、 包括如下步骤： 检测待 测者红细胞膜和健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性， 然后 进行如下判断： 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性低于健康人红 细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性， 则所述待测者为或疑似为阿尔 茨海默病患者； 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性不低于健康人 红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性， 则所述待测者不为或疑似不 为阿尔茨海默病患者。 权利要求书 2/2 页 3 CN 110853719 A 3 神经酰胺三。

12、己糖苷d18:0/24:1作为生物标志物在诊断阿尔茨 海默病中的应用 技术领域 0001 本发明属于生物医学领域， 具体涉及神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1作为生物标志 物在诊断阿尔茨海默病中的应用。 背景技术 0002 阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。 临床上 以记忆障碍、 失语、 失用、 失认、 视空间技能损害、 执行功能障碍以及人格和行为改变等全面 性痴呆表现为特征， 病因迄今未明。 目前根据病史、 体格检查、 实验室检查、 神经影像学和神 经心理学评估等建立的AD诊断临床标准， 置信度90。 0003 理想的AD生物标志物应将AD与轻度认知衰退(。

13、MCI)、 血管性痴呆(VaD)等其它类型 的痴呆症区分开来。 目前有三种AD生物标志物已经建立并在国际上得到验证， 可用于预测 诊断AD， 分别为脑脊液(CSF)中的 -淀粉样蛋白(1-42)、 总tau蛋白和磷酸化Tau-181蛋白。 上述三种CSF标志物的组合可显着提高AD的诊断有效性； 组合的敏感性95， 特异性 85。 但是脑脊液取样具有创伤性， 取样难度大， 因此患者及家属多不愿配合。 目前尚无一 种准确性高、 特异性强的外周血生物标志物。 0004 神经酰胺三己糖苷(Ceramidetrihexosides， Gb3)是一种中性糖鞘脂， 其结构式为 -Gal(14) -Gal(1。

14、4) -Glc(1O-ceramide)。 Gb3广泛存在于哺乳动物细胞膜表面， 在 细胞的生长、 分化、 信号传导等方面起到非常重要的作用。 目前， 人类退型疾病的主要原因 之一是鞘糖脂代谢的异常调节。 鞘糖脂沉积的显著特征是溶酶体内异常累积鞘糖脂， 溶酶 体通常被视作细胞内的胃， 将复杂的代谢物分解为细胞内的营养物质。 哺乳动物鞘糖脂的 分解代谢通路遵守严格的顺序性， 降解过程中每一步的缺陷都会表现出病理特征。 发明内容 0005 本发明的目的是诊断阿尔茨海默病。 0006 本发明首先保护用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质的应用， 可为X1) 或X2)或X3)或X4)： 0。

15、007 X1)制备用于诊断阿尔茨海默病的产品； 0008 X2)诊断阿尔茨海默病； 0009 X3)评价阿尔茨海默病发病风险性； 0010 X4)制备用于评价阿尔茨海默病发病风险性的产品。 0011 上述应用中， 所述 “用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质” 可为用于检测 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质。 更具体的， 所述用于检测神经酰胺三 己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质具体可为用于检测红细胞膜上神经酰胺三己糖苷 d18:0/24:1含量和/或活性的物质。 0012 本发明还保护神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1作为生物标志物的应用，。

16、 可为X1)或 说明书 1/6 页 4 CN 110853719 A 4 X2)或X3)或X4)： 0013 X1)制备用于诊断阿尔茨海默病的产品； 0014 X2)诊断阿尔茨海默病； 0015 X3)评价阿尔茨海默病发病风险性； 0016 X4)制备用于评价阿尔茨海默病发病风险性的产品。 0017 上述应用中， 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1作为生物标志物具体是指红细胞膜 上， 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1可以作为生物标志物诊断阿尔茨海默病或评价阿尔茨海 默病发病风险性。 0018 本发明还保护提高神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质在制备产 品中的应用； 。

17、所述产品的功能可为A1)和/或A2)： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海 默病。 0019 上述应用中， 所述提高神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质具体 可为提高红细胞膜上神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质。 0020 本发明还保护神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1在制备产品中的应用； 所述产品的功 能可为A1)-A4)中的至少一种： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默病； A3)诊断阿尔 茨海默病； A4)评价阿尔茨海默病发病风险性。 0021 本发明还保护神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的应用， 可为A1)-A4)中。

18、的至少一种： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默病； A3)诊断阿尔茨海默病； A4)评价阿尔茨海默 病发病风险性。 0022 本发明还保护产品甲或产品乙或产品丙。 0023 所述产品甲可含有神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1； 所述产品甲的功能可为A1)- A4)中的至少一种： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默病； A3)诊断阿尔茨海默病； A4)评价阿尔茨海默病发病风险性。 0024 所述产品甲具体可为神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1。 0025 所述产品乙可含有用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质； 所述产品乙的 功能可为A3)和/或A4)：。

19、 A3)诊断阿尔茨海默病； A4)评价阿尔茨海默病发病风险性。 0026 所述产品乙具体可为用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质。 0027 所述产品丙可含有提高红细胞膜上神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性 的物质； 所述产品丙的功能可为A1)和/或A2)： A1)预防阿尔茨海默病； A2)治疗阿尔茨海默 病。 0028 所述产品丙具体可为含有提高红细胞膜上神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/ 或活性的物质。 0029 上述产品乙中， 所述 “用于检测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的物质” 可为用于检 测神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1含量和/或。

20、活性的物质。 更具体的， 所述用于检测神经酰胺 三己糖苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质具体可为用于检测红细胞膜上神经酰胺三己糖 苷d18:0/24:1含量和/或活性的物质。 0030 所述产品甲或所述产品乙还可包括装置甲和/或装置乙和/或装置丙。 0031 所述装置甲可包括数据输入设备1、 数据记录模块1、 数据比较模块1和结论输出模 块1； 说明书 2/6 页 5 CN 110853719 A 5 0032 数据输入设备1用于输入神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性数值； 0033 数据记录模块1用于存储神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性数值； 0。

21、034 数据比较模块1用于将 “待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量 和/或活性” 和 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” 进行比 较； 0035 结论输出模块1用于显示结论， 即如果 “待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18: 0/24:1的含量和/或活性” 低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量 和/或活性” ， 则结论输出模块1显示待测者为阿尔茨海默病患者； 如果 “待测者红细胞膜中 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” 不低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己 糖苷d18:0/24:。

22、1的含量和/或活性” ， 则结论输出模块1显示待测者为非阿尔茨海默病患者。 0036 所述装置甲具体可由所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 所述数据比较模 块1和所述结论输出模块1组成。 0037 所述装置乙可包括所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 所述数据比较模块1 和结论输出模块2。 0038 所述结论输出模块2用于显示结论， 即如果 “待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷 d18:0/24:1的含量和/或活性” 低于 “健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含 量和/或活性” ， 则结论输出模块2显示待测者阿尔茨海默病发病风险性较高； 如果 “待测者 红细胞膜。

23、中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” 不低于 “健康人红细胞膜中神 经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性” ， 则结论输出模块2显示待测者阿尔茨海默 病发病风险性较低。 0039 所述装置乙具体可由所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 所述数据比较模 块1和所述结论输出模块2组成。 0040 所述装置丙可包括所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 数据比较模块3和结 论输出模块3； 0041 所述数据比较模块3用于将待测者甲和待测者乙的红细胞膜中神经酰胺三己糖苷 d18:0/24:1的含量和/或活性进行比较； 0042 所述结论输出模块3用于显示结论。

24、， 即如果 “待测者甲红细胞膜中神经酰胺三己糖 苷d18:0/24:1的含量和/或活性低于待测者乙” ， 则结论输出模块3显示待测者甲阿尔茨海 默病发病风险性较高。 0043 所述装置丙具体可由所述数据输入设备1、 所述数据记录模块1、 所述数据比较模 块3和所述结论输出模块3组成。 0044 本发明还保护评价待测者发生阿尔茨海默病的风险性的方法， 可为F1)或F2)。 0045 F1)检测待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性；“红 细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性较低” 的待测者阿尔茨海默病发 病风险性高于 “红细胞膜中神经酰胺三己。

25、糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性较高” 的待测 者。 0046 F2)检测待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷的含量和/或活性； 如果待测者红细 胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性低， 则待测者阿尔茨海默病发病风 险性较高； 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性高， 则待 说明书 3/6 页 6 CN 110853719 A 6 测者阿尔茨海默病发病风险性较低。 0047 本发明还保护一种诊断待测者是否为或疑似为阿尔茨海默病患者的方法， 包括如 下步骤： 检测待测者红细胞膜和健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含。

26、量 和/或活性， 然后进行如下判断： 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含 量和/或活性低于健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/或活性， 则所 述待测者为或疑似为阿尔茨海默病患者； 如果待测者红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/ 24:1的含量和/或活性不低于健康人红细胞膜中神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1的含量和/ 或活性， 则所述待测者不为或疑似不为阿尔茨海默病患者。 0048 上述任一所述低于可为在统计学上的低于。 0049 上述任一所述高于可为在统计学上的高于。 0050 上述任一所述产品可为药物。 0051 本发明的发明人通过研。

27、究若干名阿尔茨海默病患者和若干名健康人红细胞膜上 的物质， 发现了神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1在阿尔茨海默病患者红细胞膜上的含量显著 低于健康人。 由此可见， 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1可以作为生物标志物诊断阿尔茨海 默病或评价阿尔茨海默病发病风险性。 经ROC曲线分析， 采用神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1 诊断阿尔茨海默病的准确度、 灵敏度和特异性均较高。 本发明具有重要的应用价值。 附图说明 0052 图1为OPLS-DA的实验结果。 具体实施方式 0053 以下的实施例便于更好地理解本发明， 但并不限定本发明。 0054 下述实施例中的实验方法， 如无特殊说明， 。

28、均为常规方法。 0055 下述实施例中所用的试验材料， 如无特殊说明， 均为自常规生化试剂商店购买得 到的。 0056 以下实施例中的定量试验， 均设置三次重复实验， 结果取平均值。 0057 下述实施例中的各个实验均是在患者的知情同意的前提下进行的， 且均签署知情 同意书。 0058 阿尔茨海默病是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。 临床上以记 忆障碍、 失语、 失用、 失认、 视空间技能损害、 执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴 呆表现为特征。 在本发明的实施例中， 采用蒙特利尔认知评估(MOCA)确诊待测者是否患有 阿尔茨海默病， 具体的： 如果待测者的MOCA22， 。

29、则该待测者为健康人。 0059 实施例1、 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1作为生物标志物在诊断阿尔茨海默病中 的应用 0060 一、 病例的选择 0061 以阿尔茨海默病患者29名(男性6名， 平均年龄80.25岁； 女性23名， 平均年龄 81.66岁)进行研究， 并依次编号p1-p29。 以32名健康人作为对照(男性6名， 平均年龄81.7 3岁； 女性26名， 平均年龄80.35岁)， 并依次编号z1-z32。 29名阿尔茨海默病患者和32名 说明书 4/6 页 7 CN 110853719 A 7 健康人均为年龄为65岁以上的中国汉族人， 无糖尿病史， 无他汀类药物使用史， 无阿。

30、司匹林 使用史， 无高脂血症(即空腹血清LDL3.5mmol/L和/或甘油三酯11.3mmol/L)。 0062 将29名阿尔茨海默病患者作为病例组， 32名健康人作为对照组。 病例组和对照组 的种族、 种族、 性别构成和年龄差异均无统计学意义。 0063 二、 生物标志物的获得 0064 待测者分别为29名阿尔茨海默病患者和32名健康人。 0065 每个待测者进行如下试验： 0066 1、 待测者禁食过夜后， 采集5mL外周血于含有抗凝剂的BD真空管中。 0067 2、 完成步骤1后， 取外周血， 室温、 500g离心10min， 由上而下分为上层、 中层和下层 共三层。 0068 3、 完。

31、成步骤2后， 取下层并置于一个新的离心管中， 加入5mL预冷的PBS缓冲液进行 悬浮， 然后4、 2700g离心4min。 0069 4、 完成步骤3后， 弃上清， 加入1mL预冷的PBS缓冲液进行悬浮， 得到细胞悬液。 0070 5、 将步骤4得到的细胞悬液转移至一个新的离心管中， 4、 2700g离心4min， 弃上 清， 获得约100 L含RBCs的PBS缓冲液。 0071 6、 完成步骤5后， 取含RBCs的PBS缓冲液(约106个RBCs)， 加入0.5mL甲醇和0.25mL 氯仿， 斡旋混匀， 然后4、 13000g离心10min， 收集上清液(上清液中即含有红细胞膜)。 0072。

32、 7、 完成步骤6后， 取上清液， 浓缩干燥， 得到粉末。 0073 8、 完成步骤7后， 将粉末复溶于0.15mL甲醇和0.15mL氯仿， 得到混合液。 0074 9、 完成步骤8后， 将混合液在Exion AD UPLC-QTRAP 6500Plus(Sciex)进行LC-MS 检测。 0075 10、 收集各个待测者LC-MS检测的数据， 进行主成份分析和正交偏最小二乘判别分 析(orthogonal partial least squares discriminant analysis， OPLS-DA)。 OPLS-DA能 够将X变量中与Y变量相关的变量集中在第一个主成分中， 而其它。

33、的正交成分和Y无相关性， 仅反映X中的内部结构。 这样仅有一个成分用于预测， 更容易理解和可视化。 正交成分的个 数的最优值是通过交叉验证得到， 但有时正交成分并不显著， 这时的模型就仅有一个预测 成分， 而没有正交成分。 OPLS-DA得分图显示的是样本在预测成分(x轴)和正交成分(y轴)维 度上的分布和分组的分布区间(Mahalanobis ellipse)， 如果正交成分的个数为0， 就仅画 出预测成分的得分图。 0076 分析结果见图1(R2X和R2Y分别是模型对X变量的解释性和Y变量的解释性， 完全解 释则数值为1； Q2Y是模型的预测性， 最大值为1)， 具体如下： 0077 随机。

34、置换Y以后得到的模型结果(用点表示)与原有模型结果(用两条水平线表示) 的比较结果见图1中A。 0078 随机置换模型和原有模型的拟合结果见图1中B。 P值是随机置换模型取得更高 R2Y/Q2Y得分的比例。 原有模型的R2Y和Q2Y如果明显好于随机置换后的结果， 表明模型拟合 得很好。 0079 通过预测成分与分组的比较得到的ROC图见图1中C。 0080 上述结果表明， 病例组和对照组可以明显区分， 进一步研究分析其差异。 0081 11、 收集各个待测者LC-MS检测的数据， 定量检测病例组中特异表达的物质(这里 说明书 5/6 页 8 CN 110853719 A 8 所说的特异表达的物。

35、质是指病例组中该物质的含量为对照组的二倍以上或0.6倍以下)。 0082 部分结果见表1。 结果表明， 与对照组相比， 病例组特异表达的物质为神经酰胺三 己糖苷d18:0/24:1。 由此可见， 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1可以作为生物标志物诊断阿 尔茨海默病。 0083 表1 0084 名称简写组间变量重要性(VIP)倍数变化值 神经酰胺三己糖苷d18:0/24:1Gb3 d18:0/24:11.80400.586730058862394 0085 注： 倍数变化值是指病例组该物质含量的均值除以对照组该物质含量的均值； 组 间变量重要性(VIP)： 某物质在两组之间的差异对组间差异的贡献度， 一般认为VIP1的物 质贡献度显著， VIP越大贡献度越大。 说明书 6/6 页 9 CN 110853719 A 9 图1 说明书附图 1/1 页 10 CN 110853719 A 10 。