葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法及透明质酸钠凝胶.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911032147.8 (22)申请日 2019.10.28 (71)申请人 天津一安生物技术有限公司 地址 300457 天津市滨海新区经济技术开 发区第四大街80号天大科技园B6-101 室 (72)发明人 范龙兴苑帅朱昱霖 (74)专利代理机构 北京思创大成知识产权代理 有限公司 11614 代理人 高爽 (51)Int.Cl. C08J 3/24(2006.01) C08J 3/075(2006.01) C08L 5/08(2006.01) (54)发明名称 一种葛。

2、根素交联制备透明质酸钠凝胶的方 法及透明质酸钠凝胶 (57)摘要 本发明属于药物及化妆品制备技术领域， 涉 及一种葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法 及透明质酸钠凝胶。 包括以下步骤： (1)将透明质 酸钠与氢氧化钠溶液混合， 至透明质酸钠完全溶 解； (2)将葛根素加入步骤(1)所得的透明质酸钠 溶液中进行交联反应； 调节交联反应溶液的pH值 至中性， 终止交联反应； (3)将磷酸盐缓冲溶液加 入步骤(2)已终止交联反应的溶液中， 自然溶胀， 制得交联透明质酸钠凝胶； (4)将交联透明质酸 钠凝胶与沉淀剂混合， 进行沉淀； (5)将步骤(4) 所得沉淀进行真空干燥， 得到透明质酸钠凝胶粉 末。

3、。 本发明采用葛根素做交联剂， 可制得具有吸 水溶胀性质的凝胶， 更好的满足医药、 美容、 化妆 品等领域的不同需求。 权利要求书2页 说明书5页 CN 110698699 A 2020.01.17 CN 110698699 A 1.一种葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其特征在于， 该方法包括以下步骤： (1)溶解 将透明质酸钠与氢氧化钠溶液混合， 至透明质酸钠完全溶解； (2)交联反应 将葛根素加入步骤(1)所得的透明质酸钠溶液中， 在3070下进行交联反应1h 20h； 调节交联反应溶液的pH值至中性， 终止交联反应； (3)溶胀 将磷酸盐缓冲溶液加入步骤(2)已终止交联反应的溶液中。

4、， 自然溶胀， 制得交联透明质 酸钠凝胶； (4)沉淀 将步骤(3)所得的交联透明质酸钠凝胶与沉淀剂混合， 进行沉淀； (5)干燥 将步骤(4)所得沉淀进行真空干燥， 得到交联度为15的透明质酸钠凝胶粉末。 2.根据权利要求1所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 步骤(1)中， 所 述氢氧化钠溶液的质量浓度为0.55； 所述透明质酸钠与氢氧化钠的质量比为110:110； 所述混合的条件包括： 在2565下搅拌0.5h2.5h。 3.根据权利要求1所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 步骤(2)中， 所 述葛根素与透明质酸钠溶液中的透明质酸钠的质量比为110:1010。

5、0； 调节交联反应溶液的pH值的方式为向交联反应溶液中加入酸性溶液； 所述酸性溶液优 选为0.0080.012mol/L盐酸溶液。 4.根据权利要求1所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 步骤(3)中， 所 述磷酸盐缓冲溶液为浓度0.05mol/L0.5mol/L， pH 6.08.0的磷酸盐缓冲溶液； 所述磷 酸盐缓冲溶液与步骤(2)已终止交联反应的溶液的体积比为1:15:1； 所述自然溶胀的时间为2h5h。 5.根据权利要求1所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 步骤(4)中， 所 述交联透明质酸钠凝胶与沉淀剂的体积比为1:21:6； 所述沉淀剂为9297乙醇；。

6、 所述沉淀方式为将凝胶加入沉淀剂中， 搅拌产生沉淀后放置1h12h。 6.根据权利要求1所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 步骤(5)中， 所 述真空干燥的温度为3050。 7.根据权利要求1所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 该方法还包 括： (6)灭菌 将步骤(5)所得粉末与磷酸盐缓冲液混合， 制备成质量分数为15的凝胶， 通过高 温短时灭菌， 得到颗粒化交联透明质酸钠凝胶。 8.根据权利要求7所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 所述磷酸盐缓冲液 为浓度0.05mol/L0.5mol/L， pH 6.08.0的磷酸盐缓冲溶液； 所述粉末与磷酸盐缓冲液。

7、 的质量比为1:201:100。 权利要求书 1/2 页 2 CN 110698699 A 2 9.根据权利要求1-8中任意一项所述的葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 其中， 所述透明质酸钠通过发酵法或提取法制备得到。 10.由权利要求1-9中任意一项所述的方法制得的透明质酸钠凝胶。 权利要求书 2/2 页 3 CN 110698699 A 3 一种葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法及透明质酸钠 凝胶 技术领域 0001 本发明属于药物及化妆品制备技术领域， 更具体地， 涉及一种葛根素交联制备透 明质酸钠凝胶的方法， 以及由该方法制得的透明质酸钠凝胶。 背景技术 0002 透明质酸(hya。

8、louronic acid， HA)是一类由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基葡 萄糖双糖单位重复连接组成的一种线状聚阴离子粘多糖(式I)， 广泛存在于动物和人的关 节滑液、 眼球玻璃体、 皮肤、 细胞间隙及鸡冠等结缔组织中， 是构成关节滑液、 玻璃体、 皮肤 和软骨组织的重要成分， 具有独特的理化性质和广泛的生物学功能。 0003 0004 透明质酸通常以透明质酸盐的形式存在， 即透明质酸钠(sodium hyaluronate， SH)。 SH既可采用动物组织提取也可利用微生物发酵法生产， 广泛应用于食品、 日化和医药 领域， 依据分子量不同， 可划分为食品级、 医用级和化妆品级等多种级。

9、别。 经过长期的研究 开发， 高纯度的医用级SH已被制成注射剂， 应用于眼科手术、 骨科手术、 治疗骨性关节炎及 类风湿性关节炎和预防术后粘连等。 此外， 由于透明质酸具有良好的生物相容性、 独特的粘 弹性和优良的保水性， HA也被用于注入面部皮肤， 减轻皱纹， 改进皮肤外观和阻止皮肤衰 老。 0005 天然透明质酸钠易被生物降解， 在生物体内存留时间短， 硬度和力学强度都不够 大， 限制了其应用。 针对其以上缺陷， 通常利用适当的交联剂将透明质酸钠制备成不同分子 量的凝胶， 经交联修饰的透明质酸钠凝胶分子量增大， 可以在保留原有生物相容性的基础 上， 开发出分子结构更加复杂、 粘弹性更强、 。

10、抗酶解性和机械特性显著提高的透明质酸钠交 联改性凝胶， 从而使其应用更加广泛。 0006 目前所用的交联剂多为化学试剂， 对皮肤存在刺激性甚至细胞毒性， 其残留对使 用者具有较大的潜在危害， 限制了其应用， 因此利用安全无毒的天然生物交联剂制备透明 质酸钠凝胶是解决该问题的有效方法。 0007 葛根素亦被称为葛根黄酮， 是从干燥的葛根中分离出来的异黄酮类化合物(见式 II)， 存在于多年生豆科植物葛和野葛的根部， 具有退热、 镇静、 增加脑血流、 提高免疫、 抗肿 瘤、 降血糖、 解酒等多种作用， 临床应用除用于治疗冠心病、 高血压外， 因其具有 受体阻断 作用， 还被应用于青光眼及高眼压症的。

11、治疗， 应用范围日益广泛。 目前市场上已有试剂级高 说明书 1/5 页 4 CN 110698699 A 4 纯度的葛根素商品供应， 相关产业快速发展， 易于获取。 作为一种异黄酮类化合物， 葛根素 结构中含羟基、 醚键和不饱和吡喃酮等多个活性官能团， 由于其天然无毒、 抗氧化、 抑菌、 产 品易得等特点， 发明人认为其适合作为一种新型生物交联剂用于食品、 日化和医药等领域。 此外， 由于高纯葛根素颜色极浅， 利用其制备的凝胶避免了已开发的生物交联剂(如京尼 平)所制备凝胶呈现深蓝紫色的缺陷， 在应用中具有更好的前景和市场。 0008 0009 然而， 目前尚未有葛根素用于交联制备透明质酸钠凝。

12、胶的方法。 发明内容 0010 本发明的目的是提供一种葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法及透明质酸钠 凝胶。 0011 本发明的第一方面提供一种葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法， 该方法包括 以下步骤： 0012 (1)溶解 0013 将透明质酸钠与氢氧化钠溶液混合， 至透明质酸钠完全溶解； 0014 (2)交联反应 0015 将葛根素加入步骤(1)所得的透明质酸钠溶液中， 在3070下进行交联反应 1h20h； 调节交联反应溶液的pH值至中性， 终止交联反应； 0016 (3)溶胀 0017 将磷酸盐缓冲溶液加入步骤(2)已终止交联反应的溶液中， 自然溶胀， 制得交联透 明质酸钠凝胶； 0。

13、018 (4)沉淀 0019 将步骤(3)所得的交联透明质酸钠凝胶与沉淀剂混合， 进行沉淀； 0020 (5)干燥 0021 将步骤(4)所得沉淀进行真空干燥， 得到交联度为15的透明质酸钠凝胶粉 末。 0022 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(1)中， 所述氢氧化钠溶液的质量浓度为 0.55。 0023 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(1)中， 所述透明质酸钠与氢氧化钠的质量 比为110:110； 说明书 2/5 页 5 CN 110698699 A 5 0024 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(1)中， 所述混合的条件包括： 在2565 下搅拌0.5h2.5h。 0025。

14、 本发明中， 所述葛根素作为交联剂， 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(2)中， 所述葛根素与透明质酸钠溶液中的透明质酸钠的质量比为110:10100。 0026 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(2)中， 调节交联反应溶液的pH值的方式为 向交联反应溶液中加入酸性溶液； 所述酸性溶液优选为0.0080.012mol/L盐酸溶液。 0027 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(3)中， 所述磷酸盐缓冲溶液为浓度 0.05mol/L0.5mol/L， pH 6.08.0的磷酸盐缓冲溶液； 所述磷酸盐缓冲溶液与步骤(2)已 终止交联反应的溶液的体积比为1:15:1。 0028 根据本发明。

15、的一种优选实施方式， 步骤(3)中， 所述自然溶胀的时间为2h5h。 0029 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(4)中， 所述交联透明质酸钠凝胶与沉淀剂 的体积比为1:21:6。 0030 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(4)中， 所述沉淀剂为92-97乙醇。 0031 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(4)中， 所述沉淀方式为将凝胶加入沉淀剂 中， 搅拌产生沉淀后放置1h12h。 0032 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(5)中， 所述真空干燥的温度为3050 。 0033 根据本发明的一种优选实施方式， 该方法还包括： 0034 (6)灭菌 0035 将步骤(5)所得。

16、粉末与磷酸盐缓冲液混合， 制备成质量分数为15的凝胶， 通 过高温短时灭菌， 得到颗粒化交联透明质酸钠凝胶。 0036 根据本发明的一种优选实施方式， 步骤(6)中， 所述磷酸盐缓冲液为浓度0.05mol/ L0.5mol/L， pH 6.08.0的磷酸盐缓冲溶液； 所述粉末与磷酸盐缓冲液的质量比为1:20 1:100。 0037 根据本发明的方法， 所述透明质酸钠可以通过常规的发酵法或提取法制备得到。 0038 本发明的第二方面提供由上述方法制得的透明质酸钠凝胶。 0039 本发明具有以下技术效果： 0040 (1)采用葛根素做交联剂， 可制得具有吸水溶胀性质的凝胶， 实施例中最后一步向 干。

17、燥后的凝胶粉末中加入磷酸盐缓冲液， 粉末吸水溶胀为凝胶颗粒， 若未形成凝胶则会发 生溶解、 形成溶液。 0041 (2)由于葛根素天然无毒， 可以极大的简化凝胶后期洗脱交联剂的过程， 提高制备 效率， 降低洗脱成本。 0042 (3)在采用葛根素做交联剂的基础上， 通过进一步优化透明质酸钠原料的分子量、 调节交联反应中交联剂与透明质酸钠原料的比例以及交联反应条件， 在一定范围内可根据 需求定制特定交联度的透明质酸钠凝胶， 可以更好的满足医药、 美容、 化妆品等领域的不同 需求。 0043 本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。 说明书 3/5 页 6 CN 1106986。

18、99 A 6 具体实施方式 0044 下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。 虽然以下描述了本发明的优选实施 方式， 然而应该理解， 可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。 0045 以下实施例所选透明质酸钠原料为发酵法生产， 分子量80万200万道尔顿。 0046 磷酸盐缓冲液的组成为含不同比例的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的去离子水溶液。 0047 实施例1 0048 称取5g氢氧化钠， 溶解于200mL蒸馏水， 配制成2.5的氢氧化钠溶液， 加入5g透明 质酸钠原料， 35搅拌溶解2h， 至透明质酸钠完全溶解。 取0.5g葛根素加入到上述溶液， 30 搅拌反应12h。 反。

19、应完毕后， 加入0.01mol/L盐酸溶液调节pH至中性， 终止交联反应。 加入 500mL磷酸盐缓冲液(浓度0.1mol/L， pH7.0)， 静置溶胀4h。 在搅拌下滴加1000mL 95乙醇 至溶胀后的凝胶中， 收集沉淀， 30下真空干燥15h， 得到交联度为2.1的透明质酸钠凝胶 粉末。 将凝胶粉末加入500mL磷酸盐缓冲液(浓度0.1mol/L， pH7.0)中， 制备成凝胶颗粒， 于 120下灭菌10min。 0049 实施例2 0050 称取2.5g氢氧化钠， 溶解于200mL蒸馏水， 配制成1的氢氧化钠溶液， 加入10g透 明质酸钠原料， 50搅拌溶解3h， 至透明质酸钠完全溶。

20、解。 取2.5g葛根素加入到上述溶液， 65搅拌反应3h。 反应完毕后， 加入0.01mol/L盐酸溶液调节pH至中性， 终止交联反应。 加入 500mL磷酸盐缓冲液(浓度0.1mol/L， pH7.0)， 静置溶胀3h。 在搅拌下滴加1000mL95乙醇至 溶胀后的凝胶中， 收集沉淀， 40下真空干燥12h， 得到交联度为5.3的透明质酸钠凝胶粉 末。 将凝胶粉末加入500mL磷酸盐缓冲液(浓度0.1mol/L， pH7.0)中， 制备成凝胶颗粒， 于120 下灭菌10min。 0051 实施例3 0052 称取7.5g氢氧化钠， 溶解于200mL蒸馏水， 配制成3的氢氧化钠溶液， 加入10。

21、g透 明质酸钠原料， 40搅拌溶解1h， 至透明质酸钠完全溶解。 取5g葛根素加入到上述溶液， 45 搅拌反应20h。 反应完毕后， 加入0.01mol/L盐酸溶液调节pH至中性， 终止交联反应。 加入 500mL磷酸盐缓冲液(浓度0.1mol/L， pH7.0)， 静置溶胀3h。 在搅拌下滴加1000mL 95乙醇 至溶胀后的凝胶中， 收集沉淀， 40下真空干燥12h， 得到交联度为5.6的透明质酸钠凝胶 粉末。 将凝胶粉末加入500mL磷酸盐缓冲液(浓度0.1mol/L， pH7.0)中， 制备成凝胶颗粒， 于 120下灭菌10min。 0053 测试例 0054 粘弹性能和溶胀度是反映凝。

22、胶理化特性的重要指标， 也是透明质酸钠交联凝胶区 别于非交联凝胶的主要参考数据。 0055 1、 动力黏度测定： 0056 采用旋转式黏度计测定法， 按照 中华人民共和国药典 (2010年版)二部附录VIG 第二法测定， 在剪切速率不小于0.25Hz， (250.1)条件下， 根据在旋转过程中作用于液 体介质中的切应力大小来完成测定的， 并以下式计算供试品的动力黏度： 0057 K(T/) 0058 式中： K为用已知黏度的标准液测得的旋转式黏度计常数； 0059 T为扭力矩； 说明书 4/5 页 7 CN 110698699 A 7 0060 为角速度。 0061 2、 特性粘数测定： 00。

23、62 采用乌氏黏度计测定特性黏数， 按照 中华人民共和国药典 (2015年版)二部附录 VIG第三法测定。 0063 3、 溶胀度 0064 准确称取适量交联透明质酸钠凝胶置于培养皿中， 放入干燥箱， 调节温度至70， 烘干至恒重。 取出后准确称量其质量m1。 将烘干的交联透明质酸钠凝胶浸泡到去离子水中， 至膨胀完全， 取出用滤纸吸去表面的水分， 称量膨胀后的交联透明质酸钠的质量m2。 根据公 式Q(m2-m1)/m1计算交联凝胶的溶胀度。 0065 4、 对3个实施例制备的交联凝胶进行上述测定， 测得的性能参数如下表1所示。 0066 表1 0067 0068 以上已经描述了本发明的各实施例， 上述说明是示例性的， 并非穷尽性的， 并且也 不限于所披露的各实施例。 在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下， 对于本技 术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。 说明书 5/5 页 8 CN 110698699 A 8 。