提高长薄鳅人工繁殖效率的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910921418.9 (22)申请日 2019.09.27 (66)本国优先权数据 201910534778.3 2019.06.20 CN (71)申请人 四川省农业科学院水产研究所(四 川省水产研究所) 地址 610000 四川省成都市高新区西部园 区西源大道1001号 (72)发明人 陈春娜黄颖颖杜军龙治海 林珏周波龚全李正一 戴绍祥卢华徐飞 (74)专利代理机构 北京元本知识产权代理事务 所 11308 代理人 王红霞 (51)Int.Cl. A01K 61/10。

2、(2017.01) A01K 61/13(2017.01) A01K 61/17(2017.01) A01K 61/60(2017.01) A01K 61/65(2017.01) (54)发明名称 一种提高长薄鳅人工繁殖效率的方法 (57)摘要 本发明涉及鱼类人工繁殖技术领域， 具体地 说是一种提高长薄鳅人工繁殖效率的方法。 具体 步骤如下， 首先对亲鱼进行精心筛选后暂养在聚 氯乙烯网箱中， 然后对亲鱼进行分类， 并针对不 同的发育程度， 选择不同的催产针距时间和药物 计量， 有利于亲鱼的保护和卵母细胞的同步成 熟， 催产出的卵细胞中未成熟卵粒的比例从10 下降到3， 然后进行催产处理， 使精。

3、卵混合均 匀， 最后对亲鱼进行护理， 最大限度减少产卵亲 鱼的受伤和产后亲鱼的死亡， 保护了有限的长薄 鳅资源， 传统方法产后亲鱼的死亡率高达70 100， 本技术条件下死亡率为10。 权利要求书2页 说明书5页 CN 110876343 A 2020.03.13 CN 110876343 A 1.一种提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 具体步骤如下： A： 亲鱼暂养： 将精选的亲鱼雌雄个体分别放入聚氯乙烯网箱暂养； B： 亲鱼分类： 沿亲鱼泄殖孔开口方向上方轻轻挤压， 视结果将雌雄亲鱼分类； 雌鱼： 第一类： 排出的卵粒圆润均匀呈白色或乳白色； 第二类： 排出的卵粒大小形状均不一，。

4、 呈微黄色； 第三类： 泄殖孔内无卵排出； 雄鱼： 第一类： 精液镜检有活动精子； 第二类： 精液镜检无活动或少量活动精子； 第三类： 泄殖孔内无精液流出； C： 亲鱼注射： 根据分类结果进行注射； 第一类检查结果的亲鱼注射方法： 雌亲鱼采用二针法注射， 两针针距为8h， 雄鱼采用一 次注射， 注射时间为预计催产时间前4h， 注射剂量为雌鱼第二针的一半； 第二类检查结果的亲鱼注射方法： 雌亲鱼采用二针法注射， 两针针距为12h， 雄鱼采用 一次注射， 注射时间与雌鱼第二针同时进行， 注射剂量为雌鱼第二针的一半； 为保护亲鱼， 第三类检查结果的雌雄亲鱼不进行催产； D： 亲鱼催产： 注射催产针后。

5、的雌雄鱼分别放在两个聚氯乙烯网箱， 待达到相应的催产 时间后进行催产； 将雌鱼捞出， 挤压腹部将成熟的卵挤入干燥的容器中； 将雄鱼捞出， 挤压雄鱼腹部， 精液流到盖玻片上， 精液连同盖玻片一起放入盛卵的容器 中， 加入精子激活液， 用量以刚好淹没卵粒为宜， 轻轻摇晃使精卵混合均匀后， 移到孵化器； E： 亲鱼护理： 催产后的亲鱼放回聚氯乙烯网箱， 将网箱放在进水口附近， 保持水流量， 每日投喂鲜活水蚯蚓， 并控制光照， 1015天后转入亲鱼池培育。 2.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述精选亲鱼是挑 选成熟度好， 雌鱼要求个体完整无伤口， 腹部松软且微微膨胀， 。

6、最小个体200g以上； 雄鱼选 择体表完整无伤口， 有活力的个体。 3.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述亲鱼用量雌雄 比例为1 21 3。 4.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述步骤A采用的 聚氯乙烯网箱是箱内光照强度为50100lx， 网箱需放在进水口附近， 水流量控制在0.1m3/ min左右。 5.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述第一类检查结 果的亲鱼注射方法具体为： 雌亲鱼采用二针法注射。 第一针剂量为每千克鱼体重用0.5mgPG +0.5ugLHRH-A2+1mlH2O， 第二针注射剂。

7、量为每千克鱼体重用1mgPG+8ugLHRH-A2+1mlH2O， 水 温231时， 两针针距为8h， 预计催产时间在第二针注射后6h。 雄鱼采用一次注射， 注射时 间为预计催产时间前4h， 注射剂量为雌鱼第二针的一半； 所述第二类检查结果的亲鱼注射方法具体为： 雌亲鱼采用二针法注射。 第一针剂量为 每千克鱼体重用1mgPG+1ugLHRH-A2+1mlH2O， 第二针注射剂量为每千克鱼体重用1mgPG+ 权利要求书 1/2 页 2 CN 110876343 A 2 10ugLHRH-A2+1mlH2O， 水温231时， 两针针距为12h， 预计催产时间在第二针注射后7h。 雄 鱼采用一次注射。

8、， 注射时间与雌鱼第二针同时进行， 注射剂量为雌鱼第二针的一半。 6.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述步骤D的聚氯 乙烯网箱放在进水口附近， 水流量控制在0.3m3/min。 7.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述精子激活液以 原料重量份数为计： 氯化钠140份， 氯化钾26份， 氯化钙43.3份， 氯化镁11.3份， 0.05M的 Tris-Hcl调pH至7.9， 配制激活液的溶剂为蒸馏水。 8.按权利要求1所述提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 其特征在于， 所述步骤E中水流 量控制在0.1m3/min， 每日向网箱中投喂占亲鱼。

9、体重15的鲜活水蚯蚓， 箱内光照强度控制 在50lx。 权利要求书 2/2 页 3 CN 110876343 A 3 一种提高长薄鳅人工繁殖效率的方法 技术领域 0001 本发明涉及鱼类人工繁殖技术领域， 具体地说是一种提高长薄鳅人工繁殖效率的 方法。 背景技术 0002 长薄鳅Leptobotia elongata(Bleeker)属鳅科， 薄鳅属， 是最大鳅科鱼类， 分布于 中国长江中上游及其支流， 为我国特有种， 在其生活水域整个生态系统中占有极其重要的 位置。 长薄鳅具有较高的经济价值， 其蛋白质含量高， 营养价值丰富， 氨基酸种类数量和比 例十分合理； 同时， 长薄鳅在观赏鱼领域也占。

10、有一席之地， 曾在1989年的新加坡国际观赏鱼 评比中获得金奖。 由于环境的突变， 野生长薄鳅的种群数量及分布区域明显减少， 现已被列 入中国濒危动物红皮书。 刘军对长江特有鱼类的受威胁程度进行了定量分析， 认为应对长 薄鳅这一珍稀物种进行三级急切保护。 近年来， 随着国家对环境保护及生态修复工作的越 来越重视， 长薄鳅的增殖放流任务也陆续开展， 目前长薄鳅苗种都是依靠江河捕捞野生亲 鱼繁殖获得， 人工繁殖技术要求高， 在人工驯养繁殖中， 我们发现长薄鳅雌雄亲鱼发育不同 步， 雄鱼精液较难获得且精液量少、 质量低， 导致人工授精时， 鱼卵受精率低， 同时， 长薄鳅 抗应激能力差， 亲鱼在人工繁。

11、殖过程中极易死亡， 不利于持续性的苗种获得。 0003 因此， 提高长薄鳅人工繁殖效率， 有利于批量苗种的持续性获得， 对于长薄鳅的种 质资源保护将有重大意义。 发明内容 0004 针对上述问题， 为了解决现有技术中存在的不足,本发明提供一种提高长薄鳅人 工繁殖效率的方法。 有利于减缓长薄鳅亲鱼的应激反应， 提高精卵细胞的同步成熟率， 延长 精子的运动时间， 使其受精率及亲鱼存活率得到大幅提升。 0005 本发明技术方案如下： 0006 一种提高长薄鳅人工繁殖效率的方法， 具体步骤如下： 0007 A： 亲鱼暂养： 将精选的亲鱼雌雄个体分别放入聚氯乙烯网箱暂养； 0008 B： 亲鱼分类： 沿。

12、亲鱼泄殖孔开口方向上方轻轻挤压， 视结果将雌雄亲鱼分类； 0009 雌鱼： 0010 第一类： 排出的卵粒圆润均匀呈白色或乳白色； 0011 第二类： 排出的卵粒大小形状均不一， 呈微黄色； 0012 第三类： 泄殖孔内无卵排出； 0013 雄鱼： 0014 第一类： 精液镜检有活动精子； 0015 第二类： 精液镜检无活动或少量活动精子； 0016 第三类： 泄殖孔内无精液流出； 0017 C： 亲鱼注射： 根据分类结果进行注射； 说明书 1/5 页 4 CN 110876343 A 4 0018 第一类检查结果的亲鱼注射方法： 雌亲鱼采用二针法注射， 两针针距为8h， 雄鱼采 用一次注射，。

13、 注射时间为预计催产时间前4h， 注射剂量为雌鱼第二针的一半； 0019 第二类检查结果的亲鱼注射方法： 雌亲鱼采用二针法注射， 两针针距为12h， 雄鱼 采用一次注射， 注射时间与雌鱼第二针同时进行， 注射剂量为雌鱼第二针的一半； 0020 为保护亲鱼， 第三类检查结果的雌雄亲鱼不进行催产； 0021 D： 亲鱼催产： 注射催产针后的雌雄鱼分别放在两个聚氯乙烯网箱， 待达到相应的 催产时间后进行催产； 0022 将雌鱼捞出， 挤压腹部将成熟的卵挤入干燥的容器中； 0023 将雄鱼捞出， 挤压雄鱼腹部， 精液流到盖玻片上， 精液连同盖玻片一起放入盛卵的 容器中， 加入精子激活液， 用量以刚好淹。

14、没卵粒为宜， 轻轻摇晃使精卵混合均匀后， 移到孵 化器； 0024 E： 亲鱼护理： 催产后的亲鱼放回聚氯乙烯网箱， 将网箱放在进水口附近， 保持水流 量， 每日投喂鲜活水蚯蚓， 并控制光照， 1015天后转入亲鱼池培育。 0025 所述精选亲鱼是挑选成熟度好， 雌鱼要求个体完整无伤口， 腹部松软且微微膨胀， 最小个体200g以上； 雄鱼选择体表完整无伤口， 有活力的个体。 0026 所述亲鱼用量雌雄比例为1 21 3。 0027 所述步骤A采用的聚氯乙烯网箱是箱内光照强度为50100lx， 网箱需放在进水口 附近， 水流量控制在0.1m3/min左右。 0028 所述第一类检查结果的亲鱼注射。

15、方法具体为： 雌亲鱼采用二针法注射。 第一针剂 量为每千克鱼体重用0.5mgPG+0.5ugLHRH-A2+1mlH2O， 第二针注射剂量为每千克鱼体重用 1mgPG+8ugLHRH-A2+1mlH2O， 水温231时， 两针针距为8h， 预计催产时间在第二针注射后 6h。 雄鱼采用一次注射， 注射时间为预计催产时间前4h， 注射剂量为雌鱼第二针的一半。 0029 所述第二类检查结果的亲鱼注射方法具体为： 雌亲鱼采用二针法注射。 第一针剂 量为每千克鱼体重用1mgPG+1ugLHRH-A2+1mlH2O， 第二针注射剂量为每千克鱼体重用1mgPG+ 10ugLHRH-A2+1mlH2O， 水温。

16、231时， 两针针距为12h， 预计催产时间在第二针注射后7h。 雄 鱼采用一次注射， 注射时间与雌鱼第二针同时进行， 注射剂量为雌鱼第二针的一半。 0030 所述步骤D的聚氯乙烯网箱放在进水口附近， 水流量控制在0.3m3/min。 所述精子 激活液以原料重量份数为计： 氯化钠140份， 氯化钾26份， 氯化钙43.3份， 氯化镁11.3份， 0.05M的Tris-Hcl调pH至7.9， 配制激活液的溶剂为蒸馏水。 0031 所述步骤E中水流量控制在0.1m3/min， 每日向网箱中投喂占亲鱼体重15的鲜活 水蚯蚓， 箱内光照强度控制在50lx。 0032 本发明的主要优点是： 1.根据亲鱼。

17、不同的发育程度， 选择不同的催产针距时间和 药物计量， 有利于亲鱼的保护和卵母细胞的同步成熟， 催产出的卵细胞中未成熟卵粒的比 例从10下降到3。 0033 2.长薄鳅精液中含有大量的Na+、 K+、 Ca2+、 Mg2+等离子， 这些离子是维系精浆渗透压 的主要成分。 精子激活液中含有的离子对长薄鳅精子活力有着一定作用， 除了能减少渗透 压差带来的能量损耗外， 还能起到提高精子活力， 提高精子激活比例的作用， 精子快速运动 时间从14s提高到23s， 精子激活比例从72提高到了94， 大大增加了精子与卵的结合机 会， 使受精率大幅提高； 说明书 2/5 页 5 CN 110876343 A 。

18、5 0034 在上述2种影响的共同作用下， 人工授精率从50上升到90以上。 0035 3.最大限度减少产卵亲鱼的受伤和产后亲鱼的死亡， 保护了有限的长薄鳅资源， 传统方法产后亲鱼的死亡率高达70100， 本技术条件下死亡率为10。 具体实施方式 0036 下面通过实施例详述本发明。 0037 实施例1 0038 1.亲鱼选择及暂养 0039 亲鱼挑选成熟度较好的， 雌鱼要求个体完整无伤口， 腹部松软且微微膨胀， 最小个 体200g以上； 雄鱼选择体表完整无伤口， 活力较好的个体。 雌雄比例为1 21 3。 将雌雄个 体放入聚氯乙烯网箱暂养， 网箱规格为100cm80cm30cm， 网箱上可放。

19、置一块泡沫， 以防 其逃逸， 箱内光照强度控制在50100lx， 将网箱放在进水口附近， 水流量控制在0.1m3/min 左右。 0040 2.药物及效应时间 0041 亲鱼检查分类 0042 沿亲鱼泄殖孔开口方向上方轻轻挤压， 视结果将雌雄亲鱼分为以下几类： 0043 雌鱼： 0044 第一类： 泄殖孔内有少量卵排出， 卵粒圆润均匀呈白色或乳白色； 0045 第二类： 泄殖孔内有少量卵排出， 卵粒大小形状均不一， 呈微黄色； 0046 第三类： 泄殖孔内无卵排出。 0047 雄鱼： 0048 第一类： 泄殖孔内有白色精液流出， 遇水即散， 镜检有活动精子； 0049 第二类： 泄殖孔内有白色。

20、精液流出， 遇水不散， 镜检无活动或少量活动精子； 0050 第三类： 泄殖孔内无精液流出。 0051 注射 0052 第一类检查结果的亲鱼注射方法： 雌亲鱼采用二针法注射。 第一针剂量为每千克 鱼体重用0.5mgPG+0.5ugLHRH-A2+1mlH2O， 第二针注射剂量为每千克鱼体重用1mgPG+ 8ugLHRH-A2+1mlH2O， 水温231时， 两针针距为8h， 预计催产时间在第二针注射后6h。 雄鱼 采用一次注射， 注射时间为预计催产时间前4h， 注射剂量为雌鱼第二针的一半。 0053 第二类检查结果的亲鱼注射方法： 雌亲鱼采用二针法注射。 第一针剂量为每千克 鱼体重用1mgPG。

21、+1ugLHRH-A2+1mlH2O， 第二针注射剂量为每千克鱼体重用1mgPG+10ugLHRH- A2+1mlH2O， 水温231时， 两针针距为12h， 预计催产时间在第二针注射后7h。 雄鱼采用一 次注射， 注射时间与雌鱼第二针同时进行， 注射剂量为雌鱼第二针的一半。 0054 为保护亲鱼， 第三类检查结果的雌雄亲鱼不进行催产。 0055 上述催产药物为宁波第二激素厂生产， 所选规格为： LHRH-A2(1025微克)、 PG为 鲤鱼脑垂体。 0056 3.催产 0057 注射催产针后的雌雄鱼分别放在两个聚氯乙烯网箱， 将网箱放在进水口附近， 水 流量控制在0.3m3/min左右。 侍。

22、达到相应的催产时间后进行人工催产。 说明书 3/5 页 6 CN 110876343 A 6 0058 将雌鱼捞出， 挤压腹部有灰色卵粒从泄殖孔中顺利流出即可挤卵， 将雌鱼轻轻放 入亲鱼固着器(专利号： ZL201720106816.1)， 将成熟的卵挤入干燥的容器中。 0059 将雄鱼捞出， 轻轻放入亲鱼固着器， 将盖玻片轻放在泄殖孔处， 挤压雄鱼腹部， 精 液从泄殖孔流到盖玻片上， 精液连同盖玻片一起放入盛卵的容器中， 加入事先配制好的精 子激活液， 用量以刚好淹没卵粒为宜， 轻轻摇晃容器10s， 使精卵混合均匀后， 静置1min， 最 后移到孵化器中进行孵化。 0060 本发明所用的精子。

23、激活液(以1L激活液为例)， 包含如下原料： 氯化钠140mg， 氯化 钾26mg， 氯化钙43.3mg， 氯化镁11.3mg， 0.05M的Tris-Hcl调pH至7.9， 配制激活液的溶剂为 蒸馏水， 其配制方法如下： 0061 溶质质量计算公式： 溶质质量溶液质量浓度激活液体积溶质分子量 1000； 0062 配制步骤(以1L激活液为例)： 0063 根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的氯化钠质量， 称量出该质 量的分析纯氯化钠140mg放入烧杯中； 0064 根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的氯化钾质量， 称量出该质 量的分析纯氯化钾26mg与所称量的氯化钠放入同。

24、一烧杯中； 0065 根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的氯化钙质量， 称量出该质 量的分析纯氯化钙43.3mg放入上述同一烧杯中； 0066 根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的氯化镁质量， 称量出该质 量的分析纯氯化镁11.3mg放入上述同一烧杯中； 0067 根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的三羟甲基氨基甲烷 (Tris-base)质量， 称量出该质量的分析纯Tris-base 6.056g放入上述同一烧杯中； 0068 在烧杯中加入二分之一的激活液体积的蒸馏水并搅拌， 使烧杯中的物质充分溶 解， 将溶解后的溶解液加入0.1M的盐酸320ml混合， 移入1。

25、L的容量瓶中， 需用少量蒸馏水洗 涤烧杯两次至三次， 将洗涤后溶液也一同倒入容量瓶中， 最后用蒸馏水定容至刻度线处， 晃 匀。 0069 0.1M盐酸的配制： 取8.36mL盐酸， 加水定容到1000mL的容量瓶。 0070 4.产后亲鱼护理 0071 人工催产后的亲鱼放回聚氯乙烯网箱， 将网箱放在进水口附近， 保持一定的水流 通过网箱， 水流量控制在0.1m3/min。 每日向网箱中投喂占亲鱼体重15的鲜活水蚯蚓， 箱 内光照强度控制在50lx左右， 每天除例行检查外， 尽量不惊扰亲鱼恢复， 10天后转入亲鱼池 培育。 0072 有益效果： 0073 长薄鳅亲鱼在养殖环境改变的情况下， 亲鱼。

26、应激现象严重， 且注射催产针后， 亲 鱼会沿池壁不停游动， 腹部和吻端会出现大面积擦伤， 导致产后亲鱼死亡率高。 本发明中将 雌雄亲鱼分别放入不同的聚氯乙烯网箱内， 遮光避荫， 有利于缓减亲鱼的应激反应， 避免亲 鱼擦伤， 提高了人工繁殖的效率。 0074 现有技术两针注射剂量大、 针距间隔时间短， 催产效果不理想， 卵粒中包含了大 量未成熟的卵粒。 本发明根据亲鱼的不同发育程度， 适当降低注射剂量并延长两针注射针 说明书 4/5 页 7 CN 110876343 A 7 距间隔时间， 可充分发挥第一针催熟针的药效， 不但降低了亲鱼对催产药物的应激反应， 还 有利于卵母细胞的同步成熟， 未成熟。

27、的卵粒所占比例大幅降低， 授精率得到有效提高。 0075 长薄鳅性成熟雄鱼数量少， 人工授精时往往精液量少且质量参差不齐， 现有操 作中通常采取用清水将雄鱼生殖孔附近的精液冲洗进入盛卵的容器中完成授精过程， 此过 程易使卵在未授精以前提前吸水膨胀， 从而影响授精效果。 本发明采用盖玻片从泄殖孔处 收集精液， 精液连同盖玻片一起放入盛卵的容器中， 加入本发明特制的精子激活液， 有效避 免了因精液量少、 活力差而造成受精率低下的问题。 0076 镜检发现长薄鳅精子活力低， 快速运动时间短， 仅为14s， 比其它鱼类明显偏低， 在人工授精的过程中， 精子与卵结合前， 两者存在一定的距离， 精子在排入水体后， 需要尽 快移动这段距离。 故活力越强的精子， 在人工繁殖中的授精率越高。 本发明激活液中添加的 离子成分， 能减少渗透压差带来的能量损耗， 起到延长精子快速运动时间的作用， 显著提高 了精子活力及激活比例。 0077 以上仅为本发明的具体实施方式， 但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉 本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内， 可轻易想到变化或替换， 都应涵盖在 本发明的保护范围之内。 因此， 本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。 说明书 5/5 页 8 CN 110876343 A 8 。