中药复方在制备治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911107886.9 (22)申请日 2019.11.13 (71)申请人 上海现代中医药股份有限公司 地址 200050 上海市长宁区长宁路1027号 3301-3302室 (72)发明人 潘一峰涂驭斌卞化石周仁兴 (74)专利代理机构 上海泰能知识产权代理事务 所 31233 代理人 黄志达魏峯 (51)Int.Cl. A61K 36/9066(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (54)发明名称 一种中药复方在制备治疗非酒精性脂肪性 肝炎的药物中。

2、的应用 (57)摘要 本发明涉及一种中药复方在制备治疗非酒 精性脂肪性肝炎的药物中的应用。 本发明通过实 验证明了根据中药复方制备而得的药物可以有 效减少肝脏脂肪堆积， 有效减缓非酒精性脂肪性 肝炎引起的炎症病灶， 肝脏纤维化有所缓解， 进 一步拓展了中药复方的应用。 权利要求书1页 说明书8页 附图8页 CN 110787272 A 2020.02.14 CN 110787272 A 1.一种中药复方在制备治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物中的应用， 其特征在于： 所述 中药复方包括白术、 枳壳、 姜黄、 五味子、 丹参、 葛根、 泽泻和白芍。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述中。

3、药复方的制备方法具体步骤如下： 取丹参、 葛根、 泽泻、 白芍分别加水10倍量、 8倍量， 煎煮， 煎液过滤， 滤液合并， 滤液浓缩 至相对密度1.08-1.12， 冷却后在搅拌下加乙醇使含醇量至70， 静置沉淀， 取上清液， 过 滤， 滤液浓缩至相对密度为1.11.2， 得到浓缩物， 备用； 另取白术、 枳壳、 姜黄、 五味子分别 加70乙醇10倍量、 8倍量， 加热回流， 合并回流液， 过滤， 滤液浓缩至相对密度为1.11.2， 与备用的浓缩物合并， 干燥， 即得。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述中药复方配以辅料， 最后制粒和/或压 片成制剂。 权利要求书 1/1 页 。

4、2 CN 110787272 A 2 一种中药复方在制备治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物中的 应用 技术领域 0001 本发明属于非酒精性脂肪性肝炎领域， 特别涉及一种中药复方在制备治疗非酒精 性脂肪性肝炎的药物中的应用。 背景技术 0002 非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的活动加重状态， 以 肝实质细胞脂肪样变性， 同时伴有炎症反应、 组织学改变和持续的肝损伤为主要特征。 研究 发现， NASH是隐源性肝硬化的重要原因之一， 故预后不佳， 约30-40的NASH合并进展性 肝纤维化， 10-15并发肝硬化， 3进展至最终的肝衰竭， 严重危害人类健康。 因此， 对。

5、 NASH的防治是阻止非酒精性脂肪性肝病持续发展的关键。 目前， 中医界对NASH病因病机的 认识已渐趋一致， 但具体的治疗原则依学者经验、 学识等的不同， 呈现出多样化的特点。 中 医在改善肝功能， 调节脂质代谢上具有比较明显的疗效和优势， 尤其是在 “整体观念” 和 “辨 证论治” 的指导下， 在改善患者的生存质量上具有较为明显的优势。 中药复方治疗NASH不是 单纯降脂药物的简单堆积， 而是各药物之间交互作用的结果。 目前针对中药复方的实验研 究主要以药效为主， 而且多集中在对中药复方调控肝功能ALT、 AST、 TC、 TG等的评估。 0003 西方NAFLD的患病率为2040， 亚洲。

6、为1230。 1020的NAFLD被诊 断为NASH， 全球NASH的患病率为35。 若能对NASH及其相关肝纤维化早发现、 诊断和治 疗， 延缓其向肝硬化和肝癌进展， 则具有重要临床意义。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种中药复方在制备治疗非酒精性脂肪性肝 炎的药物中的应用， 通过实验证明了根据中药复方制备而得的药物可以有效减少肝脏脂肪 堆积， 有效减缓非酒精性脂肪性肝炎引起的炎症病灶， 肝脏纤维化有所缓解， 进一步拓展了 中药复方的应用。 0005 本发明提供了一种中药复方在制备治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物中的应用， 所 述中药复方包括白术、 枳壳、 姜黄、 五味子、。

7、 丹参、 葛根、 泽泻和白芍。 0006 所述中药复方的制备方法具体步骤如下： 0007 取丹参、 葛根、 泽泻、 白芍分别加水10倍量、 8倍量， 煎煮， 煎液过滤， 滤液合并， 滤液 浓缩至相对密度1.08-1.12， 冷却后在搅拌下加乙醇使含醇量至70， 静置沉淀， 取上清液， 过滤， 滤液浓缩至相对密度为1.11.2， 得到浓缩物， 备用； 另取白术、 枳壳、 姜黄、 五味子分 别加70乙醇10倍量、 8倍量， 加热回流， 合并回流液， 过滤， 滤液浓缩至相对密度为1.1 1.2， 与备用的浓缩物合并， 干燥， 即得。 0008 所述中药复方配以辅料， 最后制粒和/或压片成制剂。 00。

8、09 有益效果 0010 本发明通过实验证明了根据中药复方制备而得的药物可以有效减少肝脏脂肪堆 说明书 1/8 页 3 CN 110787272 A 3 积， 有效减缓非酒精性脂肪性肝炎引起的炎症病灶， 肝脏纤维化有所缓解， 进一步拓展了中 药复方的应用。 附图说明 0011 图1为给药8周大鼠肝脏中TG(A)、 TC(B)的变化。 0012 图2A为给药8周后各组大鼠肝脏组织的HE染色显示的组织形态变化(200)。 0013 图2B为给药8周后各族大鼠肝脏组织的HE染色显示的组织形态变化(400)。 0014 图3A为给药8周后各组大鼠肝脏组织的油红染色显示的脂肪滴(200)。 0015 图。

9、3B为给药8周后各组大鼠肝脏组织的油红染色显示的脂肪滴(400)。 0016 图4为给药8周后各组大鼠肝脏组织的天狼猩红染色显示的纤维化(200)。 0017 图5为给药8周后大鼠肝脏切片的NAS打分(包括脂肪堆积， 炎症， 气球样变性)。 0018 图6为给药8周后大鼠肝脏的TNF- 用RT-PCR法检测(A)以及用ELISA法检测(B)。 0019 图7为给药8周后大鼠肝脏促纤维化基因mRNA水平的检测(A为胶原酶含量、 B为胶 原蛋白含量)。 具体实施方式 0020 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。 此外应理解， 。

10、在阅读了本发明讲授的内容之后， 本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改， 这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。 0021 实施例1 0022 1.动物造模 0023 选用Wistar大鼠， 雄性， 6-8周， 200-220g， 购自澳门大学动物中心。 实验分为正常 对照组， MCS对照组， MCD模型组， 阳性药对照组及受试药给药组若干。 所有实验大鼠均饲养 在动物房中提前适应环境至少7天。 MCS对照组、 MCD模型组、 阳性药对照组及受试药给药组 的大鼠先进行一周的过度饮食， 即在一周的时间内， MCS对照组由正常饲料逐渐过渡为MCS 饮食； MCD模型组、 阳。

11、性药对照组及受试药给药组由正常饲料逐渐过渡为MCD饮食。 饮食过渡 期结束后， 按照实验分组， 给予大鼠正常饲料， MCS饲料， 或MCD饲料， 并按计划给予阳性药或 受试药物。 总体饮食及给药方案见表1， 详细的给药方法、 给药剂量见各部分实验。 0024 表1总体饮食及给药方案 0025 说明书 2/8 页 4 CN 110787272 A 4 0026 0027 2.受试方剂配制方法如表2所示： 0028 表2 0029 0030 注： A、 B为其他中药样品。 0031 3.中药复方工艺流程： 0032 处方如表3所示： 0033 表3 0034 名称白术枳壳姜黄五味子丹参葛根泽泻白芍。

12、共计 处方(g)3222333220 0035 制法： 0036 取丹参、 葛根泽泻、 白芍分别加水10倍量、 8倍量， 煎煮2次， 第一次2小时， 第二次 1.5小时， 煎液过滤， 滤液合并， 浓缩至相对密度1.08-1.12(802)， 放冷， 在搅拌下加乙 醇使含醇量至70， 静置沉淀， 取上清液， 过滤， 滤液浓缩至相对密度为1.11.2(5055 )， 备用； 另取白术、 枳壳、 姜黄、 五味子分别加70乙醇10倍量、 8倍量， 加热回流2次， 第一 次1.5小时， 第二次1小时， 合并回流液， 过滤， 滤液浓缩至相对密度为1.11.2(5055 )， 与上述备用的浓缩物合并， 干燥。

13、， 中药复方干膏粉， 加入辅料适量， 混匀， 制粒， 压制成 片。 0037 受试方剂待测剂量及给药方式如表4所示： 0038 表4 说明书 3/8 页 5 CN 110787272 A 5 0039 0040 4.实验结果 0041 给药期间大鼠的体重变化及肝脏与体重比值(LBW ratio)的变化 0042 通过各组大鼠体重的变化可以看出(见表5)： 与正常对照组相比， MCS饮食不会导 致大鼠体重明显的变化， 而MCD饮食会导致大鼠体重逐渐下降； 与MCD组相比， 阳性药 Elafibranor及各给药组的干预都未影响大鼠MCD饮食导致的体重下降。 0043 通过各组大鼠肝脏与体重比值的。

14、变化可以看出(见表6)： 与正常对照组相比， MCS 饮食略微降低了大鼠的肝脏体重比值， 而MCD饮食会导致这一指标显著的上升； 与MCD组相 比， 阳性药Elafibranor没有降低肝脏体重比值， 中药复方低、 中、 高剂量组、 A方中剂量组以 及B方中剂量对大鼠的肝脏体重比值都无显著性影响。 0044 表5给药期间大鼠体重(g)的变化 0045 说明书 4/8 页 6 CN 110787272 A 6 0046 0047 0周表示过渡饮食期间， 18周为给药期间。 结果以meanSD表示； MCD组与MCS组 相比， 显著性差异表示为#p0.001,阳性药及各给药组组与MCD组相比， 显。

15、著性差异表示 为*p0.05,*p0.01。 0048 表6给药结束后大鼠肝脏重量的变化及肝脏/体重比值的变化 0049 Liver mass(grams)Liver mass to body mass ratio() Control10.320.35362.6000.05657 MCS7.3130.54092.0400.08756 MCD7.3930.64903.7800.2650# Elafibranor8.6571.1784.2560.3556 JPHX(0.60g/kg)7.3970.80104.0870.3631 JPHX(1.21g/kg)6.6261.7383.6610.4950。

16、 JPHX(2.42g/kg)6.8100.89423.5750.3935 B(0.60g/kg)7.7890.75474.0360.3420 A(0.40g/kg)7.2380.58033.7110.2969 0050 给药8周大鼠肝脏中的TG、 TC的变化 0051 通过图1A、 B可以看出： 第8周时， MCD饮食组大鼠肝脏中的TG、 TC显著升高， 中药复 说明书 5/8 页 7 CN 110787272 A 7 方低剂量和中剂量减少了肝脏脂肪堆积。 0052 给药期间大鼠血清中的TG、 TC、 ALT及AST的变化 0053 通过第2、 4、 6、 8周大鼠TG及TC的变化可以看出(。

17、表7、 表8)： MCD饮食在第26周可 以显著性的降低血清TG， 而各给药组对MCD饮食引起的血清TG降低无显著性影响； MCD饮食 在第4周和第8周时表现出对血清TC的显著性的降低， 中药复方高中低三个剂量组及B方中 剂量组对此降低有显著的回升作用， 其他给药组也有一定的回升作用。 0054 通过第2、 4、 6、 8周大鼠ALT及AST的变化可以看出(表9、 表10、 表11)： MCD饮食在4周 起就引起了ALT及AST的显著性升高。 与MCD组相比， 阳性药Elafibranor及中药复方高中低 三个剂量组， B方中剂量组， 在48周的观测期内都可显著性地降低ALT， 而A方中剂量组。

18、对 MCD引起的ALT升高没有显著的影响； 与MCD组相比， 阳性药Elafibranor， 中药复方低中高三 个剂量组， B方中剂量组以及A方中剂量组， 在48周的观测期内都可显著性地降低MCD导致 的AST升高。 0055 表7给药期间大鼠血清中TG(mmol/L)的变化 0056 Week2Week4Week6Week8 Control0.47150.037780.63100.15480.69840.13540.34240.05135 MCS1.0100.24220.94690.15260.95570.14350.51310.1805 MCD0.51200.05780#0.57810.0。

19、9350#0.50140.09747#0.37340.03963 Elafibranor0.46350.095590.57090.069650.42750.064240.37850.06613 JPHX(0.60g/kg)0.72490.2238*0.58130.077070.44310.15700.36290.1132 JPHX(1.21g/kg)0.43670.11440.69020.13190.35090.068510.35320.07040 JPHX(2.42g/kg)0.38420.041580.57850.15800.37410.11100.32990.09665 B(0.60g/。

20、kg)0.41810.15070.57160.064690.46750.094740.26760.04869 A(0.40g/kg)0.58300.24130.69950.16900.46910.11290.31550.05760 0057 表8给药期间大鼠血清中TC(mmol/L)的变化 0058 Week2Week4Week6Week8 Control1.9170.33822.2220.32072.9070.30522.6000.5025 MCS1.7080.32552.2510.42652.1650.34092.2030.2962 MCD2.2310.61631.1410.1778#1.。

21、6820.40651.2870.2194# Elafibranor2.1310.31741.6420.21492.2760.51082.3430.4808* JPHX(0.60g/kg)2.2470.47342.0910.6110*2.4080.3916*2.2220.7076* JPHX(1.21g/kg)2.4650.33931.8970.5129*2.3260.76572.1470.4404* JPHX(2.42g/kg)2.8380.12282.0470.3075*2.1040.24772.2150.4301* B(0.60g/kg)2.9850.4297*2.2340.5405*2.。

22、1770.27942.1750.3281* A(0.40g/kg)2.5400.74091.9250.4472*1.9330.51181.7340.4515 0059 表9给药期间大鼠血清中ALT(U/L)的变化 0060 0061 说明书 6/8 页 8 CN 110787272 A 8 0062 表10给药期间大鼠血清中AST(U/L)的变化 0063 Week2Week4Week6Week8 Control44.122.38227.4811.8937.595.27221.013.081 MCS41.8810.6619.105.73730.082.95035.7515.25 MCD19.3。

23、25.555#38.5316.61#35.485.50734.382.509 Elafibranor17.992.71717.083.281*24.973.914*15.195.119* JPHX(0.60g/kg)16.984.17423.124.510*22.144.902*19.236.640* JPHX(1.21g/kg)20.034.69017.194.346*24.912.782*17.224.277* JPHX(2.42g/kg)13.581.56318.184.177*23.888.994*14.363.184* B(0.60g/kg)17.625.27720.224.612*。

24、27.827.72217.664.582* A(0.40g/kg)18.274.28025.527.032*26.158.552*20.155.562* 0064 表11给药期间大鼠血清中AST/ALT比值的变化 0065 Week2Week4Week6Week8 Control8.9647.0093.4192.4394.8881.1242.1240.3558 MCS10.702.6111.8850.66144.1250.67013.2821.100 MCD1.0940.6219#0.69710.2927#1.2700.22951.4770.8793# Elafibranor2.7881.02。

25、01.7110.3229*3.1390.89781.9250.7393 JPHX(0.60g/kg)2.5601.8381.5190.5495*1.2890.38361.1260.4739 JPHX(1.21g/kg)1.6660.61930.88360.31031.2930.48251.4610.5425 JPHX(2.42g/kg)2.8920.83541.0980.55681.1250.58171.5400.5089 B(0.60g/kg)1.8710.82770.83800.38101.3040.44181.0780.3993 A(0.40g/kg)1.1290.90810.58850。

26、.25261.0070.32750.95820.2192 0066 结果以meanSD表示， MCD组与MCS组相比， 显著性差异表示为#p0.05， #p 0.01， #p0.001， 阳性药及各给药组与MCD组相比， 显著性差异表示为*p0.05， *p 0.01， *p0.001。 0067 大鼠肝脏HE染色结果 0068 由图2A和2B可知， 通过HE染色可以看出， MCD饮食组的大鼠肝脏组织中有明显的脂 肪滴、 气球化细胞死亡、 炎症病灶现象； 而阳性药Elafibranor可以显著的改善以上四项指 标； 中药复方高中两个剂量组中及A方中剂量组的大鼠中， 脂肪滴明显变小， 具有脂肪滴。

27、的 组织比例变小， 而A方中剂量组中， 脂肪滴的大小有显著的减小， 但肝组织中依然广泛分布 着脂肪滴； 中药复方高中低三个剂量组， B方中剂量组及A方中剂量组的大鼠中， 炎症病灶的 现象亦有减少。 0069 大鼠肝脏油红O染色结果 0070 由图3A和3B可知， MCD饮食组的大鼠肝脏组织中有明显的脂肪滴(红色)， 而阳性药 Elafibranor给药组中基本观察不到成形的脂肪滴； 中药复方中低两个剂量组中， 脂肪滴的 数量和大小有所减少， 中药复方高剂量组中， 脂肪滴的数量和大小都有显著的改善， 已经观 察不到聚集成大滴的脂肪滴； B方中剂量组的大鼠中， 脂肪滴有所变小， 具有脂肪滴的组织 。

28、比例明显变小。 0071 大鼠肝脏天狼猩红染色结果(200X) 0072 由图4可知， MCD饮食组的大鼠肝脏组织中有轻微的纤维化情况(红色)， 而阳性药 Elafibranor给药组和中药复方中低高三个剂量组， 以及另外两个方中药复方和A方显示无 说明书 7/8 页 9 CN 110787272 A 9 明显的纤维化情况。 该结果也和纤维化相关基因的RT-PCR结果相一致。 0073 NAS评价肝脏病理学 0074 由图5可知， 中药复方可以缓解由蛋氨酸胆碱造成的肝脏病变， 可以减少肝脏脂肪 堆积以及炎症情况。 经过给予蛋氨酸胆碱缺乏饲料后， 模型组显现出脂肪堆积严重， 有 Kuffer细胞。

29、浸润， 在经不同剂量的中药中药复方治疗后， 脂肪堆积减少， 炎症水平下降。 B方 也降低了由蛋氨酸胆碱造成的脂肪堆积， A对脂肪堆积缓解作用效果。 0075 TNF- 的检测 0076 由图6A和6B可知， 蛋氨酸胆碱缺乏导致肝脏炎症水平的上升， 在给药中药复方8周 后， 炎症水平有所下降。 结果也和HE染色结果一致。 0077 纤维化相关基因mRNA水平的检测 0078 由图7A和7B可知， 蛋氨酸胆碱缺乏导致肝脏纤维化水平的上升， 在给药中药复方8 周后， 纤维化有所下降， 结果和天狼猩红结果一致。 0079 根据以上实验结果可知， 根据中药复方制备而得的药物可以有效减少肝脏脂肪堆 积， 。

30、有效减缓非酒精性脂肪性肝炎引起的炎症病灶， 肝脏纤维化有所缓解， 进一步拓展了中 药复方的应用。 说明书 8/8 页 10 CN 110787272 A 10 图1 说明书附图 1/8 页 11 CN 110787272 A 11 图2A 说明书附图 2/8 页 12 CN 110787272 A 12 图2B 说明书附图 3/8 页 13 CN 110787272 A 13 图3A 说明书附图 4/8 页 14 CN 110787272 A 14 图3B 说明书附图 5/8 页 15 CN 110787272 A 15 图4 说明书附图 6/8 页 16 CN 110787272 A 16 图5 图6 说明书附图 7/8 页 17 CN 110787272 A 17 图7 说明书附图 8/8 页 18 CN 110787272 A 18 。