单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物及其在抗ADV7病毒中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911375170.7 (22)申请日 2019.12.27 (71)申请人 湖北工业大学 地址 430068 湖北省武汉市洪山区南李路 28号 (72)发明人 魏艳红王海杰李妮胡康洪 王龙胜朱茂春 (74)专利代理机构 武汉科皓知识产权代理事务 所(特殊普通合伙) 42222 代理人 艾小倩 (51)Int.Cl. C07F 13/00(2006.01) C07F 19/00(2006.01) A61K 31/28(2006.01) A61P 31/14(2006.01)。

2、 (54)发明名称 单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多 酸有机衍生物及其在抗ADV7病毒中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种单碘代苯甲酸通过共价 键修饰的安德森多酸有机衍生物及其在抗ADV7 病毒中的应用。 即是通过单碘代苯甲酸通过共价 键修饰的安德森多酸有机衍生物(A1A3)抑制 ADV7病毒活性的研究实验， 化合物A1、 A2、 A3抑制 ADV7病毒在宿主细胞Hela上产生的细胞病变效 应(CPE)， 增强细胞存活率， 降低子代病毒产量， 有潜力在制备抗ADV7病毒药物中应用。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 111072723 A 2020.04.28 CN 1110。

3、72723 A 1.一种单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物， 其特征在于： 所述衍 生物包括如下化合物： A1： (TBA)3MnMo6O18(OCH2)3CNHCOC6H4-o-I)2， A2： (TBA)3MnMo6O18-(OCH2)3CNHCOC6H4-m-I)2， 和 A3： (TBA)3MnMo6O18(OCH2)3CNHCO-C6H4-p-I)2； 所述A1A3的阳离子TBA为四丁基铵阳离子， 其阴离子结构分别如下： 2.一种如权利要求1所述的单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物在 抗ADV7病毒中的应用， 其特征在于： 所述化合物A1A3均具有抗ADV。

4、7病毒作用。 3.根据权利要求2所述的单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物在抗 ADV7病毒中的应用， 其特征在于： 当化合物A1、 A2和A3均在200 g/mL时， 对抗ADV7病毒的抑 制率分别为57.5、 56.1、 71.6。 4.根据权利要求3所述的单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物在抗 ADV7病毒中的应用， 其特征在于： 所述化合物A1A3中任一作为ADV7病毒抑制剂， 添加药剂 学可接受的辅料和载体后， 用于制备抗ADV7病毒的制剂。 5.根据权利要求4所述的单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物在抗 ADV7病毒中的应用， 其特征在于： 。

5、所述制剂为颗粒剂、 片剂、 丸剂、 胶囊剂、 注射剂或分散剂 中任一种。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111072723 A 2 单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物及其 在抗ADV7病毒中的应用 技术领域 本发明涉及抗病毒药物技术领域,具体是指一种单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德 森多酸有机衍生物及其在抗ADV7病毒中的应用。 背景技术 腺病毒(adenovirus,ADV)为一群分布广泛的DNA病毒。 体腺病毒已知有52 种， 分别命 名为ADVlADV52， 分两个属， 共约100余种血清型。 人腺病毒约1/3 的已知血清型与人类疾 病相关。 腺病毒可侵犯呼吸道、 眼结。

6、膜、 胃肠道及泌尿道等多种组织器官， 以呼吸道感染为 主， 重者可致小儿肺炎， 并可累积全身各系统。 腺病毒感染所致的腺病毒性肺炎为小儿肺炎 中最严重类型之一。 与呼吸道疾病相关的腺病毒型别主要有ADV7、 ADV3和ADV4， 其中ADV7可 引起严重的或致死性的婴幼儿下呼吸道感染， 并容易引起暴发流行。 目前临床上针对该病 毒导致的感染， 尚无有效的预防疫苗和治疗药物， 主要采取对症治疗。 0003 碘代苯甲酸是一类具有生物活性的有机化合物。 例如对碘苯甲酸是肉桂酸-4-羟 化酶(CINNAMATE 4-HYDROXYLASE)的有效抑制剂,肉桂酸-4-羟化酶是类苯基丙烷途径合成 木质素构。

7、筑单元的关键酶(Dorien Van de Wouwer,et. al.Plant Physiology,2016,172, 198-220)； 间碘苯甲酸的金属盐对酿酒酵母、 异常汉逊氏酵母、 大肠杆菌和枯草芽胞杆菌均 表现出较好的抑制活性(P.Koczon,et. al.J.Agric.Food Chem.2001,49,2982-2986)。 然 而碘代苯甲酸的抗病毒活性， 包括对于ADV7病毒的抑制活性到目前却未见报道。 多金属氧酸盐(polyoxometalates)是由钒、 钼、 钨、 铌、 钽等前过渡金属的含氧金属盐 在一定条件下缩合而成的具有特定结构和组成的多阴离子簇， 又称为。

8、多酸(POMs)。 由于多 酸种类繁多， 其组成丰富多变， 拥有奇特的物理， 化学， 生理和药理活性， 以及丰富多变的 光、 电、 磁等物理性质， 在纳米科学、 材料领域、 催化领域和药物化学领域具有广阔的应用前 景。 1971年， Raynaud等人报道了SiW12O404-对小鼠白血病肉瘤病毒(MLSV)的抑制活性 (M.Raynaud,et.al.C.R. Acad.Sci.Hebd.Seances Acad.Sci.D 1971,272,347)。 1985年， 法国科学家发现 (NH4)17NaNaSb9W21O86(HPA-23)对艾滋病毒逆转录酶具有抑制作用 (Dormont D。

9、., et.al.Ann.Inst.Pastour/Virol,1985,136E,75)。 1988年， 日本YAMASE教授 发现 (i-PrNH3)6Mo7O243H2O(PM-8)表现出良好的抗肿瘤活性(Toshihiro Yamase, Inorg.Chem.Acta.1988,151,15-18)。 发明内容 本发明的目的是针对上述现状， 旨在提供一种单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森 多酸有机衍生物及其在抗ADV7病毒中的应用。 本发明的研究发现芳酰肼配体共价键修饰的 六钼酸(Bu4N)3Mo6O18(NNCOAr)(Ar芳环)与其多酸母体和配体前体相比具有增强的 抗肿瘤活性(W。

10、ang L.S.,et.al.,Eur.J.Inorg.Chem. (2017)5475-5874)。 本发明方案中合成出了一系列单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生 说明书 1/5 页 3 CN 111072723 A 3 物， 并评估了他们对ADV7病毒的抑制活性。 为实现上述目的， 本发明提供的方案如下： 第一方面， 本发明提供了一种单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生 物， 其特征在于： 所述衍生物包括如下化合物： A1： (TBA)3MnMo6O18(OCH2)3CNHCOC6H4-o-I)2， A2： (TBA)3MnMo6O18-(OCH2)3CNHCOC6H。

11、4-m-I)2， 和 A3： (TBA)3MnMo6O18(OCH2)3CNHCO-C6H4-p-I)2； 所述A1A3的阳离子TBA为四丁基铵阳离子， 其阴离子结构分别如下： 第二方面， 本发明提供了一种上述的单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机 衍生物在抗ADV7病毒中的应用， 其特征在于： 所述化合物A1A3均具有抗ADV7病毒作用。 作为优选方案， 当化合物A1、 A2和A3均在200 g/mL时， 对抗ADV7病毒的抑制率分别为 57.5、 56.1、 71.6。 碘原子与羧基的相对位置对化合物抑制ADV7病毒的活性具有显著的影响， 在其他位置 引入如烷氧基， 烷基， 烷基硫基。

12、或其它卤原子亦应具有对ADV7病毒的抑制活性。 进一步地， 所述化合物A1A3中任一作为ADV7病毒抑制剂， 添加药剂学可接受的辅料 和载体后， 用于制备抗ADV7病毒的制剂。 更进一步地， 所述制剂为颗粒剂、 片剂、 丸剂、 胶囊剂、 注射剂或分散剂中任一种。 本发明的实现方式为， 单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物(A1 A3)通过标准的病毒活性测试方法来对其进行活性测试。 本发明通过大量的生物学实验， 发现单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物A1、 A2、 A3对ADV7病毒均有一定的抑制作用， 其中化合物A3具有最好的抑制效果。 由此表明这系 列化合物有潜力制备抗ADV。

13、7感染的特异治疗药物， 具有较好的应用前景。 相对现有技术。 本发明具有以下优点和有益效果： 1、 多酸为非核苷类药物， 不易产生耐药性。 2、 多碘代修饰安德森多酸有机衍生物的抗病毒活性未见报道， 对其抗ADV7 病毒活性 说明书 2/5 页 4 CN 111072723 A 4 的开发具有一定的导向作用。 3、 从结构相似的化合物中寻找抗ADV7药物， 易于通过构效关系研究寻找到其作用靶 点， 为进一步药物开发提供一定的借鉴意义。 附图说明 图1是单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物(A1A3)对于ADV7作用的Hela细胞 存活率的影响； 图2是单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物(。

14、A1A3)对于ADV7引起的Hela细胞 CPE的抑制效应； 图3是单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物(A1A3)对于ADV7子代病毒产量的 抑制作用。 具体实施方式 本发明所用的单碘代苯甲酸购自试剂公司， 而单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍 生物(A1A3)的制备， 参照文献Inorg.Chem.(2016， 55， 94979500)的方法， 具体以三羟甲 基氨基甲烷与相应单碘代苯甲酰氯反应， 制备相应的酰胺配体， 再将所制备酰胺配体与八 钼酸和三价醋酸锰回流反应， 所得滤液乙醚扩散即可得到相应碘代羧酸所修饰的安德森多 酸衍生物(A1A3)。 本发明的应用是指碘代羧酸修饰的安德森多酸。

15、有机衍生物(A1A3)添加药剂学可接 受的辅料和载体， 用于制备抗ADV7病毒的制剂。 制剂是颗粒剂、 片剂、 丸剂、 胶囊剂、 注射剂 或分散剂中任一种。 本发明对单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物(A1A3)对ADV7病毒的抑制活 性进行了研究， 发现单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物A1、 A2、 A3对ADV7病毒均 有一定的抑制作用， 其中化合物A3具有最好的抑制效果。 由此表明这系列化合物有潜力制 备抗ADV7感染的特异治疗药物， 具有较好的应用前景。 【实施例1】 单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物A1A3 抗ADV7活 性分析 本发明对上述化合物进行了抗A。

16、DV7活性研究实验， 实验情况如下： 1、 试验内容： 化合物对ADV7抑制活性分析： 本发明将结合细胞病变效应分析和MTT测定细胞存活率 检测方法， 对单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物(A1A3) 抗ADV7活性进行评估。 2、 试验方法： 2.1化合物对于宿主Hela细胞的毒性 将Hela细胞铺板96孔板， 在37， 5CO2培养箱培养长满单层后， 弃去细胞培养液， 分 别加含不同浓度测试化合物的细胞维持液继续培养， 48h后显微镜目测并分别记录其细胞 毒性， MTT法测定细胞存活率。 SPSS 11.5软件计算药物对于细胞的半数中毒浓度(Median cyctoxic concen。

17、tration， CC50)。 细胞存活率(药物组平均OD492值/细胞对照组平均OD492 值)100。 2.2化合物对于ADV7的抑制活性 说明书 3/5 页 5 CN 111072723 A 5 将Hela细胞铺板96孔板， 在37， 5CO2培养箱培养长满单层后， 弃去培养液， 100TCID50的ADV7病毒液感染细胞1.5h， 加入不同浓度的测试化合物(利巴韦林作为阳性对 照药物)孵育细胞。 待继续培养约48h， 病毒对照孔出现90左右的CPE病变时， 显微镜下观 察细胞病变效应(CPE)。 CPE的观察记录方法： 无细胞病变记做-， 25以下细胞病变记做+， 25-50细胞病变记。

18、做 +， 50-75细胞病变记做+， 75以上细胞病变记为+。 CPE观察完毕后， 利用MTT方法检测药物对ADV7的抑制率。 具体步骤为： 每孔加入MTT 50 L(5mgmL-1)， 孵育3-4h后去掉上清液， 加入等体积的 DMSO溶解沉淀。 用酶标仪在492nm处 读取所对应的吸光度(OD492值)。 利用如下公式计算药物对ADV7的抑制率。 用SPSS 11.5软件 计算药物的半数有效浓度(Concentration for 50of maximal effect， EC50)。 药物的治疗指数(TI) TICC50/EC50。 治疗指数越高， 说明抗病毒潜力越大。 3、 实验结果 。

19、表1单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物细胞毒性及抗ADV7活性 化合物细胞毒性及抗ADV7活性测试结果如表1所示。 浓度依赖的化合物对于ADV7作用 的Hela细胞存活率的影响如图1所示。 实验结果表明单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机 衍生物A1、 A2、 A3对ADV7病毒均有一定的抑制作用， 其中化合物A3具有最好的抑制效果。 在 浓度为200 g/mL时， A1、 A2、 A3 对ADV7的最大抑制率分别为57.5、 56.1和71.6。 化合 物抑制ADV7引起的Hela细胞CPE效应如图2所示。 ADV7感染的Hela细胞变圆， 从细胞板壁脱 离， 化合物A1、 A2、 A3处理。

20、可以明显抑制ADV7引起的Hela细胞病变效应。 【实施例2】 单碘代苯甲酸通过共价键修饰的安德森多酸有机衍生物A1 A3对ADV7子 代病毒产量的抑制作用试验 本发明对单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物(A1A3)进行了抗 ADV7活性的 深入研究， 实施了化合物A1、 A2、 A3对于ADV7子代病毒产量的抑制作用试验， 试验情况如下： 1、 试验内容 检测在ADV7感染Hela细胞后， 化合物A1、 A2、 A3对于ADV7子代病毒产量的抑制作用。 2、 试验方法 对数生长期的Hela细胞铺板24孔板， 长满单层后100TCID50ADV7感染细胞， 37孵育 1.5h后移去病毒液，。

21、 PBS洗涤三次， 加入含200 g/mL A1、 A2、 A3的细胞维持液。 48h后收集细 说明书 4/5 页 6 CN 111072723 A 6 胞和上清培养液， -20和37三次冻融裂解后， TCID50方法测定ADV7病毒滴度。 3、 试验结果 如图3所示， A1、 A2、 A3处理的Hela细胞相对于病毒对照组， 其病毒滴度都有明显下降， 相对于病毒对照分别下降5.9log、 5.7log、 6.4log。 综上所述， 对单碘代苯甲酸修饰的安德森多酸有机衍生物A1、 A2、 A3具有较强的抑制 ADV7活性， 能够抑制ADV7病毒引起的Hela细胞凋亡， 增强细胞存活率， 降低子代病毒产量， 有潜力进一步开发制备一种临床上有效对抗ADV7 病毒感染的药物。 说明书 5/5 页 7 CN 111072723 A 7 图1 图2 说明书附图 1/2 页 8 CN 111072723 A 8 图3 说明书附图 2/2 页 9 CN 111072723 A 9 。