阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用.pdf

《阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用.pdf（24页完成版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911058048.7 (22)申请日 2019.11.01 (71)申请人 江苏美克医学技术有限公司 地址 211500 江苏省南京市江北新区新锦 湖路3-1号中丹生态生命科学产业园 二期C栋3楼 (72)发明人 吴自学孟凡茹王学锋潘为民 黄宝福孙康俊周淑鑫吴加一 (74)专利代理机构 江苏银创律师事务所 32242 代理人 何红梅 (51)Int.Cl. G01N 21/64(2006.01) G01N 1/30(2006.01) (54)发明名称 一种阴道微生物检测双。

2、重荧光染色液及其 应用 (57)摘要 发明公开了一种阴道微生物检测双重荧光 染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光染色液 包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色 液B液； 所述的双重荧光染色液A液由荧光染色 剂、 辅助染色剂、 染色液缓冲试剂、 抑菌剂和水组 成， 双重荧光染色液B液由染色液缓冲试剂、 碱性 调节试剂、 抗淬灭剂、 抑菌剂和水组成。 本发明具 有操作流程简单， 快速检测及病原微生物染色后 容易观测识别的优点。 并且本发明克服了血性标 本、 精液标本和基底层细胞标本等污染标本对检 测结果的干扰， 有效提高了准确性和检出率。 权利要求书2页 说明书14页 附图7页 CN 110。

3、940646 A 2020.03.31 CN 110940646 A 1.一种阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的阴道微生物检测双重荧 光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液； 所述的双重荧光染色液A 液由荧光染色剂、 辅助染色剂、 染色液缓冲试剂、 抑菌剂和水组成， 双重荧光染色液B液由染 色液缓冲试剂、 碱性调节试剂、 抗淬灭剂、 抑菌剂和水组成。 2.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的双重荧 光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料， 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成， 所述的 主要组。

4、成成分为异硫氰酸荧光素FITC、 Sybr Green I、 Sybr Green 、 Light Green、 Ever Green、 碘化丙啶、 吡啰红G、 藻红素、 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物PerCP或溴化乙啶中 的一种或几种的组合； 辅助染色剂为果绿、 甲基绿或亮绿中的一种或几种的组合。 3.根据权利要求2所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的双重荧 光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂， 所述的Sybr Green I染 色剂中的染料的体积比的范围为0.05-5000 L/L； 所述的PerCP染色剂的质量浓度范围为 。

5、0.1-5000 g/L； 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂， 所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度范围为1- 100mg/L。 4.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的染色液 缓冲试剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系、 磷酸盐缓冲体系或Tris-HCl缓冲体系中的一种或几种 的组合； 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系， 乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为0.01- 100g/L和0.1-100g/L。 5.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的双重荧 光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系， 所述的染色液缓冲试剂为无水磷酸 二。

6、氢钠和十二水合磷酸氢二钠， 所述的无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠的质量浓度 分别为0.1-50g/L和0.1-200g/L。 6.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的双重荧 光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱， 所述的无机碱为氢氧化钾或氢氧化钠， 所述的无机 碱的质量浓度为1-500mg/L； 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环2,2,2-辛烷、 N-丙基没食子酸盐、 甘油、 对苯二胺 或抗坏血酸中的一种或几种的组合； 所述的抑菌剂为硫柳汞、 叠氮钠、 Proclin 300或庆大霉素中的一种或几种的组合。 7.根据权利要求6所述的阴道微生物检测双重荧光。

7、染色液， 其特征在于： 所述的抗淬灭 剂为甘油， 抗淬灭剂的质量浓度为0.5-50g/L； 所述的抑菌剂为Proclin 300， 抑菌剂的质量 浓度为0.01-10g/L。 8.权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 其特征在于： 所述的阴道微生物 检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液， 所述的双重荧 光染色液A液包括： 权利要求书 1/2 页 2 CN 110940646 A 2 双重荧光染色液B液包括： 9.权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液在阴道分泌物、 宫颈脱落细胞样 本中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于： 通过荧。

8、光染色剂对阴道分泌物样本、 宫颈 脱落细胞样本中的细胞和微生物进行特殊染色， 实现区分上皮细胞、 白细胞、 细菌、 真菌和 滴虫。 权利要求书 2/2 页 3 CN 110940646 A 3 一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用 技术领域 0001 本发明涉及微生物荧光染色技术领域， 尤其是涉及一种阴道微生物检测双重荧光 染色液及其应用。 背景技术 0002 女性下生殖道共生着许多微生物菌群， 对病原体的侵入有自然防御功能， 但是当 阴道的微生态失调、 自然防御功能遭到破坏， 病原体则易侵入， 导致阴道炎、 宫颈炎、 盆腔炎 等疾病的发生， 增加了艾滋病和宫颈癌的风险； 患有阴道炎的女性。

9、在怀孕时会影响精子的 质量， 甚至导致不孕； 即使怀孕孕期也很容易引起宫内感染、 产道感染等环节感染胎儿、 新 生儿， 造成流产、 早产、 先天发育畸形、 智力低下等严重后果。 0003 阴道微生物增殖感染引发的感染类型主要有细菌性阴道病、 外阴阴道假丝酵母菌 病、 滴虫性阴道炎、 需氧菌性阴道炎以及细胞溶解性阴道病等。 细菌性阴道病是一种由阴道 加德纳菌和一些厌氧菌的混合感染， 导致阴道内微生态平衡失调， 其中线索细胞阳性是细 菌性阴道病诊断的一个重要指标。 外阴阴道假丝酵母菌病是假丝酵母菌在一定条件下感染 女性下生殖道引起的一种阴道炎症， 其中80-90的外阴阴道假丝酵母菌病是由白假丝 酵。

10、母菌增殖感染引起， 所以观察阴道分泌物样本中真菌孢子、 芽生孢子以及假菌丝是重要 的镜检指标。 滴虫性阴道炎主要是由阴道毛滴虫感染引起， 是一种常见的性传播疾病。 阴道 毛滴虫呈梨形， 长为10-30 m， 适宜在25-40、 pH5.5-6.6的潮湿环境下生长。 镜检中阴道毛 滴虫阳性是滴虫性阴道炎感染的诊断标准， 临床样本送检过程中需要注意保温。 0004 国内医院常用的阴道分泌物检验方法为生理盐水湿片镜检， 直接检查清洁度及有 无滴虫和真菌菌丝。 该方法操作简单方便， 成本低但主观性强。 该方法对于样本中的细胞以 及微生物均没有染色效果， 根据各成分的形态来辨别， 但是由于整个涂片背景较。

11、复杂， 有时 候较难观察识别一些微小的微生物， 如真菌类感染。 而且对于滴虫感染， 如果样本在送检过 程中样本保存不当， 如温度过低会导致滴虫死亡或活性较低， 则在镜下不容易被观察到， 容 易造成漏诊。 0005 革兰氏染色也是目前部分医院采用的镜检染色方法之一， 该方法可以清晰观察到 样本中的微生物情况， 如微生物的革兰氏阳性或阴性， 但是该方法操作复杂， 一般需进行4 步染色方法， 且染色过程中对于染色的技术要求较高， 如脱色过程若过度脱色， 则会造成结 果的不准确， 所以对医技人员要求较高。 而且由于滴虫的形态和尺寸与白细胞、 细胞核非常 相近， 因此极易造成对于滴虫检测的干扰。 000。

12、6 目前市面上出现一种对于阴道分泌物样本中的真菌、 厌氧菌和毛滴虫的荧光染色 产品， 但该方法制片和染色复杂， 需要在玻片上进行两次涂片以及两次染色， 而且观察过程 中还需要切换不同的显微镜光源， 操作中比较繁琐。 0007 传统的微生物染色技术， 直接湿片镜检镜下干扰物质较多， 对于少量假丝酵母菌 的孢子及滴虫很难观察； 革兰氏检测对于滴虫检测灵敏度较差， 极易造成漏检。 免疫荧光技 术也逐渐应用到阴道微生物检测中， 但是该检测方法检测目标单一， 对于未知样本需要同 说明书 1/14 页 4 CN 110940646 A 4 时进行多次检查， 而且该检测方法操作步骤繁琐， 耗时较长。 干化学。

13、酶法同样对于病原菌较 少感染的样本灵敏度较差， 不利于早期发现， 而且对于样本中常见的血性标本、 精液标本和 基底层细胞标本等污染标本检测准确性较低， 容易误诊。 PCR检测方法灵敏度高， 但是操作 流程复杂、 费时， 且需要昂贵的仪器和试剂。 发明内容 0008 本发明的目的是针对上述问题， 提供一种快速检测阴道微生物的双重荧光染色液 及其应用。 0009 为达到上述目的， 本发明采用了下列技术方案： 本发明的一种阴道微生物检测双 重荧光染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和 双重荧光染色液B液； 所述的双重荧光染色液A液由荧光染色剂、 辅助染色剂、 染色。

14、液缓冲试 剂、 抑菌剂和水组成， 双重荧光染色液B液由染色液缓冲试剂、 碱性调节试剂、 抗淬灭剂、 抑 菌剂和水组成。 0010 进一步地， 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料， 0011 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成， 所 述的主要组成成分为异硫氰酸荧光素FITC、 Sybr Green I、 Sybr Green、 Light Green、 Ever Green、 碘化丙啶PI、 吡啰红G、 藻红素、 多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物PerCP或溴 化乙啶中的一种或几种的组合； 辅助染色剂为果绿、 甲基绿或亮绿中的一种或几种的组合。 0。

15、012 进一步地， 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和 PerCP染色剂， 所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比的范围为0.05-5000 L/L； 所 述的PerCP染色剂质量浓度范围为0.1-5000 g/L； 0013 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂， 所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度范围 为1-100mg/L。 0014 更进一步地， 所述的染色液缓冲试剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系、 磷酸盐缓冲体系或 Tris-HCl缓冲体系中的一种或几种的组合； 0015 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系， 乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为 0.。

16、01-100g/L和0.1-100g/L。 0016 进一步地， 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系， 所 述的染色液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠， 所述的无水磷酸二氢钠和 十二水合磷酸氢二钠的质量浓度分别为0.1-50g/L和0.1-200g/L。 0017 进一步地， 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱， 所述的无机碱为 氢氧化钾或氢氧化钠， 所述的无机碱的质量浓度为1-500mg/L； 0018 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环2,2,2-辛烷、 N-丙基没食子酸盐、 甘油、 对苯 二胺或抗坏血酸中的一种或几种的组合； 0019 所述。

17、的抑菌剂为硫柳汞、 叠氮钠、 Proclin 300或庆大霉素中的一种或几种的组 合。 0020 更进一步地， 所述的抗淬灭剂为甘油， 抗淬灭剂的质量浓度为0.5-50g/L； 所述的 抑菌剂为Proclin 300， 抑菌剂的质量浓度为0.01-10g/L。 0021 进一步地， 所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A 说明书 2/14 页 5 CN 110940646 A 5 液和双重荧光染色液B液， 所述的双重荧光染色液A液包括： 0022 0023 双重荧光染色液B液包括： 0024 0025 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液在阴道分泌物、 宫颈脱落细胞样。

18、本 中的应用。 0026 进一步地， 通过荧光染色剂对阴道分泌物样本中的细胞和微生物进行特殊染色， 实现区分上皮细胞、 白细胞、 细菌、 真菌和滴虫。 0027 有益效果： 本发明具有操作流程简单， 快速检测及病原微生物染色后容易观测识 别的优点。 并且本发明克服了血性标本、 精液标本和基底层细胞标本等污染标本对检测结 果的干扰， 有效提高了准确性和检出率。 0028 本发明与现有技术相比， 具有如下优点： 0029 (1)本发明配制的阴道微生物检测双重荧光染色液是一款新型的快速阴道炎症感 染检测产品， 可用于检测新鲜或冰冻临床样本中真菌、 细菌、 滴虫以及线索细胞。 染液中的 荧光物质与样本。

19、中的目标物质结合， 可以在荧光显微镜下观察到上皮细胞、 白细胞、 线索细 胞、 真菌、 细菌以及滴虫的具体形态。 0030 (2)本发明配制的阴道微生物检测双重荧光染色液对样本要求低， 对于死亡或活 性较低的滴虫性阴道炎样本依然可以进行染色， 可以清晰看到滴虫形态结构。 0031 (3)本发明配制的阴道微生物检测双重荧光染色液对血性标本、 精液标本和基底 层细胞标本等污染标本染色无影响， 成熟红细胞在荧光显微镜下不显色且精子和底层细胞 染色后结构清晰， 可以准确识别。 说明书 3/14 页 6 CN 110940646 A 6 附图说明 0032 图1为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样。

20、本染色结果图； 0033 图2为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图； 0034 图3为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图； 0035 图4为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图； 0036 图5为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图； 0037 图6为本发明的实施例4滴虫感染样本染色观察结果图； 0038 图7为本发明的实施例4细菌性阴道病样本染色结果图； 0039 图8为本发明的外阴阴道假丝酵母菌感染样本传统湿片法观察结果图； 0040 图9为本发明的滴虫感染样本传统湿片法观察结果图； 0041 图10为本发明的细菌性阴道病。

21、传统湿片法观察结果图； 0042 图11为本发明的外阴阴道假丝酵母菌感染样本革兰氏染色结果； 0043 图12为本发明的滴虫感染样本革兰氏染色结果； 0044 图13为本发明的细菌性阴道病样本革兰氏染色结果。 具体实施方式 0045 以下对本发明原理和特征进行实例描述， 所举实例只用于解释本发明， 并非用于 限定本发明的范围。 0046 本发明实施例的试剂原料来源如表1所示。 0047 表1 0048 说明书 4/14 页 7 CN 110940646 A 7 0049 0050 实施例1 0051 双重荧光染色液1 0052 1.配方组成如表2所示。 0053 表2 0054 说明书 5/1。

22、4 页 8 CN 110940646 A 8 0055 0056 2.配制方法如下： 0057 染色液A液配制： 0058 精密分析天平称取配方量的乙酸钠， 加入配方中所述质量纯化水溶解。 溶解后加 入配方量的乙酸溶液， 混合均匀。 依次加入配方量的甲基绿、 Sybr Green I、 PerCP、 Proclin 300。 所以试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分装至干净容器中避光保存。 0059 染色液B液配制： 0060 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠， 加入配方中所述质量纯化水溶 解。 溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠， 混合均匀。 依次加入配方量的氢氧化钠。

23、、 甘油、 Proclin 300。 所有试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分装至干净容器中 保存。 0061 实施例2 0062 双重荧光染色液2 0063 1.配方组成如表3所示。 0064 表3 0065 说明书 6/14 页 9 CN 110940646 A 9 0066 0067 2.配制方法如下： 0068 染色液A液配制： 精密分析天平称取配方量的乙酸钠， 加入配方中所述质量纯化水 溶解。 溶解后加入配方量的乙酸溶液， 混合均匀。 依次加入配方量的甲基绿、 Sybr Green I、 PerCP、 Proclin 300。 所以试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌。

24、至完全溶解， 分装至干净 容器中避光保存。 0069 染色液B液配制： 0070 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠， 加入配方中所述质量纯化水溶 解。 溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠， 混合均匀。 依次加入配方量的氢氧化钠、 甘油、 Proclin 300。 所有试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分装至干净容器中 保存。 0071 实施例3 0072 双重荧光染色液3 0073 1.配方组成如表4所示。 0074 表4 0075 说明书 7/14 页 10 CN 110940646 A 10 0076 0077 2.配制方法如下： 0078 染色液A液配制： 007。

25、9 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠， 加入配方中所述质量纯化水溶 解。 溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠， 混合均匀。 依次加入配方量的异硫氰酸荧光素、 碘化丙啶、 果绿、 Proclin 300。 所有试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分 装至干净容器中避光保存。 0080 染色液B液配制： 0081 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠， 加入配方中所述质量纯化水溶 解。 溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠， 混合均匀。 依次加入配方量的氢氧化钠、 甘油、 Proclin 300。 所以试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分装至干净容器中 保存。

26、。 0082 实施例4 0083 双重荧光染色液4 0084 1.配方组成如表5所示。 0085 表5 0086 说明书 8/14 页 11 CN 110940646 A 11 0087 0088 2.配制方法如下： 0089 染色液A液配制： 0090 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠， 加入配方中所述质量纯化水溶 解。 溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠， 混合均匀。 依次加入配方量的异硫氰酸荧光素、 碘化丙啶、 果绿、 Proclin 300。 所有试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分 装至干净容器中避光保存。 0091 染色液B液配制： 0092 精密分析天平称。

27、取配方量的十二水合磷酸氢二钠， 加入配方中所述质量纯化水溶 解。 溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠， 混合均匀。 依次加入配方量的氢氧化钠、 甘油、 Proclin 300。 所以试剂加入完毕后， 将混合溶液持续搅拌至完全溶解， 分装至干净容器中 保存。 0093 实施例5 0094 本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光 染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液。 所述的双重荧光染色液A液 由荧光染色剂、 辅助染色剂、 染色液缓冲试剂、 抑菌剂和水组成， 双重荧光染色液B液由染色 液缓冲试剂、 碱性调节试剂、 抗淬灭剂、 抑菌剂和水组成。 00。

28、95 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料， 0096 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成， 所 述的主要组成成分为Sybr Green I、 异硫氰酸荧光素FITC、 碘化丙啶PI、 吡啰红G、 藻红素、 溴化乙啶中的六种的组合； 其他辅助染色剂为果绿。 说明书 9/14 页 12 CN 110940646 A 12 0097 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂， 所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比为0.05 L/L； 所述的PerCP染色剂质量浓度 为5000 g/L。 00。

29、98 所述的染色液缓冲试剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系； 0099 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系， 乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为 0.01g/L和80g/L。 0100 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系， 所述的染色 液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠， 所述的无水磷酸二氢钠和十二水合 磷酸氢二钠的质量浓度分别为50g/L和0.1g/L； 0101 所述的其他辅助染色剂为甲基绿染色剂， 所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度 为100mg/L。 0102 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱， 所述的无机碱为氢氧化钾， 所述的无机碱的质量浓度为。

30、1mg/L； 0103 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环2,2,2-辛烷、 N-丙基没食子酸盐、 甘油、 对苯 二胺和抗坏血酸中的五种的组合； 0104 所述的抑菌剂为硫柳汞、 叠氮钠和Proclin 300中的三种的组合。 0105 所述的抗淬灭剂为甘油， 抗淬灭剂的质量浓度为0.5g/L； 所述的抑菌剂为Proclin 300， 抑菌剂的质量浓度为10g/L。 0106 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液在阴道分泌物、 宫颈脱落细胞样本 中的应用。 0107 通过荧光染色剂对阴道分泌物样本中的细胞和微生物进行特殊染色， 实现区分上 皮细胞、 白细胞、 细菌、 真菌和滴虫。 0108。

31、 实施例6 0109 实施例6与实施例5的区别在于： 0110 本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光 染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液。 0111 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料， 0112 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成， 所 述的主要组成成分为异硫氰酸荧光素FITC、 Sybr Green、 Light Green、 Ever Green、 多甲 藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物PerCP和溴化乙啶中的六种的组合； 辅助染色剂为甲基绿和 亮绿中的两种的组合。 0113 所述的双重荧。

32、光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂， 所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比为5000 L/L； 所述的PerCP染色剂质量浓度 为0.1 g/L。 0114 所述的染色液缓冲试剂为Tris-HCl缓冲体系； 0115 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系， 乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为 90g/L和100g/L。 0116 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系， 所述的染色 液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠， 所述的无水磷酸二氢钠和十二水合 说明书 10/14 页 13 CN 110940646 A。

33、 13 磷酸氢二钠的质量浓度分别为0.1g/L和100g/L； 0117 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂， 所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度为 1mg/L。 0118 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱， 所述的无机碱为氢氧化钠， 所述的无机碱的质量浓度为100mg/L； 0119 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环2,2,2-辛烷、 N-丙基没食子酸盐、 甘油、 对苯 二胺或抗坏血酸中的一种或几种的组合； 0120 所述的抑菌剂为叠氮钠和庆大霉素中的两种的组合。 0121 所述的抗淬灭剂为甘油， 抗淬灭剂的质量浓度为50g/L； 所述的抑菌剂为Proclin 300， 抑菌剂的。

34、质量浓度为0.01g/L。 0122 实施例7 0123 实施例7与实施例5的区别在于： 0124 本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光 染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液。 0125 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料， 0126 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成， 所 述的主要组成成分为Sybr Green I、 吡啰红G或溴化乙啶中的三种的组合； 辅助染色剂为甲 基绿。 0127 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂， 所述的Sybr。

35、 Green I染色剂中的染料的体积比为3000 L/L； 所述的PerCP染色剂质量浓度 为0.1 g/L。 0128 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系， 乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为 100g/L和0.1g/L。 0129 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系， 所述的染色 液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠， 所述的无水磷酸二氢钠和十二水合 磷酸氢二钠的质量浓度分别为30g/L和200g/L； 0130 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂， 所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度为 80mg/L。 0131 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱。

36、， 所述的无机碱为氢氧化钾， 所述的无机碱的质量浓度为500mg/L； 0132 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环2,2,2-辛烷、 N-丙基没食子酸盐中的两种的 组合； 0133 所述的抑菌剂为庆大霉素。 0134 所述的抗淬灭剂为甘油， 抗淬灭剂的质量浓度为30g/L； 所述的抑菌剂为Proclin 300， 抑菌剂的质量浓度为8g/L。 0135 实施例8 0136 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光 染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液， 所述的双重荧光染色液A液 包括： 说明书 11/14 页 14 CN 110940646 。

37、A 14 0137 0138 0139 双重荧光染色液B液包括： 0140 0141 实施例9 0142 实施例9与实施例8的区别在于： 0143 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液， 所述的阴道微生物检测双重荧光 染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液， 所述的双重荧光染色液A液 包括： 0144 0145 双重荧光染色液B液包括： 说明书 12/14 页 15 CN 110940646 A 15 0146 0147 0148 试验例1 0149 临床分泌物样本的染色 0150 选择确诊的外阴阴道假丝酵母菌病、 滴虫性阴道炎、 细菌性阴道病样本， 向取样拭 子所在试管中。

38、加入适量的生理盐水， 振荡后将拭子涂抹在载玻片上。 将载玻片置于温度为 60-70加热台上， 样本干燥后取下干片备用。 将上述双重荧光染色液中配制的A液分别滴 加到不同类型样本玻片上， 覆盖样本后静置15-30s， 纯化水冲洗玻片除去A液。 待玻片上水 分稍干燥后分别滴加1滴双重荧光染色液的B液， 盖上盖玻片， 使用吸水纸吸去多余染色液。 选择波长为450nm-500nm的蓝光作为激发光， 置于生物(荧光)显微镜物镜下， 进行直接镜 检。 上述不同样本经实施例1-4中染色液染色后效果描述如下表6所示。 0151 表6 0152 0153 实施例1-4中染色液对于部分临床样本的染色效果分别如下图。

39、1、 图2、 图3、 图4所 示。 0154 试验例2 0155 120例临床标本检测阳性率对比 0156 对120例患者的标本分别采用本发明实施例1中的配方和背景技术中所述湿片法 以及革兰氏染色方法进行检测， 结果如下表7所示： 说明书 13/14 页 16 CN 110940646 A 16 0157 表7 0158 0159 利用本发明的阴道微生物检测荧光染色液对临床阴道分泌物样本进行染色， 本产 品染色结果(图5、 图6、 图7)真菌、 滴虫以及线索细胞辨识度高， 形态清晰； 湿片法镜下结果 (图8、 图9、 图10)杂质较多， 且真菌孢子不好辨认， 查找效率低且干扰物质较多； 革兰氏。

40、染色 结果(图11、 图12、 图13)， 真菌孢子和线索细胞比湿片效果好一点， 但是仍然没有荧光染色 呈现效果好， 荧光染色可以清晰的看到内部核， 而且革兰氏染色中滴虫形态辨认困难。 从而 验证了本发明的阴道微生物检测荧光染色液的优越性和有效性， 本发明染色液显著提高了 阳性检出率。 0160 本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。 本发明所属技术领 域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替 代， 但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。 说明书 14/14 页 17 CN 110940646 A 17 图1 图2 说明书附图 1/7 页 18 CN 110940646 A 18 图3 图4 说明书附图 2/7 页 19 CN 110940646 A 19 图5 图6 说明书附图 3/7 页 20 CN 110940646 A 20 图7 图8 说明书附图 4/7 页 21 CN 110940646 A 21 图9 图10 说明书附图 5/7 页 22 CN 110940646 A 22 图11 图12 说明书附图 6/7 页 23 CN 110940646 A 23 图13 说明书附图 7/7 页 24 CN 110940646 A 24 。