染料木素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911154217.7 (22)申请日 2019.11.22 (71)申请人 中山大学新华学院 地址 510520 广东省广州市天河区龙洞街 华美路19号 (72)发明人 徐娟娟王有娣张素中董楠 贺彦成燕琴黎卓熹关冠恒 古红婷刘佳佳张宝源刘铭美 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 代理人 孙凤侠 (51)Int.Cl. A61K 33/34(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/352(2006.01) A6。

2、1K 31/555(2006.01) (54)发明名称 染料木素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中 的应用 (57)摘要 本发明属于医药技术领域， 具体涉及染料木 素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中的应用。 所 述染料木素-铜配合物经试验证明， 对人非小细 胞肺癌细胞A549的生长具有显著的抑制效果， 且 与染料木素或5-氟尿嘧啶相比都具有显著的提 高， 同时对人脐静脉内皮细HUVEC的生长抑制作 用较小， 具有显著的选择性抑制作用， 安全性更 高， 可应用于制备治疗肺癌的药物。 权利要求书1页 说明书6页 附图8页 CN 111000865 A 2020.04.14 CN 111000865 A 。

3、1.一种染料木素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中的应用， 其特征在于， 所述染料木 素-铜配合物的结构如下： 2.根据权利要求1所述应用， 其特征在于， 所述治疗癌症是指抑制肺癌细胞的生长。 3.根据权利要求2所述应用， 其特征在于， 所述肺癌细胞为人非小细胞肺癌细胞A549。 4.根据权利要求13任一所述应用， 其特征在于， 所述药物为口服制剂或注射剂。 5.根据权利要求4所述应用， 其特征在于， 所述口服制剂包括片剂、 胶囊剂、 散剂、 丸剂、 颗粒剂和混悬剂。 6.根据权利要求4所述应用， 其特征在于， 所述注射剂包括粉针剂和水针剂。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111000865 。

4、A 2 染料木素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中的应用 技术领域 0001 本发明属于医药技术领域， 具体涉及染料木素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中 的应用。 背景技术 0002 染料木素(又名染料木黄酮、 金雀异黄素)是一种植物雌激素， 主要存在于豆科植 物中， 是豆科植物鸡血藤中的主要异黄酮类成分， 具有抑菌、 抗氧化、 抗衰老、 抗炎、 抗肿瘤 等功能， 可以治疗骨质疏松症、 妇女更年期综合症、 心血管疾病等多种疾病， 具有很好的应 用前景。 0003 针对染料木素的抗肿瘤功能， 现有研究表明， 染料木素可以通过下调TopoII 和 Sp1mRNA的表达， 上调Sp3mRNA的表达促进细胞。

5、凋亡， 并使细胞停滞于G2/M期， 达到抑制肿瘤 细胞生长的作用。 但是在实践中发现， 单独使用染料木素治疗癌症时， 常需要与其他活性成 分组合使用， 才能达到显著抑制癌症细胞生长的作用。 如中国专利申请CN1535689A公开了 一种用于治疗肿瘤的药物组合物， 该药物组合物包括染料木素、 大豆甙元、 鸡豆黄素等活性 成分和辅料， 对乳腺癌、 胃癌、 肝癌等传代细胞系具有明显的抑制作用， 并且能够一直肿瘤 细胞的转移， 效果显著， 但该药物组合物需要配以大豆甙元、 鸡豆黄素等活性成分协同作用 才能达到相应的抗肿瘤效果， 可见， 染料木素的抗肿瘤活性还无法满足制备治疗癌症药物 的需求。 发明内容。

6、 0004 本发明要解决的技术问题是克服现有技术染料木素抗肿瘤活性不高的缺陷和不 足， 提供一种具有显著抑制人非小细胞肺癌细胞A549生长的染料木素-铜配合物在制备治 疗肺癌药物中的应用。 0005 本发明上述目的通过以下技术方案实现： 0006 一种染料木素-铜配合物在制备治疗肺癌药物中的应用， 所述染料木素-铜配合物 的结构如下： 0007 0008 染料木素结构为： 说明书 1/6 页 3 CN 111000865 A 3 0009 0010 其具有很好的超离域和大 键共轨体系， 氧原子也具有较强配位能力， 再加上其分 子的空间结构， 非常有利于配合物的形成。 将染料木素与金属元素配合，。

7、 能够有效改善染料 木素的理化性质， 促进人体吸收利用， 还可以通过协同作用， 增强其生理生化功能。 申请人 在实践中惊喜的发现， 本发明将染料木素与铜元素配合， 制备得到的染料木素-铜配合物对 人非小细胞肺癌细胞A549的生长具有显著的抑制效果， 同时对人脐静脉内皮细HUVEC的生 长抑制作用较小， 具有显著的选择性抑制作用， 安全性高， 可应用于制备治疗肺癌的药物。 0011 进一步地， 所述治疗癌症是指抑制肺癌细胞的生长。 0012 更进一步地， 所述肺癌细胞为人非小细胞肺癌细胞A549。 0013 进一步地， 所述药物为口服制剂或注射剂。 0014 更进一步地， 所述口服制剂包括片剂、。

8、 胶囊剂、 散剂、 丸剂、 颗粒剂和混悬剂。 0015 进一步地， 所述注射剂包括粉针剂和水针剂。 0016 本发明具有以下有益效果： 0017 本发明中的染料木素-铜配合物经试验证明， 对人非小细胞肺癌细胞A549的生长 具有显著的抑制效果， 且与染料木素或5-氟尿嘧啶相比都具有显著的提高， 同时对人脐静 脉内皮细HUVEC的生长抑制作用较小， 具有显著的选择性抑制作用， 安全性更高， 可应用于 制备治疗肺癌的药物。 附图说明 0018 图1为本发明染料木素-铜配合物的分子结构图。 0019 图2为本发明染料木素、 染料木素-铜配合物、 染料木素-锌配合物的紫外吸收光谱 图。 0020 图3。

9、为本发明染料木素的红外光谱图。 0021 图4为本发明染料木素-铜配合物的红外光谱图。 0022 图5为本发明染料木素-锌配合物的红外光谱图。 0023 图6为本发明染料木素的热重分析图。 0024 图7为本发明染料木素-铜配合物的热重分析图。 0025 图8为本发明染料木素-锌配合物的热重分析图。 具体实施方式 0026 以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明， 但实施例并不对本发明 做任何形式的限定。 除非特别说明， 本发明采用的试剂、 方法和设备为本技术领域常规试 剂、 方法和设备。 0027 除非特别说明， 以下实施例所用试剂和材料均为市购。 0028 1、 染料木素-铜配合。

10、物的制备 0029 称取5.40g染料木素(0.02mol)， 加入170mL无水乙醇， 加热至染料木素完全溶解， 用氨水调节pH8， pH值稳定后加入4.12g CuCl22H2O(0.024mol)， 60恒温水浴加热回流 说明书 2/6 页 4 CN 111000865 A 4 7h； 反应结束后， 将反应液冷却至室温， 3000转/分钟离心2分钟， 沉淀用50乙醇溶液洗涤 三次后， 50真空干燥， 得4.878g草绿色粉末， 收率为81。 0030 2、 染料木素-锌配合物的制备 0031 称取5.40g染料木素(0.02mol)， 加入170mL无水乙醇， 加热至染料木素完全溶解， 。

11、用氨水调节pH8， pH值稳定后加入4.39g醋酸锌(0.024mol)， 60恒温水浴加热回流7h； 反 应结束后， 将反应液冷却至室温， 3000转/分钟离心2分钟， 沉淀用50乙醇溶液洗涤三次 后， 50真空干燥， 得4.017g淡黄色粉末， 收率为66.5。 0032 3、 配合物的表征 0033 (1)将制备得到的染料木素-铜配合物、 染料木素-锌配合物和染料木素分别进行 紫外光谱检测， 得到图2。 0034 由图2可见， 在DMSO溶剂中， 染料木素在266nm和326nm存在两个特征紫外吸收峰； 染料木素-铜配合物的两个吸收峰均向长波方向移动至270nm和388nm； 染料木素-。

12、锌配合物 的吸收峰也向长波方向移动至266nm、 352nm和444nm。 可见， 吸收带I和带II均发生了红移， 表明染料木素分子中4位羰基和5位羟基确实参与了配位反应。 0035 (2)将制备得到的染料木素-铜配合物、 染料木素-锌配合物和染料木素分别进行 红外光谱检测， 得到图35和表1。 0036 表1染料木素及其金属配合物的红外光谱数据 0037 化合物-OH(cm-1)-CO(cm-1)-C-O-C(cm-1)-M-O(cm-1) 染料木素3412,310416651263- 染料木素-铜配合物3448,333816251261457 染料木素-锌配合物33841641126445。

13、6 0038 由表1和图35可知： 0039 染料木素的羟基吸收峰在3412cm-1和3104cm-1， 羟基出现两个峰的原因可能由 于游离态和缔合态羰基引起的； 铜配合物的羟基吸收峰在3448cm-1和3338cm-1左右， 均往波 数大的方向发生了移动， 尤其是缔合态的羟基峰发生了较大的移动， 这很可能是羟基与金 属发生络合破坏了之前的分子内氢键引起的； 锌配合物的羟基吸收峰在3384cm-1出一个峰， 原因可能是5-OH参与配位后分子内氢键完全消失引起的； 0040 染料木素的4位羰基峰在1655cm-1左右， 而铜、 锌配合物的4位羰基峰在1625cm-1 和1641cm-1左右， 均。

14、向低波数移动， 可能是由于4位羰基也参与了配位； 0041 与染料木素相比， 铜配合物在457cm-1左右新增加了一个吸收峰， 该峰可能是金 属Cu与O形成的Cu-O键伸缩振动引起的， 锌配合物在456cm-1左右新增加了一个吸收峰， 该峰 可能是金属Zn与O形成的Zn-O键伸缩振动引起的； 0042 染料木素的C-O-C的位置和配合物比较无显著差异， 说明1位氧没有参与配位反 应。 0043 (3)将制备得到的染料木素-铜配合物、 染料木素-锌配合物和染料木素分别进行 热重分析， 得到图68。 0044 由图可见， 染料木素在100处没有峰， 而铜、 锌配合物有峰， 说明染料木素分子中 没有。

15、结晶水， 配合物均含有结晶水； 染料木素在接近440后基本稳定， 总失重为75.01， 而配合物在200-600之间失重速率快， 之后失重速率逐渐减慢， 但仍有失重， 当温度升至 说明书 3/6 页 5 CN 111000865 A 5 800时， 铜和锌配合物总失重分别为55.50、 33.39。 0045 由表征实验结果分析可知染料木素-铜配合物和染料木素-锌配合物的分子结构 为： 0046 0047 实施例1染料木素-铜配合物对人非小细胞肺癌细胞A549生长的影响 0048 将人非小细胞肺癌细胞A549采用DMEM+10胎牛血清+1青霉素、 链霉素双抗于 5CO2、 37的饱和湿度培养箱。

16、中培养， 23天传代一次， 细胞复苏后培养两代细胞， 取对 数生长期的细胞， 用含10FBS的培养基制成浓度为5104/mL的细胞悬液， 接种到96孔培 养板中， 每孔加入100 L， 在5CO2、 37的饱和湿度培养箱中继续培养24h； 0049 将染料木素、 染料木素-铜配合物、 染料木素-锌配合物、 5-氟尿嘧啶(阳性对照)分 别用DMSO配制成的最终浓度为16、 32、 64、 128 M， 每孔加入200 L， 以等体积的DMSO做空白对 照， 各组均平行设置3个副孔， 继续培养48h； 0050 在药物作用48h后， 每孔加入20 L MTT， 放入培养箱培养4h， 小心弃去培养基。

17、， 每孔 加入150uL DMSO， 置摇床上低速、 避光振摇10min使结晶溶解完全； 把处理好的板放到酶标 仪里面， 于490nm波长处测定吸光度值(OD)， 平行重复3次。 待测化合物原始数据ODDrug与 DMSO对照组ODDMSO进行预处理， 即扣除背景值ODBackground， 然后进行归一化， 细胞存活率(cell viability)计算公式如下： 0051 Cell viability(ODDrug-ODBlank)/(ODControl-ODBlank)100 0052 采用Graph Pad Prism version 7.0.计算待测化合物的单个浓度的细胞抑制率， 然。

18、后进行非线性回归曲线拟合， 得出IC50值， 试验结果参见表2。 0053 表2染料木素-铜配合物对人非小细胞肺癌细胞A549生长的影响 0054 说明书 4/6 页 6 CN 111000865 A 6 0055 由表2可见， 染料木素和5-氟尿嘧啶对A549细胞均有一定的生长抑制作用， 且作用 相近； 而染料木素形成金属配合物后， 对A549细胞的生长抑制作用显著提高， 并且抑制效果 显著优于阳性对照药5-氟尿嘧啶， 其中， 染料木素-铜配合物的效果最好。 0056 实施例2染料木素-铜配合物对人脐静脉内皮细胞HUVEC生长的影响 0057 将人脐静脉内皮细胞HUVEC采用DMEM+10胎。

19、牛血清+1青霉素、 链霉素双抗于 5CO2、 37的饱和湿度培养箱中培养， 23天传代一次， 细胞复苏后培养两代细胞， 取对 数生长期的细胞， 用含10FBS的培养基制成浓度为5104/mL的细胞悬液， 接种到96孔培 养板中， 每孔加入100 L， 在5CO2、 37的饱和湿度培养箱中继续培养24h； 0058 将染料木素、 染料木素-铜配合物、 染料木素-锌配合物、 5-氟尿嘧啶(阳性对照)分 别用DMSO配制成的最终浓度为16、 32、 64、 128 M， 每孔加入200 L， 以等体积的DMSO做空白对 照， 各组均平行设置3个副孔， 继续培养48h； 0059 在药物作用48h后，。

20、 每孔加入20 L MTT， 放入培养箱培养4h， 小心弃去培养基， 每孔 加入150uL DMSO， 置摇床上低速、 避光振摇10min使结晶溶解完全； 把处理好的板放到酶标 仪里面， 于490nm波长处测定吸光度值(OD)， 平行重复3次。 待测化合物原始数据ODDrug与 DMSO对照组ODDMSO进行预处理， 即扣除背景值ODBackground， 然后进行归一化， 细胞存活率(cell viability)计算公式如下： 0060 Cell viability(ODDrug-ODBlank)/(ODControl-ODBlank)100 0061 采用Graph Pad Prism 。

21、version 7.0.计算待测化合物的单个浓度的细胞抑制率， 然后进行非线性回归曲线拟合， 得出IC50值， 试验结果参见表3。 0062 表3染料木素-铜配合物对人脐静脉内皮细胞HUVEC生长的影响 0063 0064 由表3可知， 染料木素金属配合物最高试验浓度128 mol/L对HUVEC细胞的生长有 一定影响， 但抑制作用不大， 其中染料木素-铜配合物对HUVEC细胞的生长抑制作用较小， 与 阳性对照5-氟尿嘧啶的抑制作用相当。 0065 结合对A549细胞生长抑制的影响对比， 说明相对于人正常脐静脉内皮细胞HUVEC， 染料木素-铜配合物对人非小细胞肺癌细胞A549的生长抑制效果与。

22、染料木素或5-氟尿嘧啶 相比都具有显著的提高， 且具有选择性抑制作用， 安全性更高。 说明书 5/6 页 7 CN 111000865 A 7 0066 上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说明书 6/6 页 8 CN 111000865 A 8 图1 说明书附图 1/8 页 9 CN 111000865 A 9 图2 说明书附图 2/8 页 10 CN 111000865 A 10 图3 说明书附图 3/8 页 11 CN 111000865 A 11 图4 说明书附图 4/8 页 12 CN 111000865 A 12 图5 说明书附图 5/8 页 13 CN 111000865 A 13 图6 说明书附图 6/8 页 14 CN 111000865 A 14 图7 说明书附图 7/8 页 15 CN 111000865 A 15 图8 说明书附图 8/8 页 16 CN 111000865 A 16 。