罗汉果提取物产品及其制备方法与用途.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911369747.3 (22)申请日 2019.12.26 (71)申请人 杨凌萃健生物工程技术有限公司 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区新 桥南路5号 (72)发明人 周凯王红妮蔡冬青季亚飞 (74)专利代理机构 余姚德盛专利代理事务所 (普通合伙) 33239 代理人 吴晓微 (51)Int.Cl. C07J 17/00(2006.01) A61P 19/06(2006.01) (54)发明名称 一种罗汉果提取物产品及其制备方法与用 途 (57)摘要 本发明。

2、公开了一种罗汉果提取物产品及其 制备方法与用途， 所述制备方法包括如下步骤： (1)取原料罗汉果粉碎， 加水进行加热回流提取， 过滤， 减压浓缩， 离心， 收集上清液； (2)调pH至 8.59.5， 经大孔树脂吸附， 先用水除杂， 再用 1020乙醇除杂， 4060乙醇解析， 收 集解析液； (3)减压浓缩， 补水至无醇， 经MCI柱层 析吸附， 再经3035乙醇洗脱、 6065 乙醇洗脱、 9095乙醇洗脱， 依次收集不同 流份； (4)层析法检测， 获得不同的目标流份； (5) 分别进行减压浓缩， 干燥， 得产品。 本发明制得的 赛门苷I、 罗汉果甜苷V和11-O-罗汉果皂苷V提取 物的。

3、活性成分含量高， 其中赛门苷I提取物和罗 汉果甜苷V提取物具有治疗高尿酸血症的新用 途， 该工艺简单， 易于操作， 易于工业化生产。 权利要求书1页 说明书9页 CN 111018933 A 2020.04.17 CN 111018933 A 1.一种罗汉果提取物产品的制备方法， 其特征在于， 包括如下步骤： (1)提取浓缩： 取原料罗汉果药材粉碎， 加水进行加热回流提取， 过滤， 减压浓缩， 离心， 收集上清液； (2)大孔树脂纯化： 取上清液加水稀释， 将上清液调pH至8.59.5， 经大孔树脂吸附， 先 用水除杂， 再用1020乙醇除杂， 4060乙醇解析， 收集解析液； (3)MCI柱。

4、层析纯化： 将解析液减压浓缩， 补水至无醇， 得料液， 经MCI柱层析吸附， 再经1 1.5个MCI柱体积的3035乙醇洗脱、 11.5个MCI柱体积的6065乙醇洗脱、 1 1.5个MCI柱体积的9095乙醇洗脱， 每1/71/5个MCI柱体积为一个流份， 依次收集 不同流份； (4)获得目标流份： 经层析法检测， 获得不同的目标流份； (5)干燥： 将不同的目标流份分别进行减压浓缩， 干燥， 得不同种类的罗汉果提取物。 2.如权利要求书1所述的一种罗汉果提取物产品的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 (1)中， 所述加热回流提取时的温度为95100； 按质量比， 所述加热回流提取时， 每次。

5、所 述水的加入量为所述原料罗汉果药材质量的610倍； 按质量体积比， 所述减压浓缩至料液 体积为所述原料罗汉果药材质量的1倍。 3.如权利要求书1所述的一种罗汉果提取物产品的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 (2)中， 所述大孔树脂包括D101、 AB-8、 LX-12、 HPD100、 NKA-9中的任意一种。 4.如权利要求书1所述的一种罗汉果提取物产品的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 (2)中， 按质量体积比， 所述大孔树脂柱体积为所述原料罗汉果药材质量的0.752倍； 所述 用水除杂时的水的加入量为24个大孔树脂柱体积； 所述1020乙醇的加入量为24 个大孔树脂柱体积； 所述4。

6、060乙醇的加入量为35个大孔树脂柱体积。 5.如权利要求书1所述的一种罗汉果提取物产品的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 (3)中， 按质量体积比， 所述料液为所述原料罗汉果药材量的1/251/20倍； 按质量体积比， 所述MCI柱体积为所述原料罗汉果药材量的0.20.5倍。 6.一种赛门苷I提取物， 其特征在于， 采用如权利要求15任意一项所述的一种罗汉果 提取物产品的制备方法制备得到； 所述步骤(4)中， 经层析法检测， 获得赛门苷I提取物目标 流份； 所述步骤(5)中， 将赛门苷I提取物目标流份进行减压浓缩， 干燥， 得赛门苷I提取物。 7.一种罗汉果甜苷V提取物， 其特征在于， 采。

7、用如权利要求15任意一项所述的一种罗 汉果皂苷提取物的制备方法制备得到； 所述步骤(4)中， 经层析法检测， 获得罗汉果甜苷V提 取物目标流份； 所述步骤(5)中， 将罗汉果甜苷V提取物目标流份进行减压浓缩， 干燥， 得罗 汉果甜苷V提取物。 8.一种11-O-罗汉果皂苷V提取物， 其特征在于， 采用如权利要求15任意一项所述的 一种罗汉果提取物产品的制备方法制备得到； 所述步骤(4)中， 经层析法检测， 获得11-O-罗 汉果皂苷V提取物目标流份； 所述步骤(5)中， 将11-O-罗汉果皂苷V提取物目标流份进行减 压浓缩， 干燥， 得11-O-罗汉果皂苷V提取物。 9.如权利要求6所述的一种。

8、赛门苷I提取物在治疗高尿酸血症上的用途。 10.如权利要求7所述的一种罗汉果甜苷V提取物在治疗高尿酸血症上的用途。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111018933 A 2 一种罗汉果提取物产品及其制备方法与用途 技术领域 0001 本发明涉及植物提取技术领域， 具体涉及一种罗汉果提取物产品及其制备方法与 用途。 背景技术 0002 罗汉果Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffrey， 为葫芦科植物的干燥果实， 以广西桂林的罗汉果品质最好。 罗汉果味甜、 性凉、 无毒， 具有清肺止咳、 润肠通便、 清热解 毒、 祛痰补血、 益肝、 健脾、 促进肠胃功能等功效。

9、。 罗汉果中含有葫芦烷素三萜苷类物质， 包 括赛门苷I、 罗汉果甜苷IIE、 罗汉果甜苷III、 罗汉果甜苷IIIE、 罗汉果甜苷IV、 罗汉果甜苷 V、 罗汉果甜苷A、 罗汉果新苷和11-O-罗汉果皂苷V等， 除罗汉果甜苷IV和罗汉果新苷外， 均 有甜味物质， 其中罗汉果甜苷V的甜度高， 相当于蔗糖的300倍， 另有文献报道赛门苷I甜度 较罗汉果甜苷V高， 二者热量低， 都是糖尿病人的理想糖代品。 0003 人类嘌呤化合物的代谢终产物是尿酸， 嘌呤代谢紊乱导致高尿酸血症。 在正常嘌 呤饮食状态下， 男性空腹血尿酸水平高于420 mol/L， 女性高于360 mol/L， 即称为高尿酸血 症(。

10、hyperuricemia)。 根据报道， 我国目前约有1.2亿高尿酸血症者， 约占总人口的10， 高 发年龄为中老年男性和绝经后女性， 但近年来有年轻化趋势。 高尿酸血症发病时由于血液 中的尿酸盐将发生结晶， 结晶的尿酸盐将沉积在关节、 皮下组织、 肾脏等部位， 进而出现痛 风、 关节炎、 皮下痛风结石、 肾脏结石或痛风性肾病等一系列临床表现。 目前， 对血液中尿酸 的控制主要是通过以下两种途径实现的： (1)抑制尿酸的生成。 尿酸是由次黄嘌呤和黄嘌呤 必须经黄嘌呤氧化酶的作用而生成的， 因此抑制黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase， XO)活 性可有效的抑制尿酸的形成， 进而起到。

11、治疗痛风等症状的作用， 现常用的抑制尿酸生成的 药物有别嘌呤醇、 非布索坦等。 (2)促进尿酸的排泄。 常用的促进尿酸排泄的药物有丙磺舒、 苯溴马龙等。 上述两种方式均可降低血液中尿酸， 进而对高尿酸血症引发的痛风、 关节炎、 皮下痛风结石、 肾脏结石或痛风性肾病等病症产生疗效， 但是上述药物毒副作用通常较大， 会产生超敏综合症、 骨髓抑制等严重的毒副作用； 丙磺舒、 苯溴马隆则具有刺激胃肠道、 引 发肾绞痛、 激发痛风急性发作等副作用， 在一定程度上限制了这些药物的临床应用。 因此， 寻找新型的高效低毒的高尿酸血症药物依然是目前药学研究的一个热点。 0004 现有的专利申请号CN104262。

12、446A从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法， 将罗汉果 加入乙醇回流提取， 减压浓缩， 经大孔树脂柱层析， 酸液洗脱， 合并酸洗液调pH至中性， 经大 孔树脂和硅胶作填充物的层析柱， 用不同浓度乙醇洗脱， 收集50的乙醇洗脱液， 干燥得到 含量为95左右的罗汉果甜甙V， 该专利使用硅胶柱层析柱， 不易大生产操作。 0005 现有专利技术CN106977574A从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法， 该专利将罗汉果 粉碎， 高压处理， 得到浆液超声波提取， 得到粗提液离心分离取沉淀， 沉淀用无水甲醇洗涤， 洗涤后的沉淀用超滤膜处理， 浓缩得到浓缩液， 结晶， 重结晶， 干燥得到含量为9899 的罗汉果甙。

13、V， 该专利纯化得到的仅有罗汉果甙V。 0006 现有专利技术CN108516996A罗汉果益生元的提取方法及同时提取罗汉果甜苷V的 说明书 1/9 页 3 CN 111018933 A 3 方法， 将罗汉果碾碎， 冰水提取， 过滤， 调pH至碱性， 过滤， 经大孔树脂， 收集流出液， 纳滤膜 过滤， 经脱色树脂， 得到罗汉果益生元含量97.3。 提取罗汉果甜苷V是将上柱后的大孔吸 附树脂， 水洗至中性， 洗脱浓缩， 上反向硅胶柱， 洗脱， 收集目标洗脱液， 浓缩干燥， 得到罗汉 果甜苷V含量99.5。 该专利使用的纳滤膜， 其生产成本高。 0007 专利申请号CN109651480A一种分离。

14、罗汉果甜苷V的方法， 将罗汉果加水打浆之后 依次进行植物酶酶解， 生物酶酶解， 收集酶解液， 灭酶之后进行酵母发酵， 发酵液过有机膜， 再经复合阴阳离子交换树脂纯化、 浓缩干燥制得罗汉果甜苷V， 所得罗汉果甜苷V大于60， 总苷大于90。 该专利方法酶解发酵时间长， 纯化得到的罗汉果甜苷V含量低。 发明内容 0008 本发明所要解决的技术问题是克服背景技术的技术缺陷， 提供一种罗汉果提取物 产品及其制备方法与用途。 本发明以罗汉果(Siraitia grosvenorii)为原料， 经提取纯化 后分别得到赛门苷I提取物、 罗汉果甜苷V提取物和11-O-罗汉果皂苷V提取物， 其中赛门苷I 提取物。

15、中的活性成分赛门苷I、 罗汉果甜苷V提取物中的活性成分罗汉果甜苷V及11-O-罗汉 果皂苷V提取物中的活性成分11-O-罗汉果皂苷V含量均大于95。 本发明制备得到的赛门 苷I提取物、 罗汉果甜苷V提取物和11-O-罗汉果皂苷V提取物的活性成分含量高， 其中赛门 苷I提取物和罗汉果甜苷V提取物具有治疗高尿酸血症的新用途， 该工艺简单， 易于操作， 易 于工业化生产。 0009 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下： 0010 一种罗汉果提取物产品的制备方法， 包括如下步骤： 0011 (1)提取浓缩： 取原料罗汉果药材粉碎， 加水进行加热回流提取， 过滤， 减压浓缩， 离心， 收集上清液。

16、； 0012 (2)大孔树脂纯化： 取上清液加水稀释， 将上清液调pH至8.59.5， 经大孔树脂吸 附， 先用水除杂， 再用1020乙醇除杂， 4060乙醇解析， 收集解析液； 0013 (3)MCI柱层析纯化： 将解析液减压浓缩， 补水至无醇， 得料液， 经MCI柱层析吸附， 再经11.5个MCI柱体积的3035乙醇洗脱、 11.5个MCI柱体积的6065乙醇洗 脱、 11.5个MCI柱体积的9095乙醇洗脱， 每1/71/5个MCI柱体积为一个流份， 依次 收集不同流份； 0014 (4)获得目标流份： 经层析法检测， 获得不同的目标流份； 0015 (5)干燥： 将不同的目标流份分别进。

17、行减压浓缩， 干燥， 得不同种类的罗汉果提取 物。 0016 优选地， 所述步骤(4)中， 所述获得不同的目标流份包括赛门苷I提取物目标流份、 罗汉果甜苷V提取物目标流份、 11-O-罗汉果皂苷V提取物目标流份中的任意一种或几种。 0017 优选地， 所述步骤(5)中， 所述不同种类的罗汉果提取物包括赛门苷I提取物、 罗汉 果甜苷V提取物、 11-O-罗汉果皂苷V提取物中的任意一种或几种。 0018 一种赛门苷I提取物的制备方法， 包括如下步骤： 0019 (1)提取浓缩： 取原料罗汉果药材粉碎， 加水进行加热回流提取， 过滤， 减压浓缩， 离心， 收集上清液； 0020 (2)大孔树脂纯化：。

18、 取上清液加水稀释， 将上清液调pH至8.59.5， 经大孔树脂吸 说明书 2/9 页 4 CN 111018933 A 4 附， 先用水除杂， 再用1020乙醇除杂， 4060乙醇解析， 收集解析液； 0021 (3)MCI柱层析纯化： 将解析液减压浓缩， 补水至无醇， 得料液， 经MCI柱层析吸附， 再经11.5个MCI柱体积的3035乙醇洗脱、 11.5个MCI柱体积的6065乙醇洗 脱、 11.5个MCI柱体积的9095乙醇洗脱， 每1/71/5个MCI柱体积为一个流份， 依次 收集不同流份； 0022 (4)获得目标流份： 经层析法检测， 获得赛门苷I目标流份； 0023 (5)干燥。

19、： 将赛门苷I目标流份进行减压浓缩， 干燥， 得赛门苷I提取物。 0024 一种罗汉果甜苷V提取物的制备方法， 包括如下步骤： 0025 (1)提取浓缩： 取原料罗汉果药材粉碎， 加水进行加热回流提取， 过滤， 减压浓缩， 离心， 收集上清液； 0026 (2)大孔树脂纯化： 取上清液加水稀释， 将上清液调pH至8.59.5， 经大孔树脂吸 附， 先用水除杂， 再用1020乙醇除杂， 4060乙醇解析， 收集解析液； 0027 (3)MCI柱层析纯化： 将解析液减压浓缩， 补水至无醇， 得料液， 经MCI柱层析吸附， 再经11.5个MCI柱体积的3035乙醇洗脱、 11.5个MCI柱体积的60。

20、65乙醇洗 脱、 11.5个MCI柱体积的9095乙醇洗脱， 每1/71/5个MCI柱体积为一个流份， 依次 收集不同流份； 0028 (4)获得目标流份： 经层析法检测， 获得罗汉果甜苷V目标流份； 0029 (5)干燥： 将罗汉果甜苷V目标流份进行减压浓缩， 干燥， 得罗汉果甜苷V提取物。 0030 一种11-O-罗汉果皂苷V提取物的制备方法， 包括如下步骤： 0031 (1)提取浓缩： 取原料罗汉果药材粉碎， 加水进行加热回流提取， 过滤， 减压浓缩， 离心， 收集上清液； 0032 (2)大孔树脂纯化： 取上清液加水稀释， 将上清液调pH至8.59.5， 经大孔树脂吸 附， 先用水除杂。

21、， 再用1020乙醇除杂， 4060乙醇解析， 收集解析液； 0033 (3)MCI柱层析纯化： 将解析液减压浓缩， 补水至无醇， 得料液， 经MCI柱层析吸附， 再经11.5个MCI柱体积的3035乙醇洗脱、 11.5个MCI柱体积的6065乙醇洗 脱、 11.5个MCI柱体积的9095乙醇洗脱， 每1/71/5个MCI柱体积为一个流份， 依次 收集不同流份； 0034 (4)获得目标流份： 经层析法检测， 获得11-O-罗汉果皂苷V目标流份； 0035 (5)干燥： 将11-O-罗汉果皂苷V目标流份进行减压浓缩， 干燥， 得11-O-罗汉果皂苷 V提取物。 0036 优选地， 所述步骤(1。

22、)中， 所述水为纯化水。 0037 优选地， 所述步骤(1)中， 按质量比， 所述加热回流提取时， 每次所述水的加入量为 所述原料罗汉果药材质量的610倍。 0038 优选地， 所述步骤(1)中， 所述加热回流提取时的温度为95100。 0039 更优选地， 所述步骤(1)中， 所述加热回流提取时的温度为100。 0040 优选地， 所述步骤(1)中， 所述加热回流提取的次数为23次。 0041 优选地， 所述步骤(1)中， 每次所述加热回流提取的时间为1.52.5小时。 0042 更优选地， 所述步骤(1)中， 所述加热回流提取的次数为2次， 每次所述加热回流提 取的时间为2小时和1.5小时。

23、。 说明书 3/9 页 5 CN 111018933 A 5 0043 优选地， 所述步骤(1)中， 所述过滤采用滤布进行。 0044 更优选地， 所述步骤(1)中， 所述滤布的目数为200300目。 0045 最优选地， 所述步骤(1)中， 所述滤布的目数为300目。 0046 优选地， 所述步骤(1)中， 所述过滤后合并滤液。 0047 优选地， 所述步骤(1)中， 所述减压浓缩的条件为6570， -0.09Mpa。 0048 优选地， 所述步骤(1)中， 按质量体积比， 所述减压浓缩至料液体积为所述原料罗 汉果药材质量的1倍； 质量体积比为1是指原料1kg， 减压浓缩至料液为1L。 00。

24、49 优选地， 所述步骤(1)中， 所述离心时的转速为6000r/min。 0050 优选地， 所述步骤(1)中， 所述离心趁热进行。 0051 优选地， 所述步骤(2)中， 所述加水稀释时的水为纯化水。 0052 优选地， 所述步骤(2)中， 所述调pH时加入浓度为5的氢氧化钠进行。 0053 优选地， 所述步骤(2)中， 所述大孔树脂包括D101、 AB-8、 LX-12、 HPD100、 NKA-9中的 任意一种。 0054 更优选地， 所述步骤(2)中， 所述大孔树脂为D101、 AB-8、 LX-12中的任意一种。 0055 优选地， 所述步骤(2)中， 按质量体积比， 所述大孔树脂。

25、柱体积为所述原料罗汉果 药材质量的0.752倍； 质量体积比为1是指原料1kg， 大孔树脂柱体积为1L。 0056 更优选地， 所述步骤(2)中， 按质量体积比， 所述大孔树脂柱体积为所述原料罗汉 果药材质量的1倍或1.4倍或1.5倍。 0057 优选地， 所述步骤(2)中， 所大孔树脂吸附时的流速为每滴2秒。 0058 优选地， 所述步骤(2)中， 所述用水除杂时的水为纯化水。 0059 优选地， 所述步骤(2)中， 所述用水除杂时的水的加入量为24个大孔树脂柱体 积。 0060 更优选地， 所述步骤(2)中， 所述用水除杂时的水的加入量为2个大孔树脂柱体积。 0061 优选地， 所述步骤(。

26、2)中， 所述1020乙醇的加入量为24个大孔树脂柱体 积。 0062 更优选地， 所述步骤(2)中， 所述1020乙醇的加入量为2个或3个大孔树脂柱 体积。 0063 优选地， 所述步骤(2)中， 所述4060乙醇的加入量为35个大孔树脂柱体 积。 0064 优选地， 所述步骤(2)中， 所述4060乙醇的加入量为3个大孔树脂柱体积。 0065 优选地， 所述步骤(3)中， 所述减压浓缩的条件为6870， -0.09Mpa。 0066 优选地， 所述步骤(3)中， 按质量体积比， 所述料液为所述原料罗汉果药材量的1/ 251/20倍； 质量体积比为1/25是指原料1kg， 料液为40ml。 。

27、0067 更优选地， 所述步骤(3)中， 按质量体积比， 所述料液为所述原料罗汉果药材量的 1/25倍。 0068 优选地， 所述步骤(3)中， 按质量体积比， 所述MCI柱体积为所述原料罗汉果药材量 的0.20.5倍质量体积比为0.2是指原料1kg， MCI柱体积为0.2L。 0069 更优选地， 所述步骤(3)中， 按质量体积比， 所述MCI柱体积为所述原料罗汉果药材 量的0.2倍或0.25倍。 说明书 4/9 页 6 CN 111018933 A 6 0070 优选地， 所述步骤(3)中， 所述MCI柱层析吸附时的流速为3秒每滴。 0071 优选地， 所述步骤(3)中， 再经1个MCI柱。

28、体积的3035乙醇洗脱、 1个MCI柱体 积的6065乙醇洗脱、 1个MCI柱体积的9095乙醇洗脱， 每1/5个MCI柱体积为一 个流份， 依次收集不同流份。 0072 优选地， 所述步骤(3)中， 所述3035乙醇为30乙醇。 0073 优选地， 所述步骤(3)中， 所述6065乙醇为60乙醇。 0074 优选地， 所述步骤(3)中， 所述9095乙醇为95乙醇。 0075 优选地， 所述步骤(4)中， 所述层析法为薄层层析或高效液相色谱。 0076 优选地， 所述步骤(5)中， 所述减压浓缩的条件为68， -0.09Mpa。 0077 优选地， 所述步骤(5)中， 所述干燥为真空干燥。 。

29、0078 一种赛门苷I提取物， 采用如上所述制备方法制备得到。 0079 优选地， 所述赛门苷I提取物中的赛门苷I的含量大于95。 0080 一种罗汉果甜苷V提取物， 采用如上所述制备方法制备得到。 0081 优选地， 所述罗汉果甜苷V提取物中的罗汉果甜苷V的含量大于95。 0082 一种11-O-罗汉果皂苷V提取物， 采用如上所述制备方法制备得到。 0083 优选地， 所述11-O-罗汉果皂苷V提取物中的11-O-罗汉果皂苷V的含量大于95。 0084 如上所述的一种赛门苷I提取物在治疗高尿酸血症上的用途。 0085 如上所述的一种罗汉果甜苷V提取物在治疗高尿酸血症上的用途。 0086 上述。

30、技术方案中， 所述为质量百分含量。 0087 本发明的基本原理： 0088 本发明通过大量的试验， 发现只有采用本发明如上所述的特定技术方案才可能实 现本发明特定的技术效果， 其他技术方案均无法实现本发明特定的技术效果。 0089 与现有技术相比， 本发明的有益效果是： 0090 本发明以罗汉果(Siraitia grosvenorii)为原料， 经提取纯化得到不同种类的罗 汉果提取物， 其中赛门苷I提取物中的活性成分赛门苷I、 罗汉果甜苷V提取物中的活性成分 罗汉果甜苷V及11-O-罗汉果皂苷V提取物中的活性成分11-O-罗汉果皂苷V含量均大于 95。 本发明制备得到的赛门苷I提取物和罗汉果。

31、甜苷V提取物的活性成分含量高， 其具有 治疗高尿酸血症的新用途， 该工艺简单， 易于操作， 易于工业化生产。 具体实施方式 0091 为了更好地理解本发明的内容， 下面结合具体实施例作进一步说明。 应理解， 这些 实施例仅用于对本发明进一步说明， 而不用于限制本发明的范围。 此外应理解， 在阅读了本 发明所述的内容后， 该领域的技术人员对本发明作出一些非本质的改动或调整， 仍属于本 发明的保护范围。 0092 实施例1 0093 取2kg罗汉果粉碎， 加入纯化水回流提取2次， 每次加入的纯化水的量是罗汉果质 量的8倍， 100加热回流提取， 时间为2和1.5小时， 300目滤布过滤， 合并滤液。

32、， 温度70， - 0.09Mpa减压浓缩， 浓缩至2L， 6000r/min离心过滤， 取上清液加入2L纯化水稀释， 5氢氧化 钠调pH至9.0， 经2L大孔树脂D101(沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 流速每滴2秒， 4L 说明书 5/9 页 7 CN 111018933 A 7 纯化水除杂， 10乙醇4L除杂， 40乙醇6L解析， 收集解析液， 温度70， -0.09Mpa减压浓 缩， 补水至无醇， 料液共80ml， 经柱体积为0.5L MCI柱层析(日本三菱化学株式会社)， 流速3 秒每滴， 30乙醇0.5L洗脱， 60乙醇0.5L洗脱， 95乙醇0.5L洗脱， 每100ml为一。

33、个流份， 依次收集不同流份， 经TLC薄层检测， 第45流份为一份， 第911流份为一份， 第13流份为 一份， 温度68， -0.09Mpa减压浓缩， 真空干燥得到8.42g赛门苷I提取物， 赛门苷I含量 95.12， 赛门苷I提取物得率0.42； 20.80g罗汉果甜苷V提取物， 罗汉果甜苷V含量 96.01， 罗汉果甜苷V提取物得率1.04； 5.21g11-O-罗汉果皂苷V提取物， 11-O-罗汉果皂 苷V含量95.03， 11-O-罗汉果皂苷V提取物得率0.26。 0094 实施例2 0095 取5kg罗汉果粉碎， 加入纯化水回流提取2次， 每次加入的纯化水的量是罗汉果质 量的6倍，。

34、 100加热回流提取， 时间为2和1.5小时， 300目滤布过滤， 合并滤液， 温度67， - 0.09Mpa减压浓缩， 浓缩至5L， 6000r/min离心过滤， 取上清液加入5L纯化水稀释， 5氢氧化 钠调pH至9.0， 经7L大孔树脂AB-8(沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 流速每滴2秒， 14L纯化水除杂， 20乙醇14L除杂， 60乙醇21L解析， 收集解析液， 温度68， -0.09Mpa减 压浓缩， 补水至无醇， 料液共200ml， 经柱体积为1L MCI柱层析， 流速3秒每滴， 30乙醇1L洗 脱， 60乙醇1L洗脱， 95乙醇1L洗脱， 每200ml为一个流份， 依次收。

35、集不同流份， 经TLC薄层 检测， 第45流份为一份， 第810流份为一份， 第12流份为一份， 温度68， -0.09Mpa减压 浓缩， 真空干燥得到19.50g赛门苷I提取物， 赛门苷I含量95.86， 赛门苷I提取物得率 0.39； 47.00g罗汉果甜苷V提取物， 罗汉果甜苷V含量95.41， 罗汉果甜苷V提取物得率 0.94； 13.03g 11-O-罗汉果皂苷V提取物， 11-O-罗汉果皂苷V含量95.56， 11-O-罗汉果 皂苷V提取物得率0.26。 0096 实施例3 0097 取6kg罗汉果粉碎， 加入纯化水回流提取2次， 每次加入的纯化水的量是罗汉果质 量的10倍， 10。

36、0加热回流提取， 时间为2和1.5小时， 300目滤布过滤， 合并滤液， 温度70， - 0.09Mpa减压浓缩， 浓缩至6L， 6000r/min离心过滤， 取上清液加入6L纯化水稀释， 5氢氧化 钠调pH至9.2， 经9L大孔树脂LX-12(西安蓝晓科技新材料股份有限公司)吸附， 流速每滴2 秒， 18L纯化水除杂， 20乙醇27L除杂， 60乙醇27L解析， 收集解析液， 温度70， -0.09Mpa 减压浓缩， 补水至无醇， 料液共240ml， 经柱体积为1.5L MCI柱层析(三菱化学)， 流速3秒每 滴， 30乙醇1.5L洗脱， 60乙醇1.5L洗脱， 95乙醇1.5L洗脱， 每3。

37、00ml为一个流份， 依次 收集不同流份， 经TLC薄层检测， 第56流份为一份， 第911流份为一份， 第13流份为一份， 温度68， -0.09Mpa减压浓缩， 真空干燥得到22.80g赛门苷I提取物， 赛门苷I含量96.08， 赛门苷I提取物得率0.38； 58.20g罗汉果甜苷V提取物， 罗汉果甜苷V含量96.21， 罗汉果 甜苷V提取物得率0.97； 15.61g11-O-罗汉果皂苷V提取物， 11-O-罗汉果皂苷V含量 95.97， 11-O-罗汉果皂苷V提取物得率0.26。 0098 对比例1 0099 取2kg罗汉果粉碎， 加入纯化水回流提取2次， 每次加入的纯化水的量是罗汉果。

38、质 量的8倍， 100加热回流提取， 时间为2和1.5小时， 300目滤布过滤， 合并滤液， 温度70， - 0.09Mpa减压浓缩， 浓缩至2L， 6000r/min离心过滤， 取上清液加入2L纯化水稀释， 5氢氧化 钠调pH至9.0， 经3L大孔树脂D101(沧州宝恩)吸附， 流速每滴2秒， 6L纯化水除杂， 20乙醇 说明书 6/9 页 8 CN 111018933 A 8 6L除杂， 60乙醇9L解析， 收集解析液， 温度70， -0.09Mpa减压浓缩， 补水至无醇， 料液共 800ml， 经柱体积为0.5L脱色树脂D900柱层析(沧州宝恩吸附材料科技有限公司)， 流速3秒 每滴， 。

39、收集下柱液， 温度68， -0.09Mpa减压浓缩， 真空干燥得到26.41g罗汉果提取物， 罗汉 果提取物得率1.32， 其中赛门苷I含量2.12， 罗汉果甜苷V含量70.01， 11-O-罗汉果皂 苷V含量1.11。 0100 对比例2 0101 取2kg罗汉果粉碎， 加入纯化水回流提取2次， 每次加入的纯化水的量是罗汉果质 量的6倍， 100加热回流提取， 时间为2和1.5小时， 300目滤布过滤， 合并滤液， 温度67， - 0.09Mpa减压浓缩， 浓缩至4L， 加入100g氢氧化钙， 搅拌1小时， 静置1小时， 6000r/min离心过 滤， 温度67， 取上清液-0.09Mpa减。

40、压浓缩， 温度67， 真空-0.09Mpa， 浓缩至料液200ml， 经 柱体积为0.5L MCI柱层析， 流速3秒每滴， 30乙醇0.5L洗脱， 60乙醇0.5L洗脱， 95乙醇 0.5L洗脱， 每100ml为一个流份， 依次收集不同流份， 经TLC薄层检测， 第45流份为一份， 第 811流份为一份， 第13馏分为一份， 温度68， -0.09Mpa减压浓缩， 真空干燥得到10.61g赛 门苷I提取物， 赛门苷I含量55.86， 赛门苷I提取物得率0.53； 22.12g罗汉果甜苷V提取 物， 罗汉果甜苷V含量75.41， 罗汉果甜苷V提取物得率1.10； 13.60g 11-O-罗汉果皂。

41、苷 V， 含量35.97， 得率0.68。 0102 效果实施例 0103 一、 赛门苷I提取物、 罗汉果甜苷V提取物和11-O-罗汉果皂苷V提取物的检测方 法薄层层析(TLC)： 0104 用微量点样器分别吸取10 L流份液和对照品溶液点样于薄层层析板的点样线上 (点样线距硅胶板底部2.0cm， 每次点样均需吹干)， 放入层析缸， 展开剂(甲醇 乙酸丁酯 水 15 15 4)中展开。 当溶剂前沿展开至距离点样线约10cm时， 取出薄层板。 吹干溶剂， 置于 碘缸中显色， 显示出清晰的棕色斑点。 测试液展开后所得的点中， 在相同高度位置的棕色斑 点与标准品赛门苷I、 罗汉果甜苷V和11-O-罗。

42、汉果皂苷V的斑点具有相同Rf值。 0105 二、 赛门苷I、 罗汉果甜苷V和11-O-罗汉果皂苷V含量的检测方法高效液相色 谱(HPLC)： 0106 赛门苷I、 罗汉果甜苷V和11-O-罗汉果皂苷V对照品： 纯度大于98， 赛门苷I对照 品溶液配制， 称取于105下干燥至恒重的赛门苷I对照品10mg(精确至0.0001g)于10mL容 量瓶中， 用甲醇溶液溶解并稀释至刻度， 混匀。 罗汉果甜苷V和11-O-罗汉果皂苷V对照品溶 液同法操作。 0107 色谱条件： 色谱柱C18柱， 柱长150mm， 内径4.6mm， 内装C18填充物， 粒径5 m， 或是同 等分离效果的色谱柱。 流动相 乙腈。

43、(A)-水(B)23 77， 流速： 1.0mL/min， 检测波长： 203nm， 进样量： 10 L， 柱温： 30。 高效液相色谱仪， 配二极管阵列检测器或紫外检测器。 0108 试样溶液的制备： 称取于105下干燥至恒重的试样0 .05g0 .1g(精确至 0.0001g)， 置于25mL容量瓶中， 加入15mL甲醇溶液， 超声使之完全溶解， 继续加入甲醇溶液 定容至刻度， 用0.45 m微孔滤膜过滤。 0109 测定： 在规定色谱条件下， 取对照品溶液和试样溶液各10 L分别注入液相色谱仪， 进行色谱分析， 以保留时间定性， 峰面积定量。 0110 结果计算： 赛门苷I或罗汉果甜苷V。

44、或11-O-罗汉果皂苷V含量的质量分数w， 按式 说明书 7/9 页 9 CN 111018933 A 9 (A.1)计算： 0111 0112 式中： A试样溶液中赛门苷I或罗汉果甜苷V或11-O-罗汉果皂苷V的峰面积； c赛门苷I或罗汉果甜苷V或11-O-罗汉果皂苷V对照品溶液的浓度， 单位为毫克每毫升 (mg/mL)； V试样溶液的定容体积， 单位为毫升(mL)； As对照品溶液中赛门苷I或罗 汉果甜苷V或11-O-罗汉果皂苷V的峰面积； m试样的质量， 单位为克(g)； 1000换算 系数。 计算结果保留小数点后两位。 试验结果以两次平行测定结果的算术平均值为准。 在重 复性条件下获得。

45、的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于5.0。 0113 三、 实施例13及对比例12所述得率样品质量/药材质量100。 0114 四、 将实施例13及对比例12制备得到的产品进行动物药理实验， 方法如下： 0115 取健康SPF级雄性SD大鼠150只， 体重为170g180g， 由上海灵畅生物科技有限公 司提供； 随机平均分为15组， 每组10只， 分别为空白对照组， 高尿酸血症模型组， 阳性对照 组， 受试样品组， 其中受试样品组共12组， 分别为实施例1赛门苷I提取物(受试样品1)， 实施 例1罗汉果甜苷V提取物(受试样品2)， 实施例1 11-O-罗汉果皂苷V提取物(受试。

46、样品3)， 实 施例2赛门苷I提取物(受试样品4)， 实施例2罗汉果甜苷V提取物(受试样品5)， 实施例2 11- O-罗汉果皂苷V提取物(受试样品6)， 实施例3赛门苷I提取物(受试样品7)， 实施例3罗汉果 甜苷V提取物(受试样品8)， 实施例3 11-O-罗汉果皂苷V提取物(受试样品9)， 对比例1罗汉 果提取物(受试样品10)， 对比例2赛门苷I提取物(受试样品11)， 对比例2罗汉果甜苷V提取 物(受试样品12)。 0116 高尿酸血症的造模： 氧嗪酸钾作为化学诱导剂可抑制尿酸分解， 增加体内血清尿 酸水平， 导致体内血尿酸水平升高。 本实验选择氧嗪酸钾作造模剂， 观察受试物对大鼠高。

47、尿 酸血症的影响。 正常组腹腔注射生理盐水， 其余各组腹腔注射氧嗪酸钾溶液； 给各组大鼠在 造模的同时给予药物。 0117 给药途径： 灌胃给药(与人临床拟用药途径一致)。 给药量： 5mg/kg进行灌胃。 给药 时间： 造模的同时给予治疗药物灌胃， 阳性对照组非布索坦灌胃， 每日上午按体重灌胃1次。 给药期限： 连续给药28天。 空白对照组， 高尿酸血症模型组不做处理。 0118 实验周期为28d， 期间每7天尾静脉取血一次， 离心、 分离血清， 检测血清尿酸。 结果 以均值标准差表示； 体重及血清生化指标分别用SPSS 17.0统计软件计算出每组的平均 值和标准差并进行ANOVA方差分析，。

48、 P0.05为显著性差异。 0119 表1给药28天期间各组大鼠尿酸( mol/l)水平变化n10 0120 组别第0天尿酸第7天尿酸第14天尿酸第21天尿酸第28天尿酸 空白组61.0110.5765.2210.2561.6510.7375.0410.7480.9410.78 模型组61.0410.9085.3110.02100.3310.10117.3110.42189.6310.23 阳性对照组61.0410.2065.3410.3568.5510.6377.0410.1189.0810.91 受试样品162.1410.2065.6210.7869.2210.4778.6310.2190。

49、.7410.31 受试样品260.9410.2063.8710.4566.9810.7373.0410.0180.1710.54 受试样品362.2310.1184.7810.32100.1310.42116.9910.41189.2610.37 受试样品462.5810.2065.4210.4869.8010.5778.3810.8391.2210.27 受试样品561.0610.2063.3410.7366.7910.5372.9910.5280.0810.31 说明书 8/9 页 10 CN 111018933 A 10 受试样品662.1510.0384.9610.5099.9410.。

50、27116.9210.11189.3810.51 受试样品762.7410.2065.8210.4669.8210.4478.8910.8191.0310.53 受试样品861.0110.2062.8310.6765.7510.6371.8410.5979.9810.87 受试样品962.3410.0184.8910.3699.9810.49117.3410.52189.3510.10 受试样品1062.0410.1581.0410.5299.0410.22117.0410.21189.4710.70 受试样品1162.1110.4175.6210.3690.8210.6295.9010.14。