凝胶药物缓释制剂及其制备方法与应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911228063.1 (22)申请日 2019.12.04 (71)申请人 复旦大学 地址 200438 上海市杨浦区复旦大学江湾 校区化学楼B3100 申请人 上海市第六人民医院 (72)发明人 俞麟沈成兴时家悦陈昱 丁建东 (74)专利代理机构 北京慕达星云知识产权代理 事 务 所( 特 殊 普 通 合 伙 ) 11465 代理人 赵徐平 (51)Int.Cl. A61K 9/06(2006.01) A61K 31/165(2006.01) A61K 47/34(20。

2、17.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 一种凝胶药物缓释制剂及其制备方法与应 用 (57)摘要 本发明公开了一种凝胶药物缓释制剂及其 制备方法与应用， 属于医药领域。 本发明公开的 凝胶药物缓释制剂主要由凝胶载体材料、 有效量 的药物和溶媒组成， 以及所述凝胶药物缓释制剂 能够实现秋水仙碱药物的缓慢释放， 并且所述凝 胶药物缓释制剂具有热致凝胶化的性质， 在室温 时处于溶液状态， 在4-37时转变为凝胶状态， 可通过注射方式方便地给药。 此外所述凝胶药物 缓释制剂在体内原位成胶后， 能够原位释放药物 从而局部给药， 减少全身。

3、毒副作用， 并通过缓慢 释放， 取得长效的抗炎症和抗纤维化作用， 适于 市面推广与应用。 权利要求书1页 说明书10页 附图5页 CN 111150702 A 2020.05.15 CN 111150702 A 1.一种凝胶药物缓释制剂， 其特征在于， 所述凝胶药物缓释制剂中含有0.25-10mg/mL 的秋水仙碱。 2.根据权利要求1所述的一种凝胶药物缓释制剂， 其特征在于， 所述凝胶药物缓释制剂 含有3-10mg/mL的秋水仙碱。 3.根据权利要求1所述的一种凝胶药物缓释制剂， 其特征在于， 还包括： 凝胶载体材料 5-40wt、 调节剂0.01-15wt和余量溶媒； 其中， 所述凝胶载体。

4、材料为以聚乙二醇为亲水 嵌段、 聚酯为疏水嵌段组成的两亲性嵌段共聚物。 4.根据权利要求3所述的一种凝胶药物缓释制剂， 其特征在于， 所述凝胶载体材料在所 述凝胶药物缓释制剂中的含量为15-30wt； 所述凝胶载体材料中， 所述聚乙二醇的平均分 子量为60020000， 含量为10-90wt； 所述聚酯的含量为10-90wt， 且所述聚酯至少为聚 (DL-乳酸-乙醇酸)共聚物、 聚(L-乳酸-乙醇酸)共聚物、 聚(D-乳酸-乙醇酸)共聚物、 聚(DL- 乳酸)共聚物、 聚(L-乳酸)共聚物、 聚(D-乳酸)共聚物中的一种。 5.根据权利要求3所述的一种凝胶药物缓释制剂， 其特征在于， 所述溶媒。

5、为纯水、 生理 盐水、 缓冲溶液、 组织培养液、 细胞培养液、 动植物体液或其它不以有机溶剂为主体的溶剂 介质； 所述调节剂选自糖、 盐、 羧甲基纤维素钠、 碘甘油、 二甲硅油、 丙二醇、 卡波姆、 甘露醇、 山梨醇、 表面活性剂、 吐温20、 吐温40、 吐温80、 木糖醇、 低聚糖、 软骨素、 甲壳素、 壳聚糖、 胶 原蛋白、 明胶、 蛋白胶、 透明质酸、 聚乙二醇中的一种或多种。 6.一种如权利要求13任一所述凝胶药物缓释制剂的制备方法， 其特征在于， 包括如 下步骤： 将所述凝胶载体材料低温溶解于所述溶媒中， 并在-20以下储存备用， 使用前将溶于 所述溶媒中的所述凝胶载体材料置于室温。

6、下复溶后， 加入所述秋水仙碱药物混匀， 使得到 凝胶缓释制剂。 7.根据权利要求6所述的一种凝胶药物缓释制剂的制备方法， 其特征在于， 所述低温溶 解温度为不高于所述凝胶载体材料的溶胶-凝胶转变温度。 8.如权利要求13任一所述的一种凝胶药物缓释制剂或如权利要求6所述方法制备的 凝胶药物缓释制剂在制备治疗心肌梗死药物中的应用。 9.根据权利要求8所述的一种凝胶药物缓释制剂的应用， 其特征在于， 所述凝胶药物缓 释制剂具有热致凝胶化的性质， 在室温时处于溶液状态， 在4-37时转变为凝胶状态； 且以 小鼠为模型， 所述凝胶药物缓释制剂中秋水仙碱的有效剂量范围为0.5-2.5mg/kg。 10.根。

7、据权利要求9所述的一种凝胶药物缓释制剂的应用， 其特征在于， 根据人和动物 间按体表面积折算的等效剂量比值， 由20g小鼠推广到70kg成人， 所述凝胶药物缓释制剂中 秋水仙碱的有效剂量范围为0.055-0.275mg/kg。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111150702 A 2 一种凝胶药物缓释制剂及其制备方法与应用 技术领域 0001 本发明属于医药领域， 涉及一种凝胶药物缓释制剂及其制备方法与应用， 具体涉 及一种治疗心肌梗死的长效缓释制剂及其制备方法。 技术背景 0002 心肌梗死是由于冠状动脉血流中断导致心肌缺血缺氧发生坏死， 可引起心力衰 竭、 心源性休克或心脏骤停， 是世。

8、界主要的疾病死亡原因之一。 0003 除缺血缺氧引起的心肌损伤， 心肌梗死局部过度的炎症反应是心脏结构和功能恶 化的重要因素。 炎症反应能够促进心肌细胞的凋亡并加速细胞外基质的合成， 导致心肌纤 维化、 心肌重塑和心功能障碍。 探索新的抗炎治疗方案， 以期减轻急性心肌梗死后局部炎 症， 则将有助于减少心肌梗死后的心肌损伤并改善心肌修复， 从而抑制心肌重塑， 改善患者 预后。 0004 秋水仙碱是一种生物碱， 提取自百合科植物秋水仙， 可抑制有丝分裂、 破坏纺锤 体、 使染色体停滞在分裂中期， 可明显抑制纤维细胞增生； 同时也可干扰溶酶体脱颗粒降低 中性粒细胞的活性， 抑制粒细胞向炎症区域游走而。

9、发挥抗炎作用。 临床常用于痛风(抗炎)、 抗肿瘤(抗有丝分裂)的治疗， 但因为其用药窗口窄， 易造成全身毒副作用， 而仅作短期治 疗。 0005 最近研究发现， 秋水仙碱可减轻心肌梗死局部过度炎症反应， 抑制心肌纤维化， 从 而起到治疗心梗的作用。 然而如何有效利用秋水仙碱治疗心肌梗死又不引起明显的全身毒 副作用仍然是临床上面临的巨大挑战。 发明内容 0006 本发明为了解决上述的秋水仙碱用药窗口窄且易引起全身毒性问题， 通过将秋水 仙碱药物载入PEG/聚酯嵌段共聚物热致水凝胶中制备了一种治疗心肌梗死的长效缓释制 剂。 心梗后(超声引导下)进行局部原位注射以发挥抑制局部过炎症反应和抗心肌纤维化。

10、的 作用。 而秋水仙碱药物能够在低温时载入聚合物水溶液中， 并在进入体内后原位形成凝胶， 在药物扩散作用下实现平稳而缓慢的释放， 从而实现秋水仙碱药物的原位递送和局部持续 平稳给药。 0007 为了实现上述目的， 本发明采用如下技术方案： 0008 一种凝胶药物缓释制剂， 是以聚乙二醇为亲水嵌段、 聚酯为疏水嵌段组成的嵌段 共聚物为凝胶载体， 以秋水仙碱为所载药物以及溶媒三者共同组成， 该凝胶缓释制剂的成 分组成及重量百分比例为： 0009 聚乙二醇-聚酯嵌段共聚物5-40wt， 优选为15-30wt； 0010 秋水仙碱0.25-10mg/mL； 0011 余量为溶媒。 0012 本发明的秋。

11、水仙碱药物在各个浓度下， 因为释放动力学不受载药量的影响， 释放 说明书 1/10 页 3 CN 111150702 A 3 周期内的毒副作用只和总剂量有关， 以小鼠为模型， 秋水仙碱的有效载药量为0.5-2.5mg/ kg； 根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值， 由20g小鼠推广到70kg成人， 秋水仙 碱的有效载药量为0.055-0.275mg/kg。 0013 本发明公开的凝胶载体材料两亲性嵌段共聚物的组成如下： 0014 (1)聚乙二醇的平均分子量为600至20000， 含量为10-90wt， 优选为25-50wt， 记为A聚合物嵌段； 0015 (2)聚酯的含量为10-90w。

12、t， 优选为50-75wt， 记为B聚合物嵌段； 0016 (3)所述B嵌段为所述B嵌段为聚(DL-乳酸-乙醇酸)PLGA、 聚(L-乳酸-乙醇酸) PLLGA、 聚(D-乳酸-乙醇酸)PDLGA、 聚(DL-乳酸)PLA、 聚(L-乳酸)PLLA、 聚(D-乳酸)PDLA中的 一种； 0017 (4)所述嵌段共聚物可以为ABA或BAB型的三嵌段共聚物、 AB型的两嵌段共聚物、 A- g-B或B-g-A型的接枝共聚物、 (A-B)n或(B-A)n的星形嵌段共聚物以及A(BA)n或B(AB)n构型 的多嵌段共聚物， 其中n为2至10的整数。 0018 优选的， 所述凝胶药物缓释制剂具备可注射性，。

13、 其在低温时处于溶液状态， 在4-37 能够在1分钟内转变成为凝胶状态， 优选的凝胶转变温度为25-37。 0019 优选的， 所述溶媒是纯水、 生理盐水、 缓冲溶液、 组织培养液、 细胞培养液、 动植物 或人体的体液、 或者为其它水溶液或其他不以有机溶剂为主体的溶剂介质。 0020 优选的， 本发明中的凝胶药物缓释制剂还可加入调节剂， 所述调节剂在缓释制剂 中的重量百分含量为0.01-15wt； 且所述调节剂选自糖、 盐、 羧甲基纤维素钠、 (碘)甘油、 二甲硅油、 丙二醇、 卡波姆、 甘露醇、 山梨醇、 表面活性剂、 吐温20、 吐温40、 吐温80、 木糖醇、 低聚糖、 软骨素、 甲壳素。

14、、 壳聚糖、 胶原蛋白、 明胶、 蛋白胶、 透明质酸、 聚乙二醇中的一种或 几种的组合。 0021 此外， 本发明还公开保护上述凝胶药物缓释制剂的制备方法， 且所述凝胶药物缓 释制剂的制备方法选自下列之一： 0022 (1)先配制嵌段共聚物水溶液， 然后加入药物， 溶解均匀后成为凝胶缓释制剂， 在- 20或以下储存备用， 使用前复溶、 体内注射； 0023 (2)分别配制嵌段共聚物水溶液和药物注射液， 单独分装储存， 注射前将嵌段共聚 物水溶液和药物注射液充分混匀后制成凝胶缓释制剂； 0024 (3)配制得到药物注射液， 然后与嵌段共聚物混合并溶解均匀后成为凝胶缓释制 剂， 在-20或以下储存。

15、备用， 使用前复溶、 体内注射； 0025 (4)将嵌段共聚物与药物混合， 然后加溶媒， 溶解均匀后成为凝胶缓释制剂； 在-20 或以下储存备用， 使用前复溶、 体内注射。 0026 需要说明的是， 以上四种制备方法其制备效果无明显差异。 0027 示范性的， 本发明公开的凝胶药物缓释制剂的制备方法具体为： 0028 将所述凝胶载体材料低温溶解于所述溶媒中， 并在-20以下储存备用， 使用前将 溶于所述溶媒中的所述凝胶载体材料置于室温下复溶后， 加入所述秋水仙碱药物混匀， 使 得到凝胶缓释制剂。 0029 优选的， 所述低温溶解温度为不高于所述凝胶载体材料的溶胶-凝胶转变温度。 0030 本发。

16、明还公开保护上述凝胶药物缓释制剂或由上述制备方法制得的凝胶药物缓 说明书 2/10 页 4 CN 111150702 A 4 释制剂在制备治疗心肌梗死药物中的应用。 0031 优选的， 以小鼠为模型， 所述凝胶药物缓释制剂中秋水仙碱的有效剂量范围为 0.5-2.5mg/kg。 0032 优选的， 根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值， 由20g小鼠推广到70kg 成人， 所述凝胶药物缓释制剂中秋水仙碱的有效剂量范围为0.055-0.275mg/kg。 0033 优选的， 所述凝胶药物缓释制剂具有热致凝胶化的性质， 在室温时处于溶液状态， 在4-37时转变为凝胶状态。 0034 经由上述的。

17、技术方案可知， 与现有技术相比， 本发明提供了一种凝胶药物缓释制 剂及其制备方法与应用， 具有如下优异效果： 0035 本发明制备的凝胶缓释制剂能够实现秋水仙碱药物的缓慢释放， 并且所述凝胶药 物缓释制剂具有热致凝胶化的性质， 在室温时处于溶液状态， 在4-37时转变为凝胶状态， 可通过注射方式方便地给药； 制剂在体内原位成胶后， 能够原位释放药物从而局部给药， 减 少全身毒副作用， 并通过缓慢释放， 取得长效的抗炎症和抗纤维化作用。 附图说明 0036 为了更清楚地说明本发明实例或现有技术中的技术方案， 下面将对实施例或现有 技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍， 显而易见地， 下面描述中。

18、的附图仅仅是本发 明的实施例， 对于本领域普通技术人员来讲， 在不付出创造性劳动的前提下， 还可以根据提 供的附图获得其他的附图。 0037 图1为本发明实施例8中copolymer-1的相图。 0038 图2为本发明实施例9中copolymer-1(25wt)溶液的变温动态流变曲线。 0039 图3为本发明实施例15中载药浓度为1mg/mL的秋水仙碱药物的copolymer-1 (25wt)凝胶制剂的体外释放曲线。 0040 图4为本发明实施例26中心梗4周后各组小鼠心肌炎症反应情况， 其中图4(A)为各 组心肌切片中炎症细胞的免疫荧光染色， 图4(B)为各组心肌切片中炎症细胞数量的统计分 。

19、析。 0041 图5为本发明实施例26中心梗4周后各组小鼠心脏结构和功能情况， 其中图5(A)为 心脏超声的典型图像， 图5(B)为各组心脏超声的参数统计。 0042 图6为本发明实施例26中秋水仙碱系统毒性评价， 其中图6(A)为体重改变图， 图6 (B)为肝功能情况图。 具体实施方式 0043 下面将结合本发明实施例中的附图对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完整 地描述， 显然， 所描述地实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。 基于本 发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没由做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实 施例， 都属于本发明保护的范围。 0044 为更好地理。

20、解本发明， 下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述， 但不 可理解为对本发明的限定， 对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的 改进与调整， 也视为落在本发明的保护范围内。 说明书 3/10 页 5 CN 111150702 A 5 0045 实施例1 0046 在250mL三颈瓶中称取15g双羟基聚乙二醇(PEG1500)， 使用真空酯密封各口后， 在 机械搅拌下130真空除水3h。 随后通氩气降温至80， 加入摩尔比为1:1的D,L-丙交酯和 乙交酯共计37g， 充分搅拌； 加入含有50mg辛酸亚锡的甲苯溶液， 反复抽真空3次以除去甲苯 后升温到150在氩气保护下反应1。

21、2h。 随后降温至120抽真空3h以除去未反应的单体， 趁 热倒出后用80去离子水洗涤粗产物3次， 经冷冻干燥后得到最终产物， 得BAB型三嵌段聚 合物PLGA-PEG-PLGA(copolymer-1)， 产率约85。 通过凝胶渗透色谱(GPC， 聚苯乙烯为标 样)测得上述BAB型三嵌段聚合物得数均和重均分子量(Mn， Mw)分别为5200和6120， 分子量分 布系数(Mw/Mn，)为1.30， 其聚合物水体系具有热致凝胶化性能。 0047 实施例2 0048 在250mL三颈瓶中称取10g双羟基聚乙二醇(PEG1000)， 使用真空酯密封各口后， 在 机械搅拌下130真空除水3h。 随后。

22、通氩气降温至80， 加入D,L-丙交酯25g， 充分搅拌； 加 入含有50mg辛酸亚锡的甲苯溶液， 反复抽真空3次以除去甲苯后升温到150在氩气保护下 反应12h。 随后降温至120抽真空3h以除去未反应的单体， 趁热倒出后用80去离子水洗 涤粗产物3次， 经冷冻干燥后得到最终产物， 得BAB型三嵌段聚合物PLA-PEG-PLA (copolymer-2)， 产率约80。 通过凝胶渗透色谱(GPC， 聚苯乙烯为标样)测得上述BAB型三 嵌段聚合物得数均和重均分子量(Mn， Mw)分别为4750和6120， 分子量分布系数(Mw/Mn，) 为1.14， 其聚合物水体系具有热致凝胶化性能。 004。

23、9 实施例3 0050 在250mL三颈瓶中称取15g单甲氧基聚乙二醇(mPEG750)， 使用真空酯密封各口后， 在机械搅拌下130真空除水3h。 随后通氩气降温至80， 加入D,L-丙交酯30g， 乙交酯10g， 充分搅拌； 加入含有40mg辛酸亚锡的甲苯溶液， 反复抽真空3次以除去甲苯后升温到150 在氩气保护下反应12h。 随后降温至120抽真空3h以除去未反应的单体， 趁热倒出后用80 去离子水洗涤粗产物3次， 经冷冻干燥后得到最终产物， 得AB型嵌段聚合物mPEG-PLGA (copolymer-3)， 产率约79。 通过凝胶渗透色谱(GPC， 聚苯乙烯为标样)测得上述AB型嵌段 。

24、聚合物得数均和重均分子量(Mn， Mw)分别为2850和3300， 分子量分布系数(Mw/Mn，)为 1.24， 其聚合物水体系具有热致凝胶化性能。 0051 实施例4 0052 在250mL三颈瓶中称取20g双羟基聚乙二醇(PEG1000)， 使用真空酯密封各口后， 在 机械搅拌下130真空除水3h。 随后通氩气降温至80， 加入D-丙交酯30g， 乙交酯8g， 充分 搅拌； 加入含有60mg辛酸亚锡的甲苯溶液， 反复抽真空3次以除去甲苯后升温到150在氩 气保护下反应12h。 随后降温至120抽真空3h以除去未反应的单体， 趁热倒出后用80去 离子水洗涤粗产物3次， 经冷冻干燥后得到最终产。

25、物， 得BAB型三嵌段聚合物PDLGA-PEG- PDLGA(copolymer-4)， 产率约83。 通过凝胶渗透色谱(GPC， 聚苯乙烯为标样)测得上述BAB 型三嵌段聚合物得数均和重均分子量(Mn， Mw)分别为5150和5960， 分子量分布系数(Mw/Mn， )为1.17， 其聚合物水体系具有热致凝胶化性能。 0053 实施例5 0054 在250mL三颈瓶中称取20g双羟基聚乙二醇(PEG1000)， 使用真空酯密封各口后， 在 机械搅拌下130真空除水3h。 随后通氩气降温至80， 加入摩尔比为3:1的L-丙交酯和乙 说明书 4/10 页 6 CN 111150702 A 6 交。

26、酯共计25g， 充分搅拌； 加入含有40mg辛酸亚锡的甲苯溶液， 反复抽真空3次以除去甲苯后 升温到150在氩气保护下反应12h。 随后降温至120抽真空3h以除去未反应的单体， 趁热 倒出后用80去离子水洗涤粗产物3次， 经冷冻干燥后得到最终产物， 得BAB型三嵌段聚合 物PLLGA-PEG-PLLGA(copolymer-5)， 产率约80。 通过凝胶渗透色谱(GPC， 聚苯乙烯为标 样)测得上述BAB型三嵌段聚合物得数均和重均分子量(Mn， Mw)分别为4500和5850， 分子量分 布系数(Mw/Mn，)为1.25， 其聚合物水体系具有热致凝胶化性能。 0055 实施例6 0056 在。

27、250mL三颈瓶中称取11g单甲氧基聚乙二醇(mPEG550)， 使用真空酯密封各口后， 在机械搅拌下130真空除水3h。 随后通氩气降温至80， 加入摩尔比为20:1的DL-丙交酯 和乙交酯共计25g， 充分搅拌； 加入含有60mg辛酸亚锡的甲苯溶液， 反复抽真空3次以除去甲 苯后升温到150在氩气保护下反应12h。 随后降温至120抽真空3h以除去未反应的单体， 把粗产物溶于二氯甲烷溶液中， 冷乙醚沉淀， 产率约为85。 0057 将此两嵌段共聚物溶于无水甲苯， 投入等当量的HDMI， 60回流反应8h， 旋蒸浓缩 后加入到大量无水乙醚中， 在-20冰箱中冷冻过夜沉淀， 过滤即可除去杂质，。

28、 经真空干燥 48h得到mPEG-PLGA-mPEG。 通过凝胶渗透色谱仪(GPC)(采用聚苯乙烯作为标样， 以THF为流 动相)测定所述ABA嵌段共聚物(mPEG-PLGA-mPEG,Polymer-17)的数均与重均分子量分别为 5150和6270， 分子量分布系数(Mw/Mn，)为1.25。 此共聚物(copolymer-6)本身在水中具 有可逆的热致凝胶化的性质。 0058 实施例7 0059 按照实施例1至6所给出的基本步骤， 用不同分子量的PEG或mPEG与不同的单体合 成其它嵌段共聚物， 其性能列于表1中： 0060 表1 说明书 5/10 页 7 CN 111150702 A 。

29、7 0061 0062 上述表中的嵌段聚合物均具有热致凝胶化的性能。 将聚合物配成一定浓度的水溶 液， 其在温度低于凝胶转变温度时为溶液状态， 随温度的上升转变为半固体的凝胶， 且该过 程是可逆的。 0063 表1中嵌段聚合物按一定比例配制， 在温度低于凝胶转变温度以下溶解于水， 当温 度高于凝胶转变温度时， 聚合物混合物的溶液形成凝胶。 0064 实施例8 0065 称取适量的实施例1中的copolymer-1， 以去离子水为溶媒， 配制成一系列聚合物 质量百分数含量为1025wt的溶液， 进行倒管法测试， 具体将载有0.5mL样品溶液的2mL 样品瓶浸没在水浴中， 平衡15min后立即倒置。

30、180 ， 若在30s内样品不发生明显流动， 则认为 样品已处于凝胶状态， 此时的温度是溶胶-凝胶转变温度。 倒管法测试的结果记录于图1， 如 图1所示， 所得copolymer-1的溶液在所测试的050温度范围内能发生溶胶-凝胶相转 变， 因此具有热致凝胶化的性质。 0066 实施例9 说明书 6/10 页 8 CN 111150702 A 8 0067 取适量25wtcopolymer-1嵌段共聚物溶液， 采用旋转流变仪测量聚合物水体系 的储能模量和损耗模量等流变学性质随温度的变化。 在古荡剪切频率(f1.59Hz)下， 以1 /min的升温速率进行温度扫描， 结果记录于图2。 如图2所示。

31、， 25wt的copolymer-1聚合 物溶液在测试温度下储能模量与损耗模量在35有交点， 能发生溶胶-凝胶相转变， 因此具 有热致凝胶化的性质。 0068 实施例10 0069 称取适量的表1中嵌段共聚物copolymer-7， 以去离子水为溶媒， 配制成一系列聚 合物质量百分数含量为1025wt的溶液， 进行倒管法测试。 倒管法测试的结果表明， 所得 的copolymer-7溶液随着温度升高能够发生溶胶-凝胶相转变， 根据浓度的不同， 相转变温 度可控制在3339温度范围内， 因此copolymer-7具有热致凝胶化的性质。 0070 实施例11 0071 称取适量的表1中嵌段共聚物co。

32、polymer-12， 以PBS(pH7.4)溶液为溶媒， 配制 23wt的copolymer-12水溶液。 倒管法测试表明， 随着温度的升高23wt的copolymer-12 溶液发生溶胶-凝胶相转变， 且相转变温度为32， 正好介于室温和生理温度之间， 因此 copolymer-12具有热致凝胶化的性质。 0072 实施例12 0073 参照实施例8-11所述实验方法， 表1中的聚合物在合适的浓度下， 也可以低温溶解 于水中， 随着升温发生溶胶-凝胶相转变， 因而均具有可逆热致凝胶化性质。 0074 实施例13 0075 取实施例9制备的嵌段共聚物水溶液中加入重量百分比含量为0.0250.。

33、1之 间的秋水仙碱药物时， 发现其对溶胶-凝胶相转变温度和可注射性均没有影响。 0076 实施例14 0077 嵌段共聚物copolymer-1以生理盐水为溶媒， 配制25wt的聚合物溶液， 经过滤灭 菌。 取上述溶液约0.1mL， 以C57BL/6小鼠为模型实验动物， 将上述溶液注射到处于麻醉状态 的小鼠背部皮下。 每隔一定时间处死小鼠， 跟踪凝胶在小鼠体内的降解。 结果表明， 该注射 材料可在体内维持四周， 第五周以后已无明显可见的凝胶。 同时， 实验过程中注射部位没有 发生水肿、 组织坏死等现象。 0078 实施例15 0079 将嵌段共聚物copolymer-1加入适量生理盐水， 在4。

34、冰箱中搅拌溶解， 配制成聚 合物重量百分比为25wt的水溶液， 随后添加0.25、 0.5、 1mg/mL秋水仙碱药物， 分别搅拌均 匀得到三个浓度的载药聚合物溶液。 经过倒管法测试表明， 所得溶液能在生理温度发生溶 胶-凝胶转变， 即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态， 当温度升高至生理温度则发生 溶胶-凝胶相转变， 形成原位凝胶。 三个载药浓度的体外药物释放实验表明， 秋水仙碱药物 可以从凝胶中缓慢释放超过8天， 且秋水仙碱在水凝胶中的释放动力学不受载药量的影响， 结果记录于图3。 0080 实施例16 0081 将表1中的copolymer-7加入适量生理盐水， 在4冰箱中搅拌溶解， 。

35、配制成聚合物 重量百分比为20wt的水溶液， 随后添加2mg/mL秋水仙碱药物， 搅拌均匀得到载药聚合物 溶液。 经过倒管法测试表明， 所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变， 即在低于生理温 说明书 7/10 页 9 CN 111150702 A 9 度条件下呈易流动的溶液态， 当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶相转变， 形成原位凝 胶。 体外药物释放实验表明， 秋水仙碱药物可以从凝胶中缓慢释放超过3周。 0082 实施例17 0083 将表1中的copolymer-8加入适量生理盐水， 在4冰箱中搅拌溶解， 配制成聚合物 重量百分比为20wt的水溶液， 随后添加0.25mg/mL秋水仙碱。

36、药物， 搅拌均匀得到载药聚合 物溶液。 经过倒管法测试表明， 所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变， 即在低于生理 温度条件下呈易流动的溶液态， 当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶相转变， 形成原位 凝胶。 体外药物释放实验表明， 秋水仙碱药物可以从凝胶中缓慢释放超过1周。 0084 实施例18 0085 将表1中的copolymer-9加入适量生理盐水， 在4冰箱中搅拌溶解， 配制成聚合物 重量百分比为23wt的水溶液， 随后添加0.25mg/mL秋水仙碱药物， 搅拌均匀得到载药聚合 物溶液。 经过倒管法测试表明， 所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变， 即在低于生理 温度条件下呈易流。

37、动的溶液态， 当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶相转变， 形成原位 凝胶。 体外药物释放实验表明， 秋水仙碱药物可以从凝胶中缓慢释放超过3周。 0086 实施例19 0087 将表1中的copolymer-11加入适量生理盐水， 在4冰箱中搅拌溶解， 配制成聚合 物重量百分比为25wt的水溶液， 随后添加0.25mg/mL秋水仙碱药物， 搅拌均匀得到载药聚 合物溶液。 经过倒管法测试表明， 所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变， 即在低于生 理温度条件下呈易流动的溶液态， 当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶相转变， 形成原 位凝胶。 体外药物释放实验表明， 秋水仙碱药物可以从凝胶中缓慢释。

38、放超过1周。 0088 实施例20 0089 将实施例16中的载药凝胶缓释制剂加入1的蔗糖调节剂调节药物释放速率， 可 实现药物体外2周的释放。 0090 实施例21 0091 将实施例18中的载药凝胶缓释制剂加入5的蔗糖调节剂调节药物释放速率， 可 实现药物体外2周的释放。 0092 实施例22 0093 将实施例16中的载药凝胶缓释制剂加入5的聚乙二醇400调节药物释放速率， 可 实现药物体外2周的释放。 0094 实施例23 0095 将实施例18中的载药凝胶缓释制剂加入10的聚乙二醇200调节药物释放速率， 可实现药物体外2周的释放。 0096 实施例24 0097 将实施例16中的载。

39、药凝胶缓释制剂加入8的木糖醇调节剂调节药物释放速率， 可实现药物体外1周的释放。 0098 实施例25 0099 将实施例18中的载药凝胶缓释制剂加入5的甘露醇调节剂调节药物释放速率， 可实现药物体外2周的释放。 0100 实施例26 说明书 8/10 页 10 CN 111150702 A 10 0101 将copolymer-1用生理盐水配制得到25wt的溶液， 经过滤灭菌， 加入1mg/mL的秋 水仙碱， 在4冰箱中搅拌均匀， 即可得注射制剂。 以C57BL/6小鼠为模型动物， 将其冠状动 脉左前降支近端结扎， 构建心肌梗死小鼠模型。 随即在心梗边缘区注射秋水仙碱水凝胶10 微升， 为心。

40、梗边缘区原位注射载药凝胶的心梗小鼠(ColGel组)。 同时将假手术小鼠(Sham 组)、 未注射水凝胶的心梗小鼠(MI组)作为空白对照， 腹腔注射等剂量秋水仙碱的心梗小鼠 (Col(i.p.)组)作为阳性对照。 0102 本实施例结果表明， 本发明提供的秋水仙碱凝胶缓释制剂能够有效抑制心肌梗死 炎症反应， 改善心脏结构和功能； 与阳性对照组比较， 上述效果更明显， 且不引起系统毒性， 结果记录于图4-6。 如4图所示， 心肌梗死引起炎症反应， 表现为炎症细胞(F4/80-positive cells)显著增加； 而ColGel能明显减少炎症细胞。 与ColGel相比， 同剂量的Col(i.p。

41、.)的 效果不如ColGel。 如5(A)图的心脏超声典型图像和5B图所示， 心肌梗死组EF、 FS较假手术 组明显降低(p0.001)， LVIDs、 LVIDd较假手术组明显升高(p0.001)， 提示心肌受到严重的 结构和功能损伤。 ColGel组所有超声心动图参数均较MI组明显改善(p0.05或p0.001)， 而Col(i.p.)组仅EF和FS有所改善(p0.05或p0.001)。 这说明， 心肌梗死后ColGel治疗对 心肌结构和功能有显著的改善作用， 而Col(i.p.)治疗对心肌结构和功能的效果较弱。 如图 6(A)示， ColGel组小鼠在心肌梗死后4周的平均体重增加了3.4。

42、20.5g， 与Sham组和心肌 梗死组无明显差异。 Col(i.p.)组体重增加明显少于其他三组(2.950.4,p0.05)， 说明与 ColGel相比， 腹腔注射Col溶液可引起明显的全身毒性。 图6(B)示， 血清AST和ALT水平Col (i.p.)组显著高于其它三组(p0.001)， 这表明Col全身性暴露诱发了严重的肝损伤， 而心 肌局部应用ColGel有效地阻止了这种副作用。 图中*代表两组数据具有显著性差异， 且p 0.05， *代表两组数据具有显著性差异， 且p0.01； *代表两组数据具有显著性差异， 且p 0.001。 0103 实施例27 0104 将copolyme。

43、r-1用生理盐水配制得到25wt的溶液， 经过滤灭菌， 加入配得10mg/ mL的秋水仙碱， 在4中搅拌均匀， 即可得10mg/mL的缓释制剂。 以约20g的ICR小鼠为模型， 在背部皮下注射5 L的载药凝胶， 即实际载药量为2.5mg/kg， 发现老鼠的生理状态良好。 本 实施例结果表明， 10mg/mL的秋水仙碱浓度剂量是安全的。 0105 实施例28 0106 将copolymer-1用生理盐水配制得到25wt的溶液， 经过滤灭菌， 加入0.15,0.25, 0.5， 1， 1.5， 2mg/mL的秋水仙碱， 在4冰箱中搅拌均匀， 即可得各种不同浓度的缓释制剂。 以约20g的ICR小鼠为。

44、模型， 在背部皮下注射0.1mL的载药凝胶， 即实际载药量为0.75,1.25, 2.5， 5， 7.5， 10mg/kg。 发现载药量小于等于2.5mg/kg时， 实验老鼠的生理状态良好； 载药量 等于5mg/kg， 实验老鼠虽然存活但生理状况差； 载药量大于等于7.5mg/kg时， 则因为药物毒 性而2天内全部死亡。 0107 本实施例结果表明， 当秋水仙碱水凝胶缓释制剂的剂量达到5mg/kg时已经产生明 显的全身毒性， 而秋水仙碱水凝胶缓释制剂的剂量在0.52.5mg/kg范围内是安全的。 0108 本说明书中各个实施例采用递进的方式描述， 每个实施例重点说明的都是与其他 实施例的不同之。

45、处， 各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。 对于实施例公开的方法 而言， 由于其与实施例公开的方法相对应， 所以描述的比较简单， 相关之处参见方法部分说 说明书 9/10 页 11 CN 111150702 A 11 明即可。 0109 对所公开的实施例的上述说明， 使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。 对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的， 本文中所定义的 一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下， 在其它实施例中实现。 因此， 本发明 将不会被限制于本文所示的这些实施例， 而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一 致的最宽的范围。 说明书 10/10 页 12 CN 111150702 A 12 图1 图2 说明书附图 1/5 页 13 CN 111150702 A 13 图3 说明书附图 2/5 页 14 CN 111150702 A 14 图4 说明书附图 3/5 页 15 CN 111150702 A 15 图5 说明书附图 4/5 页 16 CN 111150702 A 16 图6 说明书附图 5/5 页 17 CN 111150702 A 17 。