含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯的制备和应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010305906.X (22)申请日 2020.04.17 (71)申请人 南通大学 地址 226019 江苏省南通市崇川区啬园路9 号 (72)发明人 戴红郑丹丹王志鹏陈佳 张燕李建华施磊张海军 李金峰高磊 (51)Int.Cl. C07D 231/16(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的 氰基丙烯酸酯的制备和应用 (57)摘要 本发明涉及含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯 吡。

2、唑单元的氰基丙烯酸酯(I)的制备和应用。 通 过1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑-5-甲基胺与 取代丙烯酸酯缩合得到。 所述含1-甲基-3-(4-氟 苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯对肿瘤细 胞HepG2呈现出良好的抑制作用， 该化合物可用 于制备抗肿瘤细胞药物。 权利要求书2页 说明书7页 CN 111333578 A 2020.06.26 CN 111333578 A 1.一种含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯I， 其特征在于结构为： 2.如权利要求1所述的含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯I的制 备方法， 其特征在于方法如下。

3、： 权利要求书 1/2 页 2 CN 111333578 A 2 3.如权利要求1所述的含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯I在抗 肿瘤细胞方面的用途， 其特征在于： 含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸 酯I对肿瘤细胞HepG2显示较好的抑制效果。 权利要求书 2/2 页 3 CN 111333578 A 3 含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯的制 备和应用 技术领域 0001 本发明涉及医药领域， 具体涉及含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙 烯酸酯的制备和应用。 背景技术 0002 恶性肿瘤是威胁人。

4、类健康的三大疾病之一， 近年来癌症的发病率逐步上升。 所以， 寻找与发现有效的抗癌药物与治疗方法是目前医学界重要研究热点之一。 0003 吡唑化合物是一类重要的含氮杂环， 许多吡唑杂环化合物对肿瘤细胞显示出优异 的抑制效果， 一些含有吡唑环的药物如塞来昔布等已被用于治疗许多疾病。 0004 氰基丙烯酸酯也是一类重要化合物， 一些氰基丙烯酸酯化合物对肿瘤细胞也显示 出良好的抑制活性， 如Zhang等制备的化合物A对人前列腺癌细胞PC3表现出较好的抑制作 用 ， 在10g/mL浓度下 ， 化合物A对人前列腺 癌细胞PC3的 抑制活性达80 .1 (J.Heterocyclic Chem.,2005。

5、,42,1211-1214)。 0005 0006 因此， 为了继续从氰基丙烯酸酯化合物中寻找与发现具有良好抗肿瘤活性的药 物， 合理地将取代吡唑单元与氰基丙烯酸酯骨架衔接在一起。 本发明公开了一类具有药用 价值的含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯。 发明内容 0007 本发明的目的是提供对HepG2肿瘤细胞具有良好抑制作用的一类含1-甲基-3-(4- 氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯。 0008 本发明的另一目的是提供上述化合物的制备方法。 0009 本发明的又一个目的是提供上述化合物在制备抗肿瘤细胞药物方面的用途。 0010 为解决上述技术问题， 本发明提供。

6、含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基 丙烯酸酯， 其具有通式I结构， 说明书 1/7 页 4 CN 111333578 A 4 0011 0012 优选地， 含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯， 具有如下结构： 0013 说明书 2/7 页 5 CN 111333578 A 5 0014 0015 本发明提供上述含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯的制备 方法， 其特征在于包括如下步骤： 0016 将中间体溶于有机溶剂中， 再加入中间体， 反应一段时间后， 停止反应， 除去 溶剂后所得粗品通过硅胶柱层析纯化得目标化合物， 001。

7、7 0018 优选地， 含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯的制备方法， 包 括如下步骤： 0019 说明书 3/7 页 6 CN 111333578 A 6 0020 0021 其中， 中间体II可参照文献(Chin.J.Org.Chem.2015,35,2399)方法制备得到， 中 间体III可参照文献(J.Agric.Food Chem.2003,51,5030)方法制备得到。 0022 通式I化合物对肿瘤细胞显示出良好抑制作用， 所述的肿瘤细胞有HepG2。 0023 本发明公开的含1-甲基-3-(4-氟苯基)-4-氯吡唑单元的氰基丙烯酸酯对肿瘤细 胞HepG2。

8、展现出良好的抑制活性， 因此可以用来制备抗肿瘤细胞药物。 具体实施方式 0024 为了便于对本发明的进一步了解， 下面提供的实施例对其做了更详细的说明。 这 些实施例仅供叙述而并非用来限定本发明的范围或实施原则。 0025 实施例1： 说明书 4/7 页 7 CN 111333578 A 7 0026 0027 将20mmol中间体溶于50mL二甲基亚砜(DMSO)， 室温下加入中间体a 20mmol， 加好后， 加热至80反应15小时。 除去溶剂后， 所得粗品通过硅胶柱层析纯化得目标物Ia； 1H NMR(400MHz,CDCl3): 10.23(s,1H,NH),7.837.86(m,2H。

9、,Ar-H),7.107.15(m,2H,Ar- H),4.86(d,J5.6Hz,2H,CH2),4.30(t,J4.8Hz,2H,CH2),3.92(s,3H,CH3),3.65(t,J 4.8Hz,2H,CH2),3.39(s,3H,OCH3),2.73(s,3H,CH3). 0028 实施例2： 0029 0030 将10mmol中间体溶于30mL1， 4-二氧六环， 室温下向其中加入中间体b 8mmol， 加好后， 加热回流反应18小时。 除去溶剂以后， 所得粗品通过硅胶柱层析纯化得目标物Ib； 1H NMR(400MHz,CDCl3): 10.24(s,1H,NH),7.837.8。

10、6(m,2H,Ar-H),7.107.14(m,2H,Ar- H),4.86(d,J5.6Hz,2H,CH2),4.29(t,J5.0Hz,2H,CH2),3.92(s,3H,CH3),3.68(t,J 5.0Hz,2H,CH2),3.56(q,J6.9Hz,2H,CH2),2.73(s,3H,CH3),1.19(t,J7.0Hz,3H,CH3). 0031 实施例3： 说明书 5/7 页 8 CN 111333578 A 8 0032 0033 将6mmol中间体溶于35mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)， 室温搅拌下向其中加入中 间体c 6mmol， 加好后， 继续室温搅拌12小时。 除。

11、去溶剂后， 所得粗品通过硅胶柱层析纯化 得目标物Ic； 1H NMR(400MHz,CDCl3): 10.22(s,1H,NH),7.837.87(m,2H,Ar-H),7.10 7.14(m,2H,Ar-H),6.957.01(m,1H,Ar-H),6.756.82(m,2H,Ar-H),4.87(d,J5.6Hz, 2H,CH2),4.52(t,J4.8Hz,2H,CH2),4.31(t,J5.0Hz,2H,CH2),3.93(s,3H,CH3),2.74(s, 3H,CH3). 0034 实施例4： 0035 样品对肿瘤细胞的活性筛选 0036 采用四甲基氮唑蓝比色法(MTT)测定了目标。

12、物的体外抗肿瘤活性。 供试对象为人 肝癌细胞株HepG2。 选择5-氟尿嘧啶(5-FU)作为阳性对照药。 取处于指数生长期的人癌细胞 HepG2制成1104个细胞/mL的细胞悬液， 接种于96孔板中， 在37、 5CO2培养箱中培养24 小时。 接着将待测化合物的供试液(10 L)加入测试孔中， 每个浓度设5个平行孔， 并使用等 量的DMSO作空白对照， 在5CO2培养箱中培养72小时后， 弃上清液， 每孔加MTT(2mg/mL in PBS)20 L， 继续培养4小时后， 吸弃培养基， 每孔加入150 L DMSO， 在振动器振荡10分钟溶解 形成的蓝紫色沉淀， 接着用酶标仪在490nm波长。

13、测定OD值， 计算细胞抑制率。 细胞抑制率 (阴性对照组OD值-受试物组OD值)/阴性对照组OD值100。 以简化概率单位法计算出IC50 值。 0037 表1.Ia-Ic的细胞毒性数据(IC50, M) 0038 化合物HepG2 Ia27.99 Ib21.05 Ic34.66 5-FU37.80 0039 由试验结果(表1)可以看出， 所合成的化合物Ia-Ic对人肝癌细胞株HepG2都显示 出较好的抑制效果， 其化合物Ia-Ic对人肝癌细胞株HepG2的抗肿瘤活性要高于阳性对照药 5-氟尿嘧啶(5-FU)。 实验结果表明， 在氰基丙烯酸酯活性单元中引入1-甲基-3-(4-氟苯 基)-4-氯吡唑基团， 形成的化合物对人肝癌细胞株HepG2展现出较好的抗肿瘤作用。 0040 以上显示和描述了本发明的基本原理、 主要特征和本发明的优点。 本行业的技术 说明书 6/7 页 9 CN 111333578 A 9 人员应该了解， 本发明不受上述实例的限制， 上述实例和说明书中描述的只是说明本发明 的原理， 在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进， 这些变化和 改进都落入要求保护的本发明范围内。 本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同 物界定。 说明书 7/7 页 10 CN 111333578 A 10 。