乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法.pdf

《乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法.pdf（16页完成版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010282752.7 (22)申请日 2020.04.08 (71)申请人 山东省兽药质量检验所 （山东省畜 产品质量检测中心） 地址 250022 山东省济南市槐荫区槐村街 68号 (72)发明人 魏秀丽张传津张志民李有志 杨林杨志昆冯涛 (74)专利代理机构 北京元本知识产权代理事务 所(普通合伙) 11308 代理人 李斌 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) 。

2、G01N 30/04(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G01N 30/12(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测 方法 (57)摘要 本发明属于兽药检测技术领域， 具体涉及一 种乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法。 该 检测方法， 采用超高效液相色谱-二极管阵列检 测法， 使用光谱图进行鉴别， 使用色谱图进行含 量定量检测。 并且建立了一测多评法， 使用和厚 朴酚为内参物， 建立和厚朴酚与盐酸巴马汀、 盐 酸小檗碱、 厚朴酚间的。

3、相对校正因子， 用所得相 对校正因子进行含量计算， 实现一测多评。 该方 法能够对四中物质进行快速定性和定量， 方法精 确度和重现性高， 减少了对照品的购买和投入， 节约了资金。 权利要求书1页 说明书7页 附图7页 CN 111323518 A 2020.06.23 CN 111323518 A 1.一种乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 乌锦颗粒采用超高效 液相色谱-二极管阵列检测法， 使用光谱图进行鉴别， 使用色谱图进行含量定量检测。 2.根据权利要求1所述的乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 使用 色谱图进行含量定量检测的具体。

4、步骤如下： (1)分别称取盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚对照品， 并分别用有机溶剂稀 释并定容， 获得盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚的储备液； (2)分别取上述的4种储备液， 加入有机溶液定容， 作为标准工作液； 取不同体积的样 品， 进样， 等度洗脱， PDA检测器分析， 通过超高效液相色谱仪进行定性定量检测； 取峰面积 和对照品的量制作标准曲线； (3)采用保留时间和光谱图进行定性鉴别， 进行定量测定； (4)取样品， 加乙腈与磷酸水溶液置于离心管中， 震荡， 室温离心， 取上清， 滤膜过滤， 取 样品进样， 测试； (5)使用超高效液相色谱仪器， 同时对四。

5、种成分盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚 朴酚进行定量测定； (6)建立了一测多评法QAMS， 使用和厚朴酚为内参物， 建立和厚朴酚与盐酸巴马汀、 盐 酸小檗碱、 厚朴酚间的相对校正因子， 用所得相对校正因子进行含量计算， 实现一测多评； 所述步骤(6)盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚的相对校正因子计算方法为： 分别按公式fk/m0.955Wk/Wm(Am/Ak)、 fk/m0.979Wk/Wm(Am/Ak)、 fk/m0.998 Wk/Wm(Am/Ak)计算盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚的相对校正因子， 其中0.955、 0.979、 0.998分别为盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、。

6、 厚朴酚的校正系数； 盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴 酚和内参物和厚朴酚间的相对校正因子分别为3.876、 4.419、 1.187； 式中Ak和Wk分别为内 参物的峰面积和浓度， Am和Wm分别为其他组分m的峰面积和浓度。 3.根据权利要求2所述的乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 所述 步骤(1)中， 有机溶剂为甲醇。 4.根据权利要求2所述的乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 所述 步骤(2)分别取上述的4种储备液2mL， 加入甲醇定容至10mL， 作为标准工作液； 取0.1 L、 0.2 L、 0.5 L、 1 L、 2 L。

7、、 3 L、 5 L， 进样， 流速0.25mL/min， 等度洗脱， 超高效液相色谱仪， PDA检 测器分析190400nm， 定性定量检测； 取峰面积和对照品的量做标准曲线。 5.根据权利要求2所述的乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 所述 步骤(3)采用保留时间和光谱图进行定性鉴别， 在255nm下进行定量测定。 6.根据权利要求2所述的乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 所述 步骤(4)取乌锦颗粒样品10g研磨成均匀一致的细粉， 精确取样品0.2g， 加入5mL乙腈和5mL 质量浓度为0.1磷酸水溶液至15mL离心管， 在20。

8、0rpm/min下震荡10min， 10000rpm/min室 温离心5min， 取上清， 0.22um滤膜过滤， 取样品2 L进样， 测试。 7.根据权利要求2所述的乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 其特征在于， 所述 步骤(5)用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， CSHTMC18为色谱柱， 2.1*100mm， 粒径1.7um； 以 乙腈0.1磷酸溶液十二烷基硫酸钠， 体积比为50： 50： 0.1为流动相， 进样量2 L， 检测 波长为255nm， 流速0.25ml/min， 柱温35， 进样室温度10； 理论塔板数均大于8000， 同时 对四种成分进行定量测定。 权利要。

9、求书 1/1 页 2 CN 111323518 A 2 一种乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法 技术领域 0001 本发明属于兽药检测技术领域， 具体涉及一种乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检 测方法。 背景技术 0002 中华人民共和国农业部公告2019年第164号， 颁布了乌锦颗粒获得了新兽药证书， 并颁布其检测质量标准。 乌锦颗粒 【功能】 涩肠止泻， 清热燥湿。【主治】 羔羊痢疾。 0003 标准具体如下： 0004 【鉴别】 (1)取本品5g， 研细， 加甲醇30ml， 加热回流30分钟， 放冷， 滤过， 蒸干， 残渣 加水20ml使溶解， 用乙醚提取3次， 每。

10、次20ml， 合并乙醚液， 挥干， 残渣加甲醇1ml使溶解， 作 为供试品溶液。 取地锦草对照药材1g， 同法制成对照药材溶液。 再取没食子酸对照品， 加甲 醇制成每1ml含1mg的溶液， 作为对照品溶液。 按照薄层色谱法(附录0502)试验， 吸取供试品 溶液4 l， 对照药材溶液和对照品溶液各2 l， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的 硅胶G薄层板上， 以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(5:5:0.5)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以1 三氯化铁乙醇溶液显色。 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显 相同颜色的斑点。 0005 (2)取本品5g， 研细， 加甲。

11、醇25ml， 超声处理30分钟， 滤过， 滤液作为供试品溶液。 另 取黄连对照药材0.25g， 同法制成对照药材溶液。 再取盐酸小檗碱对照品， 加甲醇制成每1ml 含1mg的溶液， 作为对照品溶液。 按照薄层色谱法(附录0502)试验， 吸取供试品溶液5 l， 对 照药材溶液3 l， 对照品溶液1 l， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上， 以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3:3.5:1:1.5:0.5:1)为展开剂， 置用浓 氨试液预饱和20分钟的展开缸内， 展开， 取出， 晾干， 置紫外灯(365nm)下检视。 供试品色谱 中， 在与对照药材色谱和对照品色。

12、谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。 0006 (3)取本品10g， 研细， 加水30ml使溶解， 用石油醚(30-60)振摇提取2次， 每次 30ml。 合并石油醚液， 蒸干， 残渣加乙酸乙酯1ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取厚朴酚对照 品、 和厚朴酚对照品， 加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液， 作为对照品溶液。 按照薄层色 谱法(附录0502)试验， 吸取供试品溶液5 l、 对照品溶液2 l， 分别点于同一以硅胶G薄层板 上， 以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(5:2:4:0.5)为展开剂， 预饱和10分钟， 展开， 取出， 晾干， 喷以1香草醛的10硫酸乙醇溶液， 在。

13、105加热至斑点清晰。 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应位置上， 显相同颜色的斑点。 0007 【检查】 应符合颗粒剂项下有关的各项规定(附录0106)。 0008 【含量测定】 黄连按照高效液相色谱法(附录0512)测定。 0009 色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以乙腈-水(47： 53)(1000ml水中含磷酸二氢钾3.4g与十二烷基磺酸钠1.7g)为流动相； 检测波长为347nm。 理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。 0010 对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每1ml含80 g 说明书 1/7 页 3 CN 111。

14、323518 A 3 的溶液， 滤过， 即得。 0011 供试品溶液的制备取本品研细粉末1g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加甲醇 25ml， 密塞， 称定重量， 超声30分钟， 放冷， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 静置， 取上清液， 滤 过， 取续滤液， 即得。 0012 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 0013 本品含黄连按盐酸小檗碱(C20H17NO4HCl)计， 每1g不得少于1.60mg。 0014 厚朴按照高效液相色谱法(附录0512)测定。 0015 色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以甲。

15、醇-水(78: 22)为流动相； 检测波长为294nm。 理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于4000。 0016 对照品溶液的制备取厚朴酚对照品、 和厚朴酚对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成 每1ml含厚朴酚40 g、 和厚朴酚24 g的溶液， 即得。 0017 供试品溶液的制备取本品研细粉末1g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加甲醇 25ml， 密塞， 称定重量， 超声处理30分钟， 放冷， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 静置， 取上清 液， 滤过， 取续滤液， 即得。 0018 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 0019 本品。

16、含厚朴以厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量计， 每1g不得少于 1.70mg。 0020 采用该方法鉴别结果稳定、 明显、 重现性好， 但是薄层鉴别所用的试剂繁多， 采用 了对人体和环境危害大、 污染大的环己烷、 异丙醇、 石油醚、 乙酸乙酯等物质， 而且， 斑点容 易受相对湿度、 温度等各种外界因素的干扰。 对主成分进行定性和定量测定时， 需要配制两 次不同的流动相， 采用不同的色谱条件， 来进行检测， 费时费力， 一个样品的检测， 至少需要 两三天左右的时间。 发明内容 0021 为了解决上述的技术问题， 本发明提供了一种快速定性定量乌锦颗粒的检测方 法。 00。

17、22 本发明是通过下述的技术方案来实现的： 0023 一种乌锦颗粒的UPLC-PDA联合QAMS的检测方法， 乌锦颗粒采用超高效液相色谱- 二极管阵列检测法， 使用光谱图进行鉴别， 使用色谱图进行含量定量检测。 0024 优选的， 上述的方法中， 使用色谱图进行含量定量检测的具体步骤如下： 0025 (1)分别称取盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚对照品， 并分别用有机溶 剂稀释并定容， 获得盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚的储备液； 0026 (2)分别取上述的4种储备液， 加入有机溶液定容， 作为标准工作液； 取不同体积的 样品， 进样， 等度洗脱， PDA检测器。

18、分析， 通过超高效液相色谱仪进行定性定量检测； 取峰面 积和对照品的量制作标准曲线； 0027 (3)采用保留时间和光谱图进行定性鉴别， 进行定量测定； 0028 (4)取样品， 加乙腈与磷酸水溶液置于离心管中， 震荡， 室温离心， 取上清， 滤膜过 说明书 2/7 页 4 CN 111323518 A 4 滤， 取样品进样， 测试； 0029 (5)使用超高效液相色谱仪器， 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， CSHTMC18为色 谱柱， 2.1*100mm， 粒径1.7um； 以乙腈0.1磷酸溶液十二烷基硫酸钠(50： 50： 0.1)为流 动相， 进样量2 L， 检测波长为255nm， 流。

19、速0.25ml/min， 柱温35， 进样室温度10。 理论塔 板数均大于8000， 同时对四种成分进行定量测定； 0030 (6)建立了一测多评法(QAMS)， 使用和厚朴酚为内参物， 建立和厚朴酚与盐酸巴马 汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚间的相对校正因子， 用所得相对校正因子进行含量计算(计算值)， 实现一测多评； 0031 所述步骤(6)盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚的相对校正因子计算方法为： 0032 分别按公式fk/m0.955Wk/Wm(Am/Ak)、 fk/m0.979Wk/Wm(Am/Ak)、 fk/m 0.998Wk/Wm(Am/Ak)计算盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚的。

20、相对校正因子， 其中0.955、 0.979、 0.998分别为盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚的校正系数； 盐酸巴马汀、 盐酸小檗 碱、 厚朴酚和内参物和厚朴酚间的相对校正因子分别为3.876、 4.419、 1.187； 0033 所述步骤(1)中， 有机溶剂为甲醇。 0034 所述步骤(2)分别取上述的4种储备液2mL， 加入甲醇定容至10mL， 作为标准工作 液； 取0.1 L、 0.2 L、 0.5 L、 1 L、 2 L、 3 L、 5 L， 进样， 流速0.25mL/min， 等度洗脱， 超高效液 相色谱仪， PDA检测器分析190400nm， 定性定量检测； 取峰面积和对照品。

21、的量做标准曲线。 0035 所述步骤(3)采用保留时间和光谱图进行定性鉴别， 在255nm下进行定量测定。 0036 所述步骤(4)取乌锦颗粒样品10g研磨成均匀一致的细粉， 精确取样品0.2g， 加入 5mL乙腈和5mL质量浓度为0.1磷酸水溶液至15mL离心管， 在200rpm/min下震荡10min， 10000rpm/min室温离心5min， 取上清， 0.22um滤膜过滤， 取样品2 L进样， 测试。 0037 测定乌锦颗粒中4种主要成分盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚的含量， 并与外标法测定结果进行比较， 完全证明了QAMS的可行性。 0038 本发明的有益效果在于，。

22、 采用本发明的方法对乌锦颗粒中的成分进行检测， 通过 光谱图、 色谱图、 保留时间、 峰面积等参数、 结合一测多评法， 能对4种主要成分盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚进行快速定性和定量， 方法灵敏度、 精确度和重现性高。 附图说明 0039 图1为盐酸巴马汀标准曲线图； 0040 图2为盐酸小檗碱标准曲线图； 0041 图3为和厚朴酚标准曲线图； 0042 图4为厚朴酚标准曲线图； 0043 图5为由上而下依次为盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚药物光谱图； 0044 图6为255nm乌锦颗粒色谱图； 0045 图7为265nm乌锦颗粒色谱图； 0046 图8为27。

23、5nm乌锦颗粒色谱图； 0047 图9为292nm乌锦颗粒色谱图； 0048 图10为229nm乌锦颗粒色谱图； 0049 图11为348nm乌锦颗粒色谱图。 说明书 3/7 页 5 CN 111323518 A 5 0050 图12为255nm混合对照品色谱图； 具体实施方式 0051 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明， 以便本领域的技术人员更了解 本发明， 但并不因此限制本发明。 0052 实施例1 0053 一种乌锦颗粒的检测方法， 包括以下的步骤： 0054 (1)分别称取盐酸小檗碱、 盐酸巴马汀、 和厚朴酚、 厚朴酚对照品， 并分别用甲醇稀 释并定容， 获得四种药物的储备液。

24、； 0055 具体的： 0056 盐酸小檗碱对照品， 含量86 .7， 中国食品药品检定研究院提供， 精密称取 30.09mg， 用甲醇稀释并定容至100mL； 0057 盐酸巴马汀对照品， 含量86 .2， 中国食品药品检定研究院提供， 精密称取 10.38mg， 用甲醇稀释并定容至100mL； 0058 和厚朴酚对照品， 含量98.4， 中国药品生物制品检定所提供， 精密称取12.52mg， 用甲醇稀释并定容至100mL； 0059 厚朴酚对照品， 含量98.8， 中国药品生物制品检定所提供， 精密称取15.81mg， 用 甲醇稀释并定容至100mL； 0060 分别获得盐酸巴马汀、 盐酸。

25、小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚的储备液； 0061 各取上述4种储备液2mL， 加甲醇定容至10mL， 作为标准工作液。 取0.1 L、 0.2 L、 0.5 L、 1 L、 2 L、 3 L、 4 L、 5 L、 6 L， 进样， 流速0.25mL/min， 等度洗脱， waters超高效液相色 谱仪， PDA检测器分析190-400nm， 定性定量检测。 0062 使用超高效液相色谱仪器， 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， CSHTMC18为色谱 柱， 2.1*100mm， 粒径1.7um； 以乙腈0.1磷酸溶液十二烷基硫酸钠(50： 50： 0.1)为流动 相， 检测波长为255nm， 流。

26、速0.25ml/min， 柱温35度， 进样室温度10度。 理论塔板数均大于 8000， 分离度和准确度满足要求。 单波长能同时对四种成分进行定量测定。 0063 表1盐酸巴马汀标准曲线 0064 0065 0066 表2盐酸小檗碱标准曲线 0067 进样体积 L盐酸小檗碱进样量ng峰面积 说明书 4/7 页 6 CN 111323518 A 6 0.210.44159953 0.526.09398865 152.18799601 2104.361590817 3156.532425364 0068 表3和厚朴酚的标准曲线 0069 进样体积 L和厚朴酚进样量ng峰面积 0.24.921752。

27、0 0.512.343025 124.6285631 249.24169879 373.86256782 5123.1421963 0070 表4厚朴酚标准曲线 0071 进样体积 L厚朴酚进样量ng峰面积 0.26.3226347 0.515.8165231 131.62130567 263.2259002 394.86392145 5158.1642695 0072 (2)分别取上述的4种储备液2mL， 加入甲醇定容至10mL， 作为标准工作液； 取0.1 L、 0.2 L、 0.5 L、 1 L、 2 L、 3 L、 5 L， 进样， 流速0.35mL/min， 等度洗脱， waters。

28、超高效液相色 谱仪， PDA检测器分析190400nm， 定性定量检测； 取峰面积和对照品的量做标准曲线； 0073 (3)采用保留时间和光谱图进行定性鉴别， 在255nm下进行定量测定； 0074 如附图4所示， 四种药物的光谱图， 本发明人使用保留时间和光谱图进行定性鉴 别。 盐酸巴马汀的最大吸收波长226.2nm、 275nm、 348.7nm； 盐酸小檗碱的最大吸收波长 229.2nm、 266nm、 348.6nm； 和厚朴酚的最大吸收波长208.5nm、 255.5nm、 292.9nm， 厚朴酚的 最大吸收波长200.1nm、 289.8nm， 由于盐酸小檗碱的含量较高， 229。

29、nm、 265nm、 348nm、 275nm 处， 峰面积容易超载形成肩峰， 292nm和厚朴酚的响应值偏低， 通过样品不同波长峰面积相 应值的比较， 同时为了兼顾4种药物的峰形， 选择了和厚朴酚的最大吸收波长255nm作为定 量波长， 进行定量测定。 0075 表5不同波长下的主成分峰面积响应值表 0076 波长盐酸巴马汀盐酸小檗碱和厚朴酚厚朴酚 229nm61003527706258809241075522 255nm4905172054028613635259494 265nm63971427722698479097106008 275nm63580023395282964672156。

30、23 说明书 5/7 页 7 CN 111323518 A 7 292nm286398985924390302374740 348nm67096725230851814040 保留时间(min)3.453.616.159.22 0077 色谱柱耐受性检查： 保持0.25mL/min流速不变， 改变柱温33、 35、 38、 40， 保留时间上下浮动在0.35min以内； 保持35柱温不变， 流速0.24min、 0.25min、 0.26min保 留时间上下浮动在0.35min以内； 分离度均满足要求， 而且样品检测含量均不受影响。 0078 (4)样品的处理和检测 0079 取样品10g研磨。

31、成均匀一致的细粉， 精确取样品0.2g， 加入5mL乙腈和5mL质量浓度 为0.1磷酸水溶液至15mL离心管， 在200rpm/min下震荡10min， 10000rpm/min室温离心 5min， 取上清， 0.22um滤膜过滤， 取样品2 L进样， 测试。 0080 样品来源为兽药企业的生产的乌锦颗粒， 由以下重量份数的原料及方法制备而 成： 取乌梅180g地锦草200g黄连120g厚朴120g苍术160茯苓120g山楂100g， 以上七味， 厚朴 用70乙醇回流提取2次， 每次1小时， 合并乙醇液， 减压回收乙醇， 浓缩至相对密度为1.02 1.04(6070)， 得厚朴提取液， 备用。。

32、 其余黄连等六味， 加水煎煮3次， 滤过， 合并滤液， 浓缩至相对密度为1.10-1.20(6070)， 得水煎浓缩液。 水煎浓缩液与厚朴提取液合并， 继续浓缩至相对密度为1.301.35(6070)的稠膏， 加可溶性淀粉和蔗糖适量， 制粒， 干 燥， 制成1000g， 即得。 0081 表6采用外标法检测不同样品中不同成分含量 0082 0083 (5)一测多评方法的建立 0084 建立了一测多评法(QAMS)， 使用和厚朴酚为内参物， 建立和厚朴酚与盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚间的相对校正因子， 用所得相对校正因子进行含量计算(计算值)， 实现 一测多评。 0085 和厚朴酚的保留时。

33、间为T， 相对保留时间的计算： 盐酸巴马汀0.561T、 盐酸小檗碱 0.587T、 厚朴酚1.499T。 0086 表7相对保留时间表 0087 药物名称内参物保留时间各药物保留时间相对保留时间 盐酸巴马汀6.153.450.561 盐酸小檗碱6.153.610.587 和厚朴酚6.156.151 厚朴酚6.159.221.499 0088 以和厚朴酚为内参物， 分别按公式fk/m0.955Wk/Wm(Am/Ak)、 fk/m0.979 说明书 6/7 页 8 CN 111323518 A 8 Wk/Wm(Am/Ak)、 fk/m0.998Wk/Wm(Am/Ak)计算盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱。

34、、 厚朴酚的相对 校正因子， 其中0.955、 0.979、 0.998分别为盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚的校正系数， 校 正系数通过拟合得到。 式中Ak和Wk分别为内参物的峰面积和浓度， Am和Wm分别为其他组分m 的峰面积和浓度。 盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 厚朴酚和内参物和厚朴酚间的相对校正因子分 别为3.876、 4.419、 1.187。 0089 相对校正因子的计算： 0090 表8采用一测多评法计算不同样品中不同成分含量 0091 0092 同时对比采用外标法测定4个成分的含量(实测值)表6， 比较计算值与实测值的差 异， 均小于1。 结果5份乌锦颗粒中4种成分含量的计算值。

35、与实测值无显著差异。 结论QAMS 可用于乌锦颗粒中4种不同成分的含量测定。 0093 本发明的方法前处理简单， 需要的有机溶剂品种和量比薄层色谱少很多， 毒性小， 保护环境和实验者； 并且本发明的方法色谱柱耐受性好， 流速微小改变、 柱温微小改变保留 时间变化极小， 分离度均大于1.5满足要求， 保留时间和峰面积变化极少,峰面积RSD3， 重现性精密度良好。 对照品的标准曲线相关系数均大于0.999， 相关性极好， 并且能同时对4 种主成分盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱、 和厚朴酚、 厚朴酚的进行定性定量测定； 同时建立了一 测多评， 只需要用一支和厚朴酚的对照品， 减少了盐酸巴马汀、 盐酸小檗碱。

36、、 厚朴酚对照品 的使用及资金投入， 能同时计算4种药物的含量； 而且样品前处理简单方便， 使用1种流动相 1种色谱条件， 采用超高效液相色谱仪， 比普通液相色谱仪使用的流动相减少90以上， 产 生废液减少90以上， 符合绿色减排的原则。 本发明的方法检测时间快， 仅需12分钟左右， 每运行一针比普通液相色谱仪节约30分钟左右， 经济方便快捷， 提高了检测效率。 说明书 7/7 页 9 CN 111323518 A 9 图1 图2 说明书附图 1/7 页 10 CN 111323518 A 10 图3 图4 说明书附图 2/7 页 11 CN 111323518 A 11 图5 说明书附图 3/7 页 12 CN 111323518 A 12 图6 图7 说明书附图 4/7 页 13 CN 111323518 A 13 图8 图9 说明书附图 5/7 页 14 CN 111323518 A 14 图10 图11 说明书附图 6/7 页 15 CN 111323518 A 15 图12 说明书附图 7/7 页 16 CN 111323518 A 16 。