测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010473988.9 (22)申请日 2020.05.29 (71)申请人 长沙市如虹医药科技股份有限公司 地址 410007 湖南省长沙市雨花区环保中 路188号国际企业中心7栋A604号 申请人 湖南如虹制药有限公司 (72)发明人 吉丹丹薛琳唐亮 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/60(2006.01) (54)发明名称 一种测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法 (57)摘要 本发明公开了一种测定硫酸羟氯喹中有机 杂质的方法，。

2、 该方法采用以十八烷基硅烷键合硅 胶为填充剂的色谱柱， 以二极管阵列检测器或紫 外检测器为检测器， 流动相由流动相A （NH3-NH4+ 缓冲溶液） 和流动相B （氨水-乙腈混合溶液） 进行 梯度洗脱， 洗脱程序 （不同时间A:B的体积比） 为： 0min （65:35） 15min （65:35） 16min （35:65） 30min （35:65） 30.01min （65:35） 40min （65: 35） 。 本发明的方法专属性强， 可快速检测出硫酸 羟氯喹中有机杂质。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 111474269 A 2020.07.31 CN 11147426。

3、9 A 1.一种测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 其特征在于， 所述方法为HPLC方法， 所述 HPLC方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱， 采用二极管阵列检测器或紫外 检测器， 流动相由流动相A （NH3-NH4+缓冲溶液） 和流动相B （氨水-乙腈混合溶液） 进行梯度洗 脱。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于： 所述流动相的梯度洗脱程序 （不同时间A:B 的体积比） 为： 0min （65:35） 15min （65:35） 16min （35:65） 30min （35:65） 30.01min （65:35） 40min （65:35） 。 3.根据权利要求1所述。

4、的方法， 其特征在于： 检测波长为200nm300nm， 优选为220nm。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于： 流动相流速为0.8ml/min1.2ml/min， 优选 为1.0ml/min。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于： 所述流动相B中氨水:乙腈=0.5:100 （V:V） ， 氨水浓度为10%25%。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于： 所述流动相A中NH3-NH4+的总浓度为 0.01mol/L0.10mol/L。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于： 所述缓冲溶液pH值为9.011.0， 优选为 10.0。 权利要求书 1/1 页 2 CN。

5、 111474269 A 2 一种测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法 技术领域 0001 本发明属于药物分析领域， 具体涉及一种测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法。 背景技术 0002 硫酸羟氯喹是用于治疗盘状红斑狼疮及系统性红斑狼疮， 以及类风湿关节炎等的 药物。 其结构式为： 化学名为2-4- （7-氯-4-喹啉基） 氨基戊基乙氨基-乙醇硫酸盐。 为了确保用药安 全， 对原料药或制剂中的有机杂质都需要进行严格控制。 目前， 中华人民共和国国家标准和 部颁标准、 美国药典USP40和韩国药典第10版中， 均采用薄层色谱法 （TLC方法） 。 经研究发 现， 利用TLC方法来检测硫酸羟氯喹中有机杂质时。

6、， 存在专属性不强、 灵敏度低的问题， 且 TLC方法只能检出有机杂质的限度， 而不能准确测定出有机杂质的含量。 阮圆等在 上海化 工 2018年第9期第19-22页报道了一种定量测定硫酸羟氯喹片有机杂质的高效液相色谱方 法 （HPLC方法） ， 使用Waters Symmetry C8柱， 以甲醇-磷酸二氢钾溶液为流动相进行梯度洗 脱， 流速为1mL/min， 检测波长为254nm。 欧洲药典EP9.0中也报道一种定量测定硫酸羟氯喹 中有机杂质的HPLC方法， 由流动相A和流动相B进行梯度洗脱， 其中流动相A由甲醇-pH7.0缓 冲盐按10:90 （V:V） 组成， 流动相B由甲醇-pH7.。

7、0缓冲盐按85:15 （V:V） 组成， 不同时间流动相 中A： B （体积比） 为： 0min(100:0)1min(100:0)11min(0:100)。 采用上述两个文献报道的 HPLC方法对本公司生产的硫酸羟氯喹原料药进行检测， 并与TLC方法检出结果进行对比， 发 现上述两种HPLC方法有杂质漏检。 为此， 开发一种分离效果好， 不漏检有机杂质， 并能对各 杂质进行准确定量的HPLC方法十分必要， 具有重要的现实意义。 发明内容 0003 本发明要解决的技术问题是克服现有的TLC方法专属性不强、 灵敏度低、 不能准确 定量的缺点， 同时克服现有HPLC方法漏检杂质的缺点， 提供一种专。

8、属性强、 不漏检杂质的 HPLC方法用于硫酸羟氯喹原料药和制剂中有机杂质含量的定量测定。 0004 为解决上述技术问题， 本发明采用以下技术方案： 一种测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 所述方法为HPLC方法， 所述HPLC方法采用以 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱， 采用二极管阵列检测器或紫外检测器， 流动相 由流动相A （NH3-NH4+缓冲溶液） 和流动相B （氨水-乙腈混合溶液） 进行梯度洗脱。 0005 上述测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 优选的， 所述流动相的梯度洗脱程序 （不 说明书 1/4 页 3 CN 111474269 A 3 同时间A:B的体积比） 为： 0min。

9、 （65:35） 15min （65:35） 16min （35:65） 30min （35:65） 30.01min （65:35） 40min （65:35） 。 0006 上述测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 优选的， 所述检测波长为200nm300nm， 更优选为220nm。 0007 上述测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 优选的， 所述流动相流速为0.8ml/min 1.2ml/min， 更优选为1.0ml/min。 0008 上述测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 优选的， 所述流动相B中氨水:乙腈=0.5: 100 （V:V） ， 氨水浓度为10%25%。 0009 上述测定硫酸羟。

10、氯喹中有机杂质的方法， 优选的， 所述流动相A中NH3-NH4+的总浓 度为0.01mol/L0.10mol/L。 0010 上述测定硫酸羟氯喹中有机杂质的方法， 优选的， 所述缓冲溶液pH值为9.0 11.0， 更优选为10.0。 0011 与现有技术相比， 本发明的优点在于： 本发明对硫酸羟氯喹中有机杂质进行分析， 采用C18色谱柱快速准确地测定硫酸羟氯 喹中的有机杂质， 保证了硫酸羟氯喹原料药或制剂的质量可控， 在原料药合成和制剂生产 过程的质量控制方面具有重要意义。 与目前检索到的测定硫酸羟氯喹中有机杂质的HPLC方 法相比， 本发明提供的方法专属性强、 不漏检杂质， 可以更好地控制硫。

11、酸羟氯喹生产和应用 过程中的质量。 附图说明 0012 图1为本发明实施例中空白溶液的典型HPLC图谱 （波长220nm） 。 0013 图2为本发明实施例中供试品溶液的典型HPLC图谱 （波长220nm） 。 0014 图3为本发明对比例中空白溶液的典型HPLC图谱 （波长254nm） 。 0015 图4为本发明对比例中供试品溶液的典型HPLC图谱 （波长254nm） 。 具体实施方式 0016 以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述， 但并不因此而 限制本发明的保护范围。 0017 以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。 0018 实施例 实际样品的测定 （1） 使用仪。

12、器与试剂 Agilent technologies 1100 Series四元低压液相色谱仪 （VWD检测器） ， Sartorius BT25S和Sartorius BSA124S电子天平， 上海雷磁PHSJ-3F型pH计。 0019 冰醋酸 （99.5%） 和氨水 （25%） 均为AR级， 乙腈为HPLC级， 水为华润怡宝纯净水， 硫 酸羟氯喹 （批号： HCQ-20200428-01） 由长沙市如虹医药科技股份有限公司提供。 0020 （2） 色谱测定条件 色谱柱： ACE Excel 5 Super C18, 4.6150mm； 柱温： 30； 进样体积： 10ul； 流速1.0ml/。

13、min； 检测波长： 220nm； 流动相A： pH10.0的NH3-NH4+; 流动相B： 氨水-乙腈溶液。 说明书 2/4 页 4 CN 111474269 A 4 0021 流动相由流动相A和流动相B按表1进行梯度洗脱。 0022 表1 流动相梯度洗脱程序 （实施例方法） 时间， minA， %B， % 06535 156535 163565 303565 30.016535 406535 （3） 溶液的配制 10%醋酸溶液： 取冰醋酸10ml， 用90ml水稀释， 混匀。 0023 流动相A： 精密量取2.5ml氨水于烧杯中， 再加入500ml水， 混匀， 再用10%醋酸溶液 调节溶液。

14、的pH值至10.0。 0024 流动相B： 取2.5ml氨水于烧杯中， 再加入500ml乙腈， 混匀， 即得。 0025 稀释剂 （空白溶液） ： 水； 供试品溶液： 取供试品适量， 精密称定， 用水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的 溶液。 0026 （4） 测定方法与结果 精密量取用0.22 m滤膜过滤后的空白溶液和供试品溶液各10ul， 分别注入色谱仪， 记 录色谱图， 所得色谱图见图1和图2， 供试品溶液的测定结果见表2， 共检出了11个杂质， 总杂 质含量为0.54%。 0027 表2 硫酸羟氯喹 （批号： HCQ-20200428-01） 中杂质测定结果 （实施例方法） 。

15、保留时间， min4.2384.9465.9569.50911.46913.13 各组分含量， %0.0390.050.0130.0080.03799.46 保留时间， min16.45919.19721.72622.01426.14426.586 各组分含量， %0.0210.0180.2250.0410.0430.044 备注： 各组分含量采用峰面积归一化法计算。 0028 对比例 阮圆等报道的方法测定实际样品 （1） 仪器与试剂 Agilent technologies 1100 Series四元低压液相色谱仪 （VWD检测器） ， Sartorius BT25S和Sartorius B。

16、SA124S电子天平， 上海雷磁PHSJ-3F型pH计。 0029 磷酸二氢钾、 三乙胺和KOH均为AR级， 磷酸 （85%） 和甲醇均为HPLC级， 水为华润怡宝 纯净水， 硫酸羟氯喹 （批号： HCQ-20200428-01） 由长沙市如虹医药科技股份有限公司提供。 0030 （2） 色谱测定条件 色谱柱： Athena C8-wp, 120A, 4.6150mm, 5um； 柱温： 25； 进样体积： 20ul； 流速1.0ml/min； 检测波长： 254nm； 流动相由pH8.0磷酸盐缓冲液和甲醇混合而成， 并按表3程序进行梯度洗脱。 0031 表3 流动相梯度洗脱程序 （对比例方法。

17、） 时间， minpH8.0磷酸盐缓冲液， %甲醇， % 说明书 3/4 页 5 CN 111474269 A 5 05347 203367 20.55347 305347 （3） 溶液的配制 KOH溶液 （约1mol/L） ： 称取5.6g的KOH， 加水100ml溶解并稀释， 混匀， 即得。 0032 稀磷酸溶液 （约0.2mol/L） ： 量取磷酸 （85%） 11.5ml， 用水稀释至500ml， 混匀， 即得。 0033 pH8.0磷酸盐缓冲液： 称取2.72g磷酸二氢钾， 加900ml水使溶解， 再加入2.00ml三 乙胺， 然后用KOH溶液或稀磷酸溶液调节溶液pH至8.0， 转移。

18、至1000ml容量瓶中， 用水稀释至 刻度， 摇匀， 即得。 0034 稀释剂 （空白溶液） ： pH8.0磷酸盐缓冲液-甲醇以体积比1:1混合而成。 0035 供试品溶液： 取供试品适量， 精密称定， 用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约 含1mg的溶液。 0036 （4） 测定方法与结果 精密量取用0.22 m滤膜过滤后的空白溶液和供试品溶液各20ul， 分别注入色谱仪， 记 录色谱图， 所得色谱图见图3和图4， 供试品溶液的测定结果见表4， 只检出杂质4个， 总杂质 含量为0.11%。 0037 表4 硫酸羟氯喹 （批号： HCQ-20200428-01） 中杂质测定结果 （对比例方法。

19、） 保留时间， min12.73313.57216.35320.22322.026 各组分含量， %0.050.0380.01299.8890.011 备注： 各组分含量采用峰面积归一化法计算。 0038 由上述实施例可知， 本发明的检测方法不漏检杂质， 方法的专属性强， 适用于硫酸 羟氯喹原料药和制剂的质量控制。 0039 以上所述， 仅是本发明的较佳实施例而已， 并非对本发明作任何形式上的限制。 虽 然本发明已以较佳实施例揭示如上， 然而并非用以限定本发明。 任何熟悉本领域的技术人 员， 在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下， 都可利用上述揭示的方法和技术内 容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰， 或修改为等同变化的等效实施例。 因此， 凡是未脱离本发明技术方案的内容， 依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单 修改、 等同替换、 等效变化及修饰， 均仍属于本发明技术方案保护的范围内。 说明书 4/4 页 6 CN 111474269 A 6 图 1 图 2 图 3 说明书附图 1/2 页 7 CN 111474269 A 7 图 4 说明书附图 2/2 页 8 CN 111474269 A 8 。