禽胆粉的制备方法.pdf

《禽胆粉的制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《禽胆粉的制备方法.pdf（10页完成版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010548777.7 (22)申请日 2020.06.16 (71)申请人 重庆极泽生物科技有限公司 地址 400700 重庆市北碚区云汉大道117号 附581号 (72)发明人 赵志斌秦松柏王丹丹程雷 丁峰张苏敏罗德彬 (74)专利代理机构 重庆强大凯创专利代理事务 所(普通合伙) 50217 代理人 成艳 (51)Int.Cl. A61K 35/57(2015.01) (54)发明名称 一种禽胆粉的制备方法 (57)摘要 本发明涉及生物医药领域， 具体涉及一种禽 胆粉。

2、的制备方法， 包括冷却凝析步骤： 维持胆汁 粗品的温度在2-166h或者6h以上。 本制备方法 加入了冷却凝析步骤， 解决了脂类杂质难以充分 去除的技术问题， 由此制备方法获得的禽胆粉中 的牛磺鹅去氧胆酸的含量较高。 本方法可以应用 于禽胆粉的生产精制的实践操作中， 克服现有的 禽胆粉杂质较多、 有效成分含量较低、 制作时间 长、 工艺过程难以控制且容易腐败变质等缺陷。 权利要求书1页 说明书8页 CN 111494424 A 2020.08.07 CN 111494424 A 1.一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于， 包括冷却凝析步骤： 维持胆汁粗品的温度大于 0且小于或者等于16。 2.根。

3、据权利要求1所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于， 维持胆汁粗品的温度大 于0且小于或者等于16的时长为6-24h。 3.根据权利要求2所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于， 过滤处理经过冷却凝析 步骤的胆汁粗品， 并取液相， 获得冷凝产物； 所述冷凝产物依次经过滤和浓缩处理之后， 获 得浸膏 。 4.根据权利要求3所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于， 在冷却凝析步骤之后设 有水沉步骤： 将浸膏 分散于水中， 获得浸膏 分散液； 所述浸膏 分散液依次经过滤和浓缩 处理之后， 获得浸膏。 5.根据权利要求4所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于： 将浸膏 分散于水中的 方法为： 。

4、将浸膏 分散在浸膏 的体积的2-10倍的水中， 并在2-16的环境中放置6-24h。 6.根据权利要求5所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于： 在水沉步骤之后设有醇 沉步骤： 将浸膏分散于乙醇溶液中， 获得浸膏分散液； 所述浸膏分散液依次经过滤和 浓缩处理之后， 获得浸膏。 7.根据权利要求6所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于： 将浸膏分散于乙醇溶 液中的方法为： 将浸膏分散在浸膏的体积的2-10倍的90-95乙醇中， 并在2-16的环 境中放置2-24h。 8.根据权利要求7所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于： 在醇沉步骤之后设有干 燥步骤： 对浸膏依次进行减压浓缩和干燥处理。

5、， 获得禽胆粉。 9.根据权利要求8所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于： 对冷凝产物、 浸膏 分散 液和浸膏分散液进行过滤时， 使用的过滤器的孔径为0.45-5um。 10.根据权利要求9所述的一种禽胆粉的制备方法， 其特征在于： 使用旋转式刮板薄膜 蒸发器对过滤后的冷凝产物和过滤后的浸膏 分散液进行浓缩处理。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111494424 A 2 一种禽胆粉的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及生物医药领域， 具体涉及一种禽胆粉的制备方法。 背景技术 0002 熊胆粉， 由熊科动物黑熊或棕熊干燥胆囊胆汁得到， 但目前我国天然熊胆粉的年 产量约30吨， 无法满。

6、足人们日益增长的健康需求。 为了解决天然熊胆粉短缺的问题， 大量人 工熊胆粉应运而生， 例如： 以其他动物胆为原料， 将其中的牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)通过化 学或生物方法转化为牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)， 获得人工熊胆粉。 转化获得高质量的人工熊 胆粉的前序步骤为禽胆粉的制备， 即从禽胆中分离出胆汁粗品， 再对胆汁粗品进行纯化、 浓 缩和干燥等操作， 最后获得禽胆粉。 禽胆粉的品质对人工熊胆粉的品质有着至关重要的影 响。 胆汁粗品混悬水溶液， 其中含有大量杂质(除牛磺鹅去氧胆酸外的其他物质)。 其中， 脂 类物质是其中主要的杂质， 也是影响禽胆粉的品质和后续的牛磺鹅去氧胆酸的生物转化效 。

7、率的重要因素。 现有技术中去除油脂的过程， 基本上都是用有毒害作用的有机溶剂(石油醚 或乙酸乙酯等)萃取去除， 有机溶剂的成本高， 难回收， 易挥发， 易燃易爆， 污染大， 操作难度 大。 最关键的是， 对于胆汁来说， 有机溶剂的除脂效果并不理想。 亟需开发一种适合于大规 模生产， 并且除脂效果佳的胆汁的分离纯化方法以及禽胆粉的制备方法。 发明内容 0003 本发明意在提供一种禽胆粉的制备方法， 本制备方法加入了冷却凝析步骤， 解决 了脂类杂质难以充分去除的技术问题， 由此制备方法获得的禽胆粉中的牛磺鹅去氧胆酸的 含量较高。 0004 为达到上述目的， 本发明采用如下技术方案： 0005 一种。

8、禽胆粉的制备方法， 包括冷却凝析步骤： 维持胆汁粗品的温度大于0且小于 或者等于16。 0006 本方案的原理及优点是： 本方案通过将胆汁粗品的温度维持在大于0且小于或 者等于16温度范围内， 使得胆汁粗品中的脂类物质充分冷凝， 减少制得的禽胆粉成品中 的脂类物质的含量， 提升禽胆粉的品质。 0007 胆汁粗品的制备过程一般为： 将禽胆(胆囊)割破并收集胆囊腔中流出的胆汁， 收 集获得的胆汁即为胆汁粗品。 禽胆是从禽类动物(例如鸡、 鸭和鹅等)的体内取出， 禽胆外粘 黏有大量的结缔组织、 肝脏组织、 肠道组织和胰脏组织等(在本方案中简称为非胆囊组织)。 所以在取得的胆汁粗品中会混有一定的非胆囊。

9、组织的碎片， 而在这些非胆囊组织中脂类物 质的含量较高， 若不能进行有效分离， 将会较为严重地影响最终目的产物禽胆粉的质量。 除 了非胆囊组织中带来的脂类物质杂质之外， 禽胆胆囊也会给胆汁粗品中带去大量的杂质 (包括脂质类的杂质)。 将胆汁从胆囊中取出获得胆汁粗品， 其中难免混杂有胆囊壁上的细 胞。 并且胆囊内面以粘膜覆盖， 粘膜上皮为单层柱状。 细胞游离面有许多微绒毛， 胆囊内面 的细胞很容易混合进入胆汁当中， 所以胆汁粗品中还含有较大量的胆囊组织细胞(胆囊组 说明书 1/8 页 3 CN 111494424 A 3 织细胞的内容物会被混合在胆汁粗品当中)。 除了上述两种来源之外， 胆汁粗品。

10、当中的脂类 杂质还来源于胆汁本身。 胆汁的主要成分为胆酸、 胆盐、 胆色素、 胆固醇和卵磷脂等， 脂溶性 胆色素和卵磷脂都是需要去除的脂类杂质。 综上， 胆汁粗品包含非胆囊组织碎片， 胆囊组织 碎片以及胆汁。 胆汁粗品中的脂类杂质的来源主要为非胆囊组织(非胆囊组织碎片)来源的 脂类杂质、 胆囊组织(胆囊组织碎片)来源的脂类杂质以及胆汁来源的脂类杂质。 0008 将胆汁粗品的温度维持在0-16(不包括0)， 可以让胆汁粗品中的脂类杂质凝 固(主要是非胆囊组织来源的脂类杂质和胆囊组织来源的脂类杂质)， 而胆汁并不会凝固。 经冷凝处理之后， 目标物质胆汁(包括胆汁中胆酸、 胆盐、 胆色素、 胆固醇和。

11、卵磷脂等物质) 呈液态， 非胆汁来源的脂类杂质以及非胆囊组织碎片和胆囊组织碎片成固态， 可通过简单 的过滤操作将胆汁和上述杂质分开。 0009 在现有技术中， 很少采用通过冷却凝析的手段将脂类物质和其他成分分开， 因为 普遍认为这种方法不能使脂类物质充分分离， 被认为是一种分离效率较低的方式。 并且脂 类物质的凝固会夹带大量的其他成分， 如果其他成分中含有目的成分， 会导致目的成分的 大量损耗。 现有技术中通常采用有机溶剂萃取的方法， 利用相似相容的原理， 将体系中的脂 质物质除去。 传统禽胆粉制备工艺中， 使用有机溶剂石油醚萃取去除胆汁粗品里的油脂， 石 油醚购买成本高， 使用后的石油醚极难。

12、回收， 仪器场地需要做防爆， 对环境污染大， 对操作 人员身体有损伤。 并且使用有机溶剂除脂耗时较长， 在此期间， 胆汁中细菌滋生， 影响最终 制得的禽胆粉的品质。 发明人尝试了多种替代有机溶剂的除脂类物质的方法， 最终发现冷 却凝析这种曾经被认为是分离效率很低的方法， 却非常适合于对胆汁粗品进行除脂操作。 由实验例1中的数据可知， 使用冷却凝析的方法获得的产物相对于石油醚萃取获得的产物 在油脂含量和目的成分牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)的含量上均具有一定优势。 0010 发明人进而分析了产生上述现象的原因： 胆汁为一个相对独立的乳化体系， 在不 进行溶剂处理的状态下， 胆汁和非胆囊组织碎片、 。

13、胆囊组织碎片以及这两种碎片中溢出的 细胞内容物之间是相对独立的。 直接对胆汁粗品进行冷却凝析处理， 非胆囊组织碎片和胆 囊组织碎片中的脂质就会逐渐发生凝固， 而在0-16(不包括0)的温度下胆汁仍然保持 液态， 这样通过简单过滤就可以使得胆汁这个乳化体系和来自非胆囊组织碎片和胆囊组织 碎片的脂类杂质分开。 在本方案中， 如果冷却凝析的温度低于或等于0， 胆汁内部发生结 晶和凝固， 导致胆汁无法和脂类杂质分离； 如果冷却凝析的温度高于16， 脂类杂质无法有 效凝固。 在0以上的前提下， 温度越低脂类杂质的分离效果越好。 另外， 如果采用有机溶剂 处理胆汁粗品， 胆汁的相对独立的乳化体系会被有机溶。

14、剂破坏， 非胆囊组织来源的脂类杂 质和胆囊组织来源的脂类杂质会和胆汁内的成分(胆酸、 胆盐、 胆色素、 胆固醇和卵磷脂)混 合， 增加了非胆囊组织来源的和胆囊组织来源的脂类杂质从体系中分离去除的难度。 0011 综上所述， 本方案的有益效果在于： 0012 (1)巧妙的利用动物油脂凝固点高的特点， 用冷却凝析的方法使油脂冷凝出来， 然 后过滤， 除去了绝大部分的油脂。 这种大家忽略的相对原始的方法反而才是最合适的， 所以 本发明采用低温析出加精密过滤的方法， 低温使动物油脂可以自然凝析出来， 通过过滤通 量较大的精密过滤设备把油脂和低温沉降的杂质过滤掉， 工艺简单可控。 0013 (2)避免了。

15、有机溶剂的使用所带来的安全性差、 成本高和有机残留等问题。 发明人 尝试过一些低毒害作用的有机试剂， 除脂效果并不好， 并也存在操作难度大的问题。 经多方 说明书 2/8 页 4 CN 111494424 A 4 尝试， 发现采用冷凝的方法可以使禽胆汁油脂凝固并漂浮于液体表面， 通过简单的过滤可 以比较彻底的去除油脂凝块。 过滤后， 检测发现有效物质并没有明显减少， 相对含量还有所 增加。 0014 (3)减少了禽胆粉精制所需时间， 一次冷凝便可以去除大部分脂类杂质。 在工业化 大生产的有机溶剂萃取操作中， 需要多次萃取才能实现对脂类杂质的去除， 每次萃取时间 至少在12小时以上。 0015 。

16、进一步， 维持胆汁粗品的温度大于0且小于或者等于16的时长为6-24h。 0016 采用上述方案， 冷却凝析步骤的时间下限为6h， 6h或者6h以上的冷却凝析时间可 保证绝大部分脂质凝固； 冷却凝析步骤的时间上限为24h， 是为了避免时间过长、 细菌等物 质在胆汁粗品中滋生， 以保证最终获得禽胆粉产品的安全性和品质。 将胆汁粗品的温度维 持在0-16(不包括0)， 持续6h及其以上的时间可以让胆汁粗品中的大部分脂类杂质凝 固(主要是非胆囊组织来源的脂类杂质和胆囊组织来源的脂类杂质)， 而胆汁并不会凝固。 经冷凝处理之后， 目标物质胆汁(包括胆汁中胆酸、 胆盐、 胆色素、 胆固醇和卵磷脂等物质)。

17、 呈液态， 脂类杂质以及非胆囊组织碎片和胆囊组织碎片成固态， 可通过简单的过滤操作将 胆汁和上述杂质分开。 0017 进一步， 过滤处理经过冷却凝析步骤的胆汁粗品， 并取液相， 获得冷凝产物； 所述 冷凝产物依次经过滤和浓缩处理之后， 获得浸膏 。 0018 采用上述方案， 通过过滤处理， 可除去凝固的脂类杂质以及组织碎片， 获得主要含 有胆汁的冷凝产物。 冷凝产物再次经过过滤和浓缩处理之后， 获得浸膏 ， 以供下一步加工 精制。 0019 进一步， 在冷却凝析步骤之后设有水沉步骤： 将浸膏 分散于水中， 获得浸膏 分散 液； 所述浸膏 分散液依次经过滤和浓缩处理之后， 获得浸膏。 0020 。

18、采用上述方案， 浸膏 (主要含有浓缩后的胆汁)分散于水中之后， 原来胆汁的乳化 体系已经被破坏， 胆汁中的胆酸、 胆盐、 胆色素、 胆固醇、 卵磷脂等成分被充分暴露在水沉体 系中。 胆固醇、 部分脂溶性胆色素， 还有少部分胆盐和非常少量的上一步没有完全除净的脂 肪， 在水环境下发生沉淀， 进一步除去了胆汁来源的脂类杂质和其他杂质。 0021 发明人曾经尝试在冷却凝析步骤之前， 对胆汁粗品进行水沉处理， 认为先进行水 沉处理可除去一些脂类杂质， 增加后续冷却凝析对脂类杂质的清除率。 却发现调换了操作 顺序， 却并不能改善脂类杂质的清除率， 反倒使得禽胆粉中的目的成分TCDCA含量降低。 发 明人。

19、进而分析了造成上述现象的原因： 在胆汁粗品中加入水， 会破坏胆汁本身的独立的乳 化体系， 使得非胆囊组织来源的脂类杂质和胆囊组织来源的脂类杂质会和胆汁内的成分 (胆酸、 胆盐、 胆色素、 胆固醇和卵磷脂)混合， 冷却凝析体系内物质情况变复杂， 部分脂类杂 质不能析出， 导致胆汁粗品中的脂类杂质无法有效除去。 0022 水沉工序的加入是发明人经不断尝试后确定的， 经检测， 水沉之后有效成分并没 有明显减少， 并可去除一些水不溶性的杂质。 水的成本很低， 却可以起到非常大的作用， 经 过水沉过滤之后的终产品， 就可以全溶于水， 在制作水相产品开发的时候就可以直接按比 例添加复配， 省去了产品开发时。

20、的过滤过程。 本发明采用浓缩后加水然后过滤的方法将水 溶性较差的杂质水沉掉， 可以提高有效成分纯度， 也使终品的水溶性更好， 保证制品的水溶 液的澄清度。 说明书 3/8 页 5 CN 111494424 A 5 0023 进一步， 将浸膏 分散于水中的方法为： 将浸膏 分散在浸膏 的体积的2-10倍的水 中， 并在2-16的环境中放置6-24h。 0024 采用上述方案， 上述用量的水以及搅拌过程可以保证胆固醇、 部分脂溶性胆色素， 还有少部分胆盐和非常少量的上一步没有完全除净的脂肪等， 发生充分沉淀。 水沉时间过 短、 用水量过少， 沉淀析出不完全， 用水量过大会损耗目的产物TCDCA。 。

21、水沉时间过长， 并不 能有效增加沉淀的析出量， 还会对细菌的滋生创造条件。 0025 进一步， 在水沉步骤之后设有醇沉步骤： 将浸膏分散于乙醇溶液中， 获得浸膏 分散液； 所述浸膏分散液依次经过滤和浓缩处理之后， 获得浸膏。 0026 采用上述方案， 醇沉步骤除去大部分胆盐、 水溶性胆色素、 蛋白质和核酸等杂质。 传统禽胆粉制成后， 用于后续其它产品的开发时， 总是面临溶解性不好的问题， 本方案中水 沉和醇沉的使用， 使有效物质纯度更高， 且产品无论是在有机相还是水相中， 都能溶解得到 清澈的溶解液， 为后续的工序节省了大量的时间和投资成本。 0027 浓缩后加90-95乙醇然后过滤的方法， 。

22、可将在有机相里溶解性较差的杂质醇沉 掉， 可以提高有效成分纯度， 也使终品的有机相溶解度更好。 0028 进一步， 将浸膏分散于乙醇溶液中的方法为： 将浸膏分散在浸膏的体积的 2-10倍的90-95乙醇中， 并在2-16的环境中放置2-24h。 0029 采用上述方案， 上述用量的以及浓度的乙醇可保证胆盐、 水溶性胆色素、 蛋白质和 核酸等杂质充分沉淀。 醇沉时间过短、 用醇量过少， 沉淀析出不完全， 用醇量过大会损耗目 的产物TCDCA。 醇沉时间过长， 并不能有效增加沉淀的析出量， 还会对细菌的滋生创造条件。 0030 进一步， 在醇沉步骤之后设有干燥步骤： 对浸膏依次进行减压浓缩和干燥处。

23、理， 获得禽胆粉。 0031 采用上述方案， 除去浸膏中的水分， 获得含有效成分TCDCA较高的禽胆粉。 传统 禽胆粉制备工艺中除杂之后胆汁都是直接干燥的， 在工业化生产的时候体积太大， 干燥速 度慢， 人力需求大， 且禽胆汁容易腐败变质， 本方案在最终干燥之前加一步减压浓缩， 然后 再真空干燥， 比直接干燥减少能耗， 效率更高。 0032 进一步， 对冷凝产物、 浸膏 分散液和浸膏分散液进行过滤时， 使用的过滤器的 孔径为0.45-5um。 0033 采用上述方案， 过滤器的孔径为0.45-5um可充分过滤除去冷凝产物、 浸膏 分散液 和浸膏分散液中的大颗粒杂质。 孔径过小， 过滤器容易被堵。

24、塞， 孔径过大， 杂质无法有效 去除。 0034 进一步， 使用旋转式刮板薄膜蒸发器对过滤后的冷凝产物和过滤后的浸膏 分散 液进行浓缩处理。 0035 采用上述方案， 物料含有丰富的胆酸盐、 蛋白质和氨基酸等有机营养物， 传统用旋 转蒸发仪等浓缩方法非常容易起泡和结焦， 浓缩过程费时费力， 且过程难以控制， 收率不 高。 旋转式刮板薄膜蒸发器的使用， 将物料以薄膜方式均匀的涂布在蒸发腔壁， 减少了单位 时间内加热蒸发的物料体积， 同时也增加了蒸发面积， 连续进料连续出料， 这样的浓缩模式 避免了起泡和结焦， 使得浓缩速度和得率也大大增加。 说明书 4/8 页 6 CN 111494424 A 。

25、6 具体实施方式 0036 实施例1： 禽胆粉的制备 0037 取鸡胆， 将鸡胆割破之后收集胆汁部分， 获得胆汁粗品。 将胆汁粗品暂存罐外夹套 里通入冷冻水(2冷冻水)， 低温保持24h， 胆汁粗品里的油脂会凝出， 过滤取液相部分， 获 得冷凝产物。 实际上冷冻水的温度在大于0的条件即可使得油脂凝出， 在工业化大生产的 设备中， 如果把温度设置为稍高于0， 由于温控系统存在波动， 不能够确保每一时刻冷冻 水的温度都在0以上， 所以为了保险起见， 将冷冻水的温度设置为2。 然后把冷凝产物通 过0.45um孔径的精密过滤器过滤， 获得过滤后的冷凝产物， 然后用旋转式刮板薄膜蒸发器 (华易化工， B。

26、M16)(也可以使用其他蒸发器， 例如ZJ系列球形浓缩器)浓缩成膏(即浸膏 ， 浸 膏 的体积为胆汁粗品的体积的一半)， 再加浸膏 的10倍体积(2-10倍体积均能达到理想效 果， 此处具体选择10倍)的纯水， 2低温搅拌(30-80rpm)均匀后低温静置24h， 经0.45um孔 径的精密过滤器过滤后， 用旋转式刮板薄膜蒸发器(也可以使用其他蒸发器， 例如ZJ系列球 形浓缩器)浓缩成膏(浸膏， 浸膏的体积为胆汁粗品的体积的一半)， 在浸膏里加入浸 膏的10倍(2-10倍体积均能达到理想效果， 此处具体选择10倍)体积95乙醇(使用体积 百分数为90-95的乙醇均可)， 2低温搅拌(30-80。

27、rpm)均匀后低温静置24h(醇沉时间可 在2-24h， 可以较好的将杂质沉淀， 在此处具体选择24h)， 经0.45um孔径的精密过滤器过滤 后， 用单双效真空浓缩器浓缩成膏(浸膏， 浸膏的体积为胆汁粗品的体积的一半)， 将膏 用喷雾干燥器(在此处也可以使用带式干燥器、 真空干燥箱或低温冷冻干燥机， 均能达到干 燥成粉的目的)干燥成粉， 获得禽胆粉。 并使用高效液相色谱法测定牛磺鹅去氧胆酸等多种 物质含量， 使用HPLC-ELSD， 依照 中国药典(2015) (GBT16631-2008高效液相色谱法通则) 进行检测， 计算出牛磺鹅去氧胆酸相对含量C0牛磺鹅去氧胆酸含量C/干重m， 同时用。

28、香草 醛比色法分别测定禽胆粉中的油脂含量(以每g禽胆粉中油脂的质量mg来表示)。 0038 实施例1-实施例6的参数选择如表1所示， 实施例2-实施例6的基本过程同实施例 1， 不同点在于如表1所示的参数选择。 0039 对比例1 0040 本对比例和实施例1的区别在于： 使用石油醚萃取替代冷凝析出。 将石油醚和胆汁 粗品混匀(体积比为1:2)， 静置后取水相， 通过旋蒸将水相浓缩到胆汁粗品的一半体积， 获 得第一浸膏。 然后用胆汁粗品的体积的一半的石油醚溶解第一浸膏之后， 静置取水相， 通过 旋蒸将水相浓缩到胆汁粗品的一半体积， 获得第二浸膏。 再对第二浸膏进行水沉和醇沉处 理， 对第二浸膏。

29、的处理方法同对实施例1的浸膏 的处理方法， 经处理后， 获得本对比例的禽 胆粉。 0041 对比例2 0042 本对比例和实施例1的区别在于： 将水沉步骤提前到冷却步骤之前， 具体为： 在胆 汁粗品中加入纯水， 纯水的加入量为胆汁粗品体积的10倍， 2低温搅拌均匀后静置24h， 然 后通过0.45um孔径的精密过滤器过滤， 获得水沉产物。 然后用旋转式刮板薄膜蒸发器浓缩 成膏(第一浸膏， 体积为胆汁粗品的体积的一半)， 再加第一浸膏的10倍体积的95乙醇， 2 低温搅拌均匀后静置24h， 经0.45um孔径的精密过滤器过滤后， 用单双效真空浓缩器浓缩 成膏(第二浸膏， 体积为胆汁粗品的体积的一。

30、半)， 将膏用喷雾干燥器(或带式干燥器或真空 干燥箱或低温冷冻干燥机)干燥成粉， 获得禽胆粉。 说明书 5/8 页 7 CN 111494424 A 7 0043 对比例3-对比例8的参数设置基本同实施例1， 不同点如表1所示。 0044 表1： 实施例1-实施例， 对比例1-对比例的参数选择 0045 0046 表2： 检测结果 0047 0048 根据表1和表2中的数据可知， 实施例1-实施例6中获得的禽胆粉的得率较为理想， 禽胆粉中的脂类含量、 TCDCA相对含量C0均符合产品要求(产品脂类含量不能高于0.1mg/g， TCDCA相对含量C0不能低于70)。 从时间和设备、 试剂成本考虑。

31、， 采用实施例5的方案最优。 考虑到禽胆粉的质量， 采用实施例1的方案最优。 对比例1使用石油醚进行除脂， 但是除脂效 果并不好， 在禽胆粉中油脂含量过高， TCDCA相对含量C0过低， 均不符合生产标准。 对比例2 在冷却凝析之前使用了水沉处理(在实施例1的工艺中， 浸膏加水处理之后有6-24h低温放 置的时间， 相当于进行了冷却凝析步骤)， 由于水破坏了胆汁的乳化体系， 导致胆汁内部的 脂类物质和其外部的脂类物质混合无法， 有效分离。 对比例2中获得的禽胆粉油脂含量非常 高， 是实施例1的10倍还要多， 并且TCDCA相对含量C0也有所降低。 对比例3冷却凝析的温度 过高， 不但脂类杂质不。

32、能有效分离还导致物料腐败产生恶臭。 对比例4使用的冷却凝析的温 度过低， 导致目的成分在冷却凝析的过程中随脂质物质一起析出， 禽胆粉的得率过低， 最终 获得的禽胆粉的质量过低。 对比例5冷却凝析的时间过程， 禽胆粉发生腐败产生恶臭味。 对 说明书 6/8 页 8 CN 111494424 A 8 比例6冷却凝析步骤的时间过短， 获得的禽胆粉中的脂类物质含量过高。 对比例7水沉时水 的用量过少， 导致禽胆粉中脂类物质的含量过高， 不符合产品标准。 对比例8的水沉时间过 长， 禽胆粉的得率有所降低， 但是物料发生腐败， 产生恶臭味， 不符合产品标准。 0049 实验例1： 冷却凝析与有机萃取的对比。

33、实验 0050 取200g新鲜鸡胆， 剪刀剪破胆囊， 用烧杯收集胆汁， 共161ml。 取80ml胆汁冰箱4 静置6小时， 4层纱布过滤， 将获得的滤液干燥成干粉获得样品1， 称重。 按照同样的方法制备 获得样品2和样品3， 样品1-3代表使用冷却凝析的方法制备禽胆粉， 本实验例为了验证冷却 凝析的效果， 未进行后续的水沉和醇沉的步骤。 另取80ml胆汁， 用等体积石油醚萃取两次， 并取液相， 将获得的液相部分干燥成干粉获得样品4， 称重。 按照同样的方法制备获得样品5 和样品6， 样品4-6代表使用有机溶剂萃取的方法制备禽胆粉。 在制备完成之后， 使用高效液 相色谱法测定牛磺鹅去氧胆酸含量，。

34、 然后计算出牛磺鹅去氧胆酸相对含量C0牛磺鹅去氧 胆酸含量/干重。 牛磺鹅去氧胆酸含量是指制备获得的禽胆粉中牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)的 质量， 干重是指干燥的禽胆粉的质量。 同时用香草醛比色法分别测定样品1-6的油脂含量。 分别取样品1-6各2g， 分别溶解在10ml 0.1M的甘氨酸缓冲液里， 分别加入0.1g乙醛脱氢酶， 25反应1h， 取样， 高效液相色谱法检测反应产物牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)与底物牛磺鹅去 氧胆酸(TCDCA)的比值(TUDCA:TCDCA)， 反映的是禽胆粉向人工熊胆粉的转化效率。 实验结 果如表3所示， 石油醚提取获得的禽胆粉在禽胆粉干重上和冷却凝析有显著差。

35、别(t-test， p 0.01)， 说明石油醚提取的方法的禽胆粉的得率较高。 但是， 石油醚提取获得的禽胆粉在 油脂含量上明显高于冷却凝析获得的禽胆粉(t-test， p0.01)， 说明石油醚提取获得的禽 胆粉虽然总质量大， 但是其中含有的大多是杂质， 并且脂类杂质占据了较大比重， 会严重削 弱产品品质(石油醚提取的禽胆粉油脂含量是冷凝提取的禽胆粉油脂含量的近4倍)。 并且 石油醚提取获得的禽胆粉在TCDCA含量上明显低于冷却凝析获得的禽胆粉(t-test， p 0.01)， 说明冷却凝析获得的禽胆粉中的目的成分含量更高， 禽胆粉的品质更高。 综上， 低温 凝析去油脂的效果比有机萃取更好，。

36、 油脂残留量更低。 (在表3中， 平均干重、 平均油脂含量、 平均TCDCA含量和平均TUDCA:TCDCA均采用meanSD的形式来表示， 其中n3)。 禽胆汁内 TCDCA含量因为杂质影响， 含量达不到制作熊胆粉的要求， 很多方法在除去杂质的同时 TCDCA含量也降低很多， 本方案在去掉杂质的同时能保留绝大部分TCDCA(即， 除去了大量杂 质但是TCDCA损失不多)。 0051 表3： 低温凝析与有机萃取结果分析 0052 0053 实验例2： 水沉实验 0054 取200g新鲜鸡胆， 剪刀剪破胆囊， 用烧杯收集胆汁， 取40ml胆汁干燥(样品1)， 称 重， 另取三份40ml胆汁， 分。

37、别加80ml、 200ml、 240ml纯化水， 充分搅拌后4低温静置4h， 4层 纱布过滤， 干燥获得干粉状的禽胆粉。 按照同样的方法制备样品2、 样品3和样品4。 使用高效 说明书 7/8 页 9 CN 111494424 A 9 液相色谱法， 测定牛磺鹅去氧胆酸含量， 然后计算出牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)相对含量C0 TCDCA含量/干重m。 实验结果如表4所示， 水沉后牛磺鹅去氧胆酸含量略降低， 相对含量C0增 加。 0055 表4： 水沉结果 0056 干燥总重mTCDCA含量(g)TCDCA相对含量C0() 样品17.5784.18755.252 样品27.0394.10258.275 样品36.8324.08359.763 样品46.7954.07960.029 0057 以上所述的仅是本发明的实施例， 方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识 在此未作过多描述。 应当指出， 对于本领域的技术人员来说， 在不脱离本发明技术方案的前 提下， 还可以作出若干变形和改进， 这些也应该视为本发明的保护范围， 这些都不会影响本 发明实施的效果和专利的实用性。 本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准， 说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。 说明书 8/8 页 10 CN 111494424 A 10 。