特殊方法炮制的铁皮石斛提取物及其在护肤品中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010484013.6 (22)申请日 2020.06.01 (71)申请人 中国科学院昆明植物研究所 地址 650201 云南省昆明市蓝黑路132号 申请人 北京植物医生生物科技有限公司 (72)发明人 梅任强段晓燕贺锐 (74)专利代理机构 昆明协立知识产权代理事务 所(普通合伙) 53108 代理人 马晓青 (51)Int.Cl. A61K 8/9794(2017.01) A61Q 19/00(2006.01) A61Q 19/08(2006.01) A61Q 19/。

2、02(2006.01) (54)发明名称 一种特殊方法炮制的铁皮石斛提取物及其 在护肤品中的应用 (57)摘要 本发明提供了一种具有抗氧化及酪氨酸酶 抑制活性的铁皮石斛提取物及其制备方法与应 用， 本发明中用特殊方法炮制铁皮石斛， 以90 乙醇、 石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇依次萃取、 分 离， 得到有效组分MOE、 MPE、 MEA、 MBA， 检测每种组 分的抗氧化及酪氨酸酶抑制活性。 结果显示， 特 殊炮制处理能显著提高不同组分的抗氧化及酪 氨酸酶抑制能力， 所得的铁皮石斛提取物能应用 在护肤品组合物上。 权利要求书2页 说明书8页 CN 111494284 A 2020.08.07 CN。

3、 111494284 A 1.一种具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛提取物的制备方法， 其特征在于： 以特殊方法炮制铁皮石斛， 分离得到抗氧化及酪氨酸酶抑制活性增强的不同组分的铁皮石 斛提取物。 2.根据权利要求1所述的具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛提取物的制备方 法， 其特征在于： 所述铁皮石斛鲜茎为茎上生出膜质叶鞘的2-3年生铁皮石斛鲜茎； 所述的 特殊方法炮制温度为90-120； 特殊方法炮制后的铁皮石斛， 以溶剂萃取， 根据溶剂极性， 得到不同抗氧化及酪氨酸酶抑制活性组分的提取物。 3.根据权利要求2所述的具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛提取物的制备方 法， 其特征在。

4、于： 特殊方法炮制后的铁皮石斛， 以90乙醇、 石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇依次 萃取、 分离， 得到抗氧化及酪氨酸酶抑制活性增强的不同组分的铁皮石斛提取物。 4.根据权利要求1所述的铁皮石斛特殊炮制方法， 其特征在于： 以特殊方法炮制铁皮石 斛包括如下步骤： (1)选取铁皮石斛鲜茎， 将须根、 叶和杂质去除， 保留茎部清洗后摊晒1-2天； (2)将炒药锅预热， 并调温至90-120， 将摊晒后的茎条放入锅中翻炒， 至叶鞘张开， 茎 条柔软时取出， 炒制过程不断翻炒， 避免焦黑； (3)将炒制柔软的石斛茎条搓捻扭曲后， 置于50干燥鼓风箱内脱水， 至茎条呈金黄略 青暗， 含水量降至8以下， 得铁。

5、皮石斛炮制品。 5.根据权利要求1或4所述的具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛提取物的制 备方法， 其特征在于： 该方法包括以下几个步骤： (1)将炮制或未炮制的铁皮石斛粉碎， 得到铁皮石斛粉； 将铁皮石斛粉与70-90的乙 醇按照重量比1:1-1:3比例混合， 冷浸提取1-3次， 每次提取1-2小时， 合并得到提取液， 将其 浓缩、 干燥、 粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末MOE； (2)将步骤(1)中的提取液与石油醚按照重量比1:22:1比例混合， 静置萃取， 得到最 上层的石油醚层、 中间层和最下层的水层， 去除中间层， 收集石油醚层浓缩、 干燥、 粉碎后得 到粉末MPE； (3)将步骤。

6、(2)中的水层与乙酸乙酯按照重量比1:2-2:1比例混合， 静置萃取， 得到上层 的乙酸乙酯层和下层的水层， 收集乙酸乙酯层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MEA； (4)将步骤(3)中的水层与正丁醇按照重量比1:2-2:1比例混合， 静置萃取， 得到上层的 正丁醇层和下层的水层， 收集正丁醇层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MBA。 6.特殊方法炮制的具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛提取物， 其特征在于该 铁皮石斛提取物由下述方法制备而得： S1:选取未开花的铁皮石斛鲜茎， 将须根、 叶和杂质去除， 保留茎部清洗后摊晒1-2天； S2:将炒药锅预热， 并调温至90-120， 将摊晒后的茎条。

7、放入锅中翻炒， 至叶鞘张开， 茎 条柔软时取出， 炒制过程不断翻炒， 避免焦黑； S3:上将炒制柔软的石斛茎条搓捻扭曲后， 置于50干燥鼓风箱内脱水， 至茎条呈金黄 略青暗， 含水量降至8以下， 得铁皮石斛炮制品； S4:将炮制的铁皮石斛粉碎， 得到铁皮石斛粉， 将铁皮石斛粉与70-90乙醇按照重量 比1:1-1:3比例混合， 冷浸提取1-3次， 每次提取1-2小时， 合并得到提取液， 将其减压浓缩、 干燥粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末MOE； 权利要求书 1/2 页 2 CN 111494284 A 2 S5:将步骤S4中的提取液与石油醚按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min，。

8、 得到 最上层的石油醚层、 中间层和最下层的水层， 去除中间层， 收集石油醚层浓缩、 干燥、 粉碎后 得到粉末MPE； S6:将步骤S5中的水层与乙酸乙酯按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得到 上层的乙酸乙酯层和下层的水层， 收集乙酸乙酯层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MEA； S7:将步骤S6中的水层与正丁醇按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得到上 层的正丁醇层和下层的水层， 收集正丁醇层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MBA。 7.护肤品， 其包括有权利要求6所述的铁皮石斛提取物， 以及至少一种或几种护肤品常 用载体。 8.权利要求6所述的铁皮。

9、石斛提取物在制备护肤品中的应用。 9.权利要求6所述的铁皮石斛提取物在制备具有抗氧化、 抗衰老及酪氨酸酶抑制活性 的产品中的应用。 10.根据权利要求8或9所述的应用， 其特征在于所述的护肤品和产品中含有铁皮石斛 提取物的质量分数为0.1-30。 权利要求书 2/2 页 3 CN 111494284 A 3 一种特殊方法炮制的铁皮石斛提取物及其在护肤品中的应用 技术领域 0001 本发明涉及天然产物和护肤品领域， 主要是一种具有抗氧化和酪氨酸酶抑制活性 的特殊方法炮制的铁皮石斛提取物及其制备方法以及在护肤品中的应用。 背景技术 0002 临床紫外线照射所导致的皱纹、 雀斑、 黑色素过度沉着、 。

10、无光泽以及弹性降低的过 程称之为光老化， 主要是由于受过多的紫外线辐射， 导致体内产生过多的自由基或活性氧 (ROS)， 从而对机体造成氧化损伤。 此外， ROS还会激活上游激酶的活化激活丝裂原活化蛋白 激酶(MAPK)， 从而导致胶原蛋白及弹性蛋白的降解， 皮肤会出现如松弛、 皱纹、 干燥等衰老 症状。 因此， 研发含有自由基清除活性成分的护肤品对皮肤抗衰老具有重要作用。 0003 酪氨酸酶， 又称多酚氧化酶， 是人体内合成黑色素的关键酶。 酪氨酸在酪氨酸酶的 催化作用下， 依次生成多巴， 多巴醌， 多巴色素， 最终产物为黑色素。 人类的皮肤颜色取决于 体内的黑色素含量及分布范围， 当黑色素。

11、水平发生异常时， 常伴有黄褐斑， 雀斑甚至色素瘤 等病变产生。 国内外学者通过采用有效的酪氨酸酶抑制剂， 控制酪氨酸酶的活性水平， 从而 影响黑色素的生成， 导致合成量减少， 达到美白效果。 0004 目前酪氨酸酶抑制剂来源于发酵， 人工合成， 天然植物等， 广泛应用于美白化妆品 领域的产品， 常用抑制剂包括曲酸， 熊果苷， 维生素C， 氢醌等， 但以上抑制剂多存在一定的 副作用或稳定性问题， 在产品应用中不尽人意， 如曲酸稳定低， 且长期使用有致癌风险， 而 氢醌已被多国列为禁用添加剂。 因此寻找开发安全、 有效的酪氨酸酶抑制剂是化妆品应用 领域的热门研究课题， 也是市场的迫切需求。 000。

12、5 大量研究结果和临床实验证明， 中药及其提取物具有性质平和， 耐受性好， 毒副作 用小， 作用持久等独特优点， 植物来源的抗氧化剂及酪氨酸酶抑制剂迎合消费者的安全需 求， 铁皮石斛提取物同时拥有较好的抗氧化及酪氨酸酶抑制活性， 适合作为新的安全有效 的护肤品添加剂。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种具有抗氧化和酪氨酸酶抑制活性的特殊方法炮制的 铁皮石斛提取物及其制备方法以及在护肤品中的应用。 0007 本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。 这种具有抗氧化和酪氨酸酶抑制活 性的特殊方法炮制的铁皮石斛提取物， 将鲜铁皮石斛通过特殊方法炮制粉碎后乙醇冷浸提 取， 后经石油醚、 乙酸。

13、乙酯和正丁醇萃取， 最后经减压浓缩干燥后即得具有抗氧化和酪氨酸 酶抑制活性的铁皮石斛提取物。 0008 本发明所述的这种特殊方法炮制的具有抗氧化和酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛 提取物及其制备方法， 主要包括如下具体步骤： 0009 (1)选取铁皮石斛鲜茎， 将须根、 叶和杂质去除， 保留茎部清洗后摊晒1-2天； 0010 (2)将炒药锅预热， 并调温至90-120， 将摊晒后的茎条放入锅中翻炒， 至叶鞘张 说明书 1/8 页 4 CN 111494284 A 4 开， 茎条柔软时取出， 炒制过程不断翻炒， 避免焦黑； 0011 (3)将炒制柔软的石斛茎条搓捻扭曲后， 置于50干燥鼓风箱内脱水， 。

14、至茎条呈金 黄略青暗， 含水量降至8以下， 即可制得铁皮石斛炮制品。 0012 (4)将炮制的铁皮石斛粉碎， 得到铁皮石斛粉； 将铁皮石斛粉与70-90乙醇按照 重量比1:1-1:3比例混合， 冷浸提取1-3次， 每次提取1-2小时， 合并得到提取液， 将其减压浓 缩、 干燥即得铁皮石斛总提取物。 0013 作为优选的， 所得提取液用石油醚萃取后， 再用乙酸乙酯萃取， 所得乙酸乙酯相经 减压浓缩、 干燥即得所述特殊方法炮制的铁皮石斛提取物。 本发明通过上述步骤处理后， 所 得提取物的抗氧化及酪氨酸酶抑制活性明显增强。 0014 作为优选的， 按照特殊方法炮制的铁皮石斛与70-90乙醇质量比1:。

15、2进行三次提 取， 提取时间为每次40-100min。 0015 作为最优选的， 按照特殊方法炮制的铁皮石斛与70-90乙醇质量比1:3、 1:2、 1:1 进行三次提取， 提取时间为每次60-90min。 0016 作为优选的， 上述提取液经50-60减压浓缩、 干燥即得铁皮石斛总提取物。 0017 作为优选的， 将上述乙酸乙酯萃取步骤按照体积比0.5-2:1， 萃取2-5次， 每次萃取 30-90min。 0018 作为优选的， 将上述乙酸乙酯萃取步骤按照体积比0.8-1.2:1,进行萃取， 萃取3-5 次， 每次萃取40-60min。 0019 作为最优选的， 将上述乙酸乙酯萃取步骤按照。

16、体积比0.9:1， 萃取3次， 每次萃取 50-60min。 0020 本发明此外还提供了一种特殊方法炮制的具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁 皮石斛提取物， 该铁皮石斛提取物由下述方法制备而得： 0021 S1:选取未开花的铁皮石斛鲜茎， 将须根、 叶和杂质去除， 保留茎部清洗后摊晒1-2 天； 0022 S2:将炒药锅预热， 并调温至90-120， 将摊晒后的茎条放入锅中翻炒， 至叶鞘张 开， 茎条柔软时取出， 炒制过程不断翻炒， 避免焦黑； 0023 S3:上将炒制柔软的石斛茎条搓捻扭曲后， 置于50干燥鼓风箱内脱水， 至茎条呈 金黄略青暗， 含水量降至8以下， 得铁皮石斛炮制品； 002。

17、4 S4:将炮制的铁皮石斛粉碎， 得到铁皮石斛粉， 将铁皮石斛粉与70-90乙醇按照 重量比1:1-1:3比例混合， 冷浸提取1-3次， 每次提取1-2小时， 合并得到提取液， 将其减压浓 缩、 干燥粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末MOE； 0025 S5:将步骤S4中的提取液与石油醚按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得到最上层的石油醚层、 中间层和最下层的水层， 去除中间层， 收集石油醚层浓缩、 干燥、 粉 碎后得到粉末MPE； 0026 S6:将步骤S5中的水层与乙酸乙酯按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得到上层的乙酸乙酯层和下层的水层， 收集乙。

18、酸乙酯层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MEA； 0027 S7:将步骤S6中的水层与正丁醇按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得 到上层的正丁醇层和下层的水层， 收集正丁醇层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MBA。 0028 本发明另外还提供了一种护肤品， 其包括有铁皮石斛提取物， 以及至少一种或几 说明书 2/8 页 5 CN 111494284 A 5 种护肤品常用载体。 0029 本发明同时还提供了所述的铁皮石斛提取物在制备护肤品中的应用。 0030 以及， 所述的铁皮石斛提取物在制备具有抗氧化、 抗衰老及酪氨酸酶抑制活性的 产品中的应用。 0031 在上述应用中， 。

19、所述的护肤品和产品中含有铁皮石斛提取物的质量分数为0.1- 30。 0032 作为优选的， 所述护肤品可以霜剂、 膏剂、 乳液、 悬浊液、 香皂、 粉底液。 0033 本发明的有益效果为： 通过本发明所述制备方法获得的铁皮石斛提取物， 提取物 无毒副作用， 不仅具有良好的抗氧化活性， 同时也具有优良的酪氨酸酶抑制效果， 通过清除 表皮细胞自由基， 同时抑制皮肤酪氨酸酶活性， 影响黑色素生成从而达到美白润肤的效果。 铁皮石斛是传统的名贵药材， 应用本发明提取物和技术的护肤品没有任何毒副作用， 提供 了一种的铁皮石斛开发利用途径。 具体实施方式： 0034 为了使本发明实现的技术手段、 创作特征、。

20、 达成目的与功效易于明白了解， 下面结 合具体实施例， 进一步阐述本发明， 但并不以此来限定本发明。 根据本发明的实质对本发明 进行的简单改进都属于本发明的范围。 0035 实施例1 0036 特殊方法炮制的具有抗氧化及酪氨酸酶抑制活性的铁皮石斛提取物的制备。 0037 S1:选取未开花的铁皮石斛鲜茎， 将须根、 叶和杂质去除， 保留茎部清洗后摊晒1-2 天； 0038 S2:将炒药锅预热， 并调温至90-120， 将摊晒后的茎条放入锅中翻炒， 至叶鞘张 开， 茎条柔软时取出， 炒制过程不断翻炒， 避免焦黑； 0039 S3:上将炒制柔软的石斛茎条搓捻扭曲后， 置于50干燥鼓风箱内脱水， 至茎。

21、条呈 金黄略青暗， 含水量降至8以下， 即可制得铁皮石斛炮制品。 0040 S4:将炮制的铁皮石斛粉碎， 得到铁皮石斛粉； 将铁皮石斛粉与70-90乙醇按照 重量比1:1-1:3比例混合， 冷浸提取1-3次， 每次提取1-2小时， 合并得到提取液， 将其减压浓 缩、 干燥粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末MOE。 0041 S5:将步骤S4中的提取液与石油醚按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得到最上层的石油醚层、 中间层和最下层的水层， 去除中间层， 收集石油醚层浓缩、 干燥、 粉 碎后得到粉末MPE。 0042 S6:将步骤S5中的水层与乙酸乙酯按照重量比1:2比例混合， 。

22、萃取3次， 每次50min， 得到上层的乙酸乙酯层和下层的水层， 收集乙酸乙酯层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MEA。 0043 S7:将步骤S6中的水层与正丁醇按照重量比1:2比例混合， 萃取3次， 每次50min， 得 到上层的正丁醇层和下层的水层， 收集正丁醇层浓缩、 干燥、 粉碎后得到粉末MBA。 0044 实施例2 0045 本实施例主要是对实施例1制备的铁皮石斛活性提取物进行DPPH自由基清除活性 实验测试、 酪氨酸酶抑制活性测试。 具体如下： 0046 (1)所需的药品： DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、 水溶性维生素E(Trolox)、 - 说明书 3/8 页 6 。

23、CN 111494284 A 6 熊果苷( -arbutin)、 蘑菇酪氨酸酶和左旋多巴(L-Dopa)购自Sigma公司。 0047 (2)DPPH自由基清除活性测试： 0048 实验方法： 在96孔板上， 将待测样品与DPPH(终浓度为100 M)混合反应， 设定3个重 复孔， 同时设置不含药物的空白对照和Trolox阳性对照， 在30下， 反应1h后， 用酶标仪测 定OD值， 检测波长为515nm。 0049 抗氧化率()(1-实验孔OD515nm/空白孔OD515nm)100 0050 (3)酪氨酸酶抑制活性： 0051 实验方法： 将待测样品(待测样品和阳性对照 -熊果苷均为100 。

24、g/mL)与左旋多巴 (L-Dopa， 终浓度1.25mM)混合后， 再加入酪氨酸酶(终浓度25U/mL)开始反应， 设定3个重复 孔， 同时设置不含药物的空白对照和 -熊果苷( -arbutin)阳性对照， 在室温下， 反应5min 后， 用酶标仪测定OD值， 检测波长为490nm。 计算得到酪氨酸酶活性抑制率。 0052 酪氨酸酶活性抑制率()(1样品OD490nm/实验对照孔OD490nm)100 0053 (4)测试结果： 0054 表1特殊方法炮制的铁皮石斛活性提取物的DPPH清除率和酪氨酸酶抑制率测试结 果 0055 测试样品浓度( g/mL)DPPH清除率()酪氨酸酶抑制率() 。

25、MOE10020.2517,64 MPE10011,1612.37 MEA10048.1450.50 MBA10038.9241.81 Trolox(阳性对照)2595.07 -arbutin(阳性对照)10022.16 0056 从上述测试及测试数据可以看出： 0057 实施例1所制备的铁皮石斛活性提取物MEA(乙酸乙酯萃取相)， 在测试浓度为 100ug/mL时， DPPH自由基清除率达48、 酪氨酸酶抑制活性达50， 由此可以看出， 本发明 实施例制备的铁皮石斛活性提取物具有较好的抗氧化活性、 较强的黑色素生成抑制活性。 因此， 本发明实施例制备的铁皮石斛活性提取物具有制备抗氧化、 抗衰。

26、老、 美白护肤品的新 用途。 0058 实施例3和4 0059 铁皮石斛护肤精华液的制备。 0060 组分实施例3实施例4 铁皮石斛提取物25 透明质酸钠11 1,3-丙二醇55 乙氧基二甘醇11 聚丙烯酸酯交联聚合物-60.50.5 PPG-26-丁醇聚醚-260.30.3 PEG-40氢化蓖麻油0.20.2 乳酸11 说明书 4/8 页 7 CN 111494284 A 7 EDTA二钠0.050.05 苯氧乙醇0.40.4 氯苯甘醚0.10.1 去离子水至100至100 0061 按照以下步骤制备实施例3和4的精华液： 0062 (1)油相制备： 将油、 脂、 乳化剂和其他油溶性成分加入。

27、溶解锅内， 在不断搅拌的条 件下加热至70-75， 使其充分熔化或溶解均匀待用； 0063 (2)水相制备： 将去离子水和水溶性成分加入溶解锅中， 搅拌下加热至90-100， 维持25min灭菌， 然后冷却至70-80待用； 0064 (3)乳化和冷却： 将上述油相和水相通过过滤器加入乳化锅内， 并在70-80下搅 拌乳化5-10min， 乳化后体系自然冷却至室温， 再加入热敏性成分， 充分搅拌均匀。 0065 实施例5： 0066 鼻喷雾剂： 实施例1制备的铁皮石斛活性提取物 0.2 0067 0068 制备方法： 搅拌下于适当体积的重蒸馏水中每次加入一种成分， 直至完全深解， 然 后再加入。

28、另一种成分。 加重蒸馏水至2ml后， 将该溶液在无菌过滤器上过滤， 装入瓶中并按 照适当的剂量分隔。 0069 实施例6： 0070 含有实施例1制备的铁皮石斛活性提取物的美白霜配方(W)： 说明书 5/8 页 8 CN 111494284 A 8 0071 0072 去离子水加至100 0073 按常规制作化妆品的方法制得本发明上述配方的化妆品。 0074 实施例7： 0075 含有实施例1制备的铁皮石斛活性提取物的乳剂配方(W)： 说明书 6/8 页 9 CN 111494284 A 9 0076 0077 按常规制作化妆品的方法制得本发明上述配方的化妆品。 0078 实施例8： 0079。

29、 化妆水： 0080 水相： 聚丙烯酸钠0.35克， 甘油4克， 1， 3-丁二醇2.5克， 金缕梅提取液2.5克， 维生 素B5 0.5克， 熊果甘0.5克， EDTA-Na2 50mg； 去离子水， 适量， 加至100ml。 制备方法： 将聚丙 烯酸钠0.3克溶入70ml水中， 搅拌， 充分溶胀。 缓缓加入处方中其余成分， 不停搅拌； 然后加 入0.2的实施例1制备的铁皮石斛活性提取物， 搅拌使其成匀质。 去离子水， 加至100ml， 包 装即可。 0081 实施例9： 0082 修复霜： 0083 处方： 甘油6克， 卡波姆1.5克， 三乙醇胺1.5克， 丙二醇6克， 尼伯金乙酯0.2克。

30、， 丹参 酮提取物1.2克， 铁皮石斛活性提取物， 去离子水适量， 加至总重量为100克。 制备方法： 取卡 说明书 7/8 页 10 CN 111494284 A 10 波姆于适量去离子水中， 搅匀， 静置过夜， 使其充分溶胀后， 加入甘油后， 用三乙胺调节pH 值， 使凝胶基质粘稠性增加。 另取处方量的丹参酮提取物、 丙二醇及去离子水， 混合均匀。 再 将卡波姆凝胶例入， 加入0.5铁皮石斛活性提取物， 尼伯金乙酯， 合并搅拌至均匀细腻， 加 蒸镏水至足量， 研磨均匀， 即可。 0084 前述的说明应当理解为仅仅是说明本发明。 各种选择和修正可由本领域熟练人员 不背离本发明而设计。 从而， 本发明意图包括所有落入本申请文件权利要求书和说明书范 围内的这种选择和修正以及变化。 说明书 8/8 页 11 CN 111494284 A 11 。