替抗中草药菌酶组合物及其应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010151892.0 (22)申请日 2020.03.06 (71)申请人 广东溢多利生物科技股份有限公司 地址 519060 广东省珠海市南屏科技工业 园屏北一路8号 (72)发明人 郭玉光杜红方杨博冯国华 李阳源周银华朱子昕 (74)专利代理机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 44205 代理人 林德强 (51)Int.Cl. A23K 50/75(2016.01) A23K 10/30(2016.01) A23K 10/18(2016.01) A23K 20/1。

2、89(2016.01) A23K 20/20(2016.01) (54)发明名称 一种替抗中草药菌酶组合物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种替抗中草药菌酶组合物， 由以下重量份的原料制成： 博落回提取物410 份， 丁酸梭菌复合制剂410份， 葡萄糖氧化酶1 5份， 载体2542份。 博落回提取物、 丁酸梭菌、 葡萄糖氧化酶的组合具有强效的组合效应， 能够 极大提升产品的综合性能， 有效替代抗生素的抑 菌、 杀菌效果， 同时具有显著促生长效果。 黄羽肉 鸡采食添加有该替抗中草药菌酶制剂的饲料后， 能够抑制肠道致病菌的繁殖、 提高肠道形态完整 性， 促进肠道健康， 提高机体免疫力， 增强抗。

3、氧化 能力和抗炎能力， 提高营养物质消化吸收率， 改 善生长性能， 增加养殖效益。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 附图1页 CN 111557389 A 2020.08.21 CN 111557389 A 1.一种替抗中草药菌酶组合物， 由包括以下重量份的原料制成： 博落回提取物410 份， 丁酸梭菌复合制剂410份， 葡萄糖氧化酶15份， 载体2542份。 2.根据权利要求1所述的替抗中草药菌酶组合物， 其特征在于， 所述组合物由以下重量 份的原料制成： 博落回提取物6份， 丁酸梭菌复合制剂6份， 葡萄糖氧化酶3份， 载体34份。 3.根据权利要求1所述的替抗中草药菌酶组合物， 其。

4、特征在于， 所述博落回提取物和丁 酸梭菌复合制剂的质量比例为(0.51.5)： 1。 4.根据权利要求3所述的替抗中草药菌酶组合物， 其特征在于， 所述博落回提取物和丁 酸梭菌复合制剂的质量比例为1： 1。 5.根据权利要求14任一项所述的替抗中草药菌酶组合物， 其特征在于， 所述博落回 提取物中血根碱的含量为0.15。 6.根据权利要求14任一所述的替抗中草药菌酶组合物， 其特征在于， 所述丁酸梭菌 复合制剂中丁酸梭菌活菌数为8108cfu/g。 7.根据权利要求14任一所述的替抗中草药菌酶组合物， 其特征在于， 所述葡萄糖氧 化酶的酶活为2000U/g。 8.根据权利要求14任一所述的替抗。

5、中草药菌酶组合物， 其特征在于， 所述载体为二 氧化硅。 9.一种饲料添加剂， 含有权利要求18任一所述的替抗中草药菌酶组合物。 10.一种黄羽肉鸡饲料， 其特征在于， 含有权利要求9所述的饲料添加剂， 优选地， 所述 黄羽肉鸡饲料中的饲料添加剂的添加量为： 1.21.8kg/1000kg。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111557389 A 2 一种替抗中草药菌酶组合物及其应用 技术领域 0001 本发明涉及动物饲料添加剂领域， 更具体地， 涉及一种替抗中草药菌酶组合物及 其应用。 背景技术 0002 饲用抗生素的使用， 起到抗菌、 促生长的效果； 然而抗生素长时间过量使用同样带 来病。

6、 菌耐药性提升、 畜禽免疫低下、 食品安全卫生等诸多问题。 在畜牧业、 水产养殖业中长 期大 量不合理地使用抗生素导致药物残留， 细菌耐药性等问题， 严重影响了畜牧、 水产品 的质量、 人们的食品安全。 2019年7月， 农业农村部发布第194号公告， 自2020年1月1日起， 退 出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种， 自2020年7月1日起， 饲料生产企业停 止 生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。 除了停产含有促生长类 药物饲 料添加剂(中药类除外)的商品饲料， 政府部门还发文鼓励全国积极研发绿色高效 饲料。 总体 而言， 政府加快了饲料抗生素的禁用进程， 另一。

7、方面表明饲料抗生素替代品市 场有较大发展 空间。 0003 当下， 随着食品安全等问题越来越受到关注， 促生长类饲用抗生素的禁用势在必 行。 农 业农村部194号公告的颁布意味着饲料中全面禁抗正式进入倒计时。 因此， 寻找一种 能够有 效替代抗生素， 具有控制病菌性疾病、 保障动物健康、 提高畜禽生长性能的饲料添 加剂方案 成为当下行业的关注热点和技术难点。 发明内容 0004 本发明第一个方面的目的， 在于提供一种替抗中草药菌酶组合物。 0005 本发明第二个方面的目的， 在于提供一种饲料添加剂。 0006 本发明第三个方面的目的， 在于提供一种黄羽肉鸡饲料。 0007 本发明所采取的技术方。

8、案是： 0008 本发明的第一个方面， 提供一种替抗中草药菌酶组合物， 由以下重量份的原料制 成： 博 落回提取物410份， 丁酸梭菌复合制剂410份， 葡萄糖氧化酶15份， 载体2542 份。 0009 根据本发明第一个方面所述的组合物， 所述组合物由以下重量份的原料制成： 博 落回提 取物6份， 丁酸梭菌复合制剂6份， 葡萄糖氧化酶3份， 载体34份。 0010 根据本发明第一个方面所述的组合物， 所述博落回提取物和丁酸梭菌复合制剂的 比例为(0.51.5)： 1。 0011 根据本发明第一个方面所述的组合物， 所述博落回提取物和丁酸梭菌复合制剂的 比例为 1： 1。 0012 根据本发明。

9、第一个方面所述的组合物， 所述博落回提取物中血根碱的含量为 0.15。 0013 根据本发明第一个方面所述的组合物， 所述丁酸梭菌复合制剂中丁酸梭菌活菌数 说明书 1/9 页 3 CN 111557389 A 3 为8108 cfu/g。 0014 根据本发明第一个方面所述的组合物， 所述葡萄糖氧化酶的酶活为2000U/g。 0015 根据本发明第一个方面所述的组合物， 所述载体为二氧化硅。 0016 本发明的第二个方面， 提供一种饲料添加剂， 含有本发明第一个方面所述的组合 物。 0017 本发明的第三个方面， 提供一种黄羽肉鸡饲料， 含有本发明第二个方面所述的饲 料添加 剂。 0018 根。

10、据本发明第三个方面所述的黄羽肉鸡饲料， 所述饲料中的饲料添加剂的添加量 为： 1.5kg/1000kg。 0019 本发明的有益效果是： 0020 (1)本发明包括的博落回提取物、 丁酸梭菌、 葡萄糖氧化酶均具有抑菌、 杀菌能力， 通 过组合， 抑菌杀菌能力相比单一成分提升23倍， 对于黄羽肉鸡细菌性肠炎具有很好的 预防 和治疗效果， 同时能够提高机体免疫水平。 0021 (2)本发明中博落回提取物同时具有抗炎效果， 能够减少机体炎症发生， 节约炎症 带来 的能量损耗， 提高生产净能， 促生长。 0022 (3)本发明中丁酸梭菌在肠道内释放丁酸。 丁酸后段上皮细胞的主要能量来源， 能 够加 快。

11、肠道上皮修复和发育， 提高肠道形态完整性， 同时作为油的一种能够提高饲料的能 量值。 0023 (4)本发明中葡萄糖氧化酶同时具有抗氧化应激和代谢机体毒素效果， 能够减少 应激和 霉菌毒素带来的机体损伤， 提高机体健康水平； 并降低消化道pH值， 提高消化酶活 性， 提 升营养物质消化率， 改善生长性能。 0024 综上所述， 博落回提取物、 丁酸梭菌、 葡萄糖氧化酶的组合具有强效的组合效应， 能够 极大提升产品的综合性能， 有效替代抗生素的抑菌、 杀菌效果， 同时具有显著促生长 效果。 黄羽肉鸡采食添加有该替抗中草药菌酶制剂的饲料后， 能够抑制肠道致病菌的繁 殖、 提高肠 道形态完整性， 促。

12、进肠道健康， 提高机体免疫力， 增强抗氧化能力和抗炎能力， 提高营养物 质消化吸收率， 改善生长性能， 增加养殖效益。 附图说明 0025 图1不同替抗中草药菌酶制剂对大肠杆菌抑菌效果。 具体实施方式 0026 博落回提取物取自湖南美可达公司的博落回散， 有效成分血根碱含量为0.15。 0027 丁酸梭菌复合制剂为丁酸梭菌菌液加入载体玉米淀粉和粘合剂乙基纤维素， 通过 摇摆制 粒法制成粒径为23mm的颗粒， 颗粒中丁酸梭菌活菌数为8108cfu/g。 0028 葡萄糖氧化酶取自广东溢多利生物科技股份有限公司， 酶活力为2000U/g。 0029 替抗中草药菌酶制剂的制备方法， 包括如下步骤： 。

13、称量等重量博落回提取物和载 体二氧 化硅， 混匀得到混合物一； 丁酸梭菌菌液加入载体玉米淀粉制成和粘合剂乙基纤维 素， 通过 摇摆制粒法制成粒径为23mm的颗粒， 颗粒中丁酸梭菌活菌数为8108cfu/g； 称 量上述丁酸 梭菌颗粒与混合物一进行混匀得到混合物二； 称量等重量载体二氧化硅和葡 说明书 2/9 页 4 CN 111557389 A 4 萄糖氧化酶， 混 匀后得到混合物三； 将混合物二、 混合物三及载体二氧化硅进行混匀， 最终 得到黄羽肉鸡替 抗中草药菌酶制剂产品。 0030 混合过程可用立式混合机、 单轴或双轴卧式混合机， 混合时间根据选择混合机类 型时长 为515分钟， 获得替。

14、抗中草药菌酶制剂。 0031 实施例1 0032 一种替抗中草药菌酶制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物4份， 丁酸 梭菌 复合制剂4份， 葡萄糖氧化酶1份， 二氧化硅41份。 0033 实施例2 0034 一种替抗中草药菌酶制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物6份， 丁酸 梭菌 复合制剂6份， 葡萄糖氧化酶3份， 二氧化硅35份。 0035 实施例3 0036 一种替抗中草药菌酶制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物10份， 丁酸 梭菌 复合制剂10份， 葡萄糖氧化酶5份， 二氧化硅25份。 0037 对比实施例1 0038 一种制剂， 由以下重量份的原材料。

15、制成： 博落回提取物6份， 二氧化硅44份。 0039 对比实施例2 0040 一种制剂， 由以下重量份的原材料制成： 丁酸梭菌复合制剂6份， 二氧化硅44份。 0041 对比实施例3 0042 一种制剂， 由以下重量份的原材料制成： 葡萄糖氧化酶3份， 二氧化硅47份。 0043 对比实施例4 0044 一种制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物6份， 葡萄糖氧化酶3份， 二 氧 化硅41份。 0045 对比实施例5 0046 一种制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物6份， 丁酸梭菌复合制剂6 份， 二氧化硅38份。 0047 对比实施例6 0048 一种制剂， 由以下。

16、重量份的原材料制成： 丁酸梭菌复合制剂6份， 葡萄糖氧化酶3 份， 二氧化硅41份。 0049 对比实施例7 0050 一种制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物12份， 葡萄糖氧化酶3份， 二 氧 化硅35份。 对比例9与实施例2中的区别在于， 未添加丁酸梭菌复合制剂， 而博落回提取 物 的添加份数为实施例2中博落回提取物与丁酸梭菌复合制剂添加份数的总和。 0051 对比实施例8 0052 一种制剂， 由以下重量份的原材料制成： 丁酸梭菌复合制剂12份， 葡萄糖氧化酶3 份， 二氧化硅35份。 对比例9与实施例2中的区别在于， 未添加博落回提取物， 而丁酸梭菌复 合 制剂的添加份数。

17、为实施例2中博落回提取物与丁酸梭菌复合制剂添加份数的总和。 0053 对比实施例9 0054 一种替抗中草药菌酶制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物3份， 丁酸 梭菌 复合制剂7份， 葡萄糖氧化酶3份， 二氧化硅37份。 对比例9与实施例2中的区别在于， 博 说明书 3/9 页 5 CN 111557389 A 5 落回提取物与丁酸梭菌复合制剂的比值低于0.5:1。 0055 对比实施例10 0056 一种替抗中草药菌酶制剂， 由以下重量份的原材料制成： 博落回提取物10份， 丁酸 梭菌 复合制剂6份， 葡萄糖氧化酶3份， 二氧化硅31份。 对比例9与实施例2中的区别在于， 博 落。

18、回提取物与丁酸梭菌复合制剂的比值高于1.5:1。 0057 实施例4替抗中草药菌酶制剂的抑菌效果 0058 采用滤纸片法， 观察并测量抑菌圈直径， 以此评估抑菌效果。 具体操作方法： 将培 养好 的试验菌株用无菌生理盐水稀释成浓度约为106CFU/ml的菌液， 吸取0.5ml移入无菌 培养皿 中， 倒入37灭菌营养琼脂混匀制成试验菌平板。 用灭菌缓冲液配制为12组抗菌溶 液， 分 别为实施例1至3组、 对比实施例1至9组， 抗菌溶液中分别添加本发明实施例1至3组、 对比实施例1至9组制备的制剂， 实施例1至3组、 对比实施例1至9组制备的制剂与灭菌 缓冲 液的质量配比均为1.5kg： 1000。

19、kg。 将灭菌滤纸片(直径6mm)分别浸入不同浓度的溶 液中， 2min后取出滤纸片放入试验菌平板， 将平板在37下培养18h。 结果显示如表1所示。 0059 表1体外抑菌效果测定结果 0060 0061 由表1可以看出， 实施例1组、 实施例2组、 实施例3组对各种致病菌的抑菌效果较对 比实施例1-3组高23倍， 博落回提取物、 丁酸梭菌复合制剂、 葡萄糖氧化酶的协同抑菌效 果突出。 0062 实施例1组、 实施例2组、 实施例3组对各种致病菌的抑菌效果较对比实施例4组和 对 比实施例6组高2倍左右， 略高于对比实施例5组， 博落回提取物、 丁酸梭菌复合制剂、 葡 萄糖氧化酶的协同抑菌效果。

20、高于博落回提取物、 丁酸梭菌复合制剂、 葡萄糖氧化酶中的任 意 两种组合的抑菌效果； 对比实施例5组对各种致病菌的抑菌效果明显优于对比实施例4 说明书 4/9 页 6 CN 111557389 A 6 和对 比实施例6组， 博落回提取物、 丁酸梭菌复合制剂的联合抑菌效果优于博落回提取物 与葡萄 糖氧化酶、 丁酸梭菌复合制剂与葡萄糖氧化酶的联合抑菌效果。 0063 实施例2组对各种致病菌的抑菌效果明显优于对比实施例7组和对比实施例8组， 博落 回提取物、 丁酸梭菌复合制剂的联合抑菌效果明显优于等量博落回提取物或丁酸梭 菌复合制 剂， 博落回提取物与丁酸梭菌复合制剂具有显著的协同抑菌效果。 006。

21、4 实施例1组、 实施例2组、 实施例3组对各种致病菌的抑菌效果明显优于对比实施例 9 和对比实施例10组， 博落回提取物与丁酸梭菌复合制剂的比值在0.51.5:1范围内抑菌 效果 更佳。 0065 实施例5替抗中草药菌酶制剂对动物生长性能、 血清生化指标、 肠道健康影响 0066 选用健壮、 活泼、 均匀1日龄黄鸡仔鸡4000羽， 随机平均分为8个处理组， 每个处理 组 500羽， 分别为实施例1组、 实施例2组、 实施例3组、 对比实施例4组、 对比实施例5组、 对 比实施例6组、 抗生素组， 其中实施例1组、 实施例2组、 实施例3组、 对比实施例4组、 对比实 施例5组、 对比实施例6。

22、组的黄羽肉鸡所饲喂日粮中分别添加本发明实施例1、 实施 例2、 实 施例3、 对比实施例4、 对比实施例5、 对比实施例6制备的替抗中草药菌酶制剂， 实施例1、 实 施例2、 实施例3、 对比实施例4、 对比实施例5、 对比实施例6制备的替抗中 草药菌酶制剂与 基础日粮的质量配比均为1.5kg： 1000kg， 抗生素组的黄羽肉鸡饲喂日粮中添 加抗生素， 抗 生素的添加量为1000kg日粮中添加50g金霉素和2.5g那西肽， (金霉素、 那 西肽均为抗生 素， 禁药期7天)， 持续饲喂70天后， 测定各组生长性能、 血清生化指标、 脾 脏细胞因子水平、 肠道微生物和肠道形态， 测定结果如表2、。

23、 表3、 表5、 表7、 表8、 表9 所示： 0067 1、 生产性能 0068 表2黄羽肉鸡全期生长性能测定结果 0069 0070 注： 表中同列数据肩标不同字母者表示差异显著(P0.05)。 0071 由表1可以看出， 黄羽肉鸡采食加入本发明实施例1、 实施例2、 实施例3制备的替抗 中 草药菌酶制剂的日粮， 相比采食加入抗生素、 对比实施例4、 对比实施例5、 对比实施例6 制 剂的日粮， 末重、 日增重均显著提高， 料肉比明显下降。 0072 2、 血清生化指标(免疫指标、 抗氧化指标) 0073 表3黄羽肉鸡血清生化指标测定结果 说明书 5/9 页 7 CN 111557389 。

24、A 7 0074 0075 注： 表中同列数据肩标不同字母者表示差异显著(P0.05)。 0076 免疫球蛋白是介导动物体液免疫的主要免疫分子， 也是反映机体免疫功能的重要 指标， 血清中免疫球蛋白含量的升高表明机体免疫功能增强。 由表3可以看出， 黄羽肉鸡采 食加入 本发明实施例1、 实施例2、 实施例3制备的替抗中草药菌酶制剂的日粮， 相比采食加 入抗生 素、 对比实施例4、 对比实施例5、 对比实施例6制剂的日粮， 免疫球蛋白GLB、 IgG和 IgM 均明显提高。 0077 3、 脾脏细胞因子水平(炎症指标) 0078 脾脏细胞因子水平测定采用实时荧光定量PCR法分析IL-2、 IL-。

25、4、 IL-10和IFN- mRNA 的相对表达量。 每组随机去12个脾脏样本， 提取脾脏总RNA， 逆转录合成cDNA， 以 - actin 为内参， 对目的基因进行PCR扩增， 检测模板Ct值， 采用2- Ct法进行相对定量， 引物 序列 参照表4。 0079 表4 RT-PCR引物序列 0080 0081 表5黄羽肉鸡脾脏细胞因子mRNA相对表达量测定结果 0082 0083 0084 注： 表中同行数据肩标不同字母者表示差异显著(P0.05)。 0085 由表5可以看出， 黄羽肉鸡采食本发明实施例1、 实施例2、 实施例3制备的替抗中草 药 菌酶制剂的日粮， 相比采食加入抗生素、 对比。

26、实施例4、 对比实施例5、 对比实施例6制剂 的 日粮， IL-2mRNA表达量明显提高， IL-10mRNA和IFN-mRNA表达量呈下调趋势。 说明书 6/9 页 8 CN 111557389 A 8 0086 4、 肠道菌群 0087 采用天根粪便基因组DNA试剂盒(天根生化科技北京有限公司)， 按照说明书操作 方 法分别提取盲肠食糜总DNA。 采用特异性引物(表2) ， 对总细菌、 Firmicutes、 Bacterodietes、 Clostridium cluster IV group、 Clostridium cluster XIV group、 Escherichia col。

27、i和Lactobacillus进 行菌群定量分析。 采用Chowdhury(1991) (Chowdhury,1991)的方法， 挑取代表细菌单克隆 的16S rRNA基因制备质粒， 梯度稀释后建 立标准曲线。 采用SYBR(TaKaRa Biotechnology， 大连， 中国)， 使用CFX96 PCR System (Bio-Rad,USA)系统进行荧光定量PCR(qPCR)。 0088 表6细菌基因实时定量PCR引物及其序列 0089 0090 0091 表7黄羽肉鸡肠道微生物测定结果 说明书 7/9 页 9 CN 111557389 A 9 0092 0093 注： 表中同行数据肩。

28、标不同字母者表示差异显著(P0.05)。 0094 由表7可以看出， 黄羽肉鸡采食加入本发明实施例1、 实施例2、 实施例3制备的替抗 中 草药菌酶制剂的日粮， 相比采食加入抗生素、 对比实施例4、 对比实施例5、 对比实施例6 制 剂的日粮， Clostridium cluster XIVa和Bacterodietes数量明显提高， Escherichia coli明显减少。 0095 6、 肠道形态 0096 表8十二指肠形态结果 0097 0098 0099 注： 表中同列数据肩标有不同写字母则表示差异显著(P0.05)。 VH表示绒毛高度， CD表示隐窝深度。 下表同。 0100 表9。

29、空肠形态结果 说明书 8/9 页 10 CN 111557389 A 10 0101 0102 由表8和表9可以看出， 黄羽肉鸡采食加入本发明实施例1、 实施例2、 实施例3制备 的 替抗中草药菌酶制剂的日粮， 相比采食加入抗生素、 对比实施例4、 对比实施例5、 对比实 施 例6制剂的日粮， 十二指肠和空肠绒毛高度明显提高， 绒毛高度/隐窝深度的比值升高。 0103 以上仅是本发明的优选实施方式， 应当指出的是， 上述优选实施方式不应视为对 本发明 的限制， 本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。 对于本技术领域的 普通技术 人员来说， 在不脱离本发明的精神和范围内， 还可以做出若。

30、干改进和润饰， 这些 改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。 说明书 9/9 页 11 CN 111557389 A 11 SEQUENCE LISTING 广东溢多利生物科技股份有限公司 一种替抗中草药菌酶组合物及其应用 24 PatentIn version 3.5 1 23 DNA 人工序列 1 ttctgggacc actgtatgct ctt 23 2 25 DNA 人工序列 2 taccgacaaa gtgagaatca atcag 25 3 20 DNA 人工序列 3 cagaccagca ccagtcatca 20 4 20 DNA 人工序列 4 tcccgttctc atcc。

31、atcttc 20 5 22 DNA 人工序列 5 aagtcaaagc cgcacatcaa ac 22 6 23 序列表 1/4 页 12 CN 111557389 A 12 DNA 人工序列 6 ctggattctc aagtcgttca tcg 23 7 20 DNA 人工序列 7 gtgstgcayg gyygtcgtca 20 8 20 DNA 人工序列 misc_feature (12).(12) n is a, c, g, or t 8 acgtcrtccm cnccttcctc 20 9 25 DNA 人工序列 9 ggagyatgtg gtttaattcg aagca 25。

32、 10 20 DNA 人工序列 10 agctgacgac aaccatgcac 20 11 25 DNA 人工序列 11 ggarcatgtg gtttaattcg atgat 25 12 序列表 2/4 页 13 CN 111557389 A 13 20 DNA 人工序列 12 agctgacgac aaccatgcag 20 13 21 DNA 人工序列 13 ctctacgaga ctcaagcttg c 21 14 16 DNA 人工序列 14 gcacaagcag tggagt 16 15 18 DNA 人工序列 15 cttcctccgt tttgtcaa 18 16 19 DN。

33、A 人工序列 16 cggtacctga ctaagaagc 19 17 19 DNA 人工序列 17 agtttyattc ttgcgaacg 19 18 22 DNA 人工序列 序列表 3/4 页 14 CN 111557389 A 14 18 gacgacaacc atgcaccacc tg 22 19 19 DNA 人工序列 19 agcagtaggg aatcttcca 19 20 18 DNA 人工序列 20 attccaccgc tacacatg 18 21 20 DNA 人工序列 21 cgtcccgatt aacagagctt 20 22 20 DNA 人工序列 22 catgccgcgt gtatgaagaa 20 23 21 DNA 人工序列 23 cgggtaacgt caatgagcaa a 21 24 22 DNA 人工序列 24 ggtgttcttc ccgatatcta ca 22 序列表 4/4 页 15 CN 111557389 A 15 图1 说明书附图 1/1 页 16 CN 111557389 A 16 。