放散试验室内质控品及质控方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010504303.2 (22)申请日 2020.06.05 (71)申请人 西安市第四医院 地址 710000 陕西省西安市新城区解放路 21号 (72)发明人 赵家宁宋贺李建刚刘月红 原勋孙明勇董乔睿杨周 (74)专利代理机构 西安维赛恩专利代理事务所 (普通合伙) 61257 代理人 刘艳霞 (51)Int.Cl. G01N 33/80(2006.01) G01N 33/531(2006.01) (54)发明名称 一种放散试验室内质控品及质控方法 (57)摘要 本发明。

2、公开了一种放散试验室内质控品， 包 括： 阴性质控品： 其有效成分为压积红细胞， 该压 积红细胞直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛查 试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴 性。 强阳性质控品： 其有效成分为强致敏压积红 细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛 查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测 阴性的压积红细胞， 并由单克隆IgG型抗D原液 致敏得到。 弱阳性质控品： 其有效成分为弱致敏 压积红细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规则 抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散 法检测阴性的压积红细胞， 并由稀释的单克隆 IgG型抗D原液致敏得到。 采用该质控品试验。

3、， 可 在临床上提供可信赖的实验依据。 权利要求书2页 说明书9页 CN 111721943 A 2020.09.29 CN 111721943 A 1.一种放散试验室内质控品， 其特征在于， 包括： 阴性质控品： 其有效成分为压积红细胞， 该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、 不规则抗 体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性； 强阳性质控品： 其有效成分为强致敏压积红细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规则抗 体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性的压积红细胞， 并由单克隆IgG型 抗-D原液致敏得到； 弱阳性质控品： 其有效成分为弱致敏压积红细胞， 选自直接抗人球蛋。

4、白试验、 不规则抗 体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性的压积红细胞， 并由稀释的单克 隆IgG型抗-D原液致敏得到； 各所述有效成分的体积相等。 2.根据权利要求1所述的一种放散试验室内质控品， 其特征在于， 还包括细胞保护液， 用于保存各所述有效成分， 该混合液中包括如下： 氯化钠1.8g/L， 甘氨酸12g/L， 乙二胺四乙 酸钠3g/L， pH为6.70.2， 渗透压： 33020mOsm/(KgH2O)。 3.根据权利要求1或2所述的一种放散试验室内质控品， 其特征在于， 所述红细胞为O型 RhD阳性。 4.根据权利要求3所述的一种放散试验室内质控品， 其特征在于， 。

5、所述阴性质控品、 强 阳性质控品和弱阳性质控品中的有效成分均为100 l1ml。 5.根据权利要求4所述的一种放散试验室内质控品， 其特征在于， 所述稀释的单克隆 IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原液而得， 稀释液与原液的体积比为1 2000。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的一种放散试验室内质控品的制备方法， 其特征在 于， 该制备方法如下： 选取血样， 且所述血样直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛查试验以及自身对照试验 阴性； 将所述血样离心， 弃去血浆， 得红细胞； 将所述红细胞用生理盐水洗涤， 离心， 去除上清液， 得压积红细胞； 对所述压积红细胞进行酸放散试。

6、验， 并进行如下操作： a.当试验结果为阴性时， 则： 取部分所述压积红细胞作为阴性质控品的有效成分； 另取部分所述压积红细胞， 由单克隆IgG型抗-D原液致敏， 作为强阳性质控品的有效成 分； 另取部分所述压积红细胞， 由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏， 作为弱阳性质控品的 有效成分； b.当所述试验结果为阳性时， 则另外选取血样制备， 直至得到符合a试验结果的质控 品。 7.一种放散试验室内质控方法， 采用权利要求1-5中任一项所述的一种放散试验室内 质控品， 其特征在于， 包括单次质控方法和连续质控方法； 所述单次质控方法如下： 分别取含有相同体积有效成分的所述阴性质控品、 强阳性质。

7、控品和弱阳性质控品， 同 权利要求书 1/2 页 2 CN 111721943 A 2 时取一份或多份待检样本， 将所述质控品和待检样本离心、 洗涤处理， 得到各自的压积红细 胞； 然后进行如下操作： 步骤一、 在所述阴性质控品、 强阳性质控品、 弱阳性质控品和待检样本的压积红细胞中 均分别加入与各压积红细胞相同体积的洗脱液， 混合均匀， 离心， 得一次上清液； 步骤二、 分别吸取各所述一次上清液； 在各所述一次上清液中分别滴入中和液， 摇匀， 液体由黄色变为蓝色； 步骤三、 对所述步骤二中的液体离心处理， 得二次上清液， 该所述二次上清液为放散 液； 步骤四、 将各所述放散液各自加入低离子抗。

8、人球蛋白卡的测试孔中， 在各所述放散液 中分别加入与各分散液中的抗体对应的红细胞悬液， 孵育， 离心处理； 当所述测试孔中的结果如下时： 阴性质控品的放散液的孔中： 红细胞完全沉积在凝胶底部， 未发生凝集； 强阳性质控品的放散液的孔中： 红细胞全部位于凝胶表面， 凝集强度以4+为靶值， 偏差 不大于1； 弱阳性质控品的放散液的孔中： 红细胞主要位于凝胶中部， 凝集强度以2+为靶值， 偏差 不大于1； 则表明单次结果在控， 执行步骤五； 当所述测试孔中的结果有一项不符合上述结果时， 则表明结果失控， 执行步骤六； 所述连续质控方法如下： 连续记录所述单次质控方法的结果， 当强阳性质控品的放散液的。

9、孔中： 凝集强度连续 三次低于或高于靶值； 或者弱阳性质控品的放散液的孔中： 凝集强度连续三次低于或高于 靶值； 则表明第三次单次质控结果失控， 执行步骤六； 步骤五、 输出待检样本的检测结果； 步骤六、 重复步骤一五， 重新检测待检样本。 8.根据权利要求7所述的一种放散试验室内质控方法， 其特征在于， 所述阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品的有效成分的量为100 l1ml， 一份待检样本中压积红细胞 为500 l1ml。 9.根据权利要求7或8所述的一种放散试验室内质控方法， 其特征在于， 所述洗脱液的 有效成分为甘氨酸。 10.根据权利要求9所述的一种放散试验室内质控方法， 其特征。

10、在于， 所述中和液的有 效成分为三羟甲基氨基甲烷。 权利要求书 2/2 页 3 CN 111721943 A 3 一种放散试验室内质控品及质控方法 【技术领域】 0001 本发明属于医学检测技术领域， 具体涉及一种放散试验室内质控品及质控方法。 【背景技术】 0002 放散试验是输血检验工作中常用的实验方法， 广泛应用于疑难血型、 疑难配血、 新 生儿溶血病检测等临床工作中。 输血相容性检测的室内质量控制(IQC)已在临床工作中广 泛开展， 既可以购买成品质控物， 也可以实验室自制； 而放散这一重要试验的质量控制却少 有人问津。 放散试验较输血相容性检测更精密， 更容易受到测试环境、 操作规范。

11、性等因素的 影响， 更需要做好质量控制工作。 室内质量控制可及时发现试验各环节存在的误差， 是确保 检测结果准确、 可靠的重要措施； 合格有效的质控品是IQC中的关键因素之一， 能够监测和 控制实验的精密度， 连续评价本实验室检测工作的可靠性， 给临床医生提供可信赖的实验 依据。 【发明内容】 0003 本发明的目的是提供放散试验室内质控品及质控方法， 在临床上提供可信赖的实 验依据。 0004 本发明采用以下技术方案： 一种放散试验室内质控品， 包括： 0005 阴性质控品： 其有效成分为压积红细胞， 该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、 不规 则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检。

12、测阴性； 0006 强阳性质控品： 其有效成分为强致敏压积红细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规 则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性的压积红细胞， 并由单克隆 IgG型抗-D原液致敏得到。 0007 弱阳性质控品： 其有效成分为弱致敏压积红细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规 则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性的压积红细胞， 并由稀释的 单克隆IgG型抗-D原液致敏得到。 各有效成分的体积相等。 0008 进一步地， 还包括细胞保护液， 用于保存各有效成分， 该混合液中的各成分如下： 氯化钠1.8g/L， 甘氨酸12g/L， 乙二胺四乙酸钠3g/。

13、L， pH为6.70.2， 渗透压： 33020mOsm/ (KgH2O)。 0009 进一步地， 该红细胞为O型RhD阳性。 0010 进一步地， 该阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品中的有效成分均为100 l 1ml。 0011 进一步地， 该稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原 液而得， 稀释液与原液的体积比为12000。 0012 本发明还公开了上述一种放散试验室内质控品的制备方法， 该制备方法如下： 0013 选取血样， 且血样直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛查试验以及自身对照试验 阴性。 说明书 1/9 页 4 CN 111721943 A 。

14、4 0014 将血样离心， 弃去血浆， 得红细胞。 0015 将红细胞用生理盐水洗涤， 离心， 去除上清液， 得压积红细胞。 0016 对压积红细胞进行酸放散试验， 并进行如下操作： 0017 a.当试验结果为阴性时， 则： 0018 取部分压积红细胞作为阴性质控品的有效成分； 0019 另取部分压积红细胞， 由单克隆IgG型抗-D原液致敏， 作为强阳性质控品的有效成 分； 0020 另取部分压积红细胞， 由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏， 作为弱阳性质控品的 有效成分； 0021 b.当试验结果为阳性时， 则另外选取血样制备， 直至得到符合a试验结果的质控 品。 0022 本发明还公开了。

15、一种放散试验室内质控方法， 采用上述的一种放散试验室内质控 品， 包括单次质控方法和连续质控方法； 0023 上述单次质控方法如下： 0024 分别取含有相同体积有效成分的阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品， 同 时取一份或多份待检样本， 将质控品和待检样本离心、 洗涤处理， 得到各自的压积红细胞； 然后进行如下操作： 0025 步骤一、 在阴性质控品、 强阳性质控品、 弱阳性质控品和待检样本的压积红细胞中 均分别加入与各压积红细胞相同体积的洗脱液， 混合均匀， 离心， 得一次上清液。 0026 步骤二、 分别吸取各一次上清液； 在各一次上清液中分别滴入中和液， 摇匀， 液体 由黄色变为。

16、蓝色。 0027 步骤三、 对步骤二中的液体离心处理， 得二次上清液， 该二次上清液为放散液。 0028 步骤四、 将各放散液各自加入低离子抗人球蛋白卡的测试孔中， 在各放散液中分 别加入与各分散液中的抗体对应的红细胞悬液， 孵育， 离心处理。 0029 当上述测试孔中的结果如下时： 0030 阴性质控品的放散液的孔中： 红细胞完全沉积在凝胶底部， 未发生凝集。 0031 强阳性质控品的放散液的孔中： 红细胞全部位于凝胶表面， 凝集强度以4+为靶值， 偏差不大于1。 0032 弱阳性质控品的放散液的孔中： 红细胞主要位于凝胶中部， 凝集强度以2+为靶值， 偏差不大于1。 0033 则表明单次结。

17、果在控， 执行步骤五。 0034 当测试孔中的结果有一项不符合上述结果时， 则表明结果失控， 执行步骤六； 0035 上述连续质控方法如下： 0036 连续记录单次质控方法的结果， 当强阳性质控品的放散液的孔中： 凝集强度连续 三次低于或高于靶值； 或者弱阳性质控品的放散液的孔中： 凝集强度连续三次低于或高于 靶值； 则表明第三次单次质控结果失控， 执行步骤六。 0037 步骤五、 输出待检样本的检测结果。 0038 步骤六、 重复步骤一五， 重新检测待检样本。 0039 进一步地， 该阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品的有效成分的量为100 l 说明书 2/9 页 5 CN 11172。

18、1943 A 5 1ml， 一份待检样本中压积红细胞为500 l1ml。 0040 进一步地， 该洗脱液的有效成分为甘氨酸。 0041 进一步地， 该中和液的有效成分为三羟甲基氨基甲烷。 0042 本发明的有益效果是： 1.制备出适用于酸放散的强阳性、 弱阳性、 阴性三个水平的 质控品， 有助于室内质控的开展。 2.使用单克隆IgG型抗-D这样的高亲和力抗体可节约制备 阳性质控品的时间， 提高工作效率。 3.不需要采用额外的特殊设备， 一般的输血相容性检测 实验室即可制备和使用。 【具体实施方式】 0043 下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。 0044 本发明一种放散试验室内质控品， 。

19、包括： 阴性质控品： 其有效成分为压积红细胞， 该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放 散法检测阴性； 0045 强阳性质控品： 其有效成分为强致敏压积红细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规 则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性的压积红细胞， 并由单克隆 IgG型抗-D原液致敏得到； 0046 弱阳性质控品： 其有效成分为弱致敏压积红细胞， 选自直接抗人球蛋白试验、 不规 则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性， 且酸放散法检测阴性的压积红细胞， 并由稀释的 单克隆IgG型抗-D原液致敏得到； 稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理。

20、盐水稀释单克隆 IgG型抗-D原液而得， 稀释液与原液的体积比为12000。 上述质控品中各有效成分的体积 相等。 0047 还包括细胞保护液， 用于保存各有效成分， 该混合液中的各成分如下： 氯化钠 1.8g/L， 甘氨酸12g/L， 乙二胺四乙酸钠3g/L， pH为6.70.2， 渗透压： 33020mOsm/(Kg H2O)。 0048 上述红细胞为O型RhD阳性。 阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品中的有效 成分均为100 l1ml。 稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原 液而得， 稀释液与原液的体积比为12000。 0049 为了增强结果的稳定性。

21、， 选择可购买的、 批量生产的、 成分单一的单克隆IgG型抗- D试剂致敏O型RhD阳性红细胞。 单克隆IgG型抗-D与O型RhD阳性红细胞结合迅速， 1min即可 与O型RhD阳性红细胞结合。 与孵育15min、 30min得到的致敏细胞直接抗人球蛋白试验凝集 强度无差异。 0050 采用微柱凝胶法检测多个批次的单克隆IgG型抗-D效价均为256， 表明单克隆IgG 型抗-D很稳定， 批间差异小， 以该试剂制备阳性质控品有利于本制备方法在不同实验室的 推广和使用。 0051 上述的一种放散试验室内质控品的制备方法如下： 0052 选取血样， 且血样直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛查试验以及。

22、自身对照试验 阴性。 0053 将血样离心， 弃去血浆， 得红细胞； 0054 将红细胞用生理盐水洗涤， 离心， 去除上清液， 得压积红细胞； 说明书 3/9 页 6 CN 111721943 A 6 0055 对压积红细胞进行酸放散试验， 并进行如下操作： 0056 a.当结果为阴性时， 则： 0057 取部分所述压积红细胞作为阴性质控品的有效成分； 0058 另取部分所述压积红细胞， 由单克隆IgG型抗-D原液致敏， 作为强阳性质控品的有 效成分； 0059 另取部分所述压积红细胞， 由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏， 作为弱阳性质控 品的有效成分。 0060 b.当上述结果为阳性时，。

23、 则另外选取血样制备， 直至得到符合a试验结果的质控 品。 0061 一种放散试验室内质控方法， 采用上述的一种放散试验室内质控品， 包括单次质 控方法和连续质控方法。 0062 上述单次质控方法如下： 0063 分别取含有相同体积有效成分的所述阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控 品， 同时取一份或多份待检样本， 将所述质控品和待检样本离心、 洗涤处理， 得到各自的压 积红细胞； 然后进行如下操作： 0064 步骤一、 在所述阴性质控品、 强阳性质控品、 弱阳性质控品和待检样本的压积红细 胞中均分别加入与各压积红细胞相同体积的洗脱液， 混合均匀， 离心， 得一次上清液； 0065 步骤二、。

24、 分别吸取各所述一次上清液； 在各所述一次上清液中分别滴入中和液， 摇 匀， 液体由黄色变为蓝色； 0066 步骤三、 对所述步骤二中的液体离心处理， 得二次上清液， 该所述二次上清液为放 散液； 0067 步骤四、 将各所述放散液各自加入低离子抗人球蛋白卡的测试孔中， 在各所述放 散液中分别加入与各分散液中的抗体对应的红细胞悬液， 孵育， 离心处理； 0068 当所述测试孔中的结果如下时： 0069 阴性质控品的放散液的孔中： 红细胞完全沉积在凝胶底部， 未发生凝集； 0070 强阳性质控品的放散液的孔中： 红细胞全部位于凝胶表面， 凝集强度以4+为靶值， 偏差不大于1； 0071 弱阳性质。

25、控品的放散液的孔中： 红细胞主要位于凝胶中部， 凝集强度以2+为靶值， 偏差不大于1； 0072 则表明单次结果在控， 执行步骤五； 0073 当所述测试孔中的结果有一项不符合上述结果时， 则表明结果失控， 执行步骤六； 0074 上述连续质控方法如下： 0075 连续记录所述单次质控方法的结果， 当强阳性质控品的放散液的孔中： 凝集强度 连续三次低于或高于靶值； 或者弱阳性质控品的放散液的孔中： 凝集强度连续三次低于或 高于靶值； 则表明第三次单次质控结果失控， 执行步骤六； 0076 步骤五、 输出待检样本的检测结果； 0077 步骤六、 重复步骤一五， 重新检测待检样本。 0078 与放。

26、散液一起加入反应孔共孵育的红细胞悬液为用生理盐水稀释后得到体积浓 度为0.81的红细胞悬液。 质控品使用人ABO血型反定型用红细胞试剂盒中的O型RhD 说明书 4/9 页 7 CN 111721943 A 7 阳性红细胞。 待检样本使用的红细胞类型与其放散液中的潜在抗体类型相对应。 包括可购 买的标准红细胞试剂盒中的A型RhD阳性红细胞， B型RhD阳性红细胞， O型RhD阳性红细胞、 不 规则抗体筛查细胞和谱细胞。 0079 上述阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品的有效成分的量为100 l1ml， 一份待检样本中压积红细胞为500 l1ml。 0080 本发明还公开了一种细胞保存液， 。

27、用于保存上述的一种放散试验室内质控品的有 效成分， 其为一混合液， 该混合液溶剂为蒸馏水， 其内的主要成分为： 氯化钠1.8g/L， 甘氨酸 12g/L， 乙二胺四乙酸钠3g/L， pH为6.70.2， 渗透压： 33020mOsm/(KgH2O)。 在用于保存 质控品时， 保存液的体积与压积红细胞的体积比为10100。 实际试验中， 比例为10时， 即能 满足凝集强度的要求。 由于红细胞在无保存条件下会破裂， 所以可以选择比例大于10的的 保存液。 0081 为了验证本发明中的方法， 进行如下实验， 具体如下： 0082 1.1仪器与试剂： 0083 采用的红细胞放散液试剂盒， 购自珠海贝索。

28、生物技术有限公司； ABO、 RhD血型检测 卡、 低离子抗人球蛋白卡选自Bio-Rad公司； 医用离心机， 购自长春博研科学仪器有限责任 公司品； 孵育器、 专用离心机(DiaMed GmbH)； 水浴恒温振荡器、 水浴箱， 购自西安英达医疗 器械有限责任公司； 单克隆抗-A、 抗-B试剂血清， 单克隆IgM型抗-D、 IgG型抗-D试剂、 人ABO 血型反定型用红细胞试剂盒、 抗体筛选红细胞试剂、 抗人球蛋白试剂均购自上海血液生物 医药有限责任公司。 0084 1.2阴性、 强阳性、 弱阳性三个水平质控品的制备： 0085 1.2.1阴性质控品的制备： 选用健康体检者的血液标本。 体检者及。

29、其血样入选要 求： (1)体检者无输血史、 妊娠史及自身免疫疾病； (2)进行了肝功、 输血前8项筛查， 且其丙 氨酸转氨酶(ALT)、 HBsAg、 抗-HCV、 抗-HIV及梅毒抗体均符合 献血者健康检查要求 (GB18467-2011)规定； (3)血液采集时间5天的EDTA抗凝外周静脉血； (4)血型鉴定O型RhD 阳性， 直接抗人球蛋白试验、 不规则抗体筛查以及自身对照试验阴性。 收集符合以上要求的 血样10人份混合， 1000g离心5分钟， 弃去血浆， 得红细胞， 将得到的红细胞用生理盐水洗 涤、 离心1000g离心1分钟， 上层为上清液， 操作4次， 每次尽可能吸尽末次上清液， 。

30、得到底 部的压积红细胞。 0086 取压积红细胞进行放散试验， 若结果为阴性， 则取200 l压积红细胞作为阴性质控 品的有效成分。 0087 1.2.2强阳性质控品的制备方法及条件优化： 取200 l上述压积红细胞， 由单克隆 IgG型抗-D原液致敏， 作为强阳性质控品的有效成分。 为了得到最佳致敏条件， 采用正交试 验原理对压积红细胞与抗体混合比例、 孵育时间两个实验条件进行摸索， 具体如下： 将200 l压积红细胞分别与10 l、 25 l、 50 l、 100 l的IgG型抗-D原液在37孵育1min、 15min， 30min。 再分别用生理盐水各洗涤4次， 得到的强致敏压积红细胞作。

31、为强阳性质控品的有效 成分， 然后进行放散试验。 0088 1.2.3弱阳性质控品的制备及条件优化： 取200 l上述压积红细胞， 由单克隆IgG型 抗-D原液的稀释液致敏， 作为弱阳性质控品的有效成分。 采用微柱凝胶卡式法检测单克隆 IgG抗-D效价， 选择64、 128、 256三个稀释倍数的IgG抗-D致敏基础细胞， 以生理盐水进行稀 说明书 5/9 页 8 CN 111721943 A 8 释， 该倍数表示IgG型抗-D原液的稀释液与IgG型抗-D原液的体积比。 采用正交试验原理对 红细胞与抗体稀释度、 孵育时间两个实验条件进行摸索： 200 l压积红细胞与等体积的64、 128、 2。

32、56三个稀释倍数的IgG抗-D分别在37孵育1min、 15min， 30min， 再用生理盐水洗涤4 次， 得到的弱致敏压积红细胞作为弱阳性质控品的有效成分， 然后进行放散试验。 0089 稀释液的稀释比例与质控品中的有效成分的量有关， 如果有效成分的量越多， 稀 释的比例越大； 还与低离子抗人球蛋白卡有关， 根据不同厂家的低离子抗人球蛋白卡有关， 要进行试验调整。 0090 在上述制备中， 各质控品中的有效成分均选择的为200ul， 在试验中， 可选择的范 围为100ul1ml， 但是， 一般不会选择大剂量的红细胞， 因为太浪费血样。 0091 1.3三个水平的质控品对酸放散试验的适用性评。

33、价： 0092 1.3.1酸放散试验： 具体试验方法如下： 取一定体积的待检压积红细胞与等体积的 洗脱液轻轻混合均匀， 室温下反应约15秒， 立即以1000g离心1min。 洗脱液的有效成分为 甘氨酸。 离心完成后， 迅速分离压积红细胞和上清液， 用吸管吸取上清液转移入另一试管。 在分离的上清液中滴入中和液， 边滴边摇匀， 液体颜色由黄色变为蓝色即可。 中和液的有效 成分为三羟甲基氨基甲烷。 再以1000g离心1min， 将二次上清液转移入另一试管， 二次上 清液即为放散液。 取低离子抗人球蛋白卡， 用前离心。 取待检压积红细胞的放散液25 l， 加 入低离子抗人球蛋白卡的对应的检测孔中， 再。

34、加入50 l1O型RhD阳性红细胞悬液， 置于卡 式孵育器离心15min后， 立即放入卡式离心机85g离心10min， 观察记录结果。 微柱凝胶卡 式法结果判读方式如下： (1)红细胞完全沉积在凝胶底部， 未发生凝集， 反应结果为阴性， 凝 集强度用 “-” 表示。 (2)红细胞全部位于凝胶表面， 发生强凝集， 凝集强度用 “4+” 表示。 (3)红 细胞主要位于凝胶的上半部， 发生较强凝集， 凝集强度用 “3+” 表示。 (4)红细胞主要位于凝 胶的中部， 发生中等强度的凝集， 凝集强度用 “2+” 表示。 (5)红细胞主要位于凝胶的下半部， 发生较弱的凝集， 凝集强度用 “+” 表示。 0。

35、093 1.3.2酸放散试验强阳性质控品的最佳制备条件： 0094 酸放散试验强阳性质控品的最佳制备条件如表1所示： 选择10 l、 25 l、 50 l、 100 l的单克隆IgG型抗-D原液在三个孵育时间梯度下均可成功致敏O型RhD阳性红细胞， 得到3+ 4+的强阳性放散结果； 末次洗液凝集强度为阴性。 以抗体用量最少、 孵育时间最短、 凝集 强度为4+的制备条件作为强阳性质控品的最佳制备条件： 200 l压积红细胞与25 l的单克 隆IgG型抗-D原液在37孵育1min。 0095 表1强阳性质控品制备的抗体用量、 孵育时间a 说明书 6/9 页 9 CN 111721943 A 9 0。

36、096 0097 0098 a表示凝集强度检测采用微柱凝胶卡式法。 0099 1.3.3酸放散试验弱阳性质控品的最佳制备条件： 0100 酸放散试验弱阳性质控品的最佳制备条件如表2所示： 64、 128、 256三个稀释倍数 的IgG抗-D致敏O型RhD阳性红细胞直接抗人球蛋白试验均阴性， 但放散试验阳性。 以凝集强 度为2+、 孵育时间最短的制备条件作为弱阳性质控品的最佳制备条件： 200 l压积红细胞与 200 l的256倍稀释的单克隆IgG型抗-D在37孵育1min。 0101 表2弱阳性质控品制备的抗体用量、 孵育时间a 说明书 7/9 页 10 CN 111721943 A 10 0。

37、102 0103 a表示凝集强度检测采用微柱凝胶卡式法。 0104 1.4三个水平的质控品对热放散试验的适用性评价： 0105 热放散试验： 试验方法如下： 取一定体积的待检红细胞与等体积0.9生理盐水混 合， 56孵育一定时间， 离心套管一同孵育， 1000g保温离心1min得到上清液， 该上清液即 为放散液。 取低离子抗人球蛋白卡， 用前离心。 取待检压积红细胞的放散液25 l， 加入低离 子抗人球蛋白卡的对应的检测孔中， 再加入50 l浓度为1O型RhD阳性红细胞悬液， 置于卡 式孵育器离心15min后， 立即放入卡式离心机85g离心10min， 观察记录结果。 为了探讨阴、 阳性质控品。

38、最佳放散剂量和时间， 采用正交试验原理分别采用200 l、 500 l、 1ml三种体积 的压积红细胞， 56放散1min、 3min、 5min、 10min、 15min五个时间梯度进行比较。 0106 最终， 不论以何种条件， 热放散结果均为阴性。 由此可见， 单克隆IgG型抗-D致敏的 红细胞并不适用于热放散， 热放散不能将抗-D抗体从阳性质控品的红细胞上释放下来。 0107 1.5采用本发明中的方法制备的质控品的重复性评价： 0108 连续20天每天分别制备强阳性、 弱阳性、 阴性质控品各1份， 与临床样本同步进行 酸放散试验， 观察本发明中的制备方法是否稳定。 本发明中， 强阳性质。

39、控品的凝集强度靶值 为4+， 弱阳性质控品凝集强度靶值为2+， 阴性质控品凝集强度为阴性。 连续20天的稳定性监 测显示， 阴性质控品(-)和强阳性质控品(4+)凝集强度完全没有变化， 稳定性非常好； 弱阳 性对照凝集强度仅有一次结果为1+， 其余十九次均为2+。 稳定性不如前两者， 但可满足实验 室对弱阳性质控品的质量要求。 综上所述， 本发明中的质控品制备方法重复性良好， 可满足 质控品制备的要求。 0109 1.6采用本发明中三个水平质控品的保存稳定性评价： 0110 分别制备阴性质控品、 强阳性质控品和弱阳性质控品， 其中有效成分压积红细胞 均为200 l， 各加入细胞保存液2ml， 。

40、分别分装于各塑料试管内， 将各塑料试管密封保存于4 冰箱。 细胞保存液为混合液， 在混合液中氯化钠1.8g/L， 甘氨酸12g/L， 乙二胺四乙酸钠 说明书 8/9 页 11 CN 111721943 A 11 3g/L， pH为6.70.2， 渗透压： 33020mOsm/(KgH2O)。 0111 自制备之日起， 在第0天、 第7天、 第14天、 第21天、 第28天、 第35天进行酸放散试验， 结果如表3所示。 结果说明三个水平的质控品可以在以上条件下稳定保存， 满足质控品稳定 性的要求。 0112 表3质控品不同保存时间的酸放散试验凝集强度a 0113 0114 a凝集强度检测采用微柱凝胶卡式法。 说明书 9/9 页 12 CN 111721943 A 12 。