利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010960542.9 (22)申请日 2020.09.14 (71)申请人 广西壮族自治区药用植物园 地址 530023 广西壮族自治区南宁市兴宁 区长岗路189号 (72)发明人 梁莹韦坤华李林轩秦双双 缪剑华韦范韦桂丽陈娟 乔柱 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所(普通合伙) 11369 代理人 邓雪明 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方 法 (57)摘要 本发明公开。

2、了一种利用硒提高山豆根组培 苗生物碱含量的方法， 将山豆根组培苗置于含有 硒元素的培养基中培养。 本发明通过在培养基中 加入硒元素， 有效提高了山豆根生物碱含量， 同 时提高了植株对硒的吸收率， 可调节山豆根组培 苗生长、 体内酶和激素以及主要活性成分积累。 权利要求书1页 说明书9页 CN 112005884 A 2020.12.01 CN 112005884 A 1.利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 将山豆根组培苗置于含 有硒元素的培养基中培养。 2.如权利要求1所述利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 将山豆 根组培苗置于含有亚硒酸钠的培养基中培养。

3、。 3.如权利要求2所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 所述 培养基为1/2MS+亚硒酸钠040mg/L+NAA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉4.0g/ L和活性炭0.5g/L。 4.如权利要求3所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 所述 培养基为1/2MS+亚硒酸钠1030mg/L+NAA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉 4.0g/L和活性炭0.5g/L。 5.如权利要求4所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 所述 培养基为1/2MS+亚硒酸钠20mg/。

4、L+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L和活性炭 0.5g/L。 6.如权利要求5所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 将山 豆根组培苗置于所述培养基中， 在温度为2228， 光照时间为12h/d， 光照强度为2500 3000Lux的条件进行培养， 培养45d。 7.如权利要求6所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 所述 培养基中还包括拟茎点霉诱导子， 拟茎点霉诱导子与亚硒酸钠的重量比为1.2:1。 8.如权利要求7所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其特征在于， 其包 括以下步骤： 步骤一、 按重。

5、量份数计， 取100份的马铃薯、 10份的葡萄糖、 10份的琼脂、 500份水搅拌均 匀后得第一培养基， 向第一培养基中依次加入2份碳纳米管在无菌气体保护下充分搅拌， 得 第二培养基； 将4份的拟茎点霉菌种与第二培养基混合， 于温度为25， 黑暗条件进行培养 12d， 然后过滤除去滤液， 并将滤渣用无菌水洗涤3次， 然后将洗涤后的滤渣粉碎、 低温干燥， 得拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物； 步骤二、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/L的 基本培养基， 向基本培养基中加入拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物和亚硒酸钠， 于110r/。

6、 min的转速下的摇床上培养4d， 得组培培养基； 亚硒酸钠的浓度为20mg/L； 加入的拟茎点霉 诱导子-碳纳米管复合物中所含有的拟茎点霉诱导子重量与亚硒酸钠的重量比为1.2:1； 步骤三、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 权利要求书 1/1 页 2 CN 112005884 A 2 利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域。 更具体地说， 本发明涉及一种利用硒提高山豆根组培 苗生物碱含量的方法。 背景技术 0002 山豆根是广西著名的道地药材。

7、和常用大宗中药， 又称广豆根， 为豆科植物越南槐 Sophora tonkinensis Gagnep.的干燥根和根茎。 味苦， 寒。 归肺、 胃经。 具有清热解毒， 消肿 利咽的功效， 用于火毒蕴结、 乳蛾喉痹、 咽喉肿痛、 齿龈肿痛， 口舌生疮。 是治疗肝炎、 咽喉肿 痛、 抗肿瘤、 痔疮、 暗疮、 皮肤病等近30种中成药产品的主要原料， 作为饮片在诸多配方用药 中使用。 山豆根自然生长缓慢， 由于长期砍伐， 其野生资源逐年减少， 随着山豆根市场需求 量和价格连年攀升， 现有的年产量已无法满足人们日益增长的需求。 0003 山豆根野生分布范围较狭窄， 仅在广西、 贵州、 云南的一些石灰岩地。

8、区零星分布， 该地区已经形成了具有钙质， 岩性和旱生特征的岩溶植被。 施硒可有效缓解干旱胁迫对植 株生长的抑制作用， 硒与干旱胁迫具有协同作用， 其中干旱胁迫与4mg/kg硒配施对缓解干 旱胁迫的效果最好。 同时， 硒可缓解植物重金属毒害作用， 其中硒可与重金属结合成难溶性 沉淀物质， 或改变重金属形态， 减少植物体对重金属的摄入或阻断其转运过程， 降低细胞内 可移动重金属离子的浓度， 进而达到改善山豆根生长形势的技术效果。 0004 山豆根的重要的药理成分生物碱类物质具有抗肿瘤、 抗炎、 抗病毒、 抑菌等多种作 用。 现有技术中多采用引入生物碱前驱物(氨基酸)来提高植株内部生物碱含量， 植株。

9、本身 的细胞和组织结构具有多样性， 使得外部引入的生物碱前驱物(氨基酸)可能会发生其他副 产物的合成反应， 且植株对外部合成的生物碱吸收率较差， 最终导致生物碱含量调控效果 不佳； 0005 加入一定量的硒能够有效提高山豆根苦参碱和氧化苦参碱含量， 但如硒浓度过高 存在硒吸收利用率降低， 尤其是无机硒浓度过高对植物细胞毒性提高， 进而抑制了植物的 生长发育； 如何通过加入硒， 达到改善植物生长发育形势， 同时提高植物内生物碱含量的双 重优越效果， 是本领域有待突破的技术难点。 发明内容 0006 本发明的一个目的是解决至少上述问题， 并提供至少后面将说明的优点。 0007 本发明还有一个目的是。

10、提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 本 发明通过在培养基中加入硒元素， 有效提高山豆根生物碱含量， 同时大大提高了植株对硒 的吸收率， 可调节山豆根组培苗生长、 体内酶和激素以及主要活性成分积累； 进一步通过调 节培养基中硒的加入量， 达到改善植物生长发育形势和提高植物内生物碱含量双重效果的 均衡， 使得硒的效用达到最大化。 0008 为了实现根据本发明的这些目的和其它优点， 提供了一种利用硒提高山豆根组培 苗生物碱含量的方法， 将山豆根组培苗置于含有硒元素的培养基中培养。 说明书 1/9 页 3 CN 112005884 A 3 0009 优选的是， 所述利用硒提高山豆根组培苗。

11、生物碱含量的方法， 将山豆根组培苗置 于含有亚硒酸钠的培养基中培养。 0010 优选的是， 所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 所述培养基为1/ 2MS+亚硒酸钠040mg/L+NAA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉4.0g/L和活性炭 0.5g/L。 0011 优选的是， 所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 所述培养基为1/ 2MS+亚硒酸钠1030mg/L+NAA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉4.0g/L和活性炭 0.5g/L。 0012 优选的是， 所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 所。

12、述培养基为1/ 2MS+亚硒酸钠20mg/L+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L和活性炭0.5g/L。 0013 优选的是， 所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 将山豆根组培苗 置于所述培养基中， 在温度为2228， 光照时间为12h/d， 光照强度为25003000Lux的条 件进行培养， 培养45d。 0014 优选的是， 所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 所述培养基中还 包括拟茎点霉诱导子， 拟茎点霉诱导子与亚硒酸钠的重量比为1.2:1。 0015 优选的是， 所述的利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 。

13、0016 步骤一、 按重量份数计， 取100份的马铃薯、 10份的葡萄糖、 10份的琼脂、 500份水搅 拌均匀后得第一培养基， 向第一培养基中依次加入2份碳纳米管在无菌气体保护下充分搅 拌， 得第二培养基； 将4份的拟茎点霉菌种与第二培养基混合， 于温度为25， 黑暗条件进行 培养12d， 然后过滤除去滤液， 并将滤渣用无菌水洗涤3次， 然后将洗涤后的滤渣粉碎、 低温 干燥， 得拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物； 0017 步骤二、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向基本培养基中加入拟茎点霉诱导子-碳纳。

14、米管复合物和亚硒酸钠， 于 110r/min的转速下的摇床上培养4d， 得组培培养基； 亚硒酸钠的浓度为20mg/L； 加入的拟茎 点霉诱导子-碳纳米管复合物中所含有的拟茎点霉诱导子重量与亚硒酸钠的重量比为1.2: 1； 0018 步骤三、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0019 本发明至少包括以下有益效果： 0020 1、 现有技术中， 通常将硒以肥料的形式施入植株生长的土壤中， 吸收性较差； 本发 明通过在培养基中加入硒元素， 有效提高了山豆根生物碱含量， 同时提高了植株对硒的吸。

15、 收率， 可调节山豆根组培苗生长、 体内酶和激素以及主要活性成分积累； 进一步通过调节培 养基中硒的加入量， 达到改善植物生长发育形势和提高植物内生物碱含量双重效果的均 衡， 使得硒的效用达到最大化； 0021 2、 在培养基上中加入无机硒亚硒酸钠， 以提供硒元素， 然而亚硒酸钠毒性较大， 随 着加入量的增大， 植物内部沉积的毒素量增大， 进而影响组培苗的生长发育； 本发明引入了 拟茎点霉诱导子， 将其与亚硒酸钠实现与培养， 拟茎点霉诱导子微生物菌在培养过程中可 将亚硒酸钠进行脱毒转化， 可将无机硒转换为硒氨基酸、 硒多糖和硒蛋白， 在大大降低毒性 的同时， 可提高了植株对硒的吸收速率； 说明。

16、书 2/9 页 4 CN 112005884 A 4 0022 3、 进一步的， 本发明采用拟茎点霉诱导子在对亚硒酸钠进行脱毒转化为生物硒的 同时， 还可与山豆根组培苗的细胞相互作用， 能和胞外特定受体蛋白相结合， 然后刺激愈伤 组织分泌信号分子， 进而调控次生代谢途径的相关基因， 从而促进合成、 积累植物体内特定 的次代谢产物生物碱， 最终明显提高山豆根组培苗中生物碱含量。 0023 本发明的其它优点、 目标和特征将部分通过下面的说明体现， 部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。 具体实施方式 0024 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明， 以令本领域技术人员参。

17、照说明书 文字能够据以实施。 0025 应当理解， 本文所使用的诸如 “具有” 、“包含” 以及 “包括” 术语并不排除一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。 0026 需要说明的是， 下述实施方案中所述实验方法， 如无特殊说明， 均为常规方法， 所 述试剂和材料， 如无特殊说明， 均可从商业途径获得。 0027 0028 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0029 步骤一、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基； 0030 步骤二、 将山豆根组培苗接种于基本培养基中。

18、在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0031 0032 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0033 步骤一、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入亚硒酸钠， 亚硒酸钠的浓度为10mg/L， 得组培培养基； 0034 步骤二、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0035 003。

19、6 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0037 步骤一、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入亚硒酸钠， 亚硒酸钠的浓度为20mg/L， 得组培培养基； 0038 步骤二、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0039 0040 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0041 步骤一、 配置1/2MS+NAA1mg。

20、/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入亚硒酸钠， 亚硒酸钠的浓度为30mg/L， 得组培培养基； 0042 步骤二、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0043 说明书 3/9 页 5 CN 112005884 A 5 0044 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0045 步骤一、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0。

21、.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入亚硒酸钠， 亚硒酸钠的浓度为40mg/L， 得组培培养基； 0046 步骤二、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0047 0048 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0049 步骤一、 按重量份数计， 取100份的马铃薯、 10份的葡萄糖、 10份的琼脂、 500份水搅 拌均匀后得第一培养基， 向第一培养基中依次加入3份碳纳米管在无菌气体保护下充分搅 拌， 得第二培养基； 将4份的拟茎点霉菌种与第二培养基。

22、混合， 于温度为25， 黑暗条件进行 培养12d， 然后过滤除去滤液， 并将滤渣用无菌水洗涤3次， 然后将洗涤后的滤渣粉碎、 低温 干燥， 得拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物； 0050 步骤二、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物和亚硒酸钠， 于110r/ min的转速下的摇床上培养4d， 得组培培养基； 亚硒酸钠的浓度为20mg/L， 加入的拟茎点霉 诱导子-碳纳米管复合物中所含有的拟茎点霉诱导子重量与亚硒酸钠的重量比为1.2:1； 0051 步骤三、 将山豆。

23、根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0052 0053 本发明提供一种利用硒提高山豆根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0054 步骤一、 按重量份数计， 取100份的马铃薯、 10份的葡萄糖、 10份的琼脂、 500份水搅 拌均匀后得第一培养基， 向第一培养基中依次加入3份碳纳米管在无菌气体保护下充分搅 拌， 得第二培养基； 将4份的拟茎点霉菌种与第二培养基混合， 于温度为25， 黑暗条件进行 培养12d， 然后过滤除去滤液， 并将滤渣用无菌水洗涤3次， 然后将洗涤后的滤渣粉碎、 低。

24、温 干燥， 得拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物； 0055 步骤二、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物， 于110r/min的转速下 的摇床上培养4d， 得组培培养基； 加入的拟茎点霉诱导子-碳纳米管复合物中所含有的拟茎 点霉诱导子的浓度为24mg/L； 0056 步骤三、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0057 0058 本发明提供一种利用硒提高山豆。

25、根组培苗生物碱含量的方法， 其包括以下步骤： 0059 步骤一、 按重量份数计， 取100份的马铃薯、 10份的葡萄糖、 10份的琼脂、 500份水搅 拌均匀后得第一培养基； 将4份的拟茎点霉菌种与第一培养基混合， 于温度为25， 黑暗条 件进行培养12d， 然后过滤除去滤液， 并将滤渣用无菌水洗涤3次， 然后将洗涤后的滤渣粉 碎、 低温干燥， 得拟茎点霉诱导子； 0060 步骤二、 配置1/2MS+NAA1mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉4g/L+活性炭0.5g/ L的基本培养基， 向培养基中加入拟茎点霉诱导子和亚硒酸钠， 于110r/min的转速下的摇床 说明书 4/。

26、9 页 6 CN 112005884 A 6 上培养4d， 得组培培养基； 亚硒酸钠的浓度为20mg/L， 加入的拟茎点霉诱导子重量与亚硒酸 钠的重量比为1.2:1； 0061 步骤三、 将山豆根组培苗接种于组培培养基中在温度为2228， 光照时间为 12h/d， 光照强度为25003000Lux的条件进行培养， 培养45d。 0062 0063 分别用实施例15的培养方法进行5组山豆根组培苗的培养实验， 并编号T0、 T1、 T2、 T3、 T4； 对于每组实验， 平行设置30瓶组培培养基， 每瓶中接种6株山豆根组培苗， 所有的 实验瓶中接种的山豆根组培苗品质质量一致； 0064 1、 分析。

27、并统计5组实验(T0-T4)得到的山豆根的生长性状(平均根长、 平均根数、 生 根率、 成活率)， 结果如表1所示： 0065 表1山豆根的生长性状 0066 0067 0068 备注： 平均根长(mm/株)总根长/总株数； 0069 平均根数(根/株)总生根数/总株数； 0070 生根率()总生根株数/总株数100； 0071 成活率()总成活株数/总株数100。 0072 由表1数据可知， 硒浓度变化对山豆根组培苗生根情况影响较大， 在5个不同硒浓 度培养的山豆根组培苗中， T1-实施例2(浓度为10mg/L)得到山豆根的平均根长最佳， T2- 实施例3的平均根长(浓度为20mg/L)次之。

28、， T0-实施例1(浓度为0mg/L)对应的平均根长最 短； T3-实施例4(浓度为30mg/L)得到的山豆根的生根率为最佳， T1-实施例2(浓度为 10mg/L)对应的生根率次之， T0-实施例1(浓度为0mg/L)对应的生根率最低。 由此可见， 培 养基中加适当浓度硒(10mg/L)时， 山豆根组培苗生根成活情况最好， 且较不加硒的处理有 显著差异， 高浓度硒(40mg/L)处理下山豆根组培苗平均根长、 平均根数及生根率均偏低， 根 部发黑。 0073 2、 分析并统计5组实验(T0-T4)得到的山豆根的生理生化指标， 结果如表2所示； 0074 表2山豆根生理生化指标 说明书 5/9 。

29、页 7 CN 112005884 A 7 0075 0076 0077 备注： POD-过氧化物酶； SOD-超氧化物歧化酶； GOT-谷草转氨酶； GPT-谷丙转氨酶； MDA-丙二醛； ABA-脱落酸； GA-赤霉素； ZA-玉米素； BR-油菜素内酯； JA-ME-茉莉酸甲酯。 0078 由表2可知： 0079 POD： 硒对山豆根组培苗的过氧化物酶(POD)活性并非单纯是正相关或负相关， 在 1040mg/L硒浓度范围内， 过氧化物酶活性变化趋势先增高再降低， T1-实施例2(亚硒酸 钠浓度为10mg/L)对应的POD活性的最高(29660.1527U/gFW/min)， T4-实施例。

30、5(亚硒酸钠 浓度为40mg/L)对应的POD活性最低(28653.9849U/gFW/min)， 相比T0-实施例1(未加入亚 硒酸钠)有明显抑制POD活性的作用。 0080 SOD： 硒对山豆根组培苗的超氧化物歧化酶(SOD)活性在一定范围内有明显增强作 用， T1-实施例2(亚硒酸钠浓度为10mg/L)对应的SOD活性最高(452.9876U/gFW/min)， T2- 实施例3(亚硒酸钠浓度为20mg/L)对应的SOD活性次之(450.4831U/gFW/min)， 而T0-实施 例1(未加入亚硒酸钠)对应的SOD活性最低。 方差齐性检验显著性为0.095， 满足原假设， 进 行方差检。

31、验显示， T1、 T2、 T3、 T4(实施例2实施例5)对应的SOD活性相对T0-实施例1(未加 入亚硒酸钠)对应的SOD活性(P0.05)有显著差异。 0081 GOT： 山豆根组培苗中谷草转氨酶(GOT)活性随着硒浓度增加呈先降低后增加的趋 势。 当硒浓度由0mg/L升至10mg/L时， 山豆根GOT活性达到最大(2.9868mg/gFW/30min)， 当继 续增加硒浓度时， GOT活性开始降低。 方差齐性检验显著性为0.609， 满足原假设， 进行方差 检验显示， T1-实施例2、 T3-实施例4和T4-实施例5相对T0-实施例1对应的GOT活性(P 说明书 6/9 页 8 CN 1。

32、12005884 A 8 0.05)差异性显著。 0082 GPT： 与GOT活性变化趋势相似， 山豆根谷丙转氨酶(GPT)活性在亚硒酸钠浓度为 10mg/L时增加到1.4043mg/gFW/30min， 在亚硒酸钠浓度为20mg/L时大幅降低至0.2145mg/ gFW/30min， 继续增加硒浓度， GPT活性又恢复增加， 当硒浓度为40mg/L时达到GPT活性达到 最大值(1.7016mg/gFW/30min)。 根据以上数据可知， 硒浓度为40mg/L时， 山豆根组培苗GPT 活性效果最好， 其次为10mg/L硒处理， 20mg/L硒处理的山豆根组培苗GPT活性最低。 经方差 结果分析。

33、表明T1-实施例2、 T3-实施例4、 T4实施例5处理的硒浓度相对T0处理(P0.05)MDA含量无显著差异。 0084 可溶性蛋白： 随着硒浓度的增加， 可溶性蛋白的百分含量变化显著， 且不呈简单的 递增或递减， 其百分含量在硒浓度为10mg/L时达到最大值(2.5853)， 未加入亚硒酸钠的 最小(1.8682)。 方差分析检验显示， 加入不同浓度硒相对未加入亚硒酸钠对应的(P 0.05)可溶性蛋白含量差异显著。 0085 可溶性糖： 可溶性糖的变化趋势有所不同， 硒浓度在030mg/L处理范围内呈逐渐 降低趋势， 到浓度为30mg/L时达到最低(2.2722)， 在浓度为20mg/L时。

34、最高(3.1893)。 方 差齐性检验显著性为0.142， 满足原假设， 进行方差检验显示， T1-实施例2、 T3-实施例4、 T4-实施例5相对T0-实施例1(P0.05)的可溶性糖含量有显著性差异。 0086 叶绿素： 以不同硒浓度处理的山豆根组培苗叶绿素含量并非呈简单的正相关或负 相关， 硒浓度在020mg/L处理范围内， 其含量呈先升高后降低趋势， 以10mg/L硒处理最高 (0.3290mg/g)； 继续增加其浓度， 叶绿素含量呈先升高后降低趋势， 在30mg/L硒处理时达到 最大值(0.3647mg/g)。 进行方差检验显示， 不同浓度硒处理相对T0-实施例1处理(P0.05) 。

35、的叶绿素含量均有显著性差异。 0087 内源激素脱落酸(ABA)： 硒浓度在040mg/L处理范围内， 山豆根组培苗脱落酸 (ABA)变化趋势呈先上升后下降， 在10mg/L硒处理时ABA含量为最低值(6.4321 g/g)， 继续 增加浓度， ABA值不断增大。 进行方差分析检验显示， T1-实施例2和T4-实施例5处理的硒 浓度相对T0-实施例1处理(P0.05)山豆根ABA含量有显著性差异。 0088 GA： 随硒浓度增加， 山豆根组培苗赤霉素(GA)含量先降低后增加， 在20mg/L硒处理 时为最低值(19.2181pg/gFW)， 40mg/L硒处理时为最高值(31.3673pg/g。

36、FW)。 进行方差分析 检验显示， 仅T4-实施例5处理相对T0-实施例1处理(P0.05)的GA含量有显著性差异， T1-实施例2、 T2-实施例3、 T3-实施例4处理无显著性差异。 0089 ZA： 硒浓度在1040mg/L处理范围内， 山豆根组培苗玉米素(ZA)含量随硒浓度变 化先增大后减小， 硒浓度在30mg/L时山豆根ZA含量达到最大值(6.3872ng/gFW)， 硒浓度在 20mg/L时山豆根ZA含量为最低值(5.1023ng/gFW)。 方差齐性检验显著性为0.998， 满足要 求， 但平均值差值显示， 不同硒浓度对山豆根组培苗ZA含量变化影响的差异不显著。 0090 BR：。

37、 随硒浓度增加， 山豆根组培苗油菜素内酯(BR)含量先降低后增加， 20mg/L硒处 理时为最低值(1.0844ng/gFW)， 0mg/L硒处理时为最高值(1.3878ng/gFW)， 10mg/L硒处理其 说明书 7/9 页 9 CN 112005884 A 9 次(1.1691ng/gFW)。 进行方差检验显示， 不同浓度硒处理相对T0-实施例1处理(P0.05)JA-ME含量差异不显著。 0092 3、 分析并统计5组实验(T0、 T1、 T2和T4)得到的山豆根生物碱含量， 结果如表3所 示； 0093 表3山豆根生物碱含量 0094 0095 由表3的数据可知： 0096 从全株测。

38、定结果可知， 施加硒元素对山豆根组培苗苦参碱(MA)和氧化苦参碱 (OMA)的含量积累均产生显著的影响， 随着硒浓度的增加， 山豆根MA、 OMA和M的含量均呈先 增加后下降趋势， 均在20mg/L硒处理时达到最大值， 且添加硒元素的山豆根组培苗中主要 MA和OMA的含量明显高于T0处理， 表明20mg/L硒元素是促进山豆根组培苗苦参碱合成积累 的最佳浓度。 0097 从茎叶部位测定结果可知， 增加硒浓度， OMA和M的含量均呈先增加后下降趋势， 10mg/L硒处理时为山豆根OMA含量达到最大值， 20mg/L硒处理时为山豆根MA和M含量达到最 大值， 综合分析可知硒元素对茎叶部位次生代谢产物。

39、MA和OMA合成和积累的最佳积累浓度 为20mg/L。 0098 从根部测定结果可知， 山豆根组培苗根部MA、 OMA和M的含量均随硒浓度增加而增 加， 40mg/L硒处理时山豆根MA、 OMA和M的含量均达到最大值。 0099 对比全株、 茎叶、 根整体数据可知， MA、 OMA主要富集在茎叶， 根部含量较低； 以M为 主要指标， 并综合山豆根组培苗各组生理生化指标和农艺指标， 添加20mg/L硒最适合山豆 根组培苗生长和积累有效成分， 可作为山豆根组培苗规模化生产次生代谢产物的重要调控 因子。 0100 0101 分别用实施例3、 实施例68的培养方法进行4组山豆根组培苗的培养实验； 对于。

40、 说明书 8/9 页 10 CN 112005884 A 10 每组实验， 平行设置30瓶组培培养基， 每瓶中接种6株山豆根组培苗， 所有的实验瓶中接种 的山豆根组培苗品质质量一致； 0102 对B1-B4培养得到的山豆根的平均根长、 平均根数、 生根率和全株生物碱含量进行 分析并统计， 记录至表4所示； 0103 表4统计结果 0104 指标实施例3实施例6实施例7实施例8 平均根长(mm/株)3.563.740.633.61 平均根数(根/株)2.434.371.213.97 生根率()63.2985.6111.9283.21 苦参碱(MA)mg/g6.13700.07577.28130.。

41、03654.35150.05396.51320.0378 氧化苦参碱(OMA)mg/g13.64750.324315.67210.143711.18670.106914.37910.1352 M(MA+OMA)mg/g19.78450.387221.75220.239114.20820.215620.29850.2219 0105 备注： 平均根长(mm/株)总根长/总株数； 0106 平均根数(根/株)总生根数/总株数； 0107 生根率()总生根株数/总株数100。 0108 由表4数据可知， 采用实施例6提供的培养方法得到的山豆根在改善生长性状和药 理成分生物碱积累上均具有更加优异的效果。

42、， 比较实施例1(参见对照表1和表3数据)和实 施例7对应的各项指标， 实施例7得到山豆根的生物碱含量显著提高， 说明在培养基中加入 拟茎点霉诱导子可提高山豆根的生物碱含量； 比较实施例6、 实施例8和实施例3可知， 在组 培培养基中引入用碳纳米管上培养拟茎点霉诱导子脱毒后的亚硒酸钠， 可同步改善山豆根 的生长性状和提高山豆根的生物碱含量。 0109 这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。 对本发明的应用、 修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。 0110 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节。 说明书 9/9 页 11 CN 112005884 A 11 。