人参枸杞发酵液及其制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010570984.2 (22)申请日 2020.06.19 (30)优先权数据 62/864,670 2019.06.21 US (83)生物保藏信息 DSM33108 2019.05.02 DSM32451 2017.03.13 DSM28121 2013.12.02 (71)申请人 百岳特生物技术 （上海） 有限公司 地址 201507 上海市金山区金山工业区金 舸路989号 (72)发明人 林咏翔李韶郁 (74)专利代理机构 北京市立康律师事务所 11805 代理人。

2、 梁挥孟超 (51)Int.Cl. A23L 2/38(2006.01) A23L 2/84(2006.01) A23L 33/00(2016.01) (54)发明名称 人参枸杞发酵液及其制备方法 (57)摘要 本发明主要提供一种人参枸杞发酵液的制 备方法包括： 提供培养液、 将培养液及复数菌种 在磁场内进行发酵415.5日以得到发酵原液以 及调整发酵原液的糖度以形成人参枸杞发酵液。 如此， 人参枸杞发酵液具有更高含量的有效成 分。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 112106909 A 2020.12.22 CN 112106909 A 1.一种人参枸杞发酵液的制备方法， 其特征。

3、在于， 包含： 提供一培养液， 所述培养液包括由1重量份的人参(Panax ginseng)、 1重量份的枸杞 (Lycium chinense)及50重量份的水所形成的一人参枸杞溶液及所述人参枸杞溶液总重的 10的葡萄糖； 将所述培养液及复数菌种在一磁场内进行发酵415.5日以得到一发酵原液， 其中所 述些菌种包括相对于所述培养液为0.010.5的酵母菌、 相对于所述培养液为0.01 0.25的乳酸菌及相对于所述培养液为310的醋酸菌； 以及 调整所述发酵原液的糖度以形成所述人参枸杞发酵液。 2.如权利要求1所述的人参枸杞发酵液的制备方法， 其特征在于， 其中所述将所述培养 液及所述些菌种在。

4、所述磁场内进行发酵的步骤包括： 将所述酵母菌在所述磁场内进行发酵12.5日后形成一第一初发酵液； 添加所述乳酸菌于所述第一初发酵液内并于所述磁场内发酵13日后形成一第二初 发酵液； 添加所述醋酸菌于所述第二初发酵液内并于所述磁场内发酵310日后形成所述初发 酵液； 以及 过滤所述初发酵液以得到所述发酵原液。 3.如权利要求2所述的人参枸杞发酵液的制备方法， 其特征在于， 其中过滤所述初发酵 液的步骤包括： 在60下减压浓缩及以200mesh过滤所述初发酵液。 4.如权利要求3所述的人参枸杞发酵液的制备方法， 其特征在于， 所述发酵原液的所述糖度小于等于4 Bx。 5.如权利要求1所述的人参枸杞。

5、发酵液的制备方法， 其特征在于， 其中所述提供所述培 养液的步骤包括： 混合所述人参枸杞溶液及所述葡萄糖形成一混合液； 以及 将所述混合液于50-100下提取0.5-1.5小时以得到所述培养液。 6.如权利要求1所述的人参枸杞发酵液的制备方法， 其特征在于， 所述酵母菌为Saccharomyces cerevisiae， 所述乳酸菌为Lactobacillus plantarum， 所述醋酸菌为Acetobacter aceti。 7.如权利要求1所述的人参枸杞发酵液的制备方法， 其特征在于， 其中所述调整所述发 酵原液的糖度的步骤包括： 添加一寡糖至所述发酵原液以使所述发酵原液的所述糖度达到。

6、40 Bx以形成所述人参 枸杞发酵液。 8.一种人参枸杞发酵液， 其特征在于， 经由如权利要求1至7其中任一种所述的人参枸杞发酵液的制备方法所制得。 9.如权利要求8所述的人参枸杞发酵液， 其特征在于， 所述人参枸杞发酵液的总多酚含量为436 g/ml以上。 10.如权利要求8所述的人参枸杞发酵液， 其特征在于， 所述人参枸杞发酵液的黄酮含量为12703 g/ml以上。 权利要求书 1/1 页 2 CN 112106909 A 2 人参枸杞发酵液及其制备方法 技术领域 0001 本发明关于一种发酵液饮品， 更具体的涉及一种人参枸杞发酵液饮品及其制法。 背景技术 0002 由微生物发酵的食品具有。

7、更易于消化、 香味增加、 储藏时间提升等优势。 例如： 泡 菜、 纳豆、 水果醋等等都是广受欢迎的发酵类食品。 0003 在饮品界中， 发酵饮品也愈来愈受到消费者的喜爱。 发酵饮品常以乳品、 蔬菜、 水 果、 豆类等为原料基底， 再经由不同种类的微生物作用而制得。 发明内容 0004 有鉴于此， 本发明提供一种人参枸杞发酵液及其制法， 其能进一步提升发酵饮品 的机能。 于此， 以中药材为基底， 精选高效能的菌种， 并且经由磁场发酵过程以制得人参枸 杞发酵液。 0005 在一实施例中， 人参枸杞发酵液的制备方法包括： 提供培养液； 将培养液及复数菌 种在磁场内进行发酵415.5日以得到发酵原液；。

8、 调整发酵原液的糖度以形成人参枸杞发 酵液。 其中， 培养液包括由1重量份的人参、 1重量份的枸杞及50重量份的水所形成的人参枸 杞溶液及人参枸杞溶液总重的 10的葡萄糖， 复数菌种包括相对于培养液为0.01 0.5的酵母菌、 相对于培养液为0.010.25的乳酸菌及相对于培养液为310的醋 酸菌。 0006 在一实施例中， 将培养液及菌种在磁场内进行发酵的步骤包括： 将酵母菌在磁场 内进行发酵12.5日后形成第一初发酵液； 添加乳酸菌于第一初发酵液内并在磁场内发酵 13日后形成第二初发酵液； 添加醋酸菌于第二初发酵液内并于磁场内发酵310日后形 成初发酵液； 过滤初发酵液以得到发酵原液。 0。

9、007 在一实施例中， 过滤初发酵液的步骤包括在60下减压浓缩及以 200mesh过滤初 发酵液。 0008 在一实施例中， 发酵原液的糖度小于等于4 Bx。 0009 在一实施例中， 提供培养液的步骤包括： 混合人参枸杞溶液及葡萄糖形成混合液； 将混合液于50-100下提取0.5-1.5小时以得到培养液。 0010 在一实施例中， 酵母菌为Saccharomyces cerevisiae， 乳酸菌为 Lactobacillus plantarum， 醋酸菌为Acetobacter aceti。 0011 在一实施例中， 调整发酵原液的糖度的步骤包括： 添加寡糖至发酵原液以使发酵 原液的糖度达。

10、到40 Bx以形成人参枸杞发酵液。 0012 在一实施例中， 本发明提供一种人参枸杞发酵液， 系经由上述的人参枸杞发酵液 的制备方法所制得。 0013 在一实施例中， 人参枸杞发酵液的总多酚含量为436 g/ml以上。 0014 在一实施例中， 人参枸杞发酵液的黄酮含量为12703 g/ml以上。 说明书 1/8 页 3 CN 112106909 A 3 0015 综上， 根据任一实施例的人参枸杞发酵液的制备方法， 其能增添人参枸杞发酵液 的机能性， 缩短发酵时间， 并提升人参枸杞发酵液内的多酚及黄酮含量。 在一实施例中， 在 发酵过程中分次依序加入复数菌种并且控制使用各菌种的发酵时间， 以使。

11、得菌种能有最佳 的生长， 并且进一步提升人参枸杞发酵液的有效成分浓度。 在一实施例中， 藉由浓缩初发酵 液以利后续进行人参枸杞发酵液的风味及口感的调整。 在一实施例中， 藉由监控发酵过程 中的 PH值及糖度来确保发酵过程顺利完成。 在一实施例中， 藉由将葡萄糖与人参枸杞溶液 一起加热有助于溶解葡萄糖， 并且避免培养液受到污染。 在一实施例中， 利用寡糖调整甜度 口感， 以降低热量。 附图说明 0016 图1是本发明一实施例的发酵液的制法的流程图。 0017 图2是图1步骤S02的细部的流程图。 0018 图3是总多酚含量测试结果数据图。 0019 图4是总黄酮含量测试结果数据图。 0020 图。

12、5是相对粒线体活性检测结果数据图。 0021 图6是相对丙酮酸盐含量结果数据图。 0022 图7是IL-1B引子的基因的相对表现率数据图。 0023 图8是IL-10引子的基因的相对表现率数据图。 。 0024 其中， 附图标记： 0025 步骤S01、 S02、 S03、 S21、 S22、 S23、 S24 0026 生物材料的保藏 0027 啤酒酵母TCI028， 于2019年5月2日提交到DSMZ德国微生物与细胞搜集中心保藏， 地址 ： 德国布伦瑞克市因霍芬大街7B ， 邮 编D-31824 (Inhoffenstr 7B ,D- 38124Braunschweig)， 保藏号为： D。

13、SM33108； 0028 胚芽乳酸杆菌TCI378， 于2017年3月13日提交到DSMZ德国微生物与细胞搜集中心 保藏， 地址： 德国布伦瑞克市因霍芬大街7B， 邮编D- 31824(Inhoffenstr 7B ,D- 38124Braunschweig)， 保藏号为： DSM32451； 0029 嗜热链球菌TCI633， 于2013年12月02日提交到DSMZ德国微生物与细胞搜集中心保 藏， 地址： 德国布伦瑞克市因霍芬大街7B， 邮编D-31824 (Inhoffenstr 7B ,D- 38124Braunschweig)， 保藏号为： DSM28121。 具体实施方式 0030。

14、 以下通过具体实施方式对本发明进一步的描述。 本发明的各附图仅为示意以更容 易了解本发明， 其具体比例可依照设计需求进行调整。 文中所描述的图形中相对元件的上 下关系， 在本领域技术人员应能理解是指构件的相对位置而言， 对应的， 以元件在上一面为 正面、 在下一面为背面以便于理解， 因此皆可以翻转而呈现相同的构件， 此皆应同属本说明 书所揭露的范围。 0031 于下列实施方式的说明中， 除非另有相关说明， 则 符号是指重量百分比。 0032 参考图1。 在一实施例中， 人参枸杞发酵液的制备方法包括下列步骤： 提供培养液 说明书 2/8 页 4 CN 112106909 A 4 (步骤S01)、。

15、 将培养液及复数菌种在磁场内进行发酵415.5日以得到发酵原液(步骤S02)、 以及调整发酵原液的糖度(Degrees Brix， Bx) 以完成人参枸杞发酵液(步骤S03)。 0033 在步骤S01中， 培养液包括由1重量份的人参、 1重量份的枸杞及50 重量份的水所 形成的人参枸杞溶液及人参枸杞溶液总重的10的葡萄糖。 在一些实施例中， 人参(Panax ginseng)系采用无炮制过的干燥白蔘根部。 枸杞(Lycium chinense)系采用干燥枸杞果实。 0034 在一实施例中， 步骤S01可包括： 依上述比例混合人参、 枸杞及葡萄糖形成混合液； 以及将混合液于50-100下提取0.。

16、5-1.5小时以得到培养液。 于此， 将葡萄糖与人参枸杞溶 液一并进行提取程序， 藉以助于葡萄糖溶解并且还可以避免污染。 0035 在另一个实施例中， 步骤S01包括： 将人参、 枸杞及水于50-100下提取0.5-1.5小 时形成水萃液； 以及将葡萄糖加入水萃液以得到培养液。 于此， 将人参和枸杞单独进行提取 程序， 以利于人参及/或枸杞内有效成分的确实地释出。 0036 在一些实施例中， 提取系指将混合液维持在50-100并静置0.5-1.5小时。 在一实 施例中， 提取系指将混合液维持在95并静置1小时。 0037 在一实施例中， 培养液的糖度为9 Bx10 Bx。 于此， 足够的糖度可。

17、以确保后续发 酵的顺利进行， 菌种可以有足够的养份。 0038 后续， 将培养液及复数菌种在磁场内进行发酵415.5日以得到发酵原液(步骤 S02)。 其中， 复数菌种包括相对于培养液为0.010.5的酵母菌、 相对于培养液为 0.010.25的乳酸菌及相对于培养液为310的醋酸菌 (Acetobacter aceti)。 在 一实施例中， 培养液不另滤除其内部的固形物(提取后的人参和/或枸杞)直接加入菌种进 行发酵， 藉以利用菌种进一步提取固形物中的活性成分。 0039 在一实施例中， 酵母菌可以是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。 举例而言， 采用寄存编号ATC。

18、C26602的啤酒酵母TCI028。 但本发明不以此为限， 酵母菌可以为市售啤酒 酵母。 0040 在一实施例中， 乳酸菌可以是为胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)、 嗜热 链球菌(Streptococcus thermophiles)或植物乳杆菌。 举例而言， 采用寄存编号DSM33108 胚芽乳酸杆菌菌株或寄存编号DSM32451菌株的胚芽乳酸杆菌TCI378。 再举例而言， 采用的 寄存编号DSM28121的嗜热链球菌TCI633。 本发明不以此为限， 可以为其它市售乳酸菌。 0041 在一实施例中， 采用寄存编号ATCC15973菌株的醋酸菌(Acetoba。

19、cter aceti (Pasteur)Beijerinck)。 0042 参考图2。 在一实施例中， 步骤02可包括： 将酵母菌在磁场内进行发酵12.5日后 形成第一初发酵液(步骤S21)； 添加乳酸菌于第一初发酵液内并在磁场内发酵13日后形 成第二初发酵液(步骤S22)； 添加醋酸菌于第二初发酵液内并于磁场内发酵310日后形成 初发酵液(步骤S23)； 以及过滤初发酵液以得到发酵原液(步骤S24)。 0043 在步骤S21中， 透过先添加酵母菌可以使培养液发酵以产生酒精； 于此， 酒精有利 提取出人参与枸杞内不同的有效成份。 在一些实施例中， 第一初发酵液的PH值小于4， 且其 糖度约为9。

20、 Bx。 0044 在步骤S22中， 透过添加乳酸菌可以使得第一初发酵液内的葡萄糖被进一步消耗 而降低糖度并且产生乳酸， 以降低第一初发酵液的PH值； 于此， 降低第一初发酵液的PH值有 利于进一步提取人参与枸杞内其他不同有效成分。 在一些实施例中， 第二初发酵液的PH值 说明书 3/8 页 5 CN 112106909 A 5 小于3.5， 且其糖度约为 6 Bx。 0045 在步骤S23中， 透过添加醋酸菌可以使得第二初发酵液内的酒精被消耗， 而进一步 再降低葡萄糖的含量。 在一些实施例中， 初发酵液的PH值小于3.5， 且其糖度为约为3 Bx。 0046 在步骤S24的一实施例中， 可以。

21、是过滤并浓缩初发酵液以得到发酵原液。 在一示范 例中， 浓缩方式可以采取在60下的减压浓缩， 以及过滤方式可以是以200mesh过滤。 在一 些实施例中， 发酵原液的糖度约为2 Bx。 在一些实施例中， 发酵原液的PH值小于3.5。 0047 在步骤S03的一实施例中， 可以是添加寡糖至发酵原液以使发酵原液的糖度达到 40 Bx以形成人参枸杞发酵液。 于此， 寡糖系指由310个单醣分子聚合而成的低聚糖。 其 中， 寡糖可为果寡糖、 半乳寡糖、 木寡糖、 异麦芽寡糖等等。 在一实施例中， 所添加的寡糖可 为含4070异麦芽寡糖的寡糖溶液。 0048 在一实施例中， 步骤S03所得的人参枸杞发酵液。

22、的总多酚含量为 436.33 g/ml。 在 一实施例中， 人参枸杞发酵液的黄酮含量为12703 g/ml。 0049 示范例一： 人参枸杞发酵液的制备 0050 将人参、 枸杞、 水与葡萄糖混合成为混合液。 在混合液中， 人参为1重量份、 枸杞为1 重量份以及水为50重量份， 并且葡萄糖为人参、 枸杞与水所形成的人参枸杞溶液总重的 10。 接着， 将混合液于95下提取1小时以得到培养液。 待培养液冷却之后置入其外围设 置有磁铁的发酵桶内。 添加相对于培养液为0.01的啤酒酵母于发酵桶中的培养液内， 然 后于30下进行发酵1天以形成第一初发酵液。 再添加相对于培养液为0.05的 DSM3310。

23、8 菌株的胚芽乳酸杆菌于发酵桶中的第一初发酵液内， 然后进行发酵1天以形成第二初发酵 液。 最后添加相对于培养液为5的ATCC15973 菌株的醋酸菌于发酵桶中的第二初发酵液 内， 然后进行发酵5天以得到发酵原液。 于得到发酵原液后， 在60下减压浓缩及以200mesh 过滤初发酵液以得到发酵原液。 然后， 以异麦芽寡糖60及发酵原液40之比例进行混合 以使发酵原液的糖度达到40 Bx而形成A组人参枸杞发酵液。 于此， 发酵桶外围设置的磁铁 能在发酵桶内形成磁场， 以致前述于发酵桶内的溶液在磁场内进行各阶段的发酵。 0051 另外， 采用与A组人参枸杞发酵液相同的原料比例与发酵程序， 但其发酵。

24、桶外围并 未设置磁铁， 来制得B组人参枸杞发酵液。 0052 实验一： 发酵阶段PH值及糖度数值的测定结果 0053 在制备过程中各阶段形成的溶液的PH值及糖度数值测定如下。 0054 0055 由上述可见， A组人参枸杞发酵液在各阶段的PH值及糖度都比B组人参枸杞发酵液 更低； 其代表相较于B组人参枸杞发酵液， A组人参枸杞发酵液的发酵作用的进行更为顺利， 其菌种的活性较佳， 代谢产物较多， 且葡萄糖的被利用率较佳。 换句话说， 在磁场内发酵可 说明书 4/8 页 6 CN 112106909 A 6 以明显提升发酵的效率。 0056 实验二： 总多酚含量测试 0057 分别以前述示范例一所。

25、得的A组人参枸杞发酵液及B组人参枸杞发酵液为样本。 将 各样本以水稀释10倍后取100mL到离心管中。 接着， 加入 500 L的Folin-Ciocalteu酚试剂 至离心管中与稀释后的样本混合并静置3分钟后， 再加入400 L的7.5碳酸钠混匀静置30 分钟后以得到待测反应溶液。 于二次静置后， 取200 L的待测反应溶液至96孔板中， 并测量 待测反应溶液于750nm下的吸光值。 0058 并且， 以没食子酸(Gallic acid)作为标准品制作标准曲线。 于此， 配置0 L/mL、 20 L/mL、 40 L/mL、 60 L/mL、 80 L/mL、 及100 L/mL的没食子酸的。

26、标准溶液， 并分别取100 L 的各浓度的标准溶液至10mL离心管中。 加入500 L的Folin-Ciocalteu酚试剂至离心管内与 标准溶液混合并静置3分钟后， 再加入400 L的7.5碳酸钠混匀静置30分钟后以得到标准 反应溶液。 取200 L的标准反应溶液96孔板中， 并测量其在750nm下的吸光值， 以获得标准曲 线。 0059 接着， 利用标准曲线将待测反应溶液的吸光值换算成总多酚含量。 于此， 可得到A 组人参枸杞发酵液总多酚含量为436.33 g/ml及B组人参枸杞发酵液中总多酚含量202 g/ ml， 如图3所示。 0060 由实验结果可知， A组人参枸杞发酵液总多酚含量较。

27、B组人参枸杞发酵液总多酚含 量提升21； 基此可知在磁场内进行发酵更有利于有效成份的提取。 0061 实验三： 总黄酮含量测试 0062 分别以前述示范例一所得的A组人参枸杞发酵液及B组人参枸杞发酵液为样本。 将 各样品以水稀释20倍至1200ul， 并分别加入200 L的5亚硝酸钠并混合后静置6分钟后， 再 加入200 L的10硝酸铝并混合后静置 6分钟， 接着加入2ml的4氧氧化钠并混合， 最后再 加入1.4ml的水并混合以得到待测反应溶液。 将待测反应溶液至96孔板中， 并以分光光度计 测量待测反应溶液在500nm下的吸光值。 0063 并且， 以芸香苷(rutin)作为标准品以制作标准。

28、曲线。 于此， 配置0 g/mL、 400 g/ mL、 600 g/mL、 1000 g/mL及1200 g/mL之没芸香苷的标准溶液。 将各标准溶液分别加入200 L的5亚硝酸钠并混合后静置6 分钟后， 再加入200 L的10硝酸铝并混合后静置6分钟， 接着加入2ml 的4氧氧化钠并混合， 最后再加入1.4ml的水并混合以得到待测标准品溶 液。 将200 L的待测标准品溶液移至96孔板中， 并以分光光度计测量待测反应溶液在500nm 下的吸光值分别为0 g/mL的吸光值为0.035、 400 g/mL的吸光值为0.13、 600 g/mL的吸光值 为0.183、 1000 g/mL的吸光值。

29、为0.273及1200 g/mL的吸光值为0.335， 并以上述结果依线性 回归计算以获得标准曲线。 0064 接着， 利用标准曲线将待测反应溶液的吸光值换算成总黄酮含量。 于此， 可得到A 组人参枸杞发酵液的总黄酮含量为12703 g/ml及B组人参枸杞发酵液的总黄酮含量8315 g/ml， 如图4所示。 0065 由实验结果可知， A组人参枸杞发酵液的总黄酮含量较B人参枸杞发酵液的总黄酮 含量提升52； 基此可知在磁场内进行发酵能大幅提升有效成份的提取量。 0066 实验四： 粒线体活性实验 0067此实验采用小鼠骨胳肌肉细胞(C2C12，CRL-1772)。 于此， 培养基包括 说明书 。

30、5/8 页 7 CN 112106909 A 7 DMEM细胞培养液(Dulbecco s modified Eagle s medium)、 1的青霉素-链霉素 (Penicillin-streptomycin,Gibco)以及10胎牛血清(FBS, Gibco)。 0068 将细胞分为四组进行， 第一组到第三组包括2ml上述培养基并接种1 105的细胞 及样本， 第一组样本为前述示范例一所得的A组人参枸杞发酵液， 第二组样本为B组人参枸 杞发酵液、 第三组样本为示范例一的制备过程中所形成的培养液， 第四组细胞未作施加任 何溶液处理(即空白对照组)。 上述各组在37下培养24小时。 于此， 。

31、第一组到第三组的培养 基内样本浓度为0.03125。 0069 于24小时后， 采用BDTM,MitoScreen,(JC-1)染剂对空白及处理后的各组细胞进行 染色15min， 再以JC-1分析缓冲液清洗二次， 然后采用BD Accuri C6 Plus流式细胞仪量测 PBMC粒线体的膜电位， 以得到粒线体的膜电位的活性数据。 为避免实验操作误差， 各组以相 同步骤操作三次， 实验数据如下表一所示： 0070 表一 0071 0072 0073 依上述三组实验数据之平均值绘制图5。 由图5可见， 分析换算之后得到第一组相 对活性为47.2， 第二组相对活性为40.1， 第三组相对活性为 38。

32、.0， 第四组相对活性 为38.92； 基此可知， A组人参枸杞发酵液及B组人参枸杞发酵液皆可以提升骨骼肌细胞中粒 线体的活性， 其中A组人参枸杞发酵液提升幅度最明显。 0074 实验五： 基础代谢率提升实验 0075 此实验采用小鼠骨胳肌肉细胞(C2C12， ATCC CRL-1772)。 于此， 培养基包括DMEM细 胞培养液(Dulbecco s modified Eagle s medium)、 3.7g/L 碳酸氢钠、 100I.U.青霉素、 100 g/mL链霉素(Penicillin-streptomycin,Gibco) 以及10胎牛血清(FBS,Gibco)。 0076 将细。

33、胞分为四组进行， 第一组到第三组包括2ml上述培养基并接种1 105的细胞 及样本， 第一组样本为前述示范例一所得的A组人参枸杞发酵液， 第二组样本为B组人参枸 杞发酵液、 第三组样本为示范例一的制备过程中所形成的培养液， 第四组细胞未作施加任 何溶液处理(即空白对照组)。 于此， 第一组到第三组的培养基内样本浓度为0.03125。 0077 接下来， 依下述程序处理各组细胞。 将细胞以条件培养基(含有1FBS 及1马血 清的DMEM)进行培育以分化出粒线体， 添加上述样本处理细胞 48小时， 以100 L丙酮酸缓冲 液裂解细胞， 将细胞在4下以10000g离心 10分钟并收集上清液， 在上清。

34、液内添加20 L溶 液液(Lysates)并添加丙酮酸测定缓冲液至总体积50 L， 混入反应混合物(丙酮酸测定缓冲 液46 L、 丙酮酸探针2 L及酶混合液2 L)并培育30分钟， 并以分光光度计测量待测反应溶液 在570nm下的吸光值。 0078 并且， 以丙酮酸作为标准品以制作标准曲线。 于此， 配置0、 2、 4、 6、 8及10nmol/ L 说明书 6/8 页 8 CN 112106909 A 8 之丙酮酸的标准溶液。 依上述结果与标准曲线依线性回归计算以获得丙酮酸盐的含量， 以 来确认细胞的代谢状态。 于此， 所测得丙酮酸盐相对含量如图6所示。 0079 由图6可见， 相较于空白对。

35、照组(即以第四组细胞的相对表现率为1的情况)， 第一 组细胞的相对表现率为3.23， 第二组细胞的相对表现率为2.39， 第三组细胞的相对表现率 为2.34。 可知， B组人参枸杞发酵液可以提升细胞的基础代谢率达239， 而A组人参枸杞发 酵液更能提升细胞的基础代谢率达320。 0080 实验六： 提升免疫力基因表现实验 0081 此实验采用人类单核球细胞(THP-1细胞株,ATCC TIB202)。 于此， 培养基包括培养 液(RPMI-1640,Gibco)为基底， 添加有10胎牛血清(Gibco)、 0.05Mm二硫基乙醇、 100units/ml青霉素和100 g/mL链霉素。 008。

36、2 实验共分四组进行， 第一组到第三组为实验组， 第一组样本为前述示范例一所得 的A组人参枸杞发酵液， 第二组样本为B组人参枸杞发酵液、 第三组样本为示范例一的制备 过程中所形成的培养液， 第四组细胞未作施加任何溶液处理(即空白对照组)。 0083 接下来， 依下述程序处理细胞。 提取2ml上述培养基并接种1105的细胞， 添加上 述样本以处理细胞持续24小时， 利用RNA提取试剂(Geneaid) 提取RNA， 用逆转录酶( III)将RNA反转录为cDNA， 并藉由 ABI Step One Plus Real-Time PCR system来执行使用qPCR来对目标基因进行定量。 PCR。

37、反应的熔化曲线(melting curve)是在 定量即时PCR反应期间进行确认。 采用SCORE方法来确认基因表达的相对定量。 0084 采用下表二所式的引子(Primer)以聚合酶连锁反应(PCR)仪观察THP-1 细胞株的 IL-1 及IL-10的基因表现率， 其结果如图7及图8。 0085 表二 0086 0087 *R为REVERSE反向， F为FORWARD顺向。 0088 由图7可见， 相较于空白对照组(相对表现率为1的情况)， 第一组细胞的IL-1 的相 对表现率为1.53， 第二组细胞的IL-1 的相对表现率为 0.41， 而第三组细胞的IL-1 的相对 表现率为0.36。 。

38、在由图8可见， 相较于空白对照组(相对表现率为1的情况)， 第一组细胞的 IL-10的相对表现率为1.14， 第二组细胞的IL-10的相对表现率为0.87， 而第三组细胞的IL- 10 的相对表现率为0.6。 可知， 人参枸杞发酵液可以提升免疫力。 0089 在一些实施例中， 所得的人参枸杞发酵液可可进一步作为食品添加物 (food additive)， 以致得含有人参枸杞发酵液的食品组合物。 于此， 能藉由习知方法于原料制备 时添加任一实施例的人参枸杞发酵液， 或是于食品的制作过程中添加任一实施例的人参枸 杞发酵液， 而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品(即食品组 说明。

39、书 7/8 页 9 CN 112106909 A 9 合物)。 0090 在一些实施例中， 食品产品种类包括但不限于： 饮料(beverages)、 发酵食品 (fermented foods)、 烘培产品(bakery products)、 健康食品(health foods)以及膳食补 充品(dietary supplements)。 0091 虽然本发明的技术内容已经以较佳实施例揭露如上， 然其并非用以限定本发明， 任何熟习此技艺者， 在不脱离本发明的精神所作些许的更动与润饰， 皆应涵盖于本发明的 范畴内， 因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。 说明书 8/8 页 10 CN 112106909 A 10 图1 图2 说明书附图 1/4 页 11 CN 112106909 A 11 图3 图4 说明书附图 2/4 页 12 CN 112106909 A 12 图5 图6 说明书附图 3/4 页 13 CN 112106909 A 13 图7 图8 说明书附图 4/4 页 14 CN 112106909 A 14 。