含间充质干细胞分泌因子的冻干粉及其溶媒.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010829019.2 (22)申请日 2020.08.18 (71)申请人 深圳市俊元生物科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市南山区粤海街 道高新区社区白石路深圳湾科技生态 园9栋A座901 (72)发明人 张建立曾琼霍凯兵 (51)Int.Cl. A61K 38/04(2006.01) A61K 9/19(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 47/10(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61K 47/2。

2、2(2006.01) A61K 47/28(2006.01) A61P 39/06(2006.01) (54)发明名称 一种含间充质干细胞分泌因子的冻干粉及 其溶媒 (57)摘要 本发明涉及生物技术领域， 公开了一种含间 充质干细胞分泌因子的冻干粉， 该冻干粉由人体 胚胎间充质干细胞分泌物冷冻干燥制备而成， 其 成分包括： 甘露糖醇、 寡肽1、 寡肽3、 寡肽5、 磷 酸氢二钠及磷酸二氢钠； 同时公开了一种溶媒， 该溶媒的成分包括水、 北美金缕梅提取物、 丁二 醇、 水解小核菌胶、 葡聚糖、 烟酰胺、 马齿苋提 取物、 透明质酸钠、 甘草酸二钾及乙基己基甘油。 本发明通过一种低成本、 原生态的。

3、方式获得了具 备高活性、 抗衰老作用的冻干粉， 该冻干粉在提 高肌肤修复力、 抗衰老方面具有很大的使用价 值， 并且提供的溶媒能够高效、 快速、 完全地溶解 冻干粉， 为冻干粉活性作用的高效发挥提供了保 障。 权利要求书1页 说明书3页 CN 111888459 A 2020.11.06 CN 111888459 A 1.一种含间充质干细胞分泌因子的冻干粉， 其特征在于， 该冻干粉由人体胚胎间充质 干细胞分泌物冷冻干燥制备而成， 其成分包括： 甘露糖醇、 寡肽-1、 寡肽-3、 寡肽-5、 磷酸氢 二钠及磷酸二氢钠。 2.根据权利要求1所述的含间充质干细胞分泌因子的冻干粉， 其特征在于， 该冻。

4、干粉通 过如下步骤制备而成： （1） 获取间充质干细胞： 从人体胚胎组织中分离提纯出间充质干细胞； （2） 间充质干细胞培养： 取生长状况良好的人体胚胎间充质干细胞， 使用新鲜的不含抗 生素的无血清培养基进行原代、 传代培养； （3） 提取上清液： 收集34代的细胞培养上清液， 将上清液用0.22 m的无菌过滤器过 滤， 取滤液， 即得含人体胚胎间充质干细胞分泌物的上清液； （4） 冷冻干燥、 离心： 在步骤3中的上清液中加入成份包括甘露糖醇、 磷酸氢二钠及磷酸 二氢钠的冻干剂， 然后用0 .22 m滤膜过滤， 分装后在低温下预冻24h， 然后在超低温冷冻干 燥机内冷冻干燥、 离心处理1224。

5、h， 冷冻干燥结束后， 即得到含间充质干细胞分泌因子的 冻干粉。 3.根据权利要求2所述的含间充质干细胞分泌因子的冻干粉， 其特征在于： 所述步骤4 中， 预冻的温度为-30， 冷冻干燥的温度为-80-60， 离心速度为1800rpm。 4.如权利要求13所述的含间充质干细胞分泌因子的冻干粉在制备抗衰老药物方面 的应用。 5.一种用于溶解权利要求13任一项所述冻干粉的溶媒， 其特征在于， 该溶媒的成分 包括水、 北美金缕梅 （HAMAMELIS VIRGINIANA） 提取物、 丁二醇、 水解小核菌 （SCLEROTIUM ROLFSSII） 胶、 -葡聚糖、 烟酰胺、 马齿苋 （PORTUL。

6、ACA OLERACEA） 提取物、 透明质酸钠、 甘草 酸二钾及乙基己基甘油。 6.根据权利要求5所述的溶媒， 其特征在于： 所述溶媒按照水69%、 北美金缕梅 （HAMAMELIS VIRGINIANA） 提取物1.2%、 丁二醇4%、 水解小核菌 （SCLEROTIUM ROLFSSII） 胶 3.6%、 -葡聚糖1.2%、 烟酰胺2.5%、 马齿苋 （PORTULACA OLERACEA） 提取物6%、 透明质酸钠 3.3%、 甘草酸二钾6.8%、 乙基己基甘油2.4%的比例混合配置而成。 7.根据权利要求5所述的溶媒， 其特征在于， 用于溶解冻干粉的所述溶媒与冻干粉的v/ w为1:2。

7、5 。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111888459 A 2 一种含间充质干细胞分泌因子的冻干粉及其溶媒 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域， 具体的说涉及一种含间充质干细胞分泌因子的冻干粉 及其溶媒。 背景技术 0002 间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSCs)是一类具有自我更新、 增殖和多 向分化潜能的成体干细胞， 可刺激组织生长和修复， 增强组织的再生能力， 影响免疫调节， 在细胞治疗领域有着极为广阔的应用前景， 并且间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSCs)在培养过程中能够分泌活性因子， 活性因子具有免疫调节。

8、和营养支持等作用。 0003 而现有的间充质干细胞分泌因子通过冻干粉形式来进行利用， 但是目前利用最广 泛的间充质干细胞主要是采取羊胎组织、 人体脐带组织， 采用的原料不同， 其制备得到的分 泌活性成分也不一样， 目前市面上还未通过任何一种组织的间充质干细胞的分泌因子得到 一种寡肽类具备高活性、 抗衰老作用的冻干粉。 0004 溶媒是一种用于溶解冻干粉的溶剂， 但是现有的溶媒对冻干粉的溶解度较差， 不 能够达到快速、 完全溶解的效果。 发明内容 0005 针对现有技术中的不足， 本发明要解决的技术问题在于提供了一种含间充质干细 胞分泌因子的冻干粉， 该冻干粉由人体胚胎间充质干细胞分泌物冷冻干燥。

9、制备而成， 其成 分包括： 甘露糖醇、 寡肽-1、 寡肽-3、 寡肽-5、 磷酸氢二钠及磷酸二氢钠。 0006 进一步地， 该冻干粉通过如下步骤制备而成： 0007 (1)获取间充质干细胞： 从人体胚胎组织中分离提纯出间充质干细胞； 0008 (2)间充质干细胞培养： 取生长状况良好的人体胚胎间充质干细胞， 使用新鲜的不 含抗生素的无血清培养基进行原代、 传代培养； 0009 (3)提取上清液： 收集34代的细胞培养上清液， 将上清液用0.22 m的无菌过滤器 过滤， 取滤液， 即得含人体胚胎间充质干细胞分泌物的上清液； 0010 (4)冷冻干燥、 离心： 在步骤3中的上清液中加入成份包括甘露。

10、糖醇、 磷酸氢二钠及 磷酸二氢钠的冻干剂， 然后用0.22 m滤膜过滤， 分装后在低温下预冻24h， 然后在超低温冷 冻干燥机内冷冻干燥、 离心处理1224h， 冷冻干燥结束后， 即得到含间充质干细胞分泌因 子的冻干粉。 0011 进一步地， 所述步骤4中， 预冻的温度为-30， 冷冻干燥的温度为-80-60， 离 心速度为1800rpm。 0012 本发明还提供了一种含间充质干细胞分泌因子的冻干粉的应用， 具体方案如下： 含间充质干细胞分泌因子的冻干粉在制备抗衰老药物方面的应用。 0013 本发明还提供了一种用于溶解上述冻干粉的溶媒， 该溶媒的成分包括水、 北美金 缕梅 (HAMAMELIS。

11、 VIRGINIANA)提取物、 丁二醇、 水解小核菌(SCLEROTIUM ROLFSSII)胶、 - 说明书 1/3 页 3 CN 111888459 A 3 葡聚糖、 烟酰胺、 马齿苋(PORTULACA OLERACEA)提取物、 透明质酸钠、 甘草酸二钾及乙基己 基甘油。 0014 进一步地， 所述溶媒按照水69、 北美金缕梅(HAMAMELIS VIRGINIANA)提取物 1.2、 丁二醇4、 水解小核菌(SCLEROTIUM ROLFSSII)胶3.6、 -葡聚糖1.2、 烟酰胺 2.5、 马齿苋(PORTULACA OLERACEA)提取物6、 透明质酸钠3.3、 甘草酸二钾。

12、6.8、 乙 基己基甘油2.4的比例混合配置而成。 0015 进一步地， 用于溶解冻干粉的所述溶媒与冻干粉的v/w为1:25。 0016 相对于现有技术， 本发明的有益效果是： 本发明通过培养人体胚胎间充质干细胞 得到寡肽-1、 寡肽-3、 寡肽-5等分泌因子， 并将包含分泌因子的上清液冻干制备成冻干粉， 寡肽-1、 寡肽-3、 寡肽-5均为细胞生长肽， 可促进表皮角质细胞生长， 修复受损表皮细胞， 加 快细胞的新陈代谢， 具备抗衰老的作用， 本发明采用纯天然的生产方式来获取冻干粉， 生产 成本低， 药效优良， 并且没有副作用。 0017 进一步的， 本发明采用特殊的配置工艺制备得到一种溶媒，。

13、 该溶媒能够快速完全 溶解冻干粉， 溶解快速， 溶解效果好， 有利于充分发挥冻干粉活性因子的功效。 具体实施方式 0018 下面对本发明的优选实施例进行详细阐述， 以使发明的优点和特征能更易于被本 领域技术人员理解， 从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。 0019 除非另有定义， 本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的 技术人员通常理解的含义相同。 在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实 施例的目的， 不是旨在于限制本发明。 本文所使用的术语 “和/或” 包括一个或多个相关的所 列项目的任意的和所有的组合。 0020 本发明提供了一种含间充质干细胞分泌因。

14、子的冻干粉， 该冻干粉由人体胚胎间充 质干细胞分泌物冷冻干燥制备而成， 其成分包括： 甘露糖醇、 寡肽-1、 寡肽-3、 寡肽-5、 磷酸 氢二钠及磷酸二氢钠。 0021 本优选实施例中， 冻干粉通过如下步骤制备而成： 0022 (1)获取间充质干细胞： 从人体胚胎组织中分离提纯出间充质干细胞； 0023 (2)间充质干细胞培养： 取生长状况良好的人体胚胎间充质干细胞， 使用新鲜的不 含抗生素的无血清培养基进行原代、 传代培养； 0024 (3)提取上清液： 收集34代的细胞培养上清液， 将上清液用0.22 m的无菌过滤器 过滤， 取滤液， 即得含人体胚胎间充质干细胞分泌物的上清液； 0025。

15、 (4)冷冻干燥、 离心： 在步骤3中的上清液中加入成份包括甘露糖醇、 磷酸氢二钠及 磷酸二氢钠的冻干剂， 然后用0.22 m滤膜过滤， 分装后在低温下预冻24h， 然后在超低温冷 冻干燥机内冷冻干燥、 离心处理1224h， 冷冻干燥结束后， 即得到含间充质干细胞分泌因 子的冻干粉。 0026 优选地， 步骤4中， 预冻的温度为-30， 冷冻干燥的温度为-80， 离心速度为 1800rpm。 0027 需要说明的是， 甘露糖醇、 磷酸氢二钠及磷酸二氢钠为冻干保护剂， 冻干保护剂能 够有效维护分泌因子的活性。 说明书 2/3 页 4 CN 111888459 A 4 0028 需要说明的是， 间。

16、充质干细胞的培养技术为现有技术， 本发明间充质细胞的培养 步骤按照中国专利号： 201910104124.7的具体步骤进行细胞培养。 0029 本发明提高了一种含间充质干细胞分泌因子的冻干粉的应用， 具体为： 该含间充 质干细胞分泌因子的冻干粉在制备抗衰老药物方面的应用， 间充质干细胞分泌的活性因子 寡肽-1能够促进表皮角质细胞生长， 修复受损表皮细胞， 加快细胞的新陈代谢， 寡肽对角质 细胞专一修复后， 可以提高皮肤的免疫能力和抵抗力， 使得肌肤恢复健康活力状态， 延缓细 胞的衰老； 间充质细胞分泌的活性因子寡肽-5可以快速愈合创伤皮肤、 更新皮肤细胞组成， 还可以促进皮肤微血管的生长， 促。

17、进细胞新陈代谢， 促进弹性纤维和胶原蛋白的合成， 增加 皮肤弹性， 使皮肤焕发光彩； 间充质细胞分泌的活性因子寡肽-3具有修复皮肤表皮组织、 抗 衰老、 淡化色斑、 均匀肤色、 修复皱纹的功效。 0030 本发明还提供了一种用于溶解上述冻干粉的溶媒， 该溶媒的成分包括水、 北美金 缕梅 (HAMAMELIS VIRGINIANA)提取物、 丁二醇、 水解小核菌(SCLEROTIUM ROLFSSII)胶、 - 葡聚糖、 烟酰胺、 马齿苋(PORTULACA OLERACEA)提取物、 透明质酸钠、 甘草酸二钾及乙基己 基甘油。 0031 本优选实施例中， 溶媒按照水69、 北美金缕梅(HAMA。

18、MELIS VIRGINIANA)提取物 1.2、 丁二醇4、 水解小核菌(SCLEROTIUM ROLFSSII)胶3.6、 -葡聚糖1.2、 烟酰胺 2.5、 马齿苋(PORTULACA OLERACEA)提取物6、 透明质酸钠3.3、 甘草酸二钾6.8、 乙 基己基甘油2.4的比例混合配置而成。 0032 可以理解的是， 冻干粉与溶媒需要配合使用， 并且溶媒具有溶解冻干粉及增强冻 干粉内活性因子的活性的作用； 本优选实施例中， 溶媒与冻干粉的v/w为1:25， 如50mg冻干 粉通过 2ml溶媒进行溶解。 0033 为进一步说明溶媒的高效溶解作用， 以下通过5组溶解实验来进行说明， 实验。

19、结果 如表1 所示， 表1记录冻干粉的完全溶解时间及溶解量： 0034 A组： 50mg冻干粉与2ml溶媒混合溶解； B组： 25mg冻干粉与1ml溶媒混合溶解； C组： 75mg 冻干粉与3ml溶媒混合溶解； D组： 50mg冻干粉与2ml清水混合溶解； E组： 50mg冻干粉与 2ml 生理盐水混合溶解； 实验时将溶媒加入冻干粉中摇匀即可。 0035 表1冻干粉的溶解情况 0036 是否完全溶解 溶解时间(近似) 溶解量(近似) A组 是 2s 100 B组 是 2s 100 C组 是 3s 100 D组 否 10min 50 E组 否 10min 60 0037 由上述实验可知， 本发明的冻干粉能够在特制溶媒的作用下高效、 快速、 完全溶 解， 因此， 溶媒能够为冻干粉活性作用的高效发挥提供保障。 0038 以上所述仅为本发明的优选实施方式， 并非因此限制本发明的专利范围， 凡是利 用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换， 或直接或间接运用在其它相关的技 术领域， 均同理包括在本发明的专利保护范围内。 说明书 3/3 页 5 CN 111888459 A 5 。