由自养、异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒及制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010624906.6 (22)申请日 2020.07.02 (71)申请人 河海大学 地址 210000 江苏省南京市江宁区佛城西 路8号 (72)发明人 王煜李一平程月施媛媛 王亚宁潘泓哲李金华 (74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 代理人 成立珍 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C02F 11/02(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1。

2、/125(2006.01) C12R 1/38(2006.01) C12R 1/05(2006.01) (54)发明名称 由自养、 异养反硝化菌群制备的复合固体颗 粒及制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种由自养异养反硝化菌群 制备的高活性复合固体颗粒及制备方法， 所述复 合固体颗粒按重量百分比包括脱氮硫杆菌15 20， 枯草芽孢杆菌3040， 蒙式假单胞菌 1525， 粪产碱杆菌2530。 本发明通过 脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌、 粪产 碱杆菌的自养异养协同反硝化作用， 可以较完 全的完成反硝化过程， 能有效降解底泥中氮有机 污染物等成分， 消除硫化氢等臭味气体， 提高水 。

3、体透明度， 达到黑臭底泥原位修复的效果， 且具 有修复效果持续时间长， 节约成本的优点。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 111925955 A 2020.11.13 CN 111925955 A 1.一种由自养、 异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒， 其特征在于， 所述复合固体颗粒 由自养反硝化细菌和异养反硝化细菌组成； 所述的自养反硝化细菌为脱氮硫杆菌， 异养反 硝化细菌包括枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌； 所述复合固体颗粒按重量百分 比包括脱氮硫杆菌15-20， 枯草芽孢杆菌30-40， 蒙式假单胞菌15-25和粪产碱 杆菌25-30。 2.一种由自养、 异养反硝化菌。

4、群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在于， 包括如下步 骤： 步骤1： 用接种环取斜面保种的脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆 菌各两环， 分别接种于各自的固体培养基中进行培养， 培养温度均为30-35， 培养时间均 为1-5d， 分别得到脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的活化菌种； 步骤2： 根据各菌种对氧气需求的不同， 分别将各菌种的种子培养基分装至250mL或 500mL三角瓶中； 用接种环取脱氮硫杆菌活化菌、 枯草芽孢杆菌活化菌、 蒙氏假单胞菌活化 菌和粪产碱杆菌活化菌各两环， 接种于各自的种子培养基中进行摇床振荡培养， 分别得到 脱氮硫杆菌、 枯。

5、草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液； 步骤3： 将脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液分别接种 于各自的发酵培养基进行摇床振荡培养， 然后分别得到脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假 单胞菌和粪产碱杆菌的高活性菌液； 步骤4： 将步骤3得到的高活性菌液按照重量百分比： 脱氮硫杆菌15-20， 枯草芽孢 杆菌30-40， 蒙式假单胞菌15-25， 粪产碱杆菌25-30， 进行混合， 得复合菌液； 步骤5： 取步骤4得到的复合菌液， 进行5000r/min离心处理， 去除上清液， 得湿菌体； 步骤6： 将步骤5得到的湿菌体在摇摆机上制粒， 再进行干燥处理； 步。

6、骤7： 将步骤6得到的物料在30条件下进行粉碎， 再过50目筛网， 筛后粗料重新粉 碎， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 3.根据权利要求2所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 于， 所述步骤1中固体培养基均为牛肉膏蛋白胨培养基， 按重量百分比由100重量份的水， 5 重量份的牛肉膏， 10重量份的蛋白胨， 5重量份的氯化钙和20重量份的琼脂配置而成。 4.根据权利要求3所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 于， 所述步骤2中脱氮硫杆菌种子培养基按重量百分比由100重量份的水中添加1重量份的 葡萄糖， 1重量份的玉米浆。

7、， 0.6重量份的蛋白胨， 1重量份的酵母膏， 0.15重量份的氯化钙， 0.5重量份的磷酸二氢钾和0.05重量份的硫酸镁配置而成； 取200mL所述脱氮硫杆菌种子培 养基至250mL三角瓶中， 将脱氮硫杆菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 在光照强度5000 x条件下， 摇床振荡培养转速240r/min， 摇床振荡培养温度33， 摇床振荡 培养时间6d。 5.根据权利要求4所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 于， 枯草芽孢杆菌的种子培养基按重量百分比由100重量份的水， 10重量份的胰蛋白胨， 5重 量份的氯化钠和5重量份的酵母提取物配置而成； 取。

8、100mL所述枯草芽孢杆菌种子培养基至 500mL三角瓶中， 将枯草芽孢杆菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床 振荡培养转速120r/min， 摇床振荡培养温度37， 摇床振荡培养时间24h。 6.根据权利要求5所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 权利要求书 1/2 页 2 CN 111925955 A 2 于， 蒙氏假单胞菌的种子培养基按重量百分比由100重量份的水， 3重量份的葡萄糖， 1重量 份的蛋白胨， 0.5重量份的牛肉膏， 0.5重量份的硝酸铵， 0.2重量份的磷酸二氢钾和0.1重量 份的硫酸镁配置而成； 取100mL所述蒙氏假单胞菌。

9、种子培养基至250mL三角瓶中， 将蒙氏假 单胞菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速180r/min， 摇床振荡培养温度30， 摇床振荡培养时间24h。 7.根据权利要求6所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 于， 粪产碱杆菌的种子培养基按重量百分比由100重量份的水， 20重量份的葡萄糖， 10重量 份的酵母膏和3重量份的碳酸钙配置而成； 取30mL所述粪产碱杆菌种子培养基至250mL三角 瓶中， 将粪产碱杆菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转 速200r/min， 摇床振荡培养温度30， 摇床振荡培养时间。

10、24h。 8.根据权利要求7所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 于， 所述步骤3中脱氮硫杆菌发酵培养基按重量百分比由100重量份的水， 1.2重量份的麦芽 糖， 0.4重量份的蛋白胨， 1重量份的玉米浆， 0.4重量份的磷酸二氢钾和0.03重量份的硫酸 镁配置而成； 将脱氮硫杆菌种子液按照4的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速240r/min， 摇床振荡培养温度35， 发酵36h。 9.根据权利要求8所述的由自养、 异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法， 其特征在 于， 所述步骤3中枯草芽孢杆菌发酵培养基按重量百分比由100重量份的水， 2。

11、5重量份的玉 米粉， 15重量份的蛋白胨， 5重量份的玉米浆， 1重量份的碳酸钙， 0.3重量份的硫酸镁和0.1 重量份的磷酸二氢钾配置而成； 将枯草芽孢杆菌种子液按照4的接种量接种于发酵培养 基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速220r/min， 摇床振荡培养温度30， 发酵24h； 蒙氏假单胞菌发酵培养基按重量百分比由100重量份的水， 2重量份的麦芽糖， 2重量份 的酵母粉， 0.15重量份的磷酸二氢钾和0.1重量份的硫酸镁配置而成； 将蒙氏假单胞菌种子 液按照1的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速180r/min， 摇 床振荡培养温度30， 发酵24h； 粪产。

12、碱杆菌发酵培养基按重量百分比由100重量份水， 50重量份的蔗糖， 1.1重量份的 硝酸钾， 0.5重量份的酵母膏， 15重量份的碳酸钙， 0.5重量份的硫酸镁和2.7重量份的磷酸 二氢钾配置而成； 将粪产碱杆菌种子液按照2.5的接种量接种于发酵培养基进行摇床振 荡培养， 摇床振荡培养转速200r/min， 摇床振荡培养温度30， 发酵4d。 权利要求书 2/2 页 3 CN 111925955 A 3 由自养、 异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒及制备方法 技术领域 0001 本发明属于底泥原位修复技术领域， 特别涉及一种由自养-异养反硝化菌群制备 的高活性复合固体颗粒及制备方法。 背景技术 。

13、0002 水体污染是全球普遍存在的一个重要环境问题， 在河流污染治理中， 污染底泥的 治理一直是主要的难点。 污染物通过雨水淋溶、 水土流失、 工业废水排放等途径进入水体， 并逐渐沉降富集到水体底泥中。 底泥中腐殖质会吸附螯合周围环境中的致黑物质， 加剧底 泥黑臭程度， 黑臭底泥中有机物会转化产生硫化氢等臭味气体。 底泥向上覆水体中释放的 污染物质加剧了水质污染程度。 0003 底泥修复技术可分为异位修复和原位修复两大类。 原位修复可分成化学修复技 术、 掩蔽覆盖技术和生物修复技术。 其中原位生物修复技术是利用具有降解污染物能力的 沉水植物和自然存在的或是经人工专门培养的微生物等的生命活动对水。

14、体中的污染物进 行吸附、 转移、 转化和降解作用的一种新型底泥修复技术， 目前原位微生物修复技术有投加 微生物制剂和生物促生剂等方法激活土著微生物， 但其载体可能会对水体造成二次污染。 0004 氮元素是水体污染的重要指标， 是底泥污染物中含量较高的元素， 氮元素的去除 对于底泥修复具有重要作用。 生物对环境中氮元素的去除由硝化作用和反硝化作用两部分 组成， 反硝化过程直接影响到环境中氮的降解效率。 反硝化除氮过程需要反硝化细菌的参 与， 反硝化细菌按获能方式的不同， 可分为异养型和自养型。 目前， 去除底泥中氮元素的常 见的微生物法包括投加固定化微生物、 微生物制剂和反硝化脱氮复合菌剂等， 。

15、固定化微生 物和微生物制剂的载体会对水体造成二次污染， 且单一微生物制剂由于微生物种类极少而 存在对黑臭水体中臭味气体硫化氢消除作用不明显， 氮有机污染物降解速率低等问题。 反 硝化脱氮复合菌剂由多种异养反硝化细菌复合制得或由氢自养反硝化细菌、 铁自养反硝化 细菌复合制得， 多种异养反硝化细菌制得的复合菌剂使用时存在反硝化过程碳源不足的问 题， 碳源不足导致亚硝盐或氨氮积累， 使脱氮速率降低， 修复效果持续时间短； 由氢自养反 硝化细菌与铁自养反硝化菌制得的复合菌剂使用时需要外加氢气， 成本较高， 且氢气作为 一种可燃气体存在一定的安全隐患， 铁自养反硝化细菌多为厌氧和兼性厌氧菌， 铁离子的 。

16、溶出和氨氮的形成往往需要后续处理， 使反硝化过程不能较完全地进行。 发明内容 0005 本发明针对现有技术中脱氮速率低， 微生物制剂载体易造成水体二次污染， 硫化 氢气体消除作用不明显， 反硝化作用不完全， 修复效果持续时间短的问题， 提供一种由自 养-异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒， 该复合固体颗粒由自养与异养反硝化细 菌协同作用， 能够较完全的完成反硝化过程， 提高脱氮速率， 提高水体透明度， 消除臭味气 体， 具有修复效果持续时间长， 节约成本的优点。 0006 本发明技术方案如下： 说明书 1/6 页 4 CN 111925955 A 4 0007 一种自养-异养反硝化菌群制备。

17、的高活性复合固体颗粒是由自养反硝化细菌和异 养反硝化细菌制成的， 所述的自养反硝化细菌为脱氮硫杆菌； 异养反硝化细菌包括枯草芽 孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌。 0008 所述复合固体颗粒按重量百分比包括脱氮硫杆菌15-20， 枯草芽孢杆菌30- 40， 蒙式假单胞菌15-25， 粪产碱杆菌25-30。 0009 一种复合固体颗粒的制备方法， 包括如下步骤： 0010 步骤1： 用接种环取斜面保种的脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产 碱杆菌各两环， 接种于各自的固体培养基中， 培养温度为30-35， 培养时间为1-5d， 分别得 到脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和。

18、粪产碱杆菌的活化菌种； 0011 所述的固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基， 按重量百分比由100重量份的水， 5重 量份的牛肉膏， 10重量份的蛋白胨， 5重量份的氯化钙， 20重量份的琼脂配置而成。 0012 步骤2： 根据各菌种对氧气的需求的不同， 分别将各菌种的种子培养基装至250mL 或500mL三角瓶中； 用接种环取脱氮硫杆菌活化菌、 枯草芽孢杆菌活化菌、 蒙氏假单胞菌活 化菌和粪产碱杆菌活化菌各两环， 接种于各自的种子培养基中进行摇床振荡培养， 分别得 到脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液； 0013 所述的， 脱氮硫杆菌种子培养基按重量百分比由100重量。

19、份的水中添加1重量份的 葡萄糖， 1重量份的玉米浆， 0.6重量份的蛋白胨， 1重量份的酵母膏， 0.15重量份的氯化钙， 0.5重量份的磷酸二氢钾和0.05重量份的硫酸镁配置而成； 取200mL脱氮硫杆菌种子培养基 至250mL三角瓶中， 将脱氮硫杆菌接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 在光照强度 5000 x条件下， 摇床振荡培养转速240r/min， 摇床振荡培养温度33， 摇床振荡培养时间6d； 枯草芽孢杆菌种子培养基按重量百分比由100重量份的水， 10重量份的胰蛋白胨， 5重量份 的氯化钠， 5重量份的酵母提取物配置而成； 取100mL枯草芽孢杆菌种子培养基至500mL三角 瓶中。

20、， 将枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速120r/ min， 摇床振荡培养温度37， 摇床振荡培养时间24h； 蒙氏假单胞菌种子培养基按重量百分 比由100重量份的水， 3重量份的葡萄糖， 1重量份的蛋白胨， 0.5重量份的牛肉膏， 0.5重量份 的硝酸铵， 0.2重量份的磷酸二氢钾， 0.1重量份的硫酸镁配置而成； 取100mL蒙氏假单胞菌 种子培养基至250mL三角瓶中， 将蒙氏假单胞菌接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇 床振荡培养转速180r/min， 摇床振荡培养温度30， 摇床振荡培养时间24h； 粪产碱杆菌种 子培养基按重量百分比由100重量份。

21、的水， 20重量份的葡萄糖， 10重量份的酵母膏， 3重量份 的碳酸钙配置而成； 取30mL粪产碱杆菌种子培养基至250mL三角瓶中， 将粪产碱杆菌接种于 种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速200r/min， 摇床振荡培养温度30， 摇 床振荡培养时间24h。 0014 步骤3： 将脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液分别 接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 然后得到高活性菌液； 0015 所述的脱氮硫杆菌发酵培养基按重量百分比由100重量份的水， 1.2重量份的麦芽 糖， 0.4重量份的蛋白胨， 1重量份的玉米浆， 0.4重量份的磷酸二氢钾， 0.03。

22、重量份的硫酸镁 配置而成； 将脱氮硫杆菌种子液按照4的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇 床振荡培养转速240r/min， 摇床振荡培养温度35， 发酵36h； 枯草芽孢杆菌发酵培养基按 重量百分比由100重量份的水， 25重量份的玉米粉， 15重量份的蛋白胨， 5重量份的玉米浆， 1 说明书 2/6 页 5 CN 111925955 A 5 重量份的碳酸钙， 0.3重量份的硫酸镁， 0.1重量份的磷酸二氢钾配置而成； 将枯草芽孢杆菌 种子液按照4的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速220r/ min， 摇床振荡培养温度30， 发酵24h； 蒙氏假单胞菌发酵培。

23、养基按重量百分比由100重量 份的水， 2重量份的麦芽糖， 2重量份的酵母粉， 0.15重量份的磷酸二氢钾， 0.1重量份的硫酸 镁配置而成； 将蒙氏假单胞菌种子液按照1的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培 养， 摇床振荡培养转速180r/min， 摇床振荡培养温度30， 发酵24h； 粪产碱杆菌发酵培养基 按重量百分比由100重量份水， 50重量份的蔗糖， 1.1重量份的硝酸钾， 0.5重量份的酵母膏， 15重量份的碳酸钙， 0.5重量份的硫酸镁， 2.7重量份的磷酸二氢钾配置而成； 将粪产碱杆菌 种子液按照2.5的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速200r/ mi。

24、n， 摇床振荡培养温度30， 发酵4d。 0016 步骤4： 将步骤3得到的菌液按照重量百分比： 脱氮硫杆菌15-20， 枯草芽孢杆 菌30-40， 蒙式假单胞菌15-25， 粪产碱杆菌25-30， 混合， 得复合菌液； 0017 步骤5： 取复合菌液， 进行5000r/min离心去除上清液， 得湿菌体； 0018 步骤6： 将湿菌体在摇摆机上制粒， 再进行干燥处理； 0019 步骤7： 将步骤6得到的物料在30条件下进行粉碎， 再过50目筛网， 筛后粗料重新 粉碎， 得到由自养-异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0020 本发明的复合固体颗粒适用于黑臭河道底泥原位修复， 采用直接投加。

25、的方式投放 到黑臭河道水体中， 每次投加固体颗粒的治理周期为3个月， 可以有效消除底泥臭味， 提高 脱氮速率， 消减底泥厚度， 提高水体透明度， 所述复合固体颗粒使用的菌种种类较少， 节约 成本。 0021 本发明的有益效果： 0022 本发明的高活性复合固体颗粒， 含有多种类的反硝化细菌。 进入水体后， 反硝化菌 群迅速生长繁殖， 同时， 能刺激土著微生物菌群更好的生长繁殖， 自养反硝化细菌与异养反 硝化细菌复合进行协同作用可以较完全的完成反硝化过程， 能有效降解底泥中氮有机污染 物等成分， 消除硫化氢等臭味气体， 提高水体透明度， 达到黑臭底泥原位修复的效果， 且具 有修复效果持续时间长，。

26、 节约成本的优点。 附图说明 0023 图1为本发明的高活性复合固体颗粒制备流程的示意图。 具体实施方式 0024 为进一步了解本发明， 下面结合实施例与对比例对本发明做进一步的描述。 0025 实施例1: 0026 一种自养-异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒是由自养反硝化细菌和异 养反硝化细菌制成的， 所述的自养反硝化细菌为脱氮硫杆菌； 异养反硝化细菌包括枯草芽 孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌。 0027 本实施例所述复合固体颗粒中脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙式假单胞菌和粪产 碱杆菌的重量百分比分别为： 脱氮硫杆菌20、 枯草芽孢杆菌40、 蒙式假单胞菌15和粪 产碱杆菌25。。

27、 说明书 3/6 页 6 CN 111925955 A 6 0028 一种复合固体颗粒的制备方法， 包括如下步骤： 0029 步骤1： 用接种环取斜面保种的脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产 碱杆菌各两环， 接种于各自的固体培养基中， 培养温度均为30， 培养时间均为2d， 分别得 到脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的活化菌种； 0030 所述的， 固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基， 按重量百分比由100重量份的水， 5重 量份的牛肉膏， 10重量份的蛋白胨， 5重量份的氯化钙， 20重量份的琼脂配置而成。 0031 步骤2： 根据各菌种对氧气的需求的不同， 。

28、分别将各菌种的种子培养基装至250mL 或500mL三角瓶中； 用接种环取脱氮硫杆菌活化菌、 枯草芽孢杆菌活化菌、 蒙氏假单胞菌活 化菌和粪产碱杆菌活化菌各两环， 接种于各自的种子培养基中进行摇床振荡培养， 分别得 到脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液； 0032 所述的， 脱氮硫杆菌种子培养基按重量百分比由100重量份的水中添加1重量份的 葡萄糖， 1重量份的玉米浆， 0.6重量份的蛋白胨， 1重量份的酵母膏， 0.15重量份的氯化钙， 0.5重量份的磷酸二氢钾和0.05重量份的硫酸镁配置而成； 取200mL脱氮硫杆菌种子培养基 至250mL三角瓶中， 将脱氮硫杆。

29、菌接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 在光照强度 5000 x条件下， 摇床振荡培养转速240r/min， 摇床振荡培养温度33， 摇床振荡培养时间6d； 枯草芽孢杆菌种子培养基按重量百分比由100重量份的水， 10重量份的胰蛋白胨， 5重量份 的氯化钠， 5重量份的酵母提取物配置而成； 取100mL枯草芽孢杆菌种子培养基至500mL三角 瓶中， 将枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速120r/ min， 摇床振荡培养温度37， 摇床振荡培养时间24h； 蒙氏假单胞菌种子培养基按重量百分 比由100重量份的水， 3重量份的葡萄糖， 1重量份的蛋白胨， 0.5重量。

30、份的牛肉膏， 0.5重量份 的硝酸铵， 0.2重量份的磷酸二氢钾， 0.1重量份的硫酸镁配置而成； 取100mL蒙氏假单胞菌 种子培养基至250mL三角瓶中， 将蒙氏假单胞菌接种于种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇 床振荡培养转速180r/min， 摇床振荡培养温度30， 摇床振荡培养时间24h； 粪产碱杆菌种 子培养基按重量百分比由100重量份的水， 20重量份的葡萄糖， 10重量份的酵母膏， 3重量份 的碳酸钙配置而成； 取30mL粪产碱杆菌种子培养基至250mL三角瓶中， 将粪产碱杆菌接种于 种子培养基中进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速200r/min， 摇床振荡培养温度30， 摇 。

31、床振荡培养时间24h。 0033 步骤3： 将脱氮硫杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液分别 接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 然后得到高活性菌液； 0034 所述的， 脱氮硫杆菌发酵培养基按重量百分比由100重量份的水， 1.2重量份的麦 芽糖， 0.4重量份的蛋白胨， 1重量份的玉米浆， 0.4重量份的磷酸二氢钾， 0.03重量份的硫酸 镁配置而成； 将脱氮硫杆菌种子液按照4的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速240r/min， 摇床振荡培养温度35， 发酵36h； 枯草芽孢杆菌发酵培养基 按重量百分比由100重量份的水， 25重量份的玉米粉，。

32、 15重量份的蛋白胨， 5重量份的玉米 浆， 1重量份的碳酸钙， 0.3重量份的硫酸镁， 0.1重量份的磷酸二氢钾配置而成； 将枯草芽孢 杆菌种子液按照4的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转速 220r/min， 摇床振荡培养温度30， 发酵24h； 蒙氏假单胞菌发酵培养基按重量百分比由100 重量份的水， 2重量份的麦芽糖， 2重量份的酵母粉， 0.15重量份的磷酸二氢钾， 0.1重量份的 硫酸镁配置而成； 将蒙氏假单胞菌种子液按照1的接种量接种于发酵培养基进行摇床振 说明书 4/6 页 7 CN 111925955 A 7 荡培养， 摇床振荡培养转速180r/min，。

33、 摇床振荡培养温度30， 发酵24h； 粪产碱杆菌发酵培 养基按重量百分比由100重量份水， 50重量份的蔗糖， 1.1重量份的硝酸钾， 0.5重量份的酵 母膏， 15重量份的碳酸钙， 0.5重量份的硫酸镁， 2.7重量份的磷酸二氢钾配置而成； 将粪产 碱杆菌种子液按照2.5的接种量接种于发酵培养基进行摇床振荡培养， 摇床振荡培养转 速200r/min， 摇床振荡培养温度30， 发酵4d。 0035 步骤4： 将步骤3得到的菌液按照重量百分比： 脱氮硫杆菌20， 枯草芽孢杆菌 40， 蒙式假单胞菌15， 粪产碱杆菌25， 混合， 得复合菌液； 0036 步骤5： 取复合菌液， 进行5000r/。

34、min离心去除上清液， 得湿菌体； 0037 步骤6： 将湿菌体在摇摆机上制粒， 再进行干燥处理； 0038 步骤7： 将步骤6得到的物料在30条件下进行粉碎， 再过50目筛网， 筛后粗料重新 粉碎， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0039 将来自污染河道的底泥和上覆原水装入2L烧杯中， 混合均匀后静置， 加入高活性 复合固体颗粒， 投加量是5mg/L处理35天， 检测处理过的水样， 底泥中氮有机污染物降解率 达97.1， 水样臭味消除， 水体透明度提高， 修复效果持续时间为3个月。 0040 实施例2： 0041 本实施例与实施例1的区别仅在于， 步骤1中所述的各菌种在。

35、固体培养基中培养温 度为35， 培养时间为2d； 步骤4中所述的复合菌液， 按照重量百分比由15脱氮硫杆菌， 35枯草芽孢杆菌， 20蒙式假单胞菌， 30粪产碱杆菌混合得到； 其余步骤与实施例1相 同， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0042 将来自污染河道的底泥和上覆原水装入2L烧杯中， 混合均匀后静置， 加入高活性 复合固体颗粒， 投加量是5mg/L处理35天， 检测处理过的水样， 底泥中氮有机污染物降解率 达98.5， 水样臭味消除， 水体透明度提高， 修复效果持续时间为3个月。 0043 实施例3： 0044 本实施例与实施例1的区别仅在于， 步骤1中所述的各菌种。

36、在固体培养基中培养温 度为33， 培养时间为4d； 步骤4中所述的复合菌液， 按照重量百分比由18脱氮硫杆菌， 30枯草芽孢杆菌， 25蒙式假单胞菌， 27粪产碱杆菌混合得到； 其余步骤与实施例1相 同， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0045 将来自污染河道的底泥和上覆原水装入2L烧杯中， 混合均匀后静置， 加入高活性 复合固体颗粒， 投加量是5mg/L处理35天， 检测处理过的水样， 底泥中氮有机污染物降解率 达98.9， 水样臭味消除， 水体透明度提高， 修复效果持续时间为3个月。 0046 对比例1： 0047 本对比例与实施例1的区别仅在于步骤4中所述的复合菌液。

37、， 按照重量百分比由 25脱氮硫杆菌， 45枯草芽孢杆菌， 10蒙式假单胞菌， 20粪产碱杆菌混合得到； 其余 步骤与实施例1相同， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0048 将来自污染河道的底泥和上覆原水装入2L烧杯中， 混合均匀后静置， 加入高活性 复合固体颗粒， 投加量是5mg/L处理35天， 检测处理过的水样， 底泥中氮有机污染物降解率 达84， 水样臭味消除， 水体透明度提高， 修复效果持续时间为50天。 0049 对比例2： 0050 本对比例与实施例1的区别仅在于， 步骤1中所述的各菌种在固体培养基中培养温 说明书 5/6 页 8 CN 111925955 A。

38、 8 度为35， 培养时间为2d； 步骤4中所述的复合菌液， 按照重量百分比由10脱氮硫杆菌， 50枯草芽孢杆菌， 30蒙式假单胞菌， 10粪产碱杆菌混合得到； 其余步骤与实施例1相 同， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0051 将来自污染河道的底泥和上覆原水装入2L烧杯中， 混合均匀后静置， 加入高活性 复合固体颗粒， 投加量是5mg/L处理35天， 检测处理过的水样， 底泥中氮有机污染物降解率 达80， 水样臭味未完全消除， 水体透明度改善不明显， 修复效果持续时间为45天。 0052 对比例3： 0053 本对比例与实施例1的区别仅在于， 步骤1中所述的各菌种在固体。

39、培养基中培养温 度为33， 培养时间为4d； 步骤4中所述的复合菌液， 按照重量百分比由30脱氮硫杆菌， 25枯草芽孢杆菌， 10蒙式假单胞菌， 35粪产碱杆菌混合得到； 其余步骤与实施例1相 同， 得到由自养异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。 0054 将来自污染河道的底泥和上覆原水装入2L烧杯中， 混合均匀后静置， 加入高活性 复合固体颗粒， 投加量是5mg/L处理35天， 检测处理过的水样， 底泥中氮有机污染物降解率 达78， 水样臭味消除， 水体透明度提高， 修复效果持续时间为40天。 0055 根据上述实施例可知， 本发明制备的高活性复合固体颗粒具有较好的底泥中氮有 机污染物降解效果， 具有较高的降解效率； 从上述实施例与对比例的结果来看， 在相同条件 下， 按照本发明所述的各菌种重量百分比制得的高活性复合固体颗粒， 其脱氮效果最优。 0056 以上显示和描述了本发明的基本原理、 主要特征和优点。 本行业的技术人员应该 了解， 上述实施例不以任何形式限制本发明， 凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的 技术方案， 均落在本发明的保护范围。 说明书 6/6 页 9 CN 111925955 A 9 图1 说明书附图 1/1 页 10 CN 111925955 A 10 。