眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节炎的药物中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010859311.9 (22)申请日 2020.08.24 (71)申请人 苏州人本药业有限公司 地址 215123 江苏省苏州市工业园区苏州 大学国家大学科技园B07栋307室 (72)发明人 秦正红 (74)专利代理机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 11250 代理人 周卫赛 (51)Int.Cl. A61K 35/583(2015.01) A61P 19/06(2006.01) (54)发明名称 眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或 抗痛风性关节炎的药物中。

2、的应用 (57)摘要 本发明涉及医药领域， 具体提供了眼镜蛇蛇 毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节 炎的药物中的应用。 本发明的眼镜蛇蛇毒能够有 效降低高尿酸小鼠的血尿酸水平， 同时还对痛风 性关节炎有明显改善作用， 能够修复尿酸钠沉积 导致的关节损伤， 降低关节肿胀率， 改善关节滑 膜组织增厚情况， 减少炎症细胞浸润， 保护软骨 细胞， 临床实验表明眼镜蛇神经毒素可以快速消 除痛风患者的皮下痛风结石， 患者注射三天肿块 消失， 无副作用， 综上所述， 中华眼镜蛇蛇毒在降 尿酸的同时具有修复痛风性关节炎的作用， 可作 为治疗痛风的药物。 权利要求书1页 说明书9页 附图4页 CN 11。

3、1939179 A 2020.11.17 CN 111939179 A 1.眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节炎的药物中的应用。 2.眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备能够防止尿酸盐沉积、 具有去结石作用或者具有修复 关节损伤作用的药物中的应用。 3.眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸同时抗痛风性关节炎的药物中的应用。 4.眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备预防或者治疗高尿酸血症、 痛风、 痛风性关节炎、 皮下 痛风结石或者痛风性肾病的药物中的应用。 5.根据权利要求1-4中任一所述的应用， 其特征在于， 所述眼镜蛇蛇毒为中华眼镜蛇蛇 毒。 6.根据权利要求1-5中任一所述的应用， 其特征在于，。

4、 所述提取物为眼镜蛇蛇毒氯化铵 沉淀后的提取物、 眼镜蛇蛇毒分子筛去除大分子蛋白的提取物或者上述提取物经纯化后得 到的眼镜蛇神经毒素。 7.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 以中华眼镜蛇蛇毒为药物的活性成分时， 所述药物的给药剂量为0.1-50mg/kg/天， 持续时间为1-360天。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 以眼镜蛇神经毒素为药物活性成分时， 所 述药物的给药剂量为2-30 g/kg/天， 持续时间为1-360天。 9.根据权利要求1-8中任一所述的应用， 其特征在于， 所述药物包含眼镜蛇蛇毒和一种 或多种其他降尿酸药物； 优选地， 所述其他降尿酸药物选自黄嘌呤。

5、氧化酶抑制剂、 排尿酸 剂、 尿酸盐转运体-1抑制剂、 尿酸酶中的至少一种。 10.根据权利要求1-9中任一所述的应用， 其特征在于， 所述药物中还包括药学可接受 的载体； 优选地， 所述药学可接受的载体选自药学上可接受的溶剂、 增溶剂、 助溶剂、 乳化剂、 着 色剂、 粘合剂、 崩解剂、 填充剂、 润滑剂、 润湿剂、 渗透压调节剂、 稳定剂、 助流剂、 矫味剂、 防 腐剂、 助悬剂、 包衣材料、 芳香剂、 抗粘合剂、 整合剂、 渗透促进剂、 pH值调节剂、 缓冲剂、 增塑 剂、 表面活性剂、 增稠剂、 包合剂、 保湿剂、 吸收剂、 稀释剂、 絮凝剂与反絮凝剂、 助滤剂、 释放 阻滞剂、 高分。

6、子骨架材料和成膜材料中的至少一种； 优选地， 所述药物是片剂、 胶囊剂、 口腔速溶药膜、 口服溶液、 喷雾剂或注射剂。 权利要求书 1/1 页 2 CN 111939179 A 2 眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节炎 的药物中的应用 技术领域 0001 本发明涉及医药领域， 具体涉及一种眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或 抗痛风性关节炎的药物中的应用。 背景技术 0002 尿酸是人类嘌呤代谢的终末产物， 由于人体内缺乏尿酸氧化酶， 而使人类极易形 成高尿酸血症， 高尿酸血症是由于嘌呤代谢紊乱使尿酸生成增多或者排泄减少所致的代谢 性疾病， 据统计约有5-12的高尿酸血症最终。

7、会发展成痛风。 高尿酸血症如长期存在， 尿 酸将以尿酸盐的形式沉积在关节、 皮下组织及肾脏等部位， 引起痛风性关节炎、 皮下痛风结 石、 肾脏结石或痛风性肾病等一系列临床疾病， 严重的会发生肾衰竭， 危及生命。 长期高尿 酸血症导致心血管疾病、 糖尿病等疾病的发病率和病死率增加， 是严重危害人类健康的一 种慢性代谢性疾病。 0003 人体尿酸主要来源于以下两个方面： 0004 (1)人体细胞内蛋白质分解代谢产生的核酸和其它嘌呤类化合物， 经一些酶的作 用而生成内源性尿酸； 0005 (2)食物中所含的嘌呤类化合物、 核酸及核蛋白成分， 经过消化与吸收后， 经一些 酶的作用生成外源性尿酸。 00。

8、06 目前针对高尿酸血症的治疗主要是降低血液中的尿酸水平， 一类是抑制尿酸合成 的药物， 一类是增加尿酸排泄的药物。 抑制尿酸合成的药物主要有黄嘌呤氧化酶抑制剂， 通 过抑制尿酸合成途径中的黄嘌呤氧化酶， 从而导致尿酸生成的减少。 抑制尿酸合成的药物 主要有别嘌醇和非布司他， 别嘌醇副作用是胃肠道反应， 皮疹， 肝功能异常。 在临床上如果 要给患者口服别嘌醇要进行多位点的检测， 防止别嘌醇过敏反应的发生。 另外一大类是促 进尿酸排泄的药物， 主要有排尿酸剂， 其能够抑制尿酸盐在肾小管的重吸收， 代表药物有苯 溴马隆。 此外， 还有尿酸盐转运体-1抑制剂、 尿酸酶等。 0007 眼镜蛇蛇毒是由眼。

9、镜蛇的毒腺分泌的多种组分构成的复杂混合物， 祖国传统医学 认为眼镜蛇及其毒性成分可通经络， 祛风湿， 并具有强身健体之功效， 可用其他传统中药复 配治疗各种慢性疼痛、 关节痛和神经痛。 目前， 尚未明确眼镜蛇蛇毒是否可适用于高尿酸血 症和痛风性关节炎的治疗。 发明内容 0008 因此， 本发明要解决的技术问题在于提供一种眼镜蛇蛇毒的新应用， 即眼镜蛇蛇 毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节炎的药物中的应用。 0009 本发明提供了眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节炎的药物 中的应用。 0010 本发明还提供了眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备能够防止尿酸盐沉积、 具有去结石 说明。

10、书 1/9 页 3 CN 111939179 A 3 作用或者具有修复关节损伤作用的药物中的应用。 0011 本发明还提供了眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸同时抗痛风性关节炎的药 物中的应用。 0012 本发明还提供了眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备预防或者治疗高尿酸血症、 痛风、 痛风性关节炎、 皮下痛风结石或者痛风性肾病的药物中的应用。 0013 优选地， 所述眼镜蛇蛇毒为中华眼镜蛇蛇毒。 0014 其中， 中华眼镜蛇为人工养殖的， 蛇毒采集后经冷冻干燥制成淡黄色粉末。 眼镜蛇 毒经检测蛋白含量90以上， 灰分少于2， 神经毒素含量6以上的方可应用。 0015 进一步地， 所述眼镜蛇蛇毒是眼镜蛇。

11、总毒。 提取物为眼镜蛇蛇毒氯化铵沉淀过后 的小分子蛋白提取物、 眼镜蛇蛇毒分子筛过滤后的小分子蛋白提取物或者上述提取物经纯 化后得到的眼镜蛇神经毒素。 0016 进一步地， 以中华眼镜蛇蛇毒为药物的活性成分时， 所述药物的给药剂量为0.1- 50mg/kg/天， 持续1-360天； 优选地， 给药剂量为0.1-10mg/kg/天， 持续1-120天； 更优选地， 给药剂量为0.1-1mg/kg/天， 持续3-10天。 0017 进一步地， 以眼镜蛇神经毒素为药物活性成分时， 所述药物的给药剂量为2-30 g/ kg/天， 持续1-360天。 0018 进一步地， 所述药物包含眼镜蛇蛇毒和一种或。

12、多种其他降尿酸药物。 0019 进一步地， 所述其他降尿酸药物选自黄嘌呤氧化酶抑制剂、 排尿酸剂、 尿酸盐转运 体-1抑制剂、 尿酸酶和抑制素中的至少一种。 所述其他降尿酸药物为别嘌呤醇、 非布索坦和 苯溴马隆中的至少一种。 0020 进一步地， 所述药物中还包括药学可接受的载体； 优选地， 所述药学可接受的载体 选自药学上可接受的溶剂、 增溶剂、 助溶剂、 乳化剂、 着色剂、 粘合剂、 崩解剂、 填充剂、 润滑 剂、 润湿剂、 渗透压调节剂、 稳定剂、 助流剂、 矫味剂、 防腐剂、 助悬剂、 包衣材料、 芳香剂、 抗 粘合剂、 整合剂、 渗透促进剂、 pH值调节剂、 缓冲剂、 增塑剂、 表面。

13、活性剂、 增稠剂、 包合剂、 保 湿剂、 吸收剂、 稀释剂、 絮凝剂与反絮凝剂、 助滤剂、 释放阻滞剂、 高分子骨架材料和成膜材 料中的至少一种。 0021 优选地， 所述药物是片剂、 胶囊、 口服溶液、 喷雾剂、 口腔速溶药膜、 或注射剂， 片剂 可以采用泡腾片。 0022 本发明技术方案， 具有如下优点： 0023 本发明的眼镜蛇蛇毒或其提取物能够有效降低高尿酸小鼠的血尿酸水平， 同时还 对痛风性关节炎有明显改善作用， 能够修复尿酸沉积导致的关节损伤， 减轻关节肿胀， 改善 关节滑膜组织增厚情况， 减少炎症细胞浸润， 保护软骨细胞， 临床实验表明从眼镜蛇蛇毒中 提取后经纯化得到的神经毒素可。

14、以快速消除痛风患者的皮下痛风结石， 患者注射三天炎性 肿块消失， 尿酸结石逐渐缩小， 无副作用， 综上所述， 眼镜蛇蛇毒在降尿酸的同时具有修复 痛风性关节炎的作用。 附图说明 0024 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案， 下面将对具体 实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍， 显而易见地， 下面描述中的 说明书 2/9 页 4 CN 111939179 A 4 附图是本发明的一些实施方式， 对于本领域普通技术人员来讲， 在不付出创造性劳动的前 提下， 还可以根据这些附图获得其他的附图。 0025 图1是本发明实验例2中中华眼镜蛇毒NNAV高剂量组小鼠、 N。

15、NAV低剂量组小鼠和模 型对照组、 正常对照组小鼠的踝关节图片， 其中1-A为正常对照组， 1-B为NNAV高剂量组、 1-C 为NNAV低剂量组， 1-D为模型对照组； 0026 图2是本发明实验例2中正常对照组小鼠和NNAV低剂量组小鼠的踝关节的HE染色 图。 0027 图3是本发明实验例2中NNAV高剂量组小鼠和模型对照组的踝关节的HE染色图。 0028 图4是本发明临床实验中痛风患者治疗前后的足背部图片， 左图为治疗前， 右图为 治疗后。 具体实施方式 0029 实验例1动物药效学实验 0030 1.实验材料和方法 0031 1.1药物与试剂 0032 中华眼镜蛇蛇毒(NNAV)冻干粉。

16、， 购自湖南保靖吕洞山蛇场。 经HPLC检测蛋白含量 90以上， 灰分少于2， 神经毒素含量为6.2。 0033 尿酸： 购自安徽酷尔生物工程有限公司； 尿酸测定试剂盒： 购自南京建成生物工程 研究所， 批号20171025。 0034 微晶型尿酸钠(MSU)的制备方法： 取1g尿酸加入194ml蒸馏水与1mol/LNaOH6ml， 煮 沸， 使尿酸完全溶解， 水浴冷却后， 滴入稀HCl至pH7.0， 溶液呈乳白色， 4冰箱放置过夜， 过 滤， 50烘干， 保存， 临用临配。 0035 MSU混悬液的配制方法： 将MSU加入0.9的氯化钠溶液， 得到浓度为25mg/ml的MSU 混悬液。 00。

17、36 1.2实验仪器 0037 电子数显卡尺： 购自上海工具厂有限公司； 酶标仪： 购自赛默飞。 0038 1.3实验动物 0039 雄性ICR小鼠， 体重20-25g， 由上海史莱克实验动物中心提供。 0040 1.4方法 0041 (1)50只雄性ICR小鼠随机分为5组(n10)： 正常对照组、 模型对照组、 NNAV低剂量 组(给药剂量： 0.1mg/kg)、 中剂量组(0.5mg/kg)、 高剂量组(1.0mg/kg)， 各组每鼠测量基础 踝关节周径后造模， 固定小鼠后肢右腿， 右脚弯曲， 于小鼠小腿外侧踝关节上约5mm处进针 至踝关节， 将0.02ml MSU混悬液(浓度25mg/m。

18、l)注入关节腔， 正常对照组注射等量生理盐 水。 第一次造模后开始给药， NNAV各剂量组按10ml/kg体积灌服相应浓度的水溶液， 正常对 照组与模型对照组均灌服等量蒸馏水， 1次/d， 连续给药8周。 实验于第7、 14、 21天测定每鼠 右踝关节周径后， 按第一次造模方法， 再次注射0.02ml MSU混悬液。 实验第28、 35、 42、 49、 56 天测定每鼠右踝关节周径， 第56天按表1对每鼠踝关节损伤程度进行评分。 0042 表1 评分标准 0043 分值踝关节损伤程度 说明书 3/9 页 5 CN 111939179 A 5 0关节未见肿胀、 变形、 弯曲 1关节轻度肿胀 2。

19、关节肿胀、 稍有弯曲 3关节肿胀、 变形、 明显弯曲， 牵拉不直 0044 (2)在实验第57天给药60min后， 除正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水外， 其余各 组小鼠按照体重腹腔注射250mg/kg MSU混悬液， 每鼠腹腔注射60min后， 眼眶取血， 分离血 清， 采用尿酸测定试剂盒按照其说明书中的方法步骤， 测定血清中尿酸水平。 0045 (3)数据处理与分析 0046 关节肿胀率(造模后踝关节周径-造模前踝关节周径)/造模前踝关节周径 100， 各组数据以表示， 采用SPSS17.0统计软件进行t检验和单因素方差分析， p 0.05表示差异有统计学意义， 踝关节评分采用轶和法两两比较。

20、统计处理。 0047 2.实验结果 0048 (1)中华眼镜蛇蛇毒对尿酸钠致高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响 0049 从下表可以看出， NNAV各剂量组与模型对照组比较， 血清尿酸水平均有降低， 其中 高剂量组有显著性差异(p0.01)， 说明本发明的眼镜蛇蛇毒能够有效降低尿酸水平， 可用 于预防或者治疗高尿酸血症。 0050表2 NNAV对尿酸钠致高尿酸血症小鼠血清尿酸水平影响(n10) 0051 组别剂量(mg/kg)血清尿酸水平( mol/L) 正常对照组-131.2911.27 模型对照组-212.58225.45 NNAV低剂量组0.1204.0216.73 NNAV中剂量组0.519。

21、3.1319.09 NNAV高剂量组1.0180.3014.31* 0052 注： *p0.01。 0053 (2)中华眼镜蛇蛇毒对MAU致小鼠痛风性关节炎的治疗作用 0054 结果见表3， 从表3中数据可以看出， 各NNAV给药组小鼠关节肿胀度与模型对照组 比较均有降低， 降低程度呈剂量依赖性， NNAV高剂量组1-8周均有明显降低(p0.05)， 说明 中华眼镜蛇蛇毒可以改善小鼠痛风性关节炎的关节肿胀率， 具有预防或者治疗痛风小鼠的 作用。 0055表3 NNAV对MSU致痛风小鼠关节肿胀率的影响() 说明书 4/9 页 6 CN 111939179 A 6 0056 0057 0058 。

22、注： *p0.05， *p0.01。 0059 (3)中华眼镜蛇蛇毒对MAU致小鼠痛风性关节损伤的修复作用 0060 结果见表4所示， 从表4中可以看出， 中剂量组和高剂量组的踝关节损伤程度明显 好于模型对照组(p0.05)， 说明中华眼镜蛇蛇毒能够修复MAU导致的关节损伤， 进而可用于 预防或者治疗MAU沉积导致的痛风性关节炎。 0061表4 NNAV对MSU致小鼠痛风性关节损伤的影响() 0062 0063 实验例2动物药效学实验 0064 1.实验材料和方法 0065 1.1药物与试剂 0066 中华眼镜蛇蛇毒(NNAV)： 同实验例1。 0067 尿酸： 购自安徽酷尔生物工程有限公司。。

23、 0068 微晶型尿酸钠(MSU):取1g尿酸加入194ml蒸馏水与1mol/LNaOH6ml， 煮沸， 使尿酸 完全溶解， 水浴冷却后， 滴入稀HCl至pH7.0， 溶液呈乳白色， 4冰箱放置过夜， 过滤， 50烘 干， 保存， 临用临配。 0069 MSU混悬液的配制方法： 将MSU加入0.9的氯化钠溶液， 得到浓度为20mg/ml的MSU 混悬液。 说明书 5/9 页 7 CN 111939179 A 7 0070 1.2实验仪器 0071 电子数显卡尺： 购自上海工具厂有限公司； 酶标仪： 购自赛默飞。 0072 1.3实验动物 0073 雄性ICR小鼠， 体重20-25g， 由上海史。

24、莱克实验动物中心提供。 0074 1.4方法 0075 (1)32只雄性ICR小鼠随机分为4组(n8)： 正常对照组、 模型对照组、 NNAV低剂量 组(0.5mg/kg)、 高剂量组(1.0mg/kg)， 各组每鼠测量基础踝关节周径后， 除正常对照组， 其 余各组造模， 固定小鼠后肢右腿， 右脚弯曲， 于小鼠小腿外侧踝关节上约5mm处进针至踝关 节， 将0.02ml MSU混悬液(浓度20mg/ml)注入关节腔。 第一次造模后开始给药， NNAV各剂量 组按10ml/kg体积灌服相应浓度的水溶液， 正常对照组与模型对照组灌服等量蒸馏水， 1次/ d， 连续给药120天。 实验于第7、 14、。

25、 21天测定每鼠右踝关节周径后按第一次造模方法， 再次 0.02ml MSU混悬液(浓度20mg/ml)。 实验第28、 35、 42、 49、 56、 63、 70、 77、 84、 91、 98、 105、 112、 119天测定每鼠右踝关节周径， 第120天按表1对每鼠踝关节损伤程度进行评分， 第121天各 组小鼠处死， 解剖观察主要脏器后取各鼠右踝关节， 去除表皮， 用4甲醛固定， HE染色观察 组织的病理变化情况， 具体步骤包括： 1)组织取材， 脱水； 2)石蜡包埋后切片， 厚度3 m； 3)烘 箱60烤片30min-1hr； 4)染色： 二甲苯 5min， 二甲苯5min， 二甲。

26、苯5min， 无水乙醇 1min， 95酒精1min， 75酒精1min， 自来水冲洗数秒， 苏木素染色液染2min， 自来水冲洗数 秒， 分化液快速分化后温水冲洗返蓝， 伊红染色液染1min， 75酒精30s， 95酒精30s， 无水 乙醇30s， 二甲苯透明1min.； 5)封片， 晾干； 6)镜检。 0076 (2)数据处理与分析 0077 关节肿胀率(造模后踝关节周径-造模前踝关节周径)/造模前踝关节周径 100， 各组数据以表示， 采用SPSS17.0统计软件进行t检验和单因素方差分析， p 0.05表示差异有统计学意义， 踝关节评分采用轶和法两两比较统计处理。 0078 2.实验结。

27、果 0079 (1)中华眼镜蛇蛇毒对MAU致小鼠痛风性关节炎的治疗作用 0080 结果见表5， NNAV各给药组小鼠关节肿胀程度与模型对照组比较， 第1-5周有所降 低， 但未见明显差异， 第6-17周低剂量组与高剂量组均有显著性降低(p0.05， p0.01)， 说 明中华眼镜蛇蛇毒可以改善小鼠痛风性关节炎的关节肿胀， 具有预防或者治疗痛风的作 用。 0081表5 NNAV对MSU致小鼠痛风性关节炎的关节肿胀率() 说明书 6/9 页 8 CN 111939179 A 8 0082 0083 注： *p0.05， *p0.01。 0084 每组小鼠踝关节评分结果见表6， 低剂量组和高剂量组的。

28、踝关节损伤程度明显好 于模型对照组。 图1-A为正常对照组， 1-B为NNAV高剂量组， 图1-C为NNAV低剂量组， 图1-D为 模型对照组， 由图1可以看出， 关节肿胀的修复程度依次为： NNAV高剂量组好于NNAV低剂量 组， NNAV低剂量组好于模型对照组， 说明中华眼镜蛇蛇毒能够修复MAU导致的关节损伤， 进 而可用于预防或者治疗MAU沉积导致的痛风。 0085 表6 NNAV对MSU致痛风小鼠踝关节外观评价 说明书 7/9 页 9 CN 111939179 A 9 0086 0087 (2)病理分析 0088 NNAV对MSU诱导的痛风性关节炎小鼠用药120天后， 解剖肉眼观察未见。

29、动物主要脏 器有明显的病理改变， 踝关节病理镜检结果显示： NNAV小鼠踝关节的滑膜增生、 纤维化、 炎 症细胞浸润、 软骨细胞坏死等指标均好于模型对照组， 见图2和3。 0089 具体地， 图2-A和2-B为正常对照组的HE染色图， 图2-A和2-B中未见明显病理改变。 图2-C至图2-E均为NNAV低剂量组的HE染色图， 图2-C显示： 滑膜组织轻度增厚(+)， 伴少量炎 症细胞浸润(+)， 关节软骨细胞点灶状坏死(+)。 图2-D显示： 关节软骨细胞可见坏死(+)， 滑 膜组织轻度增厚纤维化(+)， 伴轻度炎症细胞浸润(+)。 图2-E显示： 未见明显病理改变。 0090 图3-A至3-。

30、C均为NNAV高剂量组的HE染色图， 图3-A显示： 滑膜组织轻度增厚(+)， 可 见少量炎症细胞浸润(+)。 图3-B显示： 未见明显病理改变。 图3-C显示： 滑膜增厚(+)， 轻度 纤维化(+)， 散在微量炎症细胞浸润(+)。 0091 图3-D至3-F均为模型对照组， 图3-D显示： 滑膜增厚(+)， 轻度纤维化(+)， 可见炎 症细胞浸润(+)。 图3-E显示： 滑膜明显增厚(+)， 轻中度纤维化(+)， 伴少量炎症细胞浸 润(+)。 图3-F显示： 滑膜明显增厚(+)， 轻中度纤维化(+)， 伴炎症细胞浸润(+)， 关节面软 骨细胞可见坏死(+)。 0092 其中， +表示轻度； 。

31、+表示中度； +表示重度。 0093 临床观察 0094 受试药物的制备： 采用专利文献CN104974238A实施例1公开的方法， 先提取中华眼 镜蛇蛇毒中的小分子蛋白， 然后经过离子交换和反相层析法纯化， 获得纯度为97以上的 神经毒素， 经全序列测序证明为短链神经毒素cobrotoxin， 有62个氨基酸组成， 质谱分子量 测定为6948道尔顿。 氨基酸序列和分子量与基因库报告的中华眼镜蛇毒短链神经毒素 cobrotoxin完全一致。 0095 药物溶液的配制： 将上述制得的短链神经毒素cobrotoxin溶解于0.9生理盐水 中， 制得浓度为3 g/ml的神经毒素溶液， 经过20nm滤。

32、膜过滤灭菌并除病毒， 即得。 注射剂由 韩国东方医院制剂室制作， 符合东方医药GMP法规要求。 0096 患者： 韩国东方医药诊所确诊的通风患者志愿者20例， 接受神经毒素治疗， 初步观 察神经毒素的治疗效果。 0097 治疗方法与疗效： 0098 经过3天到5天治疗， 每次注射一次， 使用本发明眼镜蛇神经毒素治疗， 20例病患 中， 一般连续注射3天、 每天一次就能消肿、 止痛， 总有效率为90左右， 部分病人在3天以后 可见尿酸沉积引起的肿块缩小， 部分病人在连续使用3个月后肿块消失。 治疗期间未发生明 说明书 8/9 页 10 CN 111939179 A 10 显药物不良反应。 本发明。

33、所述的眼镜蛇毒神经毒素在痛风病人中有显著的治疗效果， 初步 观察总有效率可达90左右， 疗程短， 见效快， 且无毒副作用。 0099 典型病案举例： 0100 吴某， 男， 53岁， 于2019年5月就诊。 患者通风急性发作， 疼痛难忍， 神经毒素注射治 疗。 0101 将纯化的中华眼镜蛇短链神经毒素(98纯度， HPLC)配制成无菌注射液(生理盐 酸溶液)， 给患有痛风的志愿者局部给药围绕痛风石沉淀部位多点皮下注射， 每次注射总量 0.5-2毫升(含3微克中华眼镜蛇短链神经毒素的生理盐水溶液)， 每天注射1次， 注射期间多 喝水。 该痛风患者治疗前以及治疗3次的足背部图片如图4所示， 左图为。

34、治疗前， 右图为治疗 后。 由图4可知， 治疗3次后痛风患者的尿酸沉积引起的肿块明显缩小， 效果显著。 0102 显然， 上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例， 而并非对实施方式的限定。 对 于所属领域的普通技术人员来说， 在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或 变动。 这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。 而由此所引伸出的显而易见的变化或 变动仍处于本发明创造的保护范围之中。 说明书 9/9 页 11 CN 111939179 A 11 图1 说明书附图 1/4 页 12 CN 111939179 A 12 图2 说明书附图 2/4 页 13 CN 111939179 A 13 图3 说明书附图 3/4 页 14 CN 111939179 A 14 图4 说明书附图 4/4 页 15 CN 111939179 A 15 。