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阳离子性脂质.pdf

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1、10申请公布号CN104066712A43申请公布日20140924CN104066712A21申请号201280065699922申请日2012110261/554,62220111102US61/670,84020120712US61/671,34120120713USC07C217/08200601A61K31/231200601A61K31/24200601A61K31/40200601A61P29/00200601A61P35/00200601C07C219/08200601C07C237/06200601C07C271/20200601C07D207/08200601C07D207。

2、/12200601C07D491/056200601C12N15/0920060171申请人协和发酵麒麟株式会社地址日本东京都72发明人洼山刚之江良公宏直井智幸八木信宏74专利代理机构北京市金杜律师事务所11256代理人杨宏军王大方54发明名称阳离子性脂质57摘要本发明提供一种使得能容易地将核酸导入细胞内的阳离子性脂质、含有该阳离子性脂质及核酸的组合物、使用含有该阳离子性脂质及核酸的组合物将核酸导入细胞内的方法等，所述阳离子性脂质由式I表示，式中，R1及R2相同或不同，为链烯基等，X1及X2为氢原子、或者连接在一起形成单键或亚烷基，X3不存在或者为烷基等，Y不存在或者为阴离子，A及B相同或不同。

3、，为03，L3为单键等，R3为烷基等，L1及L2为O、COO或者OCO。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014070186PCT国际申请的申请数据PCT/JP2012/0784852012110287PCT国际申请的公布数据WO2013/065825JA2013051051INTCL权利要求书3页说明书89页序列表3页附图6页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书89页序列表3页附图6页10申请公布号CN104066712ACN104066712A1/3页21式I表示的阳离子性脂质，式中，R1及R2相同或不同，为碳原子数1224的直链状或支链状的烷。

4、基、链烯基或者炔基，或者R1及R2连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，X1及X2为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，X3不存在，或者为碳原子数16的烷基或者碳原子数36的链烯基，X3不存在时，Y也不存在，A及B为0，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2为O，或者Y也不存在，A及B相同或不同。

5、为03，并且A和B不同时为0，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，或者Y也不存在，A及B相同或不同为03，L3为单键，R3为氢原子，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，或者Y也不存在，A及B相同或不同，为03，L3为CO或者COO，R3为吡咯烷2基、吡咯烷3基、哌啶2基、哌啶3基、哌啶4基。

6、、吗啉2基、吗啉3基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，X3为碳原子数16的烷基或者碳原子数36的链烯基时，Y为制药上能允许的阴离子，A及B相同或不同，为03，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨。

7、基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO。权利要求书CN104066712A2/3页32如权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，L1及L2为O或者OCO，R1及R2为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、Z十四烷9烯基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、E十八烷9烯基、Z十八烷11烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基、9Z,12Z,15Z十八烷9,12,15三烯基、Z二十烷11烯基、11Z,1。

8、4Z二十烷11,14二烯基、3,7,11三甲基十二烷2,6,10三烯基或3,7,11,15四甲基十六烷2烯基。3如权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，L1及L2为COO，R1及R2为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、Z十三烷8烯基、Z十五烷8烯基、Z十七烷5烯基、Z十七烷8烯基、E十七烷8烯基、Z十七烷10烯基、8Z,11Z十七烷8,11二烯基、8Z,11Z,14Z十八烷8,11,14三烯基、Z十九烷10烯基、10Z,13Z十九烷10,13二烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基、2,6,10三甲基十一烷1,5,9三烯基或2,6,10,14四甲基十五烷1烯基。。

9、4如权利要求13中任一项所述的阳离子性脂质，其中，A及B同时为0或者1。5如权利要求1、2及4中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L3为单键，R3为氢原子、甲基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2为O。6如权利要求14中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L3为CO或者COO，R3为吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲。

10、酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L1及L2为相同的COO或者OCO。7如权利要求16中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2连接在一起，形成单键或亚烷基。8如权利要求15中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2连接在一起形成单键或亚烷基，R3为氢原子、甲基或者被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。9如权利要求15中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2为氢原子，R。

11、3为氢原子、甲基或者被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。10如权利要求6所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2连接在一起形成单键或亚烷基，R3为被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。11如权利要求6所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2为氢原子，R3为被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。12如权利要求111中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X3不存在，或者为甲基。权利要求书CN104066712A3/3页413一种组合物，含有权利要求112。

12、中任一项所述的阳离子性脂质及核酸。14如权利要求13所述的组合物，其中，阳离子性脂质与该核酸形成复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体。15如权利要求13所述的组合物，其中，阳离子性脂质形成与该核酸的复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体，所述组合物含有所述复合体及封入了所述复合体的脂质膜。16如权利要求1315中任一项所述的组合物，其中，核酸为具有利用了RNA干扰RNAI的靶基因的表达抑制作用的核酸。17如权利要求16所述的组合物，其中，靶基因为与肿瘤或者炎症相关的基因。18一种使用权利要求1417中任一项所述的。

13、组合物将所述核酸导入细胞内的方法。19如权利要求18所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肿瘤或者炎症部位中的细胞。20如权利要求18或者19所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肝脏、肺、肾脏或者脾脏中的细胞。21如权利要求19或者20所述的方法，其中，向细胞内导入的方法是通过静脉内给予向细胞内导入的方法。22一种癌或者炎症疾病的治疗方法，将权利要求17所述的组合物给予至哺乳动物。23如权利要求22所述的方法，其中，给与方法是静脉内给予。24一种药物，含有权利要求16所述的组合物，用于治疗疾病。25如权利要求24所述的药物，其中，给予方法是静脉内给予。26一种癌或者炎症疾病的治疗剂，含有权利要求17所述。

14、的组合物，用于治疗癌或者炎症疾病。27如权利要求26所述的癌或者炎症疾病的治疗剂，其中，给予方法是静脉内给予。权利要求书CN104066712A1/89页5阳离子性脂质技术领域0001本发明涉及使得能容易地将核酸导入例如细胞内等的新型阳离子性脂质及含有该阳离子性脂质的新型组合物等。背景技术0002所谓阳离子性脂质，为下述两亲性分子，具有含有一个或者多个烃基的脂质亲和性区域、和含有至少带一个正电的极性头基HEADGROUP的亲水性区域。阳离子性脂质与核酸等巨大分子通过形成以总电荷计带正电的复合体，使得核酸等巨大分子容易通过细胞的原生质膜进入细胞质，因此阳离子性脂质是有用的。能够在体外及体内进行的。

15、该过程作为转染被人们知晓。0003典型地，阳离子性脂质单独使用或者与磷脂等中性脂质组合。已知阳离子性脂质与中性脂质组合，能够容易地形成含有整齐排列的脂双层膜的小泡，因此这样的组合是有用的。阳离子性脂质单独或者与中性脂质组合形成的小泡、或者脂质体在表面具有多个正电荷，通过该电荷，能够与多核苷酸或者带负电的蛋白质等其他阴离子性分子形成复合体。通过多核苷酸/阳离子性脂质/中性脂质复合体的表面上残留的总阳离子电荷，能够与细胞膜表面的主要的负电荷引起很强的相互反应。0004大量的不同种类的阳离子性脂质为了用于转染而被合成，目前已有市售。上述阳离子性脂质包括例如LIPOFECTIN、LIPOFECTINA。

16、CE、LIPOFECTAMINE、TRANSFEACTAM、DOTAP等。0005专利文献1中公开的、N12,3二油基氧基丙基N,N,N三甲基氯化铵DOTMA等为当初开发的阳离子性脂质之一。DOTMA等的特征在于，向分子赋予阳离子部位的、具有季氮的丙铵基PROPANAMINIUMGROUP及与分子的丙基骨架形成醚键的一对高级烃。季氮被甲基等链比较短的烷基链三取代。结构上类似的阳离子性脂质、N2,3二9Z十八碳烯酰基氧基丙烷1基N,N,N三甲基氯化铵DOTAP不含形成了醚键的烷基，而含有酰基。0006专利文献2及3中公开的、例如N12,3二油基氧基丙基N,N二甲基N羟基乙基溴化铵DORIE、2,。

17、3二油基氧基N2精胺羧基酰胺乙基N,N二甲基1丙铵基三氟乙酸DOSPA等的特征在于，向分子赋予阳离子部位的、具有季氮的丙铵基及与分子的丙基骨架形成醚键的一对高级烃，并且特征在于，季氮被甲基等链比较短的烷基链和羟基烷基三取代。0007专利文献4中公开了例如1,2二亚油基氧基N,N二甲基氨基丙烷DLINDMA等。DLINDMA等的特征在于，出于开发更柔软的阳离子性脂质、并且由此提高脂质体等的膜流动性的目的，使结构上类似的阳离子性脂质即DOTAP及DOTMA的高级烷基为至少具有2处不饱和部位的高级烷基。另外，专利文献5中公开了例如2,2二亚油基4二甲基氨基甲基1,3二氧戊环DLINKDMA等。000。

18、8专利文献1日本特开昭61161246号公报美国专利5049386号说明书说明书CN104066712A2/89页60009专利文献2国际公开第91/16024号小册子0010专利文献3国际公开第97/019675号小册子0011专利文献4国际公开第2005/121348号小册子0012专利文献5国际公开第2009/086558号小册子发明内容0013本发明的目的在于提供一种将核酸容易地导入例如细胞内等的新型阳离子性脂质及含有该阳离子性脂质的新型组合物等。0014本发明涉及以下127。00151式I表示的阳离子性脂质00160017式中，R1及R2相同或不同，为碳原子数1224的直链状或支链状。

19、的烷基、链烯基或者炔基，或者R1及R2连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，0018X1及X2为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，0019X3不存在，或者为碳原子数16的烷基或者碳原子数36的链烯基，0020X3不存在时，0021Y也不存在，A及B为0，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2为。

20、O，或者0022Y也不存在，A及B相同或不同，为03，并且A和B不同时为0，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，或者0023Y也不存在，A及B相同或不同，为03，L3为单键，R3为氢原子，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，或者0024Y也不存在，A及B相同或不同为03，L3为CO或者CO。

21、O，R3为吡咯烷2基、吡咯烷3基、哌啶2基、哌啶3基、哌啶4基、吗啉2基、吗啉3基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单说明书CN104066712A3/89页7烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，0025X3为碳原子数16的烷基或者碳原子数36的链烯基时，0026Y为制药上能允许的阴离子，A及B相同或不同，为03，L3为单键，R3为碳。

22、原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO。00272如上述1的阳离子性脂质，其中，L1及L2为O或者OCO，R1及R2为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、Z十四烷9烯基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、E十八烷9烯基、Z十八烷11烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基、。

23、9Z,12Z,15Z十八烷9,12,15三烯基、Z二十烷11烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基、3,7,11三甲基十二烷2,6,10三烯基或者3,7,11,15四甲基十六烷2烯基。00283如上述1所述的阳离子性脂质，其中，L1及L2为COO，R1及R2为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、Z十三烷8烯基、Z十五烷8烯基、Z十七烷5烯基、Z十七烷8烯基、E十七烷8烯基、Z十七烷10烯基、8Z,11Z十七烷8,11二烯基、8Z,11Z,14Z十八烷8,11,14三烯基、Z十九烷10烯基、10Z,13Z十九烷10,13二烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基。

24、、2,6,10三甲基十一烷1,5,9三烯基或者2,6,10,14四甲基十五烷1烯基。00294如上述13中任一项所述的阳离子性脂质，其中，A及B同时为0或者1。00305如上述1、2及4中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L3为单键，R3为氢原子、甲基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2为O。00316如上述14中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L3为CO或者COO，R3为吡咯烷3基、哌啶3基。

25、、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L1及L2为相同的COO或者OCO。00327如上述16中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2连接在一起，形成单键或亚烷基。00338如上述15中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2连接在一起形成单键或亚烷基，R3为氢原子、甲基或者被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1。

26、6的烷基或碳原子数36的链烯基。说明书CN104066712A4/89页800349如上述15中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2为氢原子，R3为氢原子、甲基或者被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。003510如上述6所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2连接在一起形成单键或亚烷基，R3为被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。003611如上述6所述的阳离子性脂质，其中，X1及X2为氢原子，R3为被相同或不同的13个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基。

27、。003712如上述111中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X3不存在，或者为甲基。003813一种组合物，含有上述112中任一项所述的阳离子性脂质及核酸。003914如上述13所述的组合物，其中，阳离子性脂质与该核酸形成复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体。004015如上述13所述的组合物，其中，阳离子性脂质形成与该核酸的复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体，所述组合物含有所述复合体及封入了所述复合体的脂质膜。004116如上述1315中任一项所述的组合物，其中，核酸为具有利用了RNA干扰RNAI的靶基因表。

28、达抑制作用的核酸。004217如上述16所述的组合物，其中，靶基因为与肿瘤或者炎症相关的基因。004318一种使用上述1417中任一项所述的组合物将该核酸导入细胞内的方法。004419如上述18所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肿瘤或者炎症部位的细胞。004520如上述18或者19所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肝脏、肺、肾脏或者脾脏中的细胞。004621如上述19或者20所述的方法，其中，向细胞内导入的方法是通过静脉内给予向细胞内导入的方法。004722一种癌或者炎症疾病的治疗方法，将上述17所述的组合物给予至哺乳动物。004823如上述22所述的方法，其中，给予方法是静脉内给予。004924。

29、一种药物，含有上述16所述的组合物，用于治疗疾病。005025如上述24所述的药物，其中，给予方法是静脉内给予。005126一种癌或者炎症疾病的治疗剂，含有上述17所述的组合物，用于治疗癌或者炎症疾病。005227如上述26所述的癌或者炎症疾病的治疗剂，其中，给予方法是静脉内给予。0053通过将含有本发明的新型阳离子性脂质及核酸的组合物给予至哺乳类等，能够将该核酸容易地导入例如细胞内等。说明书CN104066712A5/89页9附图说明0054图1表示将实施例118得到的制剂使用了化合物110的制剂导入来自人肝癌的细胞株HEPG2细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。纵轴表示将阴性对照作为1时。

30、的靶基因的MRNA的表达率，横轴表示核酸浓度NM、使用的阳离子性脂质的的化合物编号。0055图2表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物1120的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0056图3表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物2130的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0057图4表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物3137的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0058图5表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物3848的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0059图6表示与图1同样地将实施例。

31、118得到的制剂使用了化合物4958的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0060图7表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物5968的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0061图8表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物6979的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0062图9表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物8090的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0063图10表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物91100的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0064图11表示与图1同样地将。

32、实施例118得到的制剂使用了化合物101110的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0065图12表示与图1同样地将实施例118得到的制剂使用了化合物111115的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。0066图13表示与图1同样地将比较例18得到的制剂导入细胞内后的、靶基因的MRNA的表达率。具体实施方式0067本发明的阳离子性脂质用式I表示，0068说明书CN104066712A6/89页100069式中，R1及R2相同或不同，为碳原子数1224的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基，或者R1及R2连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基。

33、，0070X1及X2为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，0071X3不存在，或者为碳原子数16的烷基或者碳原子数36的链烯基，0072X3不存在时，0073Y也不存在，A及B为0，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2为O，或者0074Y也不存在，A及B相同或不同，为03，并且A和B不同时为0，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基。

34、、碳原子数36的链烯基、吡咯烷3基、哌啶3基、哌啶4基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，或者0075Y也不存在，A及B相同或不同，为03，L3为单键，R3为氢原子，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，或者0076Y也不存在，A及B相同或不同，为03，L3为CO或者COO，R3为吡咯烷2基、吡咯烷3基、哌啶2基、哌啶3基、哌啶4基、吗啉2基、吗啉3基或者被相同或不同的13个氨基。

35、、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO，0077X3为碳原子数16的烷基或者碳原子数36的链烯基时，0078Y为制药上能够允许的阴离子，A及B相同或不同，为03，L3为单键，R3为碳原子数16的烷基、碳原子数36的链烯基、吡咯烷2基、吡咯烷3基、哌啶2基、哌啶3基、哌啶4基、吗啉2基、吗啉3基或者被相同或不同的13个氨基、单烷基氨。

36、基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基或碳原子数36的链烯基，L1及L2相同或不同，为O、COO或者OCO。0079以下，有时也将式I表示的化合物称为化合物I。其他式子编号的化合物也同样。0080在式I的各基团的定义中，作为碳原子数1224的直链状或支链状的烷基，例如可以举出十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14三甲基十五烷2基、十九烷基、2,6,10,14四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11。

37、,15四甲基十六烷基、二十一烷说明书CN104066712A107/89页11基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等。0081作为碳原子数1224的直链状或支链状的链烯基，为具有13个双键的碳原子数1224的直链状或支链状的链烯基即可，例如可以举出Z十三烷8烯基、Z十四烷9烯基、Z十五烷8烯基、Z十六烷9烯基、Z十七烷5烯基、Z十八烷6烯基、Z十七烷8烯基、Z十八烷9烯基、E十七烷8烯基、E十八烷9烯基、Z十七烷10烯基、Z十八烷11烯基、8Z,11Z十七烷8,11二烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基、8Z,11Z,14Z十八烷8,11,14三烯基、9Z,12Z,15Z十八烷9,12,1。

38、5三烯基、Z十九烷10烯基、Z二十烷11烯基、10Z,13Z十九烷10,13二烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基、2,6,10三甲基十一烷1,5,9三烯基、3,7,11三甲基十二烷2,6,10三烯基、2,6,10,14四甲基十五烷1烯基、3,7,11,15四甲基十六烷2烯基，优选举出Z十五烷8烯基、Z十六烷9烯基、Z十七烷5烯基、Z十八烷6烯基、Z十七烷8烯基、Z十八烷9烯基、8Z,11Z十七烷8,11二烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基等。0082作为碳原子数1224的直链状或支链状的炔基，为具有13个三键的碳原子数1224的直链状或支链状的炔基即可，例如可以举出十二烷11炔基、。

39、十三烷12炔基、十五烷6炔基、十六烷基7炔基、十五烷4,6二炔基、十六烷5,7二炔基、十七烷8炔基、十八烷9炔基等。0083需要说明的是，在式I中，R1及R2较优选为相同的、碳原子数1224的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基。另外，在R1及R2相同或不同的任一情况下均较优选为碳原子数1224的直链状或支链状的烷基或链烯基，更优选为碳原子数1224的直链状的链烯基。0084作为亚烷基，可以举出例如亚甲基、亚乙基、亚丙基等。0085作为碳原子数16的烷基，可以举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、环丙基甲基、戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、叔戊基、环戊基。

40、、己基、环己基等，优选举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、己基等，更优选举出甲基、乙基、丙基等。0086作为碳原子数36的链烯基，可以举出例如烯丙基、1丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等，优选举出烯丙基等。0087作为被取代的碳原子数16的烷基中的烷基部分及被取代的碳原子数36的链烯基中的链烯基部分，分别与上述碳原子数16的烷基及碳原子数36的链烯基同义。0088二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基中的烷基、链烯基及炔基部分，分别与上述碳原子数1224的直链状或支链状的烷基、碳原子数1224的直链状或支链状的链。

41、烯基及碳原子数1224的直链状或支链状的炔基同义。需要说明的是，更优选地，二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基及二炔基亚甲基中的烷基、链烯基及炔基部分分别相同。0089在本发明中，作为制药上能允许的阴离子，可以举出例如氯化物离子、溴化物离子、硝酸离子、硫酸离子、磷酸离子等无机离子，乙酸离子、草酸离子、马来酸离子、富马酸离说明书CN104066712A118/89页12子、柠檬酸离子、苯甲酸离子、甲磺酸离子等有机酸离子等。0090在本发明中，吡咯烷2基、吡咯烷3基、哌啶2基、哌啶3基、哌啶4基、吗啉2基及吗啉3基分别包括环中的氮原子上键合的氢原子被替换为甲基或者乙基的基团。0091作为单烷基氨基及二烷基。

42、氨基，为分别被1个及相同或不同的2个下述基团取代的氨基即可，所述基团是碳原子数16的烷基与上述同义或者被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基与上述同义，作为单烷基氨基及二烷基氨基，可以举出例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、乙基甲基氨基、甲基丙基氨基、丁基甲基氨基、甲基戊基氨基、己基甲基氨基、氨基乙基氨基、氨基丙基氨基、氨基乙基甲基氨基、二氨基乙基氨基等，优选举出甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氨基丙基氨基、二氨基乙基氨基等。0092本发明中，氨基、单烷基氨基及二烷基氨。

43、基分别可以在氮原子上的孤对电子上配位氢离子，形成铵基、单烷基铵基及二烷基铵基，氨基、单烷基氨基及二烷基氨基分别包括铵基、单烷基铵基及二烷基铵基。0093作为三烷基铵基，为被相同或不同的3个下述基团取代的铵基即可，所述基团是碳原子数16的烷基与上述同义或者是被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基与上述同义，作为三烷基铵基可以举出例如三甲基铵基、乙基二甲基铵基、二乙基甲基铵基、三乙基铵基、三丙基铵基、三丁基铵基、三戊基铵基、三己基铵基、三氨基乙基铵基、氨基乙基二甲基铵基、二氨基乙基甲基铵基等，优选举出三甲基铵基、三乙基铵基、三氨基乙基铵。

44、基、氨基乙基二甲基铵基、二氨基乙基甲基铵基等。0094本发明中，在氨基、单烷基氨基及二烷基氨基的氮原子上的孤对电子上配位氢离子的铵基、单烷基铵基及二烷基铵基、以及三烷基铵基，也可以与制药上可以允许的阴离子与上述同义形成盐。0095作为烷氧基，为被下述基团取代的羟基即可，所述基团是碳原子数16的烷基与上述同义或者是被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基与上述同义，作为烷氧基可以举出例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、氨基乙氧基、甲基氨基乙氧基等，优选举出甲氧基、乙氧基、氨基乙氧基、甲基氨基乙氧基等。0096作为单烷基氨。

45、基甲酰基及二烷基氨基甲酰基，为分别被1个及相同或不同的2个下述基团取代的氨基甲酰基即可，所述基团是碳原子数16的烷基与上述同义或者是被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数16的烷基与上述同义，作为单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基可以举出例如甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲酰基、丁基氨基甲酰基、戊基氨基甲酰基、己基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、乙基甲基氨基甲酰基、甲基丙基氨基甲酰基、丁基甲基氨基甲酰基、甲基戊基氨基甲酰基、己基甲基氨基甲酰基、氨基乙基氨基甲酰基、氨基丙基氨基甲酰基、氨基乙基甲基氨基甲酰基、二氨基乙基。

46、氨基甲酰基等，优选举出甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基等。说明书CN104066712A129/89页130097另外，L1及L2较优选为相同的O、COO或者OCO。0098另外，L1及L2的至少一个为O时，键合于O的R1及R2相同或不同，优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、Z十四烷9烯基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、E十八烷9烯基、Z十八烷11烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基、9Z,12Z,15Z十八烷9,12,15三烯基、Z二十烷11烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基、3,7,11三甲基十二烷2,。

47、6,10三烯基、3,7,11,15四甲基十六烷2烯基，或者R1及R2连接在一起，形成二烷基亚甲基或二链烯基亚甲基，更优选地，R1及R2为十四烷基、十六烷基、十八烷基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基，或者R1及R2连接在一起形成二十四烷基亚甲基、二十六烷基亚甲基、二十八烷基亚甲基、二Z十六烷9烯基亚甲基、二Z十八烷6烯基亚甲基、二Z十八烷9烯基亚甲基、二9Z,12Z十八烷9,12二烯基亚甲基。最优选地，R1及R2相同或不同、为十四烷基、十六烷基、十八烷基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基。需要说明的。

48、是，在任一种情况下，更优选地，R1及R2相同，或者R1及R2连接在一起，形成烷基、链烯基或炔基部分相同的二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基或二炔基亚甲基。0099另外，L1及L2中的至少1个为OCO时，键合于OCO上的R1及R2相同或不同，较优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、Z十四烷9烯基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、E十八烷9烯基、Z十八烷11烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基、9Z,12Z,15Z十八烷9,12,15三烯基、Z二十烷11烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基、3,7,11三甲基十二烷基2,6,10三烯基、3。

49、,7,11,15四甲基十六烷2烯基，更优选为十四烷基、十六烷基、十八烷基、Z十六烷9烯基、Z十八烷6烯基、Z十八烷9烯基、9Z,12Z十八烷9,12二烯基。需要说明的是，在任一种情况下，更优选地，R1及R2相同。0100另外，L1及L2的至少1个为COO时，键合于COO上的R1及R2相同或不同，较优选为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、Z十三烷8烯基、Z十五烷8烯基、Z十七烷5烯基、Z十七烷8烯基、E十七烷8烯基、Z十七烷10烯基、8Z,11Z十七烷8,11二烯基、8Z,11Z,14Z十八烷8,11,14三烯基、Z十九烷10烯基、10Z,13Z十九烷10,13二烯基、11Z,14Z二十烷11,14二烯基、2,6,10三甲基十一烷1,5,9三烯基、2,6,10,14四甲基十五烷1烯基，或者R1及R2连接在一起，形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，更优选地，R1及R2相同或不同、。

摘要
申请专利号：	CN201280065699.9	申请日：	2012.11.02
公开号：	CN104066712A	公开日：	2014.09.24
当前法律状态：	实审	有效性：	审中
法律详情：	实质审查的生效IPC(主分类):C07C 217/08申请日:20121102\|\|\|公开
IPC分类号：	C07C217/08; A61K31/231; A61K31/24; A61K31/40; A61P29/00; A61P35/00; C07C219/08; C07C237/06; C07C271/20; C07D207/08; C07D207/12; C07D491/056; C12N15/09	主分类号：	C07C217/08
申请人：	协和发酵麒麟株式会社
发明人：	洼山刚之; 江良公宏; 直井智幸; 八木信宏
地址：	日本东京都
优先权：	2011.11.02 US 61/554,622; 2012.07.12 US 61/670,840; 2012.07.13 US 61/671,341
专利代理机构：	北京市金杜律师事务所 11256	代理人：	杨宏军;王大方
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内容摘要

本发明提供一种使得能容易地将核酸导入细胞内的阳离子性脂质、含有该阳离子性脂质及核酸的组合物、使用含有该阳离子性脂质及核酸的组合物将核酸导入细胞内的方法等，所述阳离子性脂质由式(I)表示，式中，R1及R2相同或不同，为链烯基等，X1及X2为氢原子、或者连接在一起形成单键或亚烷基，X3不存在或者为烷基等，Y不存在或者为阴离子，a及b相同或不同，为0～3，L3为单键等，R3为烷基等，L1及L2为-O-、-CO-O-或者-O-CO-。

权利要求书

1.  式(I)表示的阳离子性脂质，

式中，R¹及R²相同或不同，为碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基，或者R¹及R²连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，
X¹及X²为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，
X³不存在，或者为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基，
X³不存在时，
Y也不存在，a及b为0，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²为-O-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同为0～3，并且a和b不同时为0，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同为0～3，L³为单键，R³为氢原子， L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，L³为-CO-或者-CO-O-，R³为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，
X³为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基时，
Y为制药上能允许的阴离子，a及b相同或不同，为0～3，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-。

2.  如权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，L¹及L²为-O-或者-O-CO-，R¹及R²为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四烷-9-烯基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(E)-十八烷-9-烯基、(Z)-十八烷-11-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八烷-9,12,15-三烯基、(Z)-二十烷-11-烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯基或3,7,11,15-四甲基十六烷-2-烯基。

3.  如权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，L¹及L²为-CO-O-，R¹及R²为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三烷-8-烯基、(Z)-十五烷-8-烯基、(Z)-十七烷-5-烯基、(Z)-十七烷-8-烯基、(E)-十七烷-8-烯基、(Z)-十七烷-10-烯基、 (8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八烷-8,11,14-三烯基、(Z)-十九烷-10-烯基、(10Z,13Z)-十九烷-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一烷-1,5,9-三烯基或2,6,10,14-四甲基十五烷-1-烯基。

4.  如权利要求1～3中任一项所述的阳离子性脂质，其中，a及b同时为0或者1。

5.  如权利要求1、2及4中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L³为单键，R³为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²为-O-。

6.  如权利要求1～4中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L³为-CO-或者-CO-O-，R³为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L¹及L²为相同的-CO-O-或者-O-CO-。

7.  如权利要求1～6中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²连接在一起，形成单键或亚烷基。

8.  如权利要求1～5中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²连接在一起形成单键或亚烷基，R³为氢原子、甲基或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。

9.  如权利要求1～5中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²为氢原子，R³为氢原子、甲基或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。

10.  如权利要求6所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²连接在一起形成单键或亚烷基，R³为被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。

11.  如权利要求6所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²为氢原子，R³为被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。

12.  如权利要求1～11中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X³不存在，或者为甲基。

13.  一种组合物，含有权利要求1～12中任一项所述的阳离子性脂质及核酸。

14.  如权利要求13所述的组合物，其中，阳离子性脂质与该核酸形成复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体。

15.  如权利要求13所述的组合物，其中，阳离子性脂质形成与该核酸的复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体，所述组合物含有所述复合体及封入了所述复合体的脂质膜。

16.  如权利要求13～15中任一项所述的组合物，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的靶基因的表达抑制作用的核酸。

17.  如权利要求16所述的组合物，其中，靶基因为与肿瘤或者炎症相关的基因。

18.  一种使用权利要求14～17中任一项所述的组合物将所述核酸导入细胞内的方法。

19.  如权利要求18所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肿瘤或者炎症部位中的细胞。

20.  如权利要求18或者19所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肝脏、肺、肾脏或者脾脏中的细胞。

21.  如权利要求19或者20所述的方法，其中，向细胞内导入的方法是通过静脉内给予向细胞内导入的方法。

22.  一种癌或者炎症疾病的治疗方法，将权利要求17所述的组合物给予至哺乳动物。

23.  如权利要求22所述的方法，其中，给与方法是静脉内给予。

24.  一种药物，含有权利要求16所述的组合物，用于治疗疾病。

25.  如权利要求24所述的药物，其中，给予方法是静脉内给予。

26.  一种癌或者炎症疾病的治疗剂，含有权利要求17所述的组合物，用于治疗癌或者炎症疾病。

27.  如权利要求26所述的癌或者炎症疾病的治疗剂，其中，给予方法是静脉内给予。

说明书

阳离子性脂质
技术领域
本发明涉及使得能容易地将核酸导入例如细胞内等的新型阳离子性脂质及含有该阳离子性脂质的新型组合物等。
背景技术
所谓阳离子性脂质，为下述两亲性分子，具有含有一个或者多个烃基的脂质亲和性区域、和含有至少带一个正电的极性头基(headgroup)的亲水性区域。阳离子性脂质与核酸等巨大分子通过形成以总电荷计带正电的复合体，使得核酸等巨大分子容易通过细胞的原生质膜进入细胞质，因此阳离子性脂质是有用的。能够在体外及体内进行的该过程作为转染被人们知晓。
典型地，阳离子性脂质单独使用或者与磷脂等中性脂质组合。已知阳离子性脂质与中性脂质组合，能够容易地形成含有整齐排列的脂双层膜的小泡，因此这样的组合是有用的。阳离子性脂质单独或者与中性脂质组合形成的小泡、或者脂质体在表面具有多个正电荷，通过该电荷，能够与多核苷酸或者带负电的蛋白质等其他阴离子性分子形成复合体。通过多核苷酸/阳离子性脂质/中性脂质复合体的表面上残留的总阳离子电荷，能够与细胞膜表面的主要的负电荷引起很强的相互反应。
大量的不同种类的阳离子性脂质为了用于转染而被合成，目前已有市售。上述阳离子性脂质包括例如Lipofectin、Lipofectin ACE、Lipofect AMINE、Transfeactam、DOTAP等。
专利文献1中公开的、N-[1-(2,3-二油基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)等为当初开发的阳离子性脂质之一。DOTMA等的特征在于，向分子赋予阳离子部位的、具有季氮的丙铵基 (propanaminium group)及与分子的丙基骨架形成醚键的一对高级烃。季氮被甲基等链比较短的烷基链三取代。结构上类似的阳离子性脂质、N-(2,3-二-(9-(Z)-十八碳烯酰基氧基))-丙烷-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTAP)不含形成了醚键的烷基，而含有酰基。
专利文献2及3中公开的、例如N-[1-(2,3-二油基氧基丙基)]-N,N-二甲基-N-羟基乙基溴化铵(DORIE)、2,3-二油基氧基-N-[2-(精胺羧基酰胺)乙基]-N,N-二甲基-1-丙铵基三氟乙酸(DOSPA)等的特征在于，向分子赋予阳离子部位的、具有季氮的丙铵基及与分子的丙基骨架形成醚键的一对高级烃，并且特征在于，季氮被甲基等链比较短的烷基链和羟基烷基三取代。
专利文献4中公开了例如1,2-二亚油基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DLinDMA)等。DLinDMA等的特征在于，出于开发更柔软的阳离子性脂质、并且由此提高脂质体等的膜流动性的目的，使结构上类似的阳离子性脂质即DOTAP及DOTMA的高级烷基为至少具有2处不饱和部位的高级烷基。另外，专利文献5中公开了例如2,2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1,3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)等。
专利文献1：日本特开昭61-161246号公报(美国专利5049386号说明书)
专利文献2：国际公开第91/16024号小册子
专利文献3：国际公开第97/019675号小册子
专利文献4：国际公开第2005/121348号小册子
专利文献5：国际公开第2009/086558号小册子
发明内容
本发明的目的在于提供一种将核酸容易地导入例如细胞内等的新型阳离子性脂质及含有该阳离子性脂质的新型组合物等。
本发明涉及以下(1)～(27)。
(1)式(I)表示的阳离子性脂质

(式中，R¹及R²相同或不同，为碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基，或者R¹及R²连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，
X¹及X²为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，
X³不存在，或者为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基，
X³不存在时，
Y也不存在，a及b为0，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²为-O-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，并且a和b不同时为0，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，L³为单键，R³为氢原子，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同为0～3，L³为-CO-或者-CO-O-，R³为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，
X³为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基时，
Y为制药上能允许的阴离子，a及b相同或不同，为0～3，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-)。
(2)如上述(1)的阳离子性脂质，其中，L¹及L²为-O-或者-O-CO-，R¹及R²为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四烷-9-烯基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(E)-十八烷-9-烯基、(Z)-十八烷-11-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八烷-9,12,15-三烯基、(Z)-二十烷-11-烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯基或者3,7,11,15-四甲基十六烷-2-烯基。
(3)如上述(1)所述的阳离子性脂质，其中，L¹及L²为-CO-O-，R¹及R²为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三烷-8-烯基、(Z)-十五烷-8-烯基、(Z)-十七烷-5-烯基、(Z)-十七烷-8-烯基、(E)-十七烷-8-烯基、(Z)-十七烷-10-烯基、(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八烷-8,11,14-三烯基、(Z)-十九烷-10-烯基、(10Z,13Z)-十九烷-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一烷-1,5,9-三烯基或者2,6,10,14-四甲基十五烷-1-烯基。
(4)如上述(1)～(3)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，a及b同时为0或者1。
(5)如上述(1)、(2)及(4)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L³为单键，R³为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²为-O-。
(6)如上述(1)～(4)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，L³为-CO-或者-CO-O-，R³为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L¹及L²为相同的-CO-O-或者-O-CO-。
(7)如上述(1)～(6)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²连接在一起，形成单键或亚烷基。
(8)如上述(1)～(5)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²连接在一起形成单键或亚烷基，R³为氢原子、甲基或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。
(9)如上述(1)～(5)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²为氢原子，R³为氢原子、甲基或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。
(10)如上述(6)所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²连接在一起形成单键或亚烷基，R³为被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。
(11)如上述(6)所述的阳离子性脂质，其中，X¹及X²为氢原子，R³为被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。
(12)如上述(1)～(11)中任一项所述的阳离子性脂质，其中，X³不存在，或者为甲基。
(13)一种组合物，含有上述(1)～(12)中任一项所述的阳离子性脂质及核酸。
(14)如上述(13)所述的组合物，其中，阳离子性脂质与该核酸形成复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体。
(15)如上述(13)所述的组合物，其中，阳离子性脂质形成与该核酸的复合体，或者阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合得到的产物与该核酸形成复合体，所述组合物含有所述复合体及封入了所述复合体的脂质膜。
(16)如上述(13)～(15)中任一项所述的组合物，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的靶基因表达抑制作用的核酸。
(17)如上述(16)所述的组合物，其中，靶基因为与肿瘤或者炎症相关的基因。
(18)一种使用上述(14)～(17)中任一项所述的组合物将该核酸导入细胞内的方法。
(19)如上述(18)所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肿瘤或者炎症部位的细胞。
(20)如上述(18)或者(19)所述的方法，其中，细胞为哺乳类的肝脏、肺、肾脏或者脾脏中的细胞。
(21)如上述(19)或者(20)所述的方法，其中，向细胞内导入的方法是通过静脉内给予向细胞内导入的方法。
(22)一种癌或者炎症疾病的治疗方法，将上述(17)所述的组合物给予至哺乳动物。
(23)如上述(22)所述的方法，其中，给予方法是静脉内给予。
(24)一种药物，含有上述(16)所述的组合物，用于治疗疾病。
(25)如上述(24)所述的药物，其中，给予方法是静脉内给予。
(26)一种癌或者炎症疾病的治疗剂，含有上述(17)所述的组合物，用于治疗癌或者炎症疾病。
(27)如上述(26)所述的癌或者炎症疾病的治疗剂，其中，给予方法是静脉内给予。
通过将含有本发明的新型阳离子性脂质及核酸的组合物给予至哺乳类等，能够将该核酸容易地导入例如细胞内等。
附图说明
[图1]表示将实施例118得到的制剂(使用了化合物1～10的制剂)导入来自人肝癌的细胞株HepG2细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。纵轴表示将阴性对照作为1时的靶基因的mRNA的表达率，横轴表示核酸浓度(nM)、使用的阳离子性脂质的的化合物编号。
[图2]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物11～20的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图3]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物21～30的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图4]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物31～37的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图5]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物38～48的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图6]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物49～58的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图7]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物59～68的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图8]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物69～79的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图9]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物80～90的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图10]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物91～100的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图11]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物101～110的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图12]表示与图1同样地将实施例118得到的制剂(使用了化合物111～115的制剂)导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
[图13]表示与图1同样地将比较例1～8得到的制剂导入细胞内后的、靶基因的mRNA的表达率。
具体实施方式
本发明的阳离子性脂质用式(I)表示，

(式中，R¹及R²相同或不同，为碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基，或者R¹及R²连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，
X¹及X²为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，
X³不存在，或者为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基，
X³不存在时，
Y也不存在，a及b为0，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数 3～6的链烯基，L¹及L²为-O-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，并且a和b不同时为0，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，L³为单键，R³为氢原子，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，或者
Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，L³为-CO-或者-CO-O-，R³为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-，
X³为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基时，
Y为制药上能够允许的阴离子，a及b相同或不同，为0～3，L³为单键，R³为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L¹及L²相同或不同，为-O-、-CO-O-或者-O-CO-)。
以下，有时也将式(I)表示的化合物称为化合物(I)。其他式子编号的化合物也同样。
在式(I)的各基团的定义中，作为碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基，例如可以举出十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等。
作为碳原子数12～24的直链状或支链状的链烯基，为具有1～3个双键的碳原子数12～24的直链状或支链状的链烯基即可，例如可以举出(Z)-十三烷-8-烯基、(Z)-十四烷-9-烯基、(Z)-十五烷-8-烯基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十七烷-5-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十七烷-8-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(E)-十七烷-8-烯基、(E)-十八烷-9-烯基、(Z)-十七烷-10-烯基、(Z)-十八烷-11-烯基、(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八烷-8,11,14-三烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八烷-9,12,15-三烯基、(Z)-十九烷-10-烯基、(Z)-二十烷-11-烯基、(10Z,13Z)-十九烷-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一烷-1,5,9-三烯基、3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五烷-1-烯基、3,7,11,15-四甲基十六烷-2-烯基，优选举出(Z)-十五烷-8-烯基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十七烷-5-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十七烷-8-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基等。
作为碳原子数12～24的直链状或支链状的炔基，为具有1～3个三键的碳原子数12～24的直链状或支链状的炔基即可，例如可以举出十二烷-11-炔基、十三烷-12-炔基、十五烷-6-炔基、十六烷基-7-炔基、十五烷-4,6-二炔基、十六烷-5,7-二炔基、十七烷-8-炔基、十八烷-9-炔基等。
需要说明的是，在式(I)中，R¹及R²较优选为相同的、碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基。另外，在R¹及R²相同或不同的任一情况下均较优选为碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基或链烯基，更优选为碳原子数12～24的直链状的链烯基。
作为亚烷基，可以举出例如亚甲基、亚乙基、亚丙基等。
作为碳原子数1～6的烷基，可以举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、环丙基甲基、戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、叔戊基、环戊基、己基、环己基等，优选举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、己基等，更优选举出甲基、乙基、丙基等。
作为碳原子数3～6的链烯基，可以举出例如烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等，优选举出烯丙基等。
作为被取代的碳原子数1～6的烷基中的烷基部分及被取代的碳原子数3～6的链烯基中的链烯基部分，分别与上述碳原子数1～6的烷基及碳原子数3～6的链烯基同义。
二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基中的烷基、链烯基及炔基部分，分别与上述碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、碳原子数12～24的直链状或支链状的链烯基及碳原子数12～24的直链状或支链状的炔基同义。需要说明的是，更优选地，二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基及二炔基亚甲基中的烷基、链烯基及炔基部分分别相同。
在本发明中，作为制药上能允许的阴离子，可以举出例如氯化物离子、溴化物离子、硝酸离子、硫酸离子、磷酸离子等无机离子，乙酸离子、草酸离子、马来酸离子、富马酸离子、柠檬酸离子、苯甲酸离子、甲磺酸离子等有机酸离子等。
在本发明中，吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基及吗啉-3-基分别包括环中的氮原子上键合的氢原子被替换为甲基或者乙基的基团。
作为单烷基氨基及二烷基氨基，为分别被1个及相同或不同的2个下述基团取代的氨基即可，所述基团是碳原子数1～6的烷基(与上述同义)或者被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基(与上述同义)，作为单烷基氨基及二烷基氨基，可以举出例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、乙基甲基氨基、甲基丙基氨基、丁基甲基氨基、甲基戊基氨基、己基甲基氨基、氨基乙基氨基、氨基丙基氨基、(氨基乙基)甲基氨基、二(氨基乙基)氨基等，优选举出甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氨基丙基氨基、二(氨基乙基)氨基等。
本发明中，氨基、单烷基氨基及二烷基氨基分别可以在氮原子上的孤对电子上配位氢离子，形成铵基、单烷基铵基及二烷基铵基，氨基、单烷基氨基及二烷基氨基分别包括铵基、单烷基铵基及二烷基铵基。
作为三烷基铵基，为被相同或不同的3个下述基团取代的铵基即可，所述基团是碳原子数1～6的烷基(与上述同义)或者是被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基(与上述同义)，作为三烷基铵基可以举出例如三甲基铵基、乙基二甲基铵基、二乙基甲基铵基、三乙基铵基、三丙基铵基、三丁基铵基、三戊基铵基、三己基铵基、三(氨基乙基)铵基、(氨基乙基)二甲基铵基、二(氨基乙基)甲基铵基等，优选举出三甲基铵基、三乙基铵基、三(氨基乙基)铵基、(氨基乙基)二甲基铵基、二(氨基乙基)甲基铵基等。
本发明中，在氨基、单烷基氨基及二烷基氨基的氮原子上的孤对电子上配位氢离子的铵基、单烷基铵基及二烷基铵基、以及三烷基铵基，也可以与制药上可以允许的阴离子(与上述同义)形成盐。
作为烷氧基，为被下述基团取代的羟基即可，所述基团是碳原子数1～6的烷基(与上述同义)或者是被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基(与上述同义)，作为烷氧基可以举出例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、氨基乙氧基、甲基氨基乙氧基等，优选举出甲氧基、乙氧基、氨基乙氧基、甲基氨基乙氧基等。
作为单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基，为分别被1个及相同或不同的2个下述基团取代的氨基甲酰基即可，所述基团是碳原子数1～6的烷基(与上述同义)或者是被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基(与上述同义)，作为单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基可以举出例如甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲酰基、丁基氨基甲酰基、戊基氨基甲酰基、己基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、乙基甲基氨基甲酰基、甲基丙基氨基甲酰基、丁基甲基氨基甲酰基、甲基戊基氨基甲酰基、己基甲基氨基甲酰基、氨基乙基氨基甲酰基、氨基丙基氨基甲酰基、(氨基乙基)甲基氨基甲酰基、二(氨基乙基)氨基甲酰基等，优选举出甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基等。
另外，L¹及L²较优选为相同的-O-、-CO-O-或者-O-CO-。
另外，L¹及L²的至少一个为-O-时，键合于-O-的R¹及R²相同或不同，优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四烷-9-烯基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(E)-十八烷-9-烯基、(Z)-十八烷-11-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八烷-9,12,15-三烯基、(Z)-二十烷-11-烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六烷-2-烯基，或者R¹及R²连接在一起，形成二烷基亚甲基或二链烯基亚甲基，更优选地，R¹及R²为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基，或者R¹及R²连接在一起形成二(十四烷基)亚甲基、二(十六烷基)亚甲基、二(十八烷基)亚甲基、二((Z)-十六烷-9-烯基)亚甲基、二((Z)-十八烷-6-烯基)亚甲基、二((Z)-十八烷-9-烯基)亚甲基、二((9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基)亚甲基。最优选地，R¹及R²相同或不同、为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基。需要说明的是，在任一种情况下，更优选地，R¹及R²相同，或者R¹及R²连接在一起，形成烷基、链烯基或炔基部分相同的二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基或二炔基亚甲基。
另外，L¹及L²中的至少1个为O-CO-时，键合于-O-CO-上的R¹及R²相同或不同，较优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四烷-9-烯基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(E)-十八烷-9-烯基、(Z)-十八烷-11-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八烷-9,12,15-三烯基、(Z)-二十烷-11-烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二烷基-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六烷-2-烯基，更优选为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六烷-9-烯基、(Z)-十八烷-6-烯基、(Z)-十八烷-9-烯基、(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基。需要说明的是，在任一种情况下，更优选地，R¹及R²相同。
另外，L¹及L²的至少1个为-CO-O-时，键合于-CO-O-上的R¹及R²相同或不同，较优选为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三烷-8-烯基、(Z)-十五烷-8-烯基、(Z)-十七烷-5-烯基、(Z)-十七烷-8-烯基、(E)-十七烷-8-烯基、(Z)-十七烷-10-烯基、(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八烷-8,11,14-三烯基、(Z)-十九烷-10-烯基、(10Z,13Z)-十九烷-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十烷-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一烷-1,5,9-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五烷-1-烯基，或者R¹及R²连接在一起，形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，更优选地，R¹及R²相同或不同、为十三烷基、十五烷基、十七烷基、(Z)-十五烷-8-烯基、(Z)-十七烷-5-烯基、(Z)-十七烷-8-烯基、(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基。需要说明的是，在任一种情况下，更优选地，R¹及R²相同，或者R¹及R²连接在一起，形成烷基、链烯基或炔基部分相同的二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基或二炔基亚甲基。
另外，较优选a及b同时为0或者1。
需要说明的是，a及b同时为1时，较优选X¹及X²连接在一起，形成单键或亚烷基。另外，a及b同时为1、L³为单键时L¹及L²为-CO-O-也是本发明的一个较优选方案。
另外，较优选X¹及X²连接在一起，形成单键或亚烷基。需要说明的是，X¹及X²连接在一起，形成单键或亚烷基时，R³较优选氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，更优选氢原子、甲基或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，最优选氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-氨基甲酰基乙基等。
另外，X¹及X²连接在一起形成单键时，L³为-CO-或者-CO-O-、优选为-CO-的情况，也是本发明的较优选方案之一。在这种情况下，R³更优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基等，最优选为1,2-二氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基。
另外，X¹及X²连接在一起形成单键时，a及b相同或不同、为1～3、优选为1的情况，也是本发明的较优选方案之一。在这种情况下，L¹及L²为相同的-CO-O-或者-O-CO-、优选为-CO-O-、R³为甲基的情况，也是本发明的更优选方案之一，在这种情况下，R¹及R²相同或不同，较优选为(Z)-十七烷-8-烯基或者(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基，最优选相同为(Z)-十七烷-8-烯基或者(8Z,11Z)-十七烷-8,11-二烯基。
另外，X¹及X²连接在一起形成单键时，X³为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基、优选为甲基的情况，也是本发明的较优选方案之一，在这种情况下，更优选L¹及L²为相同的-CO-O-或者-O-CO-，最优选为-CO-O-。
需要说明的是，X¹及X²为氢原子时，R³较优选氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，更优选氢原子、甲基或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，最优选氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1-氨基-2-羟基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-氨基甲酰基乙基等。
另外，较优选L³为单键。需要说明的是，L³为单键时，较优选L¹及L²为-O-。
另外，L³为单键时，R³较优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，更优选氢原子、甲基、羟基甲基、2-羟基乙基、2,3-二羟基丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-羟基-3-甲氧基丙基、氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、2-氨基甲酰基乙基、2-二甲基氨基甲酰基乙基、1-甲基哌啶-4-基等，最优选氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-氨基甲酰基乙基等，在任一种情况下，L¹及L²较优选为-O-。
需要说明的是，当X³不存在、Y也不存在、L³为单键、R³为氢原子的情况下，L¹及L²为相同的-CO-O-或者-O-CO-、优选为-CO-O- 的情况，也是本发明的较优选方案之一。在这种情况下，R¹及R²相同或不同，较优选为(Z)-十七烷-5-烯基或者(Z)-十七烷-8-烯基，最优选相同为(Z)-十七烷-5-烯基或者(Z)-十七烷-8-烯基。
需要说明的是，L³为-CO-或者-CO-O-时，L¹及L²较优选为相同的-CO-O-或者-O-CO-，更优选为-CO-O-。
另外，L³为-CO-或者-CO-O-时，R³为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个较优选为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，R³更优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、(N,N-二甲基氨基)甲基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、1-氨基-2-羟基乙基等，最优选为1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基等。
L³为-CO-或者-CO-O-时，R³为氨基甲基、1-羟基-2-氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、L¹及L²为相同的-O-的情况，也是本发明的更优选方案之一。在这种情况下，R¹及R²相同或不同，较优选为(Z)-十八烷-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基，最优选相同为(Z)-十八烷-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基。
另外，较优选X³不存在，或者为甲基。X³为甲基时，较优选R³为甲基，L¹及L²较优选为相同的-CO-O-或者-O-CO-，更优选为-CO-O-。
化合物(I)中，作为较优选的阳离子脂质之一，可以举出式(i)表示的化合物(i)。

(式中，R⁴及R⁵是R¹及R²中的、相同或不同的、碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基，
L⁴及L⁵为-CO-O-或者-O-CO-，优选为-CO-O-，
a及b分别与上述定义相同，
R⁶是R³中的、氢原子、碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基。)
接下来说明化合物(I)的制造法。需要说明的是，以下所示的制造法中，定义过的基团在该制造法的条件下将变化或者不适合实施该制造法时，可以通过使用有机合成化学中常用的保护基的导入及除去方法[例如Protective Groups in Organic Synthesis,third edition、T.W.Greene著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等中记载的方法]等，制造目标化合物。另外，根据需要还可以改变取代基导入等反应步骤的顺序。
制造法1
化合物(Ia)[化合物(I)中L¹及L²为-O-，L³为单键，X³及Y不存在]可以通过以下方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、X¹、X²、a及b分别与上述同义，Z表示氯原子、溴原子、碘原子、三氟甲磺酰氧基、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基、对甲苯磺酰氧基等离去基团)
步骤1及2
化合物(IIb)可以通过下述方法制造：将化合物(IIa)与化合物(IIIa)在溶剂中，在室温与150℃之间的温度下，在1～30当量的碱存在下，处理5分钟至100小时，进行分离。并且，化合物(Ia)可以通过下述方法制造：将化合物(IIb)与化合物(IIIb)在溶剂中，在室温与150℃之间的温度下，在1～30当量的碱存在下，处理5分钟至100小时，进行分离。
作为溶剂，可以举出例如甲苯、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等，它们可以单独或者混合使用。
作为碱，可以举出例如氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾等。
化合物(IIa)可以通过市售品或者已知的方法(例如“Chem.Pharm.Bull”,1991年,第39卷,p.2219、国际公开第2006/10036号小册子)或分别以它们为基准的方法或者参考例中记载的方法得到。
化合物(IIIa)及化合物(IIIb)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座13【有机化合物的合成I】，第5版，p.374，丸善(2005年))或基于其的方法得到。
R¹与R²相同的情况的化合物(Ia)可以通过在步骤1中，使用2当量以上的化合物(IIIa)而得到。
制造法2
化合物(Ib)[化合物(I)中，L¹及L²为-CO-O-，L³为单键，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤3及4
化合物(IIc)可以通过下述方法制造：将化合物(IIa)和化合物(IVa)在溶剂中，在-20℃与150℃之间的温度下，在1～30当量的缩合剂存在下，处理5分钟至100小时，进行分离。并且，化合物(Ib)可以通过下述方法制造：将化合物(IIc)与化合物(IVb)在溶剂中，在-20℃和150℃之间的温度下，在1～30当量的缩合剂存在下，处理5分钟至100小时，进行分离。步骤3及4中，还可以加入0.01～30当量的添加剂及/或1当量～非常过量的碱，促进反应。
作为溶剂，可以举出例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等，它们可以单独或者混合使用。
作为缩合剂，可以举出例如1,3-二环己基碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺·盐酸盐、羰基二咪唑、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐、碘化2-氯-1-甲基吡啶等。
作为添加剂，可以举出例如1-羟基苯并三唑、4-二甲基氨基吡啶等。
作为碱，可以举出例如乙酸钾、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、叔丁醇钾、三乙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯等。
化合物(IVa)及化合物(IVb)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座16【有机化合物的合成IV】，第5版，p.1，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
R¹和R²相同时的化合物(Ib)可以通过在步骤3中，使用2当量以上的化合物(IVa)得到。
制造法3
化合物(Ic)[化合物(I)中，L¹及L²为-O-CO-，L³为单键，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤5及6
化合物(IIe)可以通过下述方法制造：将化合物(IId)和化合物(Va)在溶剂中，在-20℃与150℃之间的温度下，在1～30当量的缩合剂存在下，处理5分钟至100小时，进行分离。并且，化合物(Ic)可以通过下述方法制造：将化合物(IIe)和化合物(Vb)在溶剂中，在-20℃与150℃之间的温度下，在1～30当量的缩合剂存在下，处理5分钟至100小时，进行分离。在步骤5及6中，还可以加入0.01～30当量的添加剂及/或1当量～非常过量的碱，促进反应。
作为溶剂、缩合剂、添加剂及碱，可以举出分别与制造法2相同的物质。
化合物(IId)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座16【有机化合物的合成IV】，第5版，p.1，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
化合物(Va)及化合物(Vb)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座14【有机化合物的合成II】，第5版，p.1，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
R¹与R²相同时的化合物(Ic)可以通过在步骤5中，使用2当量以上的化合物(Va)得到。
制造法4
化合物(Id)[化合物(I)中，L³为单键，R³为氢原子，X³及Y不存在]可以通过以下方法制造。

(式中，R¹、R²、L¹、L²、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤7
化合物(Id)可以通过下述方法制造：将化合物(VI)和氯甲酸1-氯乙基酯在惰性溶剂中，在-20℃与230℃之间的温度下，处理5分钟至100小时，接下来加入1～非常过量的醇，在-20℃与230℃之间的温度下，处理5分钟至100小时处理。
作为惰性溶剂，可以举出例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等，它们可以单独或者混合使用。
作为醇，可以举出例如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇等，它们可以单独或者混合使用。
化合物(VI)可以通过基于制造法1、制造法2或者制造法3的方法的方法得到。
制造法5
化合物(Ie)[化合物(I)中，L³为单键，R³为-CHR^AR^B(R^A及R^B相同或不同，为氢原子、碳原子数1～5的烷基、碳原子数3～5的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～5的烷基或碳原子数3～5的链烯基，或者与相邻的碳原子连接在一起，形成吡咯烷-3-基、哌啶-3-基或哌啶-4-基，除R^A及R^B均为氢原子的情况之外，R^A及R^B的烷基、被取代的烷基的烷基部分、链烯基及被取代的链烯基的链烯基部分的碳原子数的总和为1～5，R^A及R^B中的任一个为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基或者吗啉-3-基时，该R^A及R^B中的另一方为氢原子、碳原子数1～5的烷基、碳原子数3～5的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1个或2个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～5的烷基或碳原子数3～5的链烯基，R^A及R^B为被取代的烷基或者链烯基时，该取代基的总数为2或者3)，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R^A、R^B、L¹、L²、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤8
化合物(Ie)可以通过下述方法制造：将化合物(Id)优选与1～10当量的化合物(VII)在溶剂中，优选在1～非常过量的还原剂及根据需要优选在1～10当量的酸存在下，在-20℃与150℃之间的温度下，反应5分钟～72小时。
作为溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、水等，它们可以单独或者混合使用。
作为还原剂，可以举出例如三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠等。
作为酸，可以举出例如盐酸、乙酸等。
化合物(VII)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座15【有机化合物的合成III】，第5版，p.1，丸善(2005年)，第5版实验化学讲座15【有机化合物的合成III】，第5版，p.153，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
制造法6
化合物(If)[化合物(I)中，L³为单键，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、L¹、L²、X¹、X²、a、b及Z分别与上述同义)
步骤9
化合物(If)可以通过下述方法制造：将化合物(Id)与化合物(VIII)在无溶剂的情况下或者在溶剂中，根据需要优选在1～10当量的添加剂存在下、及/或根据需要优选在1～10当量的碱存在下，在-20℃与150℃之间的温度下，反应5分钟～72小时。
作为溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡啶、水等，它们可以单独或者混合使用。
作为碱，可以举出例如碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、叔丁醇钾、三乙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯(DBU)等。
作为添加剂，可以举出例如碘化钠、碘化钾、四正丁基碘化铵等。
化合物(VIII)可以作为市售品得到，或者通过已知的方法(例如第5版实验化学讲座13【有机化合物的合成I】，第5版，p.374，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
制造法7
化合物(Ig)[化合物(I)中，L³为-CO-，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、L¹、L²、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤10
化合物(Ig)可以通过下述方法制造：将化合物(Id)与化合物(IX)在溶剂中，在-20℃与150℃之间的温度下，在1当量～非常过量的缩合剂下处理5分钟至100小时而制造。此时，还可以根据需要优选在0.01～10当量的添加剂存在下、及/或根据需要优选加入1～非常过量的碱，促进反应。
作为溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、水等，它们可以单独或者混合使用。
作为缩合剂、添加剂及碱，可以举出分别与制造法2相同的物质。
化合物(IX)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座16【有机化合物的合成IV】，第5版，p.1，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
制造法8
化合物(Ih)[化合物(I)中，L³为-CO-O-，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、L¹、L²、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤11
化合物(Ih)可以通过下述方法制造：将化合物(Id)与化合物(X)在无溶剂的情况下或者在溶剂中，根据需要优选在1～10当量的添加剂存在下、及/或根据需要优选在1～10当量的碱存在下，在-20℃与150℃之间的温度下，反应5分钟～72小时。
作为溶剂及添加剂，可以举出与制造法2相同的物质。
作为碱，可以举出例如三乙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯等。
化合物(X)可以通过市售品或者已知的方法(例如“J.Am.Chem.Soc.”，1981年，第103卷，p.4194-4199)或以其为基准的方法得到。
制造法9
化合物(Ii)[化合物(I)中，L³为单键，R³为-CH₂-C(OH)R^CR^D(R^C及R^D相同或不同，为氢原子、碳原子数1～4的烷基、碳原子数3～4的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或不同的1个或2个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～4的烷基或碳原子数3～4的链烯基，除R^C及R^D均为氢原子的情况之外，R^C及R^D的烷基、被取代的烷基的烷基部分、链烯基及被取代的链烯基的链烯基部分的碳原子数的总和为1～4， R^C及R^D中的任一方为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基或者吗啉-3-基时，该R^C及R^D的另一方为氢原子、碳原子数1～4的烷基、碳原子数3～4的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被1个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～4的烷基或碳原子数3～4的链烯基，R^C及R^D为被取代的烷基或者链烯基时，该取代基的总数为2)，X³及Y不存在]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R^C、R^D、L¹、L²、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤12
化合物(Ii)可以通过将化合物(Id)与化合物(XI)在溶剂中或者在无溶剂的情况下，在0℃与230℃之间的温度下，处理5分钟至100小时而制造。
作为溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇、1-丙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等，它们可以单独或者混合使用。
化合物(XI)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座17【有机化合物的合成V】，第5版，p.186，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
制造法10
化合物(Ij)[在化合物(I)中，L³为单键，X³为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基，Y为制药上可以允许的阴离子]可以通过以下的方法制造。

(式中，R¹、R²、R³、L¹、L²、X¹、X²、X³、Y、a、b及Z分别与上述同义)
步骤13及14
化合物(Ij-A)可以通过将化合物(If)与化合物(XII)在溶剂中或者在无溶剂的情况下，在0℃与230℃之间的温度下，处理5分钟至100小时而制造。化合物(Ij)可以通过用Y型阴离子交换树脂处理化合物(Ij-A)而制造。
作为溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡啶等，它们可以单独或者混合使用。
化合物(XII)可以通过市售品或者已知的方法(例如第5版实验化学讲座13【有机化合物的合成I】，第5版，p.374，丸善(2005年))或以其为基准的方法得到。
另外，Z与Y相同时，可以通过省略步骤14来制造(Ij)。
制造法11
化合物(Id)[在化合物(I)中，L³为单键，R³为氢原子，X³及Y不存在]还可以通过以下方法制造。

(式中，R¹、R²、L¹、L²、X¹、X²、a及b分别与上述同义)
步骤15
化合物(Id)可以通过将化合物(XIII)在无溶剂的情况下或者在溶剂中，优选在1～非常过量的酸存在下，在-20℃与150℃之间的温度下，反应5分钟至100小时而制造。
作为溶剂，可以举出与制造法2相同的物质。
作为酸，可以举出例如三氟乙酸、盐酸、硫酸。
化合物(XIII)可以通过基于制造法1、制造法2或者制造法3的方法的方法得到。
化合物(I)中的R¹、R²或者R³中包括的官能团的改变也可以通过已知的方法[例如Comprehensive Organic Transformations2nd edition、R.C.Larock著、Vch Verlagsgesellschaft Mbh(1999年)等记载的方法]或者基于已知的方法进行。
上述各制造法中的中间体及目标化合物可以通过有机合成化学中常用的分离纯化法、例如过滤、提取、清洗、干燥、浓缩、重结晶、各种色谱法等进行分离纯化。另外，在中间体中也可以不进行特别的纯化而供给至下一个反应。
化合物(I)中，也可以在结构中的氮原子上的孤对电子上配位氢离子，该氮原子可以与制药上可以允许的阴离子(与上述同义)形成盐，化合物(I)中，还包含在该氮原子上的孤对电子上配位有氢离子的化合物。需要说明的是，本发明中，所谓X³不存在的情况，还包含氢离子配位的情况。
化合物(I)中，还包括可以存在几何异构体、光学异构体等立体异构体、互变异构体等的物质，化合物(I)中，含有上述物质，包括全部的可能的异构体及它们的混合物。
化合物(I)中的各原子的一部分或者全部可以分别用对应的同位素原子取代，化合物(I)中还包括这些用同位素原子取代的化合物。例如化合物(I)中的氢原子的一部分或者全部可以为原子量为2的氢原子(氘原子)。
化合物(I)中的各原子的一部分或者全部分别用对应的同位素原子取代的化合物，可以使用市售的结构单元(building block)，通过与上述各制造法相同的方法制造。另外，化合物(I)中的氢原子的一部分或者全部用氘原子取代的化合物例如还可以通过下述方法合成：1)使用过氧化氘，在碱性条件下将羧酸等氘化的方法(参照美国专利第3849458号说明书)；2)使用铱络合物作为催化剂，使用重水作为氘源将醇、羧酸等氘化的方法[参照J.Am.Chem.Soc.,Vol.124,No.10,2092(2002)]；3)使用钯碳作为催化剂，作为氘源仅使用氘气体将脂肪酸氘化的方法[参照LIPIDS,Vol.9,No.11,913(1974)]；4)使用铂、钯、铑、钌、铱等金属作为催化剂，使用重水或者重水及氘气体作为氘源将丙烯酸、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯等氘化的方法(参照日本特公平5-19536号公报、日本特开昭61-277648号公报及日本特开昭61-275241号公报)；5)使用钯、镍、铜或者亚铬酸铜等催化剂，使用重水作为氘源，将丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯等氘化的方法(参照日本特开昭63-198638号公报)等。
根据本发明得到的化合物(I)的具体例示于表1～17。但是，本发明的化合物不限于下述化合物。
[表1]

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

[表6]

[表7]

[表8]

[表9]

[表10]

[表11]

[表12]

[表13]

[表14]

[表15]

[表16]

[表17]

另外，作为本发明中使用的核酸，只要是核苷酸及/或与该核苷酸具有同等功能的分子聚合得到的分子，则可以为任何分子，可以举出例如作为核糖核苷酸的聚合体的RNA、作为脱氧核糖核苷酸的聚合体的DNA、RNA与DNA形成的嵌合核酸、及上述核酸中的至少一个核苷酸被与核苷酸具有同等功能的分子置换得到的核苷酸聚合体。另外，含有至少一种核苷酸及/或与该核苷酸具有同等功能的分子聚合得到的分子的衍生物也包括在本发明的核酸中。并且，也可以举出肽核酸(PNA)[Acc.Chem.Res.,32,624(1999)]、氧基肽核酸(OPNA)[J.AM.Chem.Soc.,123,4653(2001)]、肽核糖核酸(PRNA)[J.Am.Chem.Soc.,122,6900(2000)]等。需要说明的是，本发明中，RNA中的尿苷U、与DNA中的胸腺嘧啶T可以分别相互替换。
作为与核苷酸具有同等功能的分子，可以举出例如核苷酸衍生物等。
作为核苷酸衍生物，只要是对核苷酸进行了修饰的分子则可以为任何分子，例如与RNA或者DNA比较，为了提高核酸酶耐性或使其免受其他分解因子的影响而稳定化，为了提高与互补链核酸的亲和性，为了提高细胞透过性，或者为了使其可被观察到，可优选使用对核糖核苷酸或者脱氧核糖核苷酸进行了修饰的分子等。
作为核苷酸衍生物，可以举出例如糖部修饰核苷酸、磷酸二酯键修饰核苷酸、碱基修饰核苷酸等。
作为糖部修饰核苷酸，只要为对核苷酸的糖的化学结构的一部分或者全部用任意的取代基进行了修饰或取代的产物、或者为用任意的原子进行了取代的产物，则可以为任何物质，可以优选使用2’-修饰核苷酸。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团，可以举出例如2’-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-链烯基、2’-取代链烯基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-S-烷基、2’-S-取代烷基、2’-S-链烯基、2’-S-取代链烯基、2’-氨基、2’-NH-烷基、2’-NH-取代烷基、2’-NH-链烯基、2’-NH-取代链烯基、2’-SO-烷基、2’-SO-取代烷基、2’-羧基、2’-CO-烷基、2’-CO-取代烷基、2’-Se-烷基、2’-Se-取代烷基、2’-SiH₂-烷基、2’-SiH₂-取代烷基、2’-ONO₂、2’-NO₂、2’-N₃、2’-氨基酸残基(从氨基酸的羧酸中除去羟基得到的基团)、2’-O-氨基酸残基(与上述氨基酸残基同义)。另外，具有2’位的修饰基团与4’位的碳原子桥联的结构的桥联结构型人工核酸(BridgedNucleic Acid)(BNA)，更具体而言，2’位的氧原子与4’位的碳原子经亚甲基交联得到的锁人工核酸(Locked Nucleic Acid)(LNA)、及乙烯桥联结构型人工核酸(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[Nucleic AcidResearch,32,e175(2004)]等也包括在本发明中的在2’位被修饰基团取代的核糖内。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团，优选2’-氰基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-Se-烷基、2’-Se-取代烷基，较优选2’-氰基、2’-氟、2’-氯、2’-溴、2’-三氟甲基、2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-O-异丙基、2’-O-三氟甲基、2’-O-[2-(甲氧基)乙基]、2’-O-(3-氨基丙基)、2’-O-[2-(N,N-二甲基)氨基氧基]乙基、2’-O-[3-(N,N-二甲基氨基)丙基]、2’-O-{2-[2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基]乙基}、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]、2’-Se-甲基等，更优选2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-氟等，最优选2’-O-甲基、2’-O-乙基。
另外，糖部修饰核苷酸的修饰基团还可以从其大小考虑来定义优选范围，从氟的大小考虑优选相当于-O-丁基的大小的基团，从-O-甲基的大小考虑较优选相当于-O-乙基的大小的基团。
糖部修饰核苷酸的修饰基团中的烷基，与化合物(I)中的碳原子数1～6的烷基同义。
糖部修饰核苷酸的修饰基团中的链烯基，与化合物(I)中的碳原子数3～6的链烯基同义。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的卤素，可以举出氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。
作为氨基酸残基中的氨基酸，可以举出例如脂肪族氨基酸(具体而言，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等)、羟基氨基酸(具体而言，丝氨酸、苏氨酸等)、酸性氨基酸(具体而言，天冬氨酸、谷氨酸等)、酸性氨基酸酰胺(具体而言，天冬酰胺、谷氨酰胺等)、碱性氨基酸(具体而言，赖氨酸、羟基赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸等)、含硫氨基酸(具体而言，半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸等)、亚氨基酸(具体而言，脯氨酸、4-羟基脯氨酸等)等。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的取代烷基及取代链烯基的取代基，可以举出例如卤素(与上述同义)、羟基、硫基、氨基、氧代、-O-烷基(该-O-烷基的烷基部分与上述烷基同义)、-S-烷基(该-S-烷基的烷基部分与上述烷基同义)、-NH-烷基(该-NH-烷基的烷基部分与上述烷基同义)、二烷基氨基氧基(该二烷基氨基氧基的2个烷基相同或不同，与上述烷基同义)、二烷基氨基(该二烷基氨基的2个烷基相同或不同，与上述烷基同义)、二烷基氨基亚烷基氧基(该二烷基氨基亚烷基氧基的2个烷基相同或不同，与上述烷基同义，亚烷基部分表示从上述烷基除去1个氢原子得到的基团)等，取代数优选为1～3。
作为磷酸二酯键修饰核苷酸，只要是对核苷酸的磷酸二酯键的化学结构的一部分或者全部用任意的取代基修饰或取代的核苷酸，或者用任意的原子取代的核苷酸，则可以为任意的核苷酸，可以举出例如磷酸二酯键被硫代磷酸酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被二硫代磷酸酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被磷酸烷基酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被氨基磷酸酯键取代的核苷酸等。
作为碱基修饰核苷酸，只要是对核苷酸的碱基的化学结构的一部分或者全部，用任意的取代基修饰或取代的核苷酸，或者用任意的原子取代的核苷酸，则可以为任意的核苷酸，可以举出例如碱内的氧原子被硫原子取代的核苷酸，氢原子被碳原子数1～6的烷基取代的核苷酸，甲基被氢原子或碳原子数2～6的烷基取代的核苷酸，氨基被碳原子数1～6的烷基、碳原子数1～6的烷酰基等保护基保护的核苷酸。
进而，作为核苷酸衍生物，还可以举出向核苷酸或者糖部、磷酸二酯键或碱基的至少一方被修饰的核苷酸衍生物中加成脂质、磷脂、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素、色素等、其他化学物质而得的产物，具体而言，可以举出5’-多胺加成核苷酸衍生物、胆固醇加成核苷酸衍生物、类固醇(steroid)加成核苷酸衍生物、胆汁酸加成核苷酸衍生物、维生素加成核苷酸衍生物、Cy5加成核苷酸衍生物、Cy3加成核苷酸衍生物、6-FAM加成核苷酸衍生物、及生物素加成核苷酸衍生物等。
另外，核苷酸衍生物中，可以形成核酸内的其他核苷酸或者核苷酸衍生物与亚烷基结构、肽结构、核苷酸结构、醚结构、酯结构、及将它们中的至少一方组合得到的结构等的交联结构。
作为本发明中使用的核酸，优选可以举出抑制靶基因表达的核酸，较优选可以举出具有利用了RNA干扰(RNAi)的靶基因表达抑制作用的核酸。
作为本发明中使用的靶基因，只要是产生mRNA进行表达的基因则没有特别限定，优选例如与肿瘤或者炎症相关的基因，可以举出例如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，以下简称为VEGF)、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factorreceptor，以下简称为VEGFR)、成纤维细胞生长因子、成纤维细胞生长因子受体、血小板源生长因子、血小板源生长因子受体、肝细胞生长因子、肝细胞生长因子受体、Kruppel样因子(Kruppel-like factor，以下简称为KLF)、Ets转录因子、核因子、低氧诱导因子、细胞周期相关因子、染色体复制相关因子、染色体修复相关因子、微管相关因子、生长信号途径相关因子、生长相关转录因子、细胞凋亡相关因子等编码蛋白质的基因等，具体而言，可以举出VEGF基因、VEGFR基因、成纤维细胞生长因子基因、成纤维细胞生长因子受体基因、血小板源生长因子基因、血小板源生长因子受体基因、肝细胞生长因子基因、肝细胞生长因子受体基因、KLF基因、Ets转录因子基因、核因子基因、低氧诱导因子基因、细胞周期相关因子基因、染色体复制相关因子基因、染色体修复相关因子基因、微管相关因子基因(例如，CKAP5基因等)、生长信号途径相关因子基因(例如，KRAS基因等)、生长相关转录因子基因、细胞凋亡相关因子(例如，BCL-2基因等)等。
另外，作为本发明中使用的靶基因，优选例如在肝脏、肺、肾脏或者脾脏中表达的基因，可以举出例如与上述肿瘤或者炎症相关的基因、乙型肝炎病毒基因组、丙型肝炎病毒基因组、编码下述蛋白质的基因等，所述蛋白质为脱脂载脂蛋白(APO)、甲羟戊二酸单酰(HMG)CoA还原酶、kexin9型丝氨酸蛋白酶(PCSK9)、XII因子、胰高血糖素受体、糖皮质激素受体、白三烯受体、血栓烷A2受体、组胺H1受体、碳酸酐酶、血管紧张肽转变酶、肾素、p53、酪氨酸磷酸酶(PTP)、钠依赖性葡萄糖运送载体、肿瘤坏死因子、白细胞介素等。
作为抑制靶基因表达的核酸，只要是例如含有针对编码蛋白质等的基因(靶基因)的mRNA的一部分的碱基序列互补的碱基序列、并且抑制靶基因的表达的核酸即可，可以使用任意的核酸，例如siRNA(短干扰RNA，short interference RNA)、miRNA(微型RNA，micro RNA)等双链核酸；shRNA(短发卡RNA，short hairpin RNA)、反义核酸、核酶等单链核酸等，但优选使用双链核酸。
将含有针对靶基因的mRNA的一部分碱基序列互补的碱基序列的核酸称为反义链核酸，还将含有针对反义链核酸的碱基序列互补的碱基序列的核酸称为有义链核酸。有义链核酸是指由靶基因的一部分碱基序列形成的核酸本身等、能够与反义链核酸配对形成双链形成部的核酸。
所谓双链核酸，是指两条链配对、具有双链形成部的核酸。所谓双链形成部，是指构成双链核酸的核苷酸或者其衍生物构成碱基对形成双链的部分。构成双链形成部的碱基对，通常为15～27个碱基对，优选为15～25个碱基对，较优选为15～23个碱基对，更优选为15～21个碱基对，特别优选为15～19个碱基对。
作为双链形成部的反义链核酸，优选使用含有靶基因的mRNA的一部分序列的核酸、或者在该核酸中取代、缺失或添加1～3个碱基、优选1～2个碱基、较优选1个碱基、并且具有靶蛋白质的表达抑制活性的核酸。构成双链核酸的单链的核酸长度通常为包括15～30个碱基，优选15～29个碱基、较优选15～27个碱基、更优选15～25个碱基、特别优选17～23个碱基、最优选19～21个碱基。
构成双链核酸的反义链、有义链中的任一方、或者双方的核酸可以在与双链形成部连续的3’侧或者5’侧具有未形成双链的追加的核酸。所述未形成双链的部分也称为突出部(悬挂，overhang)。
作为具有突出部的双链核酸，使用在至少一方的链的3’末端或者5’末端具有含有1～4个碱基、通常含有1～3个碱基的突出部的双链核酸，优选使用具有含有2个碱基的突出部的双链核酸，较优选使用具有含有dTdT或者UU的突出部的双链核酸。突出部可以仅在反义链一方具有，可以仅在有义链一方具有，也可以在反义链和有义链双方均具有，优选使用在反义链和有义链双方均具有突出部的双链核酸。
另外，可以使用与双链形成部连续且与靶基因的mRNA的一部分或者全部一致的序列、或者与双链形成部连续且与靶基因的mRNA的互补链的碱基序列一致的序列。并且，作为抑制靶基因的表达的核酸，还可以使用例如通过Dicer等核糖核酸酶的作用生成上述双链核酸的核酸分子(国际公开第2005/089287号小册子)、或者不具有3’末端或5’末端的突出部的双链核酸等。
另外，上述双链核酸为siRNA时，反义链中，由5’末端侧向3’末端侧至少第1～17个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续17个碱基的序列互补的碱基的序列，优选，该反义链中，从5’末端侧向3’末端侧第1～19个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续19个碱基的序列互补的碱基的序列，或者第1～21个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续21个碱基的序列互补的碱基的序列，或者第1～25个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续25个碱基的序列互补的碱基的序列。
进而，本发明中使用的核酸为siRNA时，优选该核酸中的糖的10～70％、较优选15～60％、更优选20～50％为在2’位被修饰基团取代的核糖。在本发明中的核糖的2’位被修饰基团取代是指2’位的羟基被修饰基团取代，可以与核糖的2’位的羟基的立体配置相同或不同，优选与核糖的2’位的羟基的立体配置相同。在2’位被修饰基团取代的核糖包括在糖部修饰核苷酸中的2’-修饰核苷酸中，在2’位被修饰基团取代的核糖的修饰基团与2’-修饰核苷酸的修饰基团同义。
本发明中使用的核酸中包括，核酸结构中的磷酸部、酯部等中含有的氧原子等例如取代为硫原子等其他原子的衍生物。
另外，键合于反义链及有义链的5’末端的碱基的糖中，各个5’位的羟基可以被磷酸基或上述修饰基团、或者通过生物体内的核酸分解酶等转换为磷酸基或上述修饰基团的基团修饰。
另外，与反义链及有义链的3’末端的碱基键合的糖中，各个3’位的羟基可以被磷酸基或上述修饰基团、或者通过生物体内的核酸分解酶等转换为磷酸基或上述修饰基团的基团修饰。
作为单链的核酸，只要是包括包含靶基因的连续15～27个碱基、优选15～25个碱基、较优选15～23个碱基、更优选15～21个碱基、特别优选15～19个碱基的序列的互补序列的核酸、或者在该核酸中有1～3个碱基、优选1～2个碱基、较优选1个碱基被置换、缺失或添加、且具有靶蛋白质的表达抑制活性的核酸即可，可以为任意的核酸，优选使用15～30个碱基以下，优选15～29个碱基、较优选15～27个碱基、更优选15～25个碱基、特别优选15～23个碱基的单链核酸。
作为单链核酸，也可以使用将构成上述双链核酸的反义链及有义链经间隔序列(间隔寡核苷酸)连接得到的核酸。作为间隔寡核苷酸优选6～12个碱基的单链核酸分子，优选其5’末端侧的序列为2个U。作为间隔寡核苷酸的例子，可以举出含有UUCAAGAGA序列的核酸。对于经由间隔寡核苷酸连接的反义链及有义链的顺序，任一方形成5’侧均可。作为该单链核酸，优选为通过茎环结构具有双链形成部的shRNA等单链核酸。shRNA等单链核酸通常为50～70个碱基长度。
通过核糖核酸酶等的作用，可以使用以生成上述单链核酸或者双链核酸的方式设计的、70个碱基长度以下，优选50个碱基长度以下，更优选30个碱基长度以下的核酸。
需要说明的是，本发明中使用的核酸采用已知的RNA或者DNA合成法及RNA或者DNA修饰法进行制造即可。
本发明的组合物是含有化合物(I)与核酸的组合物，可以举出例如含有化合物(I)和核酸的复合体的组合物、或者含有在化合物(I)中组合中性脂质及/或高分子所得的产物和核酸的复合体的组合物、含有该复合体及封入该复合体的脂质膜的组合物等。该脂质膜可以是脂质单层膜(脂质1分子膜)也可以是脂质双层膜(脂质2分子膜)。需要说明的是，该脂质膜也可以含有化合物(I)、中性脂质及/或高分子。另外，该复合体及/或该脂质膜中也可以含有除化合物(I)之外的阳离子性脂质。
另外，作为本发明的组合物，例如也可以举出含有下述复合体以及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜中含有化合物(I)的组合物，所述复合体是化合物(I)以外的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者在化合物(I)以外的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体。此时的脂质膜也同样地既可以为脂质单层膜(脂质1分子膜)也可以为脂质双层膜(脂质2分子膜)。另外，该脂质膜中也可以含有除化合物(I)以外的阳离子性脂质、中性脂质及/或者高分子。
在本发明的组合物中，较优选含有化合物(I)与核酸的复合体的组合物、或者含有化合物(I)或除化合物(I)以外的阳离子性脂质与核酸的复合体及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜中含有化合物(I)的组合物，更优选含有化合物(I)与核酸的复合体的组合物、或者含有化合物(I)与核酸的复合体及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜中含有化合物(I)的组合物，最优选含有化合物(I)与核酸的复合体及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜含有化合物(I)的组合物。需要说明的是，任意一种情况下均可以在该脂质膜含有中性脂质及/或者高分子。另外，也可以在该复合体及/或者该脂质膜中含有除化合物(I)以外的阳离子性脂质。
作为复合体的形态，任意一种情况均可以举出核酸与由脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体、核酸与脂质体的复合体、核酸与胶束的复合体等，优选核酸与由脂质单层形成的膜的复合体或者核酸与脂质体的复合体。
作为含有复合体及封入该复合体的脂质双层膜的组合物，可以举出含有由该复合体及封入该复合体的脂质双层膜构成的脂质体的组合物等。
需要说明的是，在本发明的组合物中可以使用一种或多种化合物(I)、另外也可以使用化合物(I)与除化合物(I)以外的阳离子性脂质的混合物。
作为除化合物(I)以外的阳离子性脂质，例如可以举出日本特开昭61-161246号公报(美国专利5049386号说明书)中公开的、DOTMA、DOTAP等、国际公开第91/16024号小册子及国际公开第97/019675号小册子中公开的、DORIE、DOSPA等、国际公开第2005/121348号小册子中公开的、DLinDMA等、国际公开第2009/086558号小册子中公开的、DLin-K-DMA等，优选举出DOTMA、DOTAP、DORIE、DOSPA、DLinDMA、DLin-K-DMA等具有2个未取代烷基的叔胺部位或者具有3个未取代烷基的季铵部位的阳离子性脂质，更优选举出具有该叔胺部位的阳离子性脂质。更优选该叔胺部位及该季铵部位的未取代烷基是甲基。
使用多种化合物(I)时或者将化合物(I)与除化合物(I)以外的阳离子性脂质混合使用时、或者本发明的组合物为含有复合体(该复合体是除化合物(I)以外的阳离子性脂质与核酸等的复合体、或者在除化合物(I)以外的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸等的复合体)以及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜中含有化合物(I)的组合物时，化合物(I)较优选：X³不存在、Y也不存在、L³为单键、且R³为碳原子数1～6的烷基。
需要说明的是，本发明的组合物能够含有核酸，也可以含有与核酸在化学方面相似的化合物。
本发明的组合物可以采用已知的制造方法或者以其为基准进行制造，可以采用任何制造方法制造。例如作为组合物之一的含有脂质体的组合物的制造中，可以适用已知的脂质体的制备方法。作为已知的脂质体的制备方法，可以举出例如Bangham等的脂质体制备法[参照“J.Mol.Biol.”，1965年，第13卷，p.238-252]、乙醇注入法[参照“J.Cell Biol.”，1975年，第66卷，p.621-634]、法压法[参照“FEBS Lett.”，1979年，第99卷，p.210-214]、冻融法[参照“Arch.Biochem.Biophys.”，1981年，第212卷，p.186-194]、反相蒸发法[参照“Proc.Natl.Acad.Sci.USA”，1978年，第75卷，p.4194-4198]或者pH梯度法(参照例如日本专利第2572554号公报、日本专利第2659136号公报等)等。作为脂质体制造时将脂质体分散的溶液，可以使用例如水、酸、碱、各种缓冲液、生理盐溶液或者氨基酸输液等。另外，脂质体的制造时，还可以添加例如柠檬酸、抗坏血酸、半胱氨酸或者乙二胺四乙酸(EDTA)等抗氧化剂、例如丙三醇、葡萄糖或者氯化钠等的等渗剂等。另外，也可以将脂质等溶解在例如乙醇等有机溶剂中，蒸馏除去溶剂后，添加生理盐水等，振荡搅拌，形成脂质体，由此制造脂质体。
另外，本发明的组合物可以通过下述方法等制造，例如将化合物(I)或化合物(I)与除化合物(I)之外的阳离子性脂质的混合物预先溶解于氯仿，接着加入核酸的水溶液和甲醇进行混合形成阳离子性脂质/核酸的复合体，进而取出氯仿层，向其中加入聚乙二醇化磷脂、中性脂质和水，形成油包水型(W/O)乳液，采用反相蒸发法处理，进行制造(参照日本特表2002-508765号公报)；及将核酸溶解在酸性电解质水溶液中，加入脂质(乙醇中)，降低乙醇浓度至20v/v％，内包核酸，进行尺寸过滤，通过透析除去过量的乙醇后，进一步提高试样的pH，透析除去附着在表面的核酸，进行制造(参照日本特表2002-501511号公报及Biochimica et Biophysica Acta，2001年,第1510卷，p.152-166)等。
本发明的组合物中，由化合物(I)与核酸的复合体、或者在化合物(I)中组合了中性脂质及/或高分子的产物与核酸的复合体、及封入该复合粒子的脂双层膜构成的脂质体，可以根据例如国际公开第02/28367号小册子及国际公开第2006/080118号小册子参照等中公开的制造方法进行制造。
另外，本发明的组合物中，含有化合物(I)与核酸的复合体、或者在化合物(I)组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体以及封入该复合体的脂质膜、且在脂质膜中含有化合物(I)及/或者化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物、含有化合物(I)以外的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者在化合物(I)以外的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体以及封入该复合体的脂质膜、且在脂质膜中含有化合物(I)或者化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物等，可以如下获得：按照国际公开第02/28367号小册子及国际公开第2006/080118号小册子等中记载的制备方法，制造各复合体，在水或者0～20％乙醇水溶液中使该复合体分散但不使其溶解(A液)、另外，使各自的脂质膜成分溶解于乙醇水溶液中(B液)，将等量的A液与B液混合，进而适当地加入水，由此可以制备得到。需要说明的是，A液及B液中的阳离子性脂质可以使用一种或者多种的化合物(I)或者化合物(I)以外的阳离子性脂质，另外也可以将化合物(I)与化合物(I)以外的阳离子性脂质组合、混合使用。
需要说明的是，在本发明中，本发明的组合物中，含有复合体(即，化合物(I)与核酸的复合体、或者在化合物(I)中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜含有化合物(I)及/或者化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物、含有复合体(即，化合物(I)以外的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者在化合物(I)以外的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜中含有化合物(I)或者化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物等，在其制备中及制备后，通过复合体中的核酸与脂质膜中的阳离子性脂质之间的静电相互作用、或复合体中的阳离子性脂质与脂质膜中的阳离子性脂质之间的融合，复合体及/或者膜的结构发生了变位，由此所得的产物也分别包含在本发明的组合物中的、含有复合体(即，化合物(I)与核酸的复合体、或者在化合物(I)中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜含有化合物(I)及/或者化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物、含有复合体(即，化合物(I)以外的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者在化合物(I)以外的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜、且脂质膜含有化合物(I)或者化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物等中。
本发明的脂质纳米粒子中，复合体中的化合物(I)的分子的总数优选是核酸的磷原子的数的0.5～4倍，较优选为1.5～3.5倍，更优选为2～3倍。另外，该复合体中的化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数优选是该核酸的磷原子的数的0.5～4倍，较优选为1.5～3.5倍，更优选为2～3倍。
本发明的脂质纳米粒子中，含有复合体及封入该复合体的脂质膜的脂质纳米粒子中的化合物(I)的分子的总数优选是该核酸的磷原子的数的1～10倍，较优选为2.5～9倍，更优选为3.5～8倍。另外，该脂质纳米粒子中的化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数优选是该核酸的磷原子的数的1～10倍，较优选为2.5～9倍，更优选为3.5～8倍。
根据国际公开第02/28367号小册子及国际公开第2006/080118号小册子等记载的制备方法，制备由核酸(与前文同义)、优选双链核酸与含有任意阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或本发明的化合物(I)以外的阳离子性脂质的脂质体形成的复合体，在水或者0～20％乙醇水溶液中使该复合体分散且不使其溶解(A液)、另外使任意的阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或者本发明的化合物(I)以外的阳离子性脂质溶解于乙醇水溶液中(B液)，将等量或者体积比1:1的A液与B液混合，或者，进一步适当地加入水，由此能够得到含有该核酸和该阳离子性脂质的组合物。该组合物优选是含有下述复合体及封入该复合体的脂质膜的组合物，所述复合体是阳离子性脂质与核酸的复合体，该组合物较优选是含有下述复合体及封入该复合体的脂质膜的组合物，所述复合体是该核酸与由含有该阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体。此时的脂质膜可以是脂质单层膜(脂质1分子膜)也可以是脂质双层膜(脂质2分子膜)。
另外，本文中的该核酸与该脂质体的复合体中的脂质体，优选是预先将大小调节至平均粒子径10nm～400nm、较优选30nm～110nm、更优选40nm～80nm的脂质体。另外，该复合体及/或者脂质膜中可以含有中性脂质及/或者高分子。另外，如果A液能够形成脂质体与该核酸的复合体，则乙醇浓度可以为20～40％。
另外，代替混合等量的A液与B液，也可以按照能够形成下述乙醇水溶液的比例混合A液与B液，所述乙醇水溶液具有在A液与B液混合后复合体不溶解、且B液中的阳离子性脂质不溶解的乙醇浓度，优选为复合体不溶解、B液中的阳离子性脂质不溶解、且乙醇浓度为30～60％，或者也可以按照能够成为在A液与B液混合后复合体不溶解的乙醇浓度的比例将A液与B液混合，进而加入水，由此形成B液中的阳离子性脂质不溶解的乙醇浓度。
通过本文，提供了用于获得下述组合物的、新型且有用的制备方法的发明，所述组合物是含有核酸(与上述同义)、优选双链核酸和任意阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或者本发明的化合物(I)以外的阳离子性脂质的组合物、优选为含有复合体(即，该核酸与由含有该阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体)及封入该复合体的脂质膜(该脂质膜含有任意的阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或者本发明的化合物(I)以外的阳离子性脂质)的组合物。与国际公开第02/28367号小册子及国际公开第2006/080118号小册子等中记载的制备方法相比，区别之处有：具有药物为核酸(与上述同义)、优选为双链核酸、B液中含有阳离子性脂质的特征。该A液中的核酸与脂质体的复合体，在将A液与B液混合、进而适当地加入水之后，形态变化，成为由含有阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)与核酸的复合体。本文的制备方法得到的含有该核酸与该阳离子性脂质的组合物，优选为含有阳离子性脂质与核酸的复合体及封入该复合体的脂质膜的组合物，较优选为含有复合体(即，由含有阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)与核酸的复合体)及封入该复合体的脂质膜、且该脂质膜含有阳离子性脂质的组合物，其制备性(收率及/或者均一性)优异。
该A液中的核酸与脂质体的复合体中，复合体中的阳离子性脂质的分子的总数优选为核酸的磷原子的数的0.5～4倍，较优选为1.5～3.5倍，更优选为2～3倍。
A液与B液混合后的含有复合体(即，该核酸与由含有该阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体)及封入该复合体的脂质膜的组合物中，该复合体及封入该复合体的脂质膜中的阳离子性脂质的分子的总数，优选为该核酸的磷原子的数的1～10倍，较优选为2.5～9倍，更优选为3.5～8倍。
作为中性脂质，可以为单纯脂质、复合脂质或者衍生脂质中的任一种，例如可以举出磷脂、甘油糖脂、神经鞘糖脂、鞘氨基醇 (sphingoid)或者甾醇等，但不限于此。
本发明的组合物中含有中性脂质时，中性脂质的分子的总数优选是化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数的0.1～1.8倍，较优选为0.3～1.1倍，更优选为0.4～0.9倍。本发明的组合物，中性脂质可以包含在复合体中，也可以包含在封入复合体的脂质膜中，较优选至少包含在封入复合体的脂质膜中，更优选在复合体及封入该复合体的脂质膜中均包含中性脂质。
作为中性脂质中的磷脂，可以举出例如卵磷脂(具体而言，大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂(EPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、二棕榈酰卵磷脂(DPPC)、棕榈酰油酰卵磷脂(POPC)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、二油酰卵磷脂(DOPC)等)、磷脂酰乙醇胺(具体而言，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、16-0-单甲基PE、16-0-二甲基PE、18-1-反式PE、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、1-硬酯酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)等)、甘油基磷脂(具体而言，磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、棕榈酰油酰磷脂酰甘油(POPG)、溶血卵磷脂等)、神经鞘磷脂(具体而言，神经鞘磷脂、神经酰胺磷酸乙醇胺、神经酰胺磷酸甘油、神经酰胺磷酸甘油磷酸(ceramide phosphoglycerophosphate)等)、甘油磷酸脂质(glycerophosphono lipid)、神经鞘膦酰基脂质、天然卵磷脂(具体而言蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂等)或者氢化磷脂(具体而言氢化大豆卵磷脂等)等天然或者合成的磷脂。
作为中性脂质中的甘油糖脂，可以举出例如硫氧基核糖基甘油酯(sulfoxyribosyl glyceride)、二糖基甘油二酯、二半乳糖基甘油二酯、半乳糖基甘油二酯或者糖基甘油二酯等。
作为中性脂质中的神经鞘糖脂，可以举出例如半乳糖基脑苷脂、糖基脑苷脂或者神经节苷脂等。
作为中性脂质中的鞘氨基醇，可以举出例如鞘氨糖(sphingan)、二十烷鞘氨糖、鞘氨醇或者它们的衍生物等。作为衍生物，可以举出例如鞘氨糖、二十烷鞘氨糖或者鞘氨醇等的-NH₂变换为-NHCO(CH₂)xCH₃(式中，x为0～18的整数，其中优选6、12或者18)的产物等。
作为中性脂质中的甾醇，可以举出例如胆固醇、二氢胆甾醇、羊毛甾醇、β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜子甾醇、麦角甾醇、岩藻甾醇或者3β-[N-(N’,N’-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)等。
作为高分子，可以举出包含例如蛋白质、白蛋白、葡聚糖、polyfect、脱乙酰壳多糖、硫酸葡聚糖、例如聚-L-赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚天冬氨酸、苯乙烯马来酸共聚物、异丙基丙烯酰胺-丙烯基吡咯烷酮共聚物、聚乙二醇修饰树状聚体、聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸或者聚乙二醇化聚乳酸等高分子或者它们的盐的1种以上的胶束。
此处，高分子中的盐，包括例如金属盐、铵盐、酸加成盐、有机胺加成盐、氨基酸加成盐等。作为金属盐，可以举出例如锂盐、钠盐、钾盐等碱金属盐，镁盐、钙盐等碱土金属盐，铝盐或者锌盐等。作为铵盐，可以举出例如铵或者四甲基铵等盐。作为酸加成盐，可以举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐或者磷酸盐等无机酸盐，及乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐或者柠檬酸盐等有机酸盐。作为有机胺加成盐，可以举出例如吗啉或者哌啶等的加成盐。作为氨基酸加成盐，可以举出例如甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或者赖氨酸等的加成盐。
另外，本发明中的组合物，均优选含有例如选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂等。上述选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂可以包含在复合体中，也可以包含在封入复合体的脂质膜中，较优选包含在复合体及封入该复合体的脂质膜两者中。
本发明的组合物含有选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物时，选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的分子的总数，优选为化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数的0.05～0.3倍，较优选为0.07～0.25倍，更优选为0.1～0.2倍。
作为选自糖、肽、核酸及水溶性高分子的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂，优选举出糖脂、或者水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，优选举出水溶性高分子的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物。选自糖、肽、核酸及水溶性高分子的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂优选为下述具有两面性的物质，所述物质具有分子的一部分与组合物的其他构成成分通过例如疏水性亲和力、静电相互作用等结合的性质，并且具有其他部分与组合物制造时的溶剂通过例如亲水性亲和力、静电相互作用等结合的性质。
作为糖、肽或者核酸的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如蔗糖、山梨醇、乳糖等糖、例如来自酪蛋白的肽、来自蛋白的肽、来自大豆的肽、谷胱甘肽等肽、或者例如DNA、RNA、质粒、siRNA、ODN等核酸、与上述组合物的定义中举出的中性脂质或化合物(I)或者例如硬脂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸等脂肪酸键合形成的产物等。
另外，作为糖的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，还包括例如上述组合物定义中举出的甘油糖脂或者神经鞘糖脂等。
作为水溶性高分子的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、寡糖、糊精、水溶性纤维素、葡聚糖、硫酸软骨素、聚甘油、脱乙酰壳多糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚天冬酰胺、聚-L-赖氨酸、甘露聚糖、普鲁兰多糖、寡甘油等或者它们的衍生物、与上述组合物定义中举出的中性脂质或化合物(I)、或者例如硬脂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸或者月桂酸等脂肪酸键合形成的产物、它们的盐等，较优选举出聚乙二醇衍生物、聚甘油衍生物等的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，更优选举出聚乙二醇衍生物的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物及它们的盐。
作为聚乙二醇衍生物的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如聚乙二醇化脂质(具体而言，聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(更具体而言1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DMPE)等)、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、CREMOPHOR EL等)、聚乙二醇失水山梨糖醇脂肪酸酯类(具体而言，聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯等)或者聚乙二醇脂肪酸酯类等，较优选举出聚乙二醇化脂质。
作为聚甘油衍生物的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如聚甘油化脂质(具体而言，聚甘油-磷脂酰乙醇胺等)或者聚甘油脂肪酸酯类等，较优选举出聚甘油化脂质。
作为表面活性剂，可以举出例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(具体而言聚山梨酸酯80等)、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇(具体而言普朗尼克(Pluronic)F68等)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(具体而言失水山梨糖醇单月桂酸酯、失水山梨糖醇单油酸酯等)、聚氧乙烯衍生物(具体而言聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇等)、丙三醇脂肪酸酯或者聚乙二醇烷基醚等，优选举出聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、丙三醇脂肪酸酯或者聚乙二醇烷基醚等。
另外，本发明的组合物中的复合体及脂质膜，可以任意地进行基于例如高分子、聚氧乙烯衍生物等的表面改性[参照D.D.Lasic、F.Martin编,“Stealth Liposomes”(美国),CRC Press Inc,1995年,p.93-102]。作为可以用于表面改性的高分子，可以举出例如葡聚糖、普鲁兰多糖、甘露聚糖、支链淀粉或者羟基乙基淀粉等。作为聚氧乙烯衍生物，可以举出例如聚山梨酸酯80、普朗尼克F68、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇或者PEG-DSPE等。通过该表面改性，可以使组合物中的复合体及脂质膜含有选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂。
另外，也可以任意地进行：通过将靶向化的配体共价键合在本发明的组合物中的复合体及脂质膜的脂质成分的极性头部残基上，由此直接键合在该复合体及该脂质膜的表面(参见国际公开第 2006/116107号小册子)。
本发明的组合物中的复合体或封入复合体的脂质膜的平均粒径，可以根据需要自由选择，优选为下述的平均粒径。作为调节平均粒径的方法，可以举出例如挤出法、将较大的多层脂质体(MLV)等机械粉碎(具体而言使用Manton Gaulin、高压微射流均质机(Microfluidizer)等)的方法[参照R.H.Muller、S.Benita、B.Bohm编著,“Emulsion andNanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs”,Germany,Scientific Publishers Stuttgart,1998年,p.267-294]等。
对于本发明的组合物中的复合体或封入复合体的脂质膜的大小来说，平均粒径优选约10nm～1000nm，较优选约30nm～300nm，更优选约50nm～200nm。
通过将本发明的组合物给予至哺乳类的细胞，能够将本发明的组合物中的核酸导入细胞内。
在体外将本发明的组合物给予至哺乳类的细胞的方法按照在体外能够进行的已知的转染的顺序进行即可。
在体内将本发明的组合物给予至哺乳类的细胞的方法，按照在体内能够进行的已知的转染的顺序进行即可。例如通过将本发明的组合物静脉内给予至包括人在内的哺乳动物，能够送达至例如产生癌或者炎症的脏器或者部位，将本发明组合物中的核酸导入送达脏器或者部位的细胞内。作为产生癌或者炎症的脏器或者部位，没有特别限定，可以举出例如胃、大肠、肝脏、肺、脾脏、胰腺、肾脏、膀胱、皮肤、血管、眼球等。另外，通过将本发明的组合物静脉内给予至包括人在内的哺乳动物，能够送达至例如血管、肝脏、肺、脾脏及/或肾脏，将本发明的组合物中的核酸导入送达脏器或者部位的细胞内。肝脏、肺、脾脏及/或肾脏的细胞可以为正常细胞、与癌或炎症相关的细胞或者与其他疾病相关的细胞中的任一种。
本发明组合物中的核酸只要是利用了RNA干扰(RNAi)的具有靶基因表达抑制作用的核酸即可，能够在体内将抑制基因表达的核酸等导入哺乳类的细胞内，能够抑制基因等的表达。给予对象优选为人。
另外，本发明组合物中的靶基因是例如与肿瘤或者炎症相关的基因时，能够将本发明的组合物用作癌或者炎症疾病的治疗剂或者预防剂，优选用作实体癌或者血管或血管附近的炎症的治疗剂或者预防剂。具体而言，本发明组合物中的靶基因是与血管新生相关的基因等时，能够抑制血管平滑肌的增殖或血管新生等，因此能够将本发明的组合物用作例如伴随有血管平滑肌的增殖或血管新生的癌或者炎症疾病的治疗剂或者预防剂。将化合物(I)多种组合使用时或者将化合物(I)与化合物(I)之外的阳离子性脂质组合使用时，与单独使用各个阳离子性脂质时相比，能够减少用量，因此，能够减少由阳离子性脂质导致的不理想情况的发生率及程度。
即，本发明还提供将上述说明的本发明的组合物给予至哺乳动物的、癌或者炎症疾病的治疗方法。给予对象优选为人，较优选罹患癌或者炎症疾病的人。
另外，本发明的组合物还可以在关于癌或者炎症疾病的治疗剂或者预防剂的体内的药效评价模型中用作用于验证抑制靶基因的有效性的工具。
本发明的组合物还可以用作以例如血液成分等的生物体成分(例如血液、消化管等)中的上述核酸的稳定化、副作用的降低、或者增大对包括靶基因的表达部位的组织或者脏器的药物蓄积性等为目的的制剂。
将本发明的组合物用作药品的癌或者炎症疾病等的治疗剂或者预防剂时，作为给予途径，优选使用在治疗时最有效的给予途径，可以举出口腔内、气管内、直肠内、皮下、肌肉内或者静脉内等非口服给予或者口服给予，可以优选举出静脉内给予或者肌肉内给予，较优选举出静脉内给予。
给予量根据给予对象的症状、年龄、或给予途径等而不同，例如以换算为核酸的1天给予量约为0.1μg～1000mg的方式给予即可。
作为适合于静脉内给予或者肌肉内给予的制剂，可以举出例如注射剂，通过上述方法制备的组合物的分散液也可以直接例如以注射剂等的形态使用，还可以通过例如过滤、离心分离等从该分散液中除去溶剂进行使用，还可以将该分散液冷冻干燥进行使用、及/或将加入了例如甘露糖醇、乳糖、海藻糖、麦芽糖或甘氨酸等赋形剂的分散液冷冻干燥进行使用。
为注射剂时，优选在上述组合物的分散液或者上述的除去了溶剂或者经冷冻干燥的组合物中，混合例如水、酸、碱、各种缓冲液、生理盐溶液或者氨基酸输液等制备注射剂。另外，还可以添加例如柠檬酸、抗坏血酸、半胱氨酸或EDTA等抗氧化剂或者丙三醇、葡萄糖或氯化钠等的等渗剂等制备注射剂。另外，还可以加入例如丙三醇等冷冻保存剂进行冷冻保存。
接下来，通过实施例及试验例，具体说明本发明。但是，本发明不限于所述实施例及试验例。
需要说明的是，实施例及参考例中所示的质子核磁共振谱(¹HNMR)是在270MHz、300MHz或者400MHz下测定的，有时由于化合物及测定条件不能明确地观测到交换性质子。需要说明的是，作为信号的多样性的符号，使用通常使用的符号，所谓br表示表观上宽信号。
参考例1 (3R,4R)-1-苄基-3,4-二((9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-1)
在氢化钠(油性,60％,5.80g,145mmol)的甲苯(100mL)悬浊液中，一边搅拌一边缓慢添加(3R,4R)-1-苄基吡咯烷-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司制，3.50g,18.1mmol)的甲苯(70mL)溶液，之后，滴入(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep,Inc公司制,15.6g,45.3mmol)的甲苯(30mL)溶液。将得到的混合物在加热回流下彻夜搅拌。冷却至室温后，用饱和氯化铵水溶液终止反应。在得到的混合物中加入饱和食盐水，用乙酸乙酯提取2次。合并有机层，用无水硫酸镁干燥后，减压下浓缩。将残渣用硅胶柱色谱法(甲醇/氯仿＝0/100～2/98)纯化，由此得到化合物VI-1(6.96g,55.7％)。
ESI-MS m/z：691(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.26-1.38(m，30H)，1.52-1.62(m，6H)，2.05(q，J＝6.3Hz，8H)，2.50(dd，J＝9.9，4.3Hz，2H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，2.85(dd，J＝9.6，5.9Hz，2H)，3.37-3.45(m，4H)，3.52-3.66(m，2H)，3.83(t，J＝4.6Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H)，7.23-7.33(m，5H).
参考例2 (3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯酸酯)(化合物VI-2)
将(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制、350mg，1.81mmol)溶解在二氯甲烷(18mL)中，加入亚油酸(Aldrich公司制，1.24mL，3.98mmol)、二环己基碳二亚胺(国产化学公司制，860mg，4.17mmol)、4-二甲基氨基吡啶(东京化成工业公司制，55.3mg，0.453mmol)，在室温下彻夜搅拌。在反应液中加入己烷(18mL)，过滤后，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(己烷/氯仿＝40/60～20/80)纯化，由此得到化合物VI-2(1.21g，93.0％)。
ESI-MS m/z：719(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.30-1.40(m，28H)，1.55-1.64(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.30(t，J＝7.5Hz，4H)，2.50(dd，J＝10.3，4.0Hz，2H)，2.77(t，J＝6.1Hz，4H)，3.06(dd，J＝10.3，6.1Hz，2H)，3.62(q，J＝13.8Hz，2H)，5.12(dd，J＝5.3，4.0Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H)，7.23-7.34(m，5H).
参考例3 (3R，4S)-1-苄基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-3)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4S)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，274mg，1.42mmol)及(9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，1.22g，3.54mmol)作为原料，得到化合物VI-3(398mg，40.7％)。
ESI-MS m/z：691(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.6Hz，6H)，1.29-1.40(m，30H)，1.56(dd，J＝13.0，7.1Hz，6H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.46(dd，J＝9.5，6.0Hz，2H)，2.77(t，J＝6.0Hz，4H)，3.08(dd，J＝9.5，6.0Hz，2H)，3.37-3.53(m，4H)，3.63(s，2H)，3.85-3.92(m，2H)，5.28-5.43(m，8H)，7.20-7.30(m，5H).
参考例4 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((Z)-十八烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-4)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，250mg，1.29mmol)及(Z)-十八烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，1.79g，5.17mmol)，得到化合物VI-4(507mg，56.4％)。
ESI-MS m/z：695(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.36(m，44H)，1.53-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.50(dd，J＝9.9，4.7Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.9，6.1Hz，2H)，3.34-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.6Hz，2H)，3.83(t，J＝4.7Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.23-7.32(m，5H).
参考例5 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二(十四烷基氧基)吡咯烷(化合物VI-5)
将(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，150mg，0.776mmol)溶解于二甲基亚砜(4mL)，加入氢氧化钾(348mg，6.21mmol)，在100℃下搅拌15分钟。在反应溶液中加入甲磺酸十四烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，568mg，1.94mmol)的二甲基亚砜(4mL)溶液，在100℃下搅拌4小时。冷却至室温后，加入水，用乙酸乙酯提取水层。用水、饱和氯化钠水溶液清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿100％)纯化，由此得到化合物VI-5(449mg，98.6％)。
ESI-MS m/z：587(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25-1.33(m，44H)，1.51-1.60(m，4H)，2.50(dd，J＝9.9，4.7Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.9，6.0Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.8Hz，2H)，3.83(t，J＝4.7Hz，2H)，7.21-7.33(m，5H).
参考例6 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((Z)-十六烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-6)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，146mg，0.753mmol)及(Z)-十六烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，600mg，1.88mmol)，得到化合物VI-6(231mg，48.0％)。
ESI-MS m/z：639(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.28-1.37(m，36H)，1.50-1.60(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.50(dd，J＝9.8，4.6Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.8，5.9Hz，2H)，3.34-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.6Hz，2H)，3.83(t，J＝4.6Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.20-7.34(m，5H).
参考例7 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((Z)-十八烷-6-烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-7)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制、134mg，0.693mmol)及(Z)-十八烷-6-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，600mg，1.73mmol)，得到化合物VI-7(196mg，40.7％)。
ESI-MS m/z：695(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.37(m，44H)，1.52-1.61(m，4H)，1.97-2.05(m，8H)，2.50(dd，J＝9.9，4.6Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.9，5.9Hz，2H)，3.34-3.48(m，4H)，3.59(q，J＝11.8Hz，2H)，3.83(t，J＝4.6Hz，2H)，5.28-5.41(m，4H)，7.22-7.34(m，5H).
参考例8 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-8)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，124mg，0.644mm0l)及(11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，600mg，1.61mmol)，得到化合物VI-8(210mg，43.7％)。
ESI-MS m/z：747(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.40(m，40H)，1.51-1.60(m，4H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.50(dd，J＝10.0，4.5Hz，2H)，2.77(t，J＝6.1Hz，4H)，2.85(dd，J＝10.0，6.1Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.8Hz，2H)，3.83(t，J＝4.5Hz，2H)，5.29-5.43(m，8H)，7.22-7.33(m，5H).
参考例9 (3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二基二((Z)-十八烷-9-烯酸酯)(化合物VI-9)
采用与参考例2相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，500mg，2.59mmol)及油酸(东京化成工业公司制，1.61g，5.69mmol)，得到化合物VI-9(1.85g，98.8％)。
ESI-MS m/z：723(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.55-1.65(m，4H)，2.01(q，J＝5.6Hz，8H)，2.30(t，J＝7.4Hz，4H)，2.50(dd，J＝10.2，4.1Hz，2H)，3.06(dd，J＝10.2，6.3Hz，2H)，3.63(q，J＝12.9Hz，2H)，5.12(dd，J＝5.1，4.1Hz，2H)，5.28-5.40(m，4H)，7.23-7.34(m，5H).
参考例10(3S，4S)-1-苄基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-10)
采用与参考例1相同的方法，使用(3S，4S)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，500mg，2.59mmol)及(9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，2.23g，6.47mmol)，得到化合物VI-10(966mg，54.1％)。
ESI-MS m/z：691(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.4Hz，6H)，1.28-1.38(m，32H)，1.50-1.60(m，4H)，2.04(q，J＝6.6Hz，8H)，2.49(dd，J＝10.0，4.1Hz，2H)，2.75-2.88(m，6H)，3.34-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝11.2Hz，2H)，3.82(t，J＝4.9Hz，2H)，5.27-5.43(m，8H)，7.21-7.31(m，5H).
参考例11 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二(十六烷基氧基)吡咯烷(化合物VI-11)
采用与参考例5相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，100mg，0.517mmol)及甲磺酸十六烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，415mg，1.29mmol)，得到化合物VI-11(324mg，97.6％)。
ESI-MS m/z：643(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25-1.33(m，52H)，1.50-1.58(m，4H)，2.50(dd，J＝9.9，4.8Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.9，6.0Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.8Hz，2H)，3.83(t，J＝4.8Hz，2H)，7.20-7.33(m，5H).
参考例12 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二(十八烷基氧基)吡咯烷(化合物VI-12)
采用与参考例5相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，100mg，0.517mmol)及甲磺酸十八烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，451mg，1.29mmol)，得到化合物VI-12(319mg，88.3％)。
ESI-MS m/z：699(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25-1.33(m，60H)，1.51-1.59(m，4H)，2.50(dd，J＝9.8，4.5Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.8，6.2Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.7Hz，2H)，3.83(t，J＝4.5Hz，2H)，7.21-7.33(m，5H).
参考例13 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((Z)-十四烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-13)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，80.0mg，0.414mmol)及(Z)-十四烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，301mg，1.04mmol)，得到化合物VI-13(119mg，49.5％)。
ESI-MS m/z：583(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.28-1.37(m，28H)，1.51-1.60(m，4H)，1.98-2.05(m，8H)，2.50(dd，J＝9.8，4.6Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.8，6.0Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.6Hz，2H)，3.83(t，J＝4.6Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.21-7.34(m，5H).
参考例14 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((Z)-十八烷-11-烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-14)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，112mg，0.577mmol)及(Z)-十八烷-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，500mg，1.44mmol)，得到化合物VI-14(244mg，60.8％)。
ESI-MS m/z：695(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.35(m，44H)，1.51-1.59(m，4H)，2.01(q，J＝6.1Hz，8H)，2.50(dd，J＝9.9，4.6Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.9，6.0Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.8Hz，2H)，3.83(t，J＝4.6Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H)，7.21-7.34(m，5H).
参考例15 (3R，4R)-1-苄基-3，4-二((Z)-二十烷-11-烯基氧基)吡咯烷(化合物VI-15)
采用与参考例1相同的方法，使用(3R，4R)-1-苄基吡咯烷-3，4-二醇(Diverchim S.A.公司制，103mg，0.534mmol)及(Z)-二十烷-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，500mg，1.34mmol)，得到化合物VI-15(251mg，62.7％)。
ESI-MS m/z：751(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，52H)，1.50-1.60(m，4H)，2.01(q，J＝6.0Hz，8H)，2.50(dd，J＝9.8，4.4Hz，2H)，2.85(dd，J＝9.8，6.2Hz，2H)，3.35-3.47(m，4H)，3.59(q，J＝12.8Hz，2H)，3.83(t，J＝4.4Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H)，7.21-7.34(m，5H).
参考例16 (反式-1-苄基吡咯烷-3，4-二基)二甲醇
将参照国际公开第2009/027820号小册子合成的反式-二乙基1-苄基吡咯烷-3，4-二甲酸酯(830mg，2.72mmol)溶解于THF(24mL)，在0℃下加入氢化铝锂(206mg，5.44mmol)，室温下搅拌1.3小时。向反应混合物中加入硫酸钠十水合物、氯仿、硅藻土，室温下进一步搅拌。加入无水硫酸镁后过滤，减压下浓缩滤液。加入己烷滤取固体，由此得到(反式-1-苄基吡咯烷-3，4-二基)二甲醇(565mg，93.9％)。
ESI-MS m/z：222(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.17-2.28(m，2H)，2.35(dd，J＝9.0，5.1Hz，2H)，2.77(dd，J＝9.0，7.1Hz，2H)，3.56-3.68(m，6H)，7.22-7.34(m，5H).
参考例17 反式-1-苄基-3，4-二(((Z)-十六烷-9-烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物VI-16)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例16中得到的(反式-1-苄基吡咯烷-3，4-二基)二甲醇(150mg，0.678mmol)及(Z)-十六烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，540mg，1.70mmol)，得到化合物VI-16(372mg，82.3％)。
ESI-MS m/z：667(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.28-1.35(m，36H)，1.49-1.57(m，4H)，1.95-2.10(m，10H)，2.37(dd，J＝9.2，5.5Hz，2H)，2.67(dd，J＝9.2，7.0Hz，2H)，3.31-3.44(m，8H)，3.57(dd，J＝18.1，13.0Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.19-7.32(m，5H).
参考例18 N-苄基二乙醇胺
在二乙醇胺(1.80g，17.1mmol)的氯仿(46mL)溶液中添加二异丙基乙基胺(2.99mL，17.1mmol)和苄基溴(1.36mL，11.4mmol)，加热回流下搅拌5小时。将反应溶液用水、饱和碳酸氢钠水、饱和食盐水清洗，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(甲醇/氯仿＝0/100～12/88)纯化，由此得到N-苄基二乙醇胺(1.77g，79.4％)。
ESI-MS m/z：196(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.29(br s，2H)，2.73(t，J＝5.3Hz，4H)，3.63(t，J＝5.3Hz，4H)，3.71(s，2H)，7.24-7.37(m，5H).
参考例19 N-苄基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物VI-17)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例18中得到的N-苄基二乙醇胺(149mg，0.763mmol)及(Z)-十八烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-ChekPrep，Inc公司制，661mg，1.91mmol)，得到化合物VI-17(257mg，48.4％)。
ESI-MS m/z：697(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27(br s，44H)，1.50-1.58(m，4H)，1.97-2.04(m，8H)，2.74(t，J＝6.2Hz，4H)，3.37(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50(t，J＝6.2Hz，4H)，3.71(s，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.21-7.35(m，5H).
参考例20 N-苄基-N，N-二(2-((Z)-十四烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物VI-18)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例18中得到的N-苄基二乙醇胺(171mg，0.876mmol)及(Z)-十四烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-ChekPrep，Inc公司制、636mg，2.19mmol)，得到化合物VI-18(424mg，82.9％)。
ESI-MS m/z：585(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.1Hz，6H)，1.25-1.35(m，28H)，1.50-1.57(m，4H)，1.97-2.05(m，8H)，2.74(t，J＝6.3Hz，4H)，3.37(t，J＝6.7Hz，4H)，3.50(t，J＝6.3Hz，4H)，3.71(s，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.19-7.36(m，5H).
参考例21 N-苄基-N，N-二(2-(十四烷基氧基)乙基)胺(化合物VI-19)
采用与参考例5相同的方法，使用参考例18中得到的N-苄基二乙醇胺(171mg，0.876mmol)及甲磺酸十四烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，640mg，2.19mmol)，得到化合物VI-19(173mg，33.6％)。
ESI-MS m/z：589(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25(br s，44H)，1.50-1.58(m，4H)，2.74(t，J＝6.1Hz，4H)，3.37(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50(t，J＝6.3Hz，4H)，3.71(s，2H)，7.21-7.36(m，5H).
参考例22 N-苄基-N，N-二(2-(十六烷基氧基)乙基)胺(化合物VI-20)
采用与参考例5相同的方法，使用参考例18中得到的N-苄基二乙醇胺(171mg，0.876mmol)及甲磺酸十六烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，702mg，2.19mmol)，得到化合物VI-20(411mg，72.9％)。
ESI-MS m/z：645(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25(br s，52H)，1.50-1.58(m，4H)，2.74(t，J＝6.3Hz，4H)，3.37(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50(t，J＝6.3Hz，4H)，3.71(s，2H)，7.21-7.36(m，5H).
参考例23 N-苄基-N，N-二(2-(十八烷基氧基)乙基)胺(化合物VI-21)
采用与参考例5相同的方法，使用参考例18中得到的N-苄基二乙醇胺(171mg，0.876mmol)及甲磺酸十八烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，763mg，2.19mmol)，得到化合物VI-21(421mg，68.7％)。
ESI-MS m/z：701(M+H)⁺；1H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25(br s，60H)，1.49-1.58(m，4H)，2.74(t，J＝6.3Hz，4H)，3.37(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50(t，J＝6.3Hz，4H)，3.71(s，2H)，7.19-7.35(m，5H).
参考例24 N-苄基-N，N-二(2-((Z)-十六烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物VI-22)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例18中得到的N-苄基二乙醇胺(277mg，1.42mmol)及(Z)-十六烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-ChekPrep，Inc公司制，1.13g，3.55mmol)，得到化合物VI-22(739mg，81.4％)。
ESI-MS m/z：641(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.28-1.35(m，36H)，1.49-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.74(t，J＝6.2Hz，4H)，3.37(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50(t，J＝6.2Hz，4H)，3.71(s，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.19-7.35(m，5H).
参考例25 反式-1-苄基-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物VI-23)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例16中得到的(反式-1-苄基吡咯烷-3，4-二基)二甲醇(150mg，0.678mmol)及(Z)-十八烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，597mg，1.70mmol)，得到化合物VI-23(359mg，73.4％)。
ESI-MS m/z：723(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.36(m，44H)，1.48-1.57(m，4H)，1.98-2.08(m，10H)，2.37(dd，J＝9.0，5.1Hz，2H)，2.67(dd，J＝9.0，7.2Hz，2H)，3.31-3.43(m，8H)，3.52-3.63(m，2H)，5.29-5.40(m，4H)，7.21-7.31(m，5H).
参考例26 反式-1-苄基-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物VI-24)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例16中得到的(反式-1- 苄基吡咯烷-3，4-二基)二甲醇(150mg，0.678mmol)及(9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，584mg，1.70mmol)，得到化合物VI-24(384mg，78.9％)。
ESI-MS m/z：719(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.4Hz，6H)，1.28-1.40(m，32H)，1.48-1.57(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，10H)，2.37(dd，J＝9.0，4.9Hz，2H)，2.67(dd，J＝9.0，7.1Hz，2H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.30-3.43(m，8H)，3.51-3.63(m，2H)，5.28-5.43(m，8H)，7.20-7.31(m，5H).
参考例27 反式-1-苄基-3，4-二(((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物VI-25)
采用与参考例1相同的方法，使用参考例16中得到的(反式-1-苄基吡咯烷-3，4-二基)二甲醇(150mg，0.678mmol)及(11Z，14Z)-二十烷-9，12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，631mg，1.70mmol)，得到化合物VI-25(423mg，80.6％)。
ESI-MS m/z：775(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.38(m，40H)，1.49-1.57(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，10H)，2.37(dd，J＝9.2，5.1Hz，2H)，2.67(dd，J＝9.1，7.1Hz，2H)，2.77(t，J＝6.0Hz，4H)，3.31-3.43(m，8H)，3.52-3.62(m，2H)，5.29-5.43(m，8H)，7.21-7.31(m，5H).
参考例28 反式-1-(叔丁氧基羰基)-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯氧基)甲基)吡咯烷(化合物XIII-1)
采用与参考例2相同的方法，使用参照国际公开第2006/100036号小册子合成的反式-3，4-二(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(156mg，0.674mmol)及油酸(东京化成工业公司制，419mg，1.48mmol)，得到化合物XIII-1(280mg，54.6％)。
ESI-MS m/z：761(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25-1.46(m，36H)，1.46(s，9H)，1.46-1.66(m，8H)，1.97-2.04(m，8H)，2.27-2.38(m，6H)，3.10-3.23(m，2H)，3.53-3.66(m，2H)，4.03(dd，J＝10.8，6.0Hz，2H)，4.14(dd，J＝10.8，6.0Hz，2H)，5.28-5.40(m，4H).
参考例29 反式-1-(叔丁氧基羰基)-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)甲基)吡咯烷(化合物XIII-2)
采用与参考例2相同的方法，使用参照国际公开第2006/100036号小册子合成的反式-3，4-二(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.674mmol)及亚油酸(Aldrich公司制，400mg，1.48mmol)，得到化合物XIII-2(351mg，71.7％)。
ESI-MS m/z：757(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.21-1.45(m，26H)，1.46(s，9H)，1.47-1.68(m，6H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.26-2.38(m，6H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.10-3.23(m，2H)，3.53-3.66(m，2H)，4.03(dd，J＝11.0，6.0Hz，2H)，4.14(dd，J＝11.0，6.0Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例1]
(3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物1)
将参考例1中得到的化合物VI-1(6.96g，10.1mmol))溶解于1，2-二氯乙烷(100mL)，加入氯甲酸1-氯乙基酯(东京化成工业公司制，3.30mL，30.3mmol)，在130℃下搅拌1小时。反应溶液中加入甲醇(100mL)，在130℃下进一步搅拌1小时。冷却至室温后，减压下浓缩，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～92/8)纯化。收集含有化合物的馏分，用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液清洗，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩，由此得到化合物1(5.56g，92.0％)。
ESI-MS m/z：601(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.29-1.41(m，30H)，1.49-1.60(m，4H)，1.67(br s，3H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.75-2.85(m，6H)，3.09(dd，J＝12.4，5.1Hz，2H)，3.37-3.49(m，4H)，3.76(dd，J＝5.0，3.3Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例2]
(3R，4R)-吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯酸酯)(化合物2)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例2中得到的化合物VI-2(1.51g，2.10mmol)，得到化合物2(1.20g，90.9％)。
ESI-MS m/z：629(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.41(m，29H)，1.56-1.68(m，4H)，2.05(q，J＝6.4Hz，8H)，2.30(t，J＝7.6Hz，4H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，2.87(dd，J＝13.0，3.0Hz，2H)，3.32(dd，J＝13.0，5.0Hz，2H)，5.08(dd，J＝5.0，3.0Hz，2H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例3]
(3R，4S)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物3)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例3中得到的化合物VI-3(346mg，0.501mmol)，得到化合物3(245mg，81.3％)。
ESI-MS m/z：601(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.7Hz，6H)，1.30-1.40(m，30H)，1.54-1.68(m，8H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.00(d，J＝5.0Hz，3H)，3.41-3.55(m，4H)，3.83(t，J＝3.8Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例4]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-十八烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物4)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例4中得到的化合物VI-4(455mg，0.655mmol)，得到化合物4(333mg，84.1％)。
ESI-MS m/z：605(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.5Hz，6H)，1.26-1.35(m，38H)，1.50-1.58(m，11H)，2.01(q，J＝6.5Hz，8H)，2.82(dd，J＝12.4，3.0Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.4，5.0Hz，2H)，3.43(td，J＝6.5，1.3Hz，4H)，3.76(dd，J＝5.0，3.0Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例5]
(3R，4R)-3，4-二(十四烷基氧基)吡咯烷(化合物5)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例5中得到的化合物VI-5(454mg，0.775mmol)，得到化合物5(331mg，86.1％)。
ESI-MS m/z：497(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.34(m，41H)，1.50-1.59(m，4H)，1.66(br s，4H)，2.82(dd，J＝12.6，3.0Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.6，5.0Hz，2H)，3.40-3.46(m，4H)，3.76(dd，J＝5.0，3.0Hz，2H).
[实施例6]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-十六烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物6)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例6中得到的化合物VI-6(208mg，0.326mmol)，得到化合物6(160mg，89.2％)。
ESI-MS m/z：549(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.36(m，34H)，1.50-1.59(m，4H)，1.82(br s，3H)，2.01(q，J＝6.2Hz，8H)，2.84(dd，J＝12.5，3.0Hz，2H)，3.10(dd，J＝12.5，5.0Hz，2H)，3.43(t，J＝6.8Hz，4H)，3.77(dd，J＝5.0，3.0Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例7]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-十八烷-6-烯基氧基)吡咯烷(化合物7)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例7中得到的化合物VI-7(171mg，0.246mmol)，得到化合物7(123mg，82.2％)。
ESI-MS m/z：605(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.38(m，40H)，1.51-1.61(m，4H)，1.64(s，5H)，1.97-2.06(m，8H)，2.82(dd，J＝12.5，3.3Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.5，5.1Hz，2H)，3.41-3.46(m，4H)，3.76(dd，J＝4.6，3.3Hz，2H)，5.29-5.41(m，4H).
[实施例8]
(3R，4R)-3，4-二((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)吡咯烷(化合物8)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例8中得到的化合物VI-8(186mg，0.249mmol)，得到化合物8(144mg，87.5％)。
ESI-MS m/z：657(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.40(m，36H)，1.50-1.59(m，4H)，1.64(s，5H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.75-2.85(m，6H)，3.09(dd，J＝12.5，5.0Hz，2H)，3.43(td，J＝6.7，1.3Hz，4H)，3.76(dd，J＝5.0，2.9Hz，2H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例9]
(3R，4R)-吡咯烷-3，4-二基二((Z)-十八烷-9-烯酸酯)(化合物9)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例9中得到的化合物VI-9(1.79g，2.48mmol)，得到化合物9(965mg，61.6％)。
ESI-MS m/z：633(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.36(m，38H)，1.56-1.64(m，7H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.30(t，J＝7.6Hz，4H)，2.87(dd，J＝13.1，2.8Hz，2H)，3.32(dd，J＝13.1，5.1Hz，2H)，5.09(dd，J＝5.1，2.8Hz，2H)，5.28-5.41(m，4H).
[实施例10]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物10)
将实施例1中得到的化合物1(4.00g，6.67mmol)溶解于1，2-二氯乙烷(50mL)、甲醇(50mL)中，加入甲醛(4.96mL，66.7mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(Acros Organics公司制、7.06g，33.3mmol)，在室温下搅拌1小时。在反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(AcrosOrganics公司制，7.06g，33.3mmol)，在室温下进一步搅拌2.5小时。反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。将有机层用饱和氯化钠水溶液清洗，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～95/5)纯化，由此得到化合物10(3.99g，97.4％)。
ESI-MS m/z：615(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.30-1.41(m，30H)，1.52-1.62(m，4H)，1.70(br s，2H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.31(s，3H)，2.47(dd，J＝9.9，4.0Hz，2H)，2.75-2.86(m，6H)，3.36-3.49(m，4H)，3.81(dd，J＝5.5，4.5Hz，2H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例11]
(3R，4S)-1-甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物11)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例3中得到的化合物3(194mg，0.323mmol)，得到化合物11(129mg，64.6％)。
ESI-MS m/z：615(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.30-1.40(m，28H)，1.54-1.62(m，4H)，1.76(br s，4H)，2.05(q，J＝5.9Hz，8H)，2.38(s，3H)，2.46-2.51(m，2H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.06-3.11(m，2H)，3.39-3.55(m，4H)，3.90(t，J＝3.8Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例12]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二((Z)-十八烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物 12)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例4中得到的化合物4(100mg，0.166mmol)，得到化合物12(81.0mg，79.4％)。
ESI-MS m/z：619(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.23-1.35(m，44H)，1.52-1.61(m，4H)，2.01(q，J＝5.8Hz，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝9.8，4.4Hz，2H)，2.82(dd，J＝9.8，5.8Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(t，J＝4.4Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例13]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二(十四烷基氧基)吡咯烷(化合物13)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例5中得到的化合物5(74.0mg，0.149mmol)，得到化合物13(73.6mg，96.8％)。
ESI-MS m/z：511(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.35(m，44H)，1.52-1.61(m，4H)，2.31(s，3H)，2.47(dd，J＝9.8，4.2Hz，2H)，2.83(dd，J＝9.8，5.5Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(dd，J＝5.5，4.2Hz，2H).
[实施例14]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-十六烷-9-烯基氧基)-1-甲基吡咯烷(化合物14)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例6中得到的化合物6(107mg，0.195mmol)，得到化合物14(107mg，97.4％)。
ESI-MS m/z：563(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.38(m，34H)，1.52-1.62(m，4H)，1.67(br s，2H)，2.01(q，J＝6.1Hz，8H)，2.32(s，3H)，2.47(dd，J＝9.8，4.4Hz，2H)，2.83(dd，J＝9.8，5.8Hz，2H)，3.36-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.4Hz，2H)，5.29-5.41(m，4H).
[实施例15]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二((Z)-十八烷-6-烯基氧基)吡咯烷(化合物15)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例7中得到的化合物7(80.0mg，0.132mmol)，得到化合物14(75.3mg，91.8％)。
ESI-MS m/z：619(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.41(m，44H)，1.53-1.63(m，4H)，1.97-2.06(m，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝9.6，4.2Hz，2H)，2.82(dd，J＝9.6，5.6Hz，2H)，3.36-3.49(m，4H)，3.81(dd，J＝5.6，4.2Hz，2H)，5.28-5.41(m，4H).
[实施例16]
(3R，4R)-3，4-二((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)-1-甲基吡咯烷(化合物16)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例8中得到的化合物8(90.0mg，0.137mmol)，得到化合物16(87.4mg，95.0％)。
ESI-MS m/z：671(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.41(m，40H)，1.52-1.61(m，4H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝10.0，4.5Hz，2H)，2.77(t，J＝5.7Hz，4H)，2.82(dd，J＝10.0，5.7Hz，2H)，3.36-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.5Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例17]
(3R，4R)-1-乙基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物17)
将实施例1中得到的化合物1(70.0mg，0.117mmol)溶解于乙醇(2mL)，加入碳酸钾(32.2mg，0.233mmol)、碘乙烷(0.0104mL，0.128mmol)，室温下搅拌2天。减压下浓缩反应溶液，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～96/4)纯化，由此得到化合物17(33.3 mg，45.4％)。
ESI-MS m/z：629(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.11(t，J＝6.8Hz，2H)，1.30-1.38(m，29H)，1.55(br s，10H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.53(br s，2H)，2.77(t，J＝5.6Hz，4H)，2.88(br s，2H)，3.44(t，J＝6.6Hz，4H)，3.83(t，J＝4.6Hz，2H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例18]
(3R，4R)-1-乙基-3，4-二((Z)-十八烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物18)
采用与实施例17相同的方法，使用实施例4中得到的化合物4(40.0mg，0.066mmol)，得到化合物18(13.4mg，32.0％)。
ESI-MS m/z：633(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.08(t，J＝7.1Hz，3H)，1.23-1.35(m，44H)，1.52-1.59(m，4H)，2.01(q，J＝6.2Hz，8H)，2.37-2.52(m，4H)，2.84(dd，J＝9.5，6.2Hz，2H)，3.41-3.45(m，4H)，3.81(t，J＝4.9Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例19]
(3R，4R)-1，1-二甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷氯化物(化合物19)
在实施例10中得到的化合物10(24.6mg，0.0401mmol)中加入碘代甲烷(1mL)，在室温下搅拌4小时。减压下浓缩反应液，将残渣装载在阴离子交换树脂(Dowex1x-200氯化物型(The Dow ChemicalCompany公司制)，0.5mL，用水和甲醇进行预清洗)中，用甲醇洗脱。将洗脱液在减压下浓缩，将残渣用硅胶柱色谱法(甲醇/氯仿＝0/100～25/75)纯化，由此得到化合物19(24.9mg，93.5％)。
ESI-MS m/z：629M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29(s，32H)，1.50-1.57(m，4H)，1.58(s，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.44-3.57(m，4H)，3.67(s，6H)，3.86(dd，J＝13.4，3.8Hz，2H)，4.04-4.13(m，4H)，5.29-5.42(m，8H).
[实施例20]
(3R，4R)-1，1-二甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)吡咯烷氯化物(化合物20)
采用与实施例19相同的方法，使用参考例30中得到的化合物A-3(1.16g，1.81mmol)，得到化合物20(1.21g，96.4％)。
ESI-MS m/z：657M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.38(m，26H)，1.57-1.67(m，4H)，1.78(s，2H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.39(t，J＝7.6Hz，4H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.78(s，6H)，4.15(dd，J＝14.0，3.0Hz，2H)，4.38(dd，J＝14.0，5.8Hz，2H)，5.27-5.46(m，10H).
[实施例21]
(3R，4S)-1，1-二甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷氯化物(化合物21)
采用与实施例19相同的方法，使用实施例11中得到的化合物11(76.0mg，0.124mmol)，得到化合物21(62.8mg，76.6％)。
ESI-MS m/z：629M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.7Hz，6H)，1.23-1.41(m，30H)，1.52-1.61(m，4H)，1.93-2.17(m，2H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.41(s，3H)，3.47-3.64(m，9H)，4.43-4.50(m，2H)，4.58(br s，2H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例22]
(3R，4R)-1，1-二甲基-3，4-二((Z)-十八烷-9-烯基氧基)吡咯烷氯化物(化合物221
将实施例4中得到的化合物4(135mg，0.223mmol)溶解于甲醇(2mL)，加入碳酸钾(154mg，1.12mmol)、碘代甲烷(0.699mL，11.2mmol)，室温下彻夜搅拌。减压下浓缩反应溶液，将残渣装载于阴离子交换树脂(Dowex1x-200氯化物型(The Dow Chemical Company公司制)，1mL，用水和甲醇进行预清洗)，用甲醇洗脱。减压下浓缩洗脱液，将残渣用硅胶柱色谱法(甲醇/氯仿＝0/100～70/30)纯化，由此得到化合物22(27.8mg，18.6％)。
ESI-MS m/z：633M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.36(m，40H)，1.50-1.59(m，4H)，1.62(s，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，3.44-3.58(m，4H)，3.66(s，6H)，3.86(dd，J＝13.2，4.0Hz，2H)，4.02-4.13(m，4H)，5.29-5.41(m，4H).
[实施例23]
(3R，4R)-1，1-二甲基-3，4-二((Z)-十八烷-9-烯氧基)吡咯烷氯化物(化合物23)
采用与实施例19相同的方法，使用参考例31中得到的化合物A-4(430mg，0.666mmol)，得到化合物23(442mg，95.2％)。
ESI-MS m/z：661M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.35(m，38H)，1.58-1.67(m，4H)，1.76(br s，2H)，2.01(q，J＝5.1Hz，8H)，2.38(t，J＝7.5Hz，4H)，3.78(s，6H)，4.15(dd，J＝13.6，2.6Hz，2H)，4.37(dd，J＝13.6，5.7Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H)，5.43-5.46(m，2H).
[实施例24]
3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1，2-二醇(化合物24)
将实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)溶解于1-丙醇(1mL)，加入缩水甘油(0.111mL，1.67mmol)，进行微波照射(300W，100℃，2小时)。在反应溶液中加入水，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～87/13)纯化，由此得到化合物24(30.4mg，27.1％)。
ESI-MS m/z：675(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，3.0H)，0.93(t，J＝7.3Hz，3.0H)，1.26-1.38(m，22.0H)，1.51-1.67(m，8.0H)，2.05(q，J＝6.4Hz，8.0H)，2.33-2.42(m，1.0H)，2.54(dd，J＝10.2，4.3Hz，1.0H)，2.66-2.90(m，7.0H)，3.04(dd，J＝9.9，5.9Hz，1.0H)，3.40-3.58(m，9.5H)，3.63-3.88(m，7.5H)，5.28-5.44(m，8.0H).
[实施例25]
(3R，4R)-1-(2-(二甲基氨基)乙酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物25)
将实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)溶解于氯仿(2mL)，加入N，N-二甲基甘氨酸盐酸盐(东京化成工业公司制，46.5mg，0.333mmol)、二异丙基乙基胺(0.146mL，0.833mmol)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(渡边化学工业公司制，217mg，0.417mmol)，在室温下搅拌1.5小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿提取水层。用饱和氯化钠水溶液清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～95/5)纯化，由此得到化合物25(98.9mg，86.8％)。
ESI-MS m/z：686(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.41(m，32H)，1.49-1.57(m，4H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.31(s，6H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.06(s，2H)，3.37-3.70(m，8H)，3.84-3.91(m，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例26]
(3R，4R)-1-(2-(二甲基氨基)乙酰基)吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯酸酯)(化合物26)
采用与实施例25相同的方法，使用在实施例2中得到的化合物 2(300mg，0.478mmol)及N，N-二甲基甘氨酸盐酸盐(东京化成工业公司制、133mg，0.955mmol)，得到化合物26(297mg，87.2％)。
ESI-MS m/z：714(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.40(m，28H)，1.56-1.64(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.27-2.35(m，10H)，2.77(t，J＝5.7Hz，4H)，3.06(s，2H)，3.66-3.91(m，4H)，5.18(d，J＝4.0Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例27]
(3R，4R)-1-(2-(二甲基氨基)乙酰基)吡咯烷-3，4-二基二((Z)-十八烷-9-烯酸酯)(化合物27)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例9中得到的化合物9(200mg，0.316mmol)及N，N-二甲基甘氨酸盐酸盐(东京化成工业公司制，88mg，0.633mmol)，得到化合物27(210mg，92.5％)。
ESI-MS m/z：718(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.56-1.64(m，4H)，2.01(q，J＝6.2Hz，8H)，2.27-2.34(m，10H)，3.06(s，2H)，3.66-3.91(m，4H)，5.18(d，J＝3.7Hz，2H)，5.34(tt，J＝11.2，4.6Hz，4H).
[实施例28]
(3R，4R)-1-(3-(二甲基氨基)丙酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物28)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(63.0mg，0.105mmol)及3-(二甲基氨基)丙酸(MATRIX Scientific公司制，24.6mg，0.210mmol)，得到化合物28(43.2mg，58.8％)。
ESI-MS m/z：700(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.28-1.38(m，32H)，1.48-1.57(m，4H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.75-2.85(m，6H)，2.95(s，6H)，3.42-3.53(m，8H)，3.59-3.66(m，2H)，3.86-3.95(m，2H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例29]
(3R，4R)-1-(3-(二甲基氨基)丙酰基)吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯酸酯)(化合物29)
采用与实施例25相同的方法，使用在实施例2中得到的化合物2(60.0mg，0.096mmol)及3-(二甲基氨基)丙酸(MATRIX Scientific公司制，22.4mg，0.191mmol)，得到化合物29(57.6mg，82.9％)。
ESI-MS m/z：728(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.26-1.40(m，28H)，1.55-1.63(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.27-2.34(m，10H)，2.44(t，J＝7.4Hz，2H)，2.68(t，J＝7.4Hz，2H)，2.77(t，J＝5.7Hz，4H)，3.55(d，J＝12.1Hz，1H)，3.64-3.78(m，2H)，3.82(dd，J＝12.1，4.0Hz，1H)，5.18(d，J＝4.0Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例30]
(3R，4R)-1-(3-(二甲基氨基)丙酰基)吡咯烷-3，4-二基二((Z)-十八烷-9-烯酸酯)(化合物30)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例9中得到的化合物9(200mg，0.316mmol)及3-(二甲基氨基)丙酸(MATRIX Scientific公司制，74.1mg，0.633mmol)，得到化合物35(209mg，90.3％)。
ESI-MS m/z：732(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，38H)，1.56-1.65(m，4H)，1.74(br s，2H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.28-2.34(m，10H)，2.46(t，J＝7.3Hz，2H)，2.72(t，J＝7.3Hz，2H)，3.55(d，J＝12.1Hz，1H)，3.67-3.85(m，3H)，5.19(d，J＝3.7Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例31]
(3R，4R)-1-((S)-2，6-二氨基己酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物31)
将Nε-(叔丁氧基羰基)-Nα-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸(东京化成工业公司制，125mg，0.267mm0l)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(渡边化学工业公司制，146mg，0.280mmol)溶解于氯仿(1mL)，室温下搅拌1小时。反应溶液中加入实施例1中得到的化合物1(80.0mg，0.133mmol)的氯仿(2mL)溶液，室温下搅拌7小时。反应混合物中加入Nε-(叔丁氧基羰基)-Nα-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸(东京化成工业公司制，187mg，0.400mmol)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(渡边化学工业公司制，222mg，0.427mmol)，室温下彻夜搅拌。在反应混合物中加入Nε-(叔丁氧基羰基)-Nα-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸(东京化成工业公司制，156mg，0.333mmol)、0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(Aldrich公司制，152mg，0.400mmol)，室温下彻夜搅拌，80℃下搅拌3小时。冷却至室温后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用饱和氯化钠水溶液清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。使得到的残渣通过硅胶垫(silicagel pad)，由此得到(5S)-5-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-6-(3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-6-氧代己基氨基甲酸叔丁基酯的粗产物。
将得到的粗产物溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(0.103mL，1.33mmol)，在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入三氟乙酸(0.205mL，2.67mmol)，室温下搅拌4.5小时。反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿提取水层。用饱和氯化钠水溶液清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～87/13)纯化，由此得到(9H-芴-9-基)甲基(2S)-6-氨基-1-(3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-1-氧代己烷-2-基氨基甲酸酯(66.1mg，52.2％，以2个步骤)。
将得到的(9H-芴-9-基)甲基(2S)-6-氨基-1-(3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-1-氧代己烷-2-基氨基甲酸酯(65mg，0.068mmol)溶解于四氢呋喃(2mL)，加入吡咯烷(0.5mL)，在室温下搅拌5小时。将反应混合物在减压下浓缩，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～60/40)纯化，由此得到化合物31(24.0mg，48.2％)。
ESI-MS m/z：729(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.26-1.38(m，32H)，1.50-1.74(m，10H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.01(br s，2H)，3.32-3.72(m，8H)，3.86(br s，2H)，3.93(br s，1H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例32]
N-甲基-N，N-二(2-((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)乙基)胺(化合物32)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制、119mg，0.999mmol)及(9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，861mg，2.50mmol)，得到化合物32(68.3mg，11.1％)。
ESI-MS m/z：617(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.29(br s，32H)，1.50-1.61(m，4H)，2.00-2.09(m，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，2.77(t，J＝5.6Hz，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.27-5.44(m，8H).
[实施例33]
N-甲基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物33)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，119mg，0.999mmol)及(Z)-十八烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，865mg，2.50mmol)，得到化合物33(156mg，25.2％)。
ESI-MS m/z：621(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25-1.34(m，44H)，1.51-1.60(m，4H)，1.97-2.04(m，8H)，2.33(s，3H)，2.63(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.28-5.40(m，4H).
[实施例34]
N-甲基-N，N-二(2-(十四烷基氧基)乙基)胺(化合物34)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，119mg，0.999mmol)及甲磺酸十四烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，731mg，2.50mmol)，得到化合物34(99.3mg，0.194mmol)。
ESI-MS m/z：513(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26(br s，44H)，1.51-1.60(m，4H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.52(t，J＝5.9Hz，4H).
[实施例35]
N-甲基-N，N-二(2-((Z)-十六烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物35)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，82.6mg，0.693mmol)及(Z)-十六烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，530mg，1.66mmol)，得到化合物35(199mg，50.9％)。
ESI-MS m/z：565(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29(br s，36H)，1.51-1.56(m，4H)，1.97-2.04(m，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.28-5.40(m，4H).
[实施例36]
N-甲基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-6-烯基氧基)乙基)胺(化合物36)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，66.3mg，0.557mmol)及(Z)-十八烷-6-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，463mg，1.34mmol)，得到化合物36(205mg，59.4％)。
ESI-MS m/z：621(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.24-1.37(m，44H)，1.52-1.63(m，4H)，1.97-2.06(m，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.6Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例37]
N-甲基-N，N-二(2-(十八烷基氧基)乙基)胺(化合物37)
采用与参考例5相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，179mg，1.50mmol)及1-溴代十八烷(东京化成工业公司制，1.20g，3.60mmol)，得到化合物37(218mg，23.3％)。
ESI-MS m/z：625(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26(s，60H)，1.51-1.60(m，4H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.6Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H).
[实施例38]
(3R，4R)-3，4-二(十六烷基氧基)吡咯烷(化合物38)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例11中得到的化合物VI-11(288mg，0.449mmol)，得到化合物38(210mg，84.8％)。
ESI-MS m/z：553(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.34(m，50H)，1.50-1.59(m，4H)，1.66-1.68(m，3H)，2.82(dd，J＝12.5，3.0Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.5，5.0Hz，2H)，3.43(td，J＝6.6，0.7Hz，4H)，3.76(dd，J＝5.0，3.0Hz，2H).
[实施例39]
(3R，4R)-3，4-二(十八烷基氧基)吡咯烷(化合物39)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例12中得到的化合物VI-12(290mg，0.415mmol)，得到化合物39(209mg，82.6％)。
ESI-MS m/z：609(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.34(m，58H)，1.50-1.59(m，4H)，1.64(br s，3H)，2.82(dd，J＝12.3，3.1Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.3，5.0Hz，2H)，3.43(t，J＝6.6Hz，4H)，3.77(dd，J＝5.0，3.1Hz，2H).
[实施例40]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-十四烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物40)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例13中得到的化合物VI-13(100mg，0.172mmol)，得到化合物40(71.4mg，84.0％)。
ESI-MS m/z：492(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.87-0.92(m，6H)，1.29-1.35(m，26H)，1.50-1.59(m，4H)，1.64(br s，3H)，2.02(q，J＝5.9Hz，8H)，2.82(dd，J＝12.5，2.9Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.5，4.9Hz，2H)，3.37-3.49(m，4H)，3.76(dd，J＝4.9，2.9Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例41]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-十八烷-11-烯基氧基)吡咯烷(化合物41)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例14中得到的化合物VI-14(220mg，0.317mmol)，得到化合物41(157mg，82.0％)。
ESI-MS m/z：605(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.37(m，42H)，1.50-1.59(m，4H)，1.87(br s，2H)，2.01(q，J＝6.1Hz，8H)，2.83(dd，J＝12.5，2.9Hz，2H)，3.10(dd，J＝12.5，5.0Hz，2H)，3.43(t，J＝6.8Hz，4H)，3.77(dd，J＝5.0，2.9Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例42]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-二十烷-11-烯基氧基)吡咯烷(化合物42)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例15中得到的化合物VI-15(225mg，0.300mmol)，得到化合物42(168mg，84.6％)。
ESI-MS m/z：661(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.36(m，50H)，1.50-1.59(m，4H)，1.78(br s，2H)，2.01(q，J＝6.2Hz，8H)，2.82(dd，J＝12.5，2.9Hz，2H)，3.09(dd，J＝12.5，5.0Hz，2H)，3.43(td，J＝6.7，0.9Hz，4H)，3.76(dd，J＝5.0，2.9Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例43]
(3S，4S)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物43)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例10中得到的化合物VI-10(929mg，1.35mmol)，得到化合物43(728mg，90.1％)。
ESI-MS m/z：601(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.30-1.41(m，30H)，1.50-1.60(m，4H)，1.65(br s，3H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.75-2.85(m，6H)，3.09(dd，J＝12.5，5.3Hz，2H)，3.43(t，J＝6.6Hz，4H)，3.75-3.78(m，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例44]
反式-3，4-二(((Z)-十六烷-9-烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物44)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例17中得到的化合物VI-16(335mg，0.503mmol)，得到化合物44(260mg，89.7％)。
ESI-MS m/z：577(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.35(m，36H)，1.50-1.59(m，4H)，1.96-2.07(m，10H)，2.70(dd，J＝11.1，5.7Hz，2H)，3.06(dd，J＝11.1，7.3Hz，2H)，3.28-3.46(m，8H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例45]
(3R，4R)-3，4-二(十六烷基氧基)-1-甲基吡咯烷(化合物45)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例38中得到的化合物38(175mg，0.317mmol)，得到化合物45(182mg)。
ESI-MS m/z：567(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.35(m，52H)，1.52-1.61(m，4H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝9.6，4.3Hz，2H)，2.82(dd，J＝9.6，5.5Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(dd，J＝5.5，4.3Hz，2H).
[实施例46]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二(十八烷基氧基)吡咯烷(化合物46)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例39中得到的化合物39(174mg，0.286mmol)，得到化合物46(169mg，95.0％)。
ESI-MS m/z：623(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.35(m，60H)，1.52-1.61(m，4H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝9.9，4.3Hz，2H)，2.82(dd，J＝9.9，5.6Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(dd，J＝5.6，4.3Hz，2H).
[实施例47]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二((Z)-十四烷-9-烯基氧基)吡咯烷(化合物47)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例40中得到的化合物40(55mg，0.112mmol)，得到化合物47(53.4mg，93.6％)。
ESI-MS m/z：507(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.87-0.92(m，6H)，1.26-1.35(m，28H)，1.52-1.61(m，4H)，1.98-2.05(m，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝9.9，4.2Hz，2H)，2.82(dd，J＝9.9，5.6Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(dd，J＝5.6，4.2Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例48]
(3R，4R)-1-甲基-3，4-二((Z)-十八烷-11-烯基氧基)吡咯烷(化合物48)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例41中得到的化合物41(130mg，0.215mmol)，得到化合物48(125mg，94.3％)。
ESI-MS m/z：619(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.36(m，44H)，1.52-1.61(m，4H)，2.01(q，J＝6.1Hz，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝9.9，4.0Hz，2H)，2.82(dd，J＝9.9，5.9Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(t，J＝4.9Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例49]
(3R，4R)-3，4-二((Z)-二十烷-11-烯基氧基)-1-甲基吡咯烷(化合物49)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例42中得到的化合物42(141mg，0.214mmol)，得到化合物49(132mg，91.7％)。
ESI-MS m/z：675(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.36(m，52H)，1.52-1.61(m，4H)，2.01(q，J＝6.1Hz，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝10.0，4.2Hz，2H)，2.82(dd，J＝10.0，5.9Hz，2H)，3.37-3.48(m，4H)，3.81(t，J＝4.8Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例50]
(3S，4S)-1-甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物50)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例43中得到的化合物43(325mg，0.542mmol)，得到化合物50(330mg，99.2％)。
ESI-MS m/z：615(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.7Hz，6H)，1.29-1.38(m，30H)，1.51-1.62(m，4H)，1.71(br s，2H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝10.0，4.5Hz，2H)，2.75-2.86(m，6H)，3.36-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.5Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例51]
反式-3，4-二(((Z)-十六烷-9-烯基氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷(化合物51)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例44中得到的化合物44(175mg，0.304mmol)，得到化合物51(174mg，97.1％)。
ESI-MS m/z：591(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.35(m，36H)，1.50-1.59(m，4H)，1.98-2.11(m，10H)，2.33(s，3H)，2.39(dd，J＝9.2，5.3Hz，2H)，2.67(dd，J＝9.2，7.3Hz，2H)，3.31-3.45(m，8H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例52]
(3S，4S)-1，1-二甲基-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷氯化物(化合物52)
采用与实施例19相同的方法，使用实施例50中得到的化合物50(125mg，0.204mmol)，得到化合物52(135mg，99.8％)。
ESI-MS m/z：629M+；1H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.7Hz，6H)，1.29-1.38(m，30H)，1.50-1.59(m，4H)，1.72(br s，2H)，2.05(q，J＝6.5Hz，8H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.43-3.57(m，4H)，3.68(s，6H)，3.87(dd，J＝13.2，3.6Hz，2H)，4.03-4.13(m，4H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例53]
(3R，4R)-1-(2，3-二羟基丙基)吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-烯酸酯)(化合物53)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例2中得到的化合物2(100mg，0.159mmol)、DL-2，3-二羟基丙醛(Aldrich公司制，143mg，1.59mmol)，得到化合物53(95.4mg，85.2％)。
ESI-MS m/z：703(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25-1.40(m，28H)，1.56-1.66(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.31(t，J＝7.5Hz，4H)，2.39-2.48(m，1H)，2.56(dd，J＝10.8，3.8Hz，1H)，2.67-2.85(m，6H)，3.09(dd，J＝10.3，5.9Hz，1H)，3.24(dd，J＝10.3，5.9Hz，1H)，3.50-3.56(m，1H)，3.72-3.80(m，2H)，5.11(dd，J＝8.8，5.1Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例54]
1-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-2-醇(化合物54)
采用与实施例24相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)、1，2-环氧基丙烷(0.023mL，0.333mmol)，得到化合物54(94.7mg，86.1％)。
ESI-MS m/z：659(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.12(d，J＝6.2Hz，3H)，1.26-1.40(m，28H)，1.52-1.61(m，8H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.22-2.30(m，1H)，2.41-2.52(m，2H)，2.67(dd，J＝10.1，4.6Hz，1H)，2.75-2.85(m，5H)，3.03(dd，J＝9.5，5.9Hz，1H)，3.38-3.49(m，4H)，3.73-3.85(m，3H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例55]
1-(3R，4R)-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基丙烷-2-醇(化合物55)
采用与实施例24相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)、2-(甲氧基甲基)环氧乙烷(0.035mL，0.333mmol)，得到化合物55(92.9mg，80.8％)。
ESI-MS m/z：689(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.30-1.38(m，28H)，1.52-1.60(m，8H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.33-2.43(m，1H)，2.50-2.56(m，1H)，2.59-2.68(m，2H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)， 2.86(dd，J＝9.7，6.0Hz，1H)，3.01(dd，J＝9.7，6.0Hz，1H)，3.33-3.49(m，9H)，3.79-3.87(m，3H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例56]
3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1-醇(化合物56)
将实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)溶解于乙醇(2mL)，加入丙烯酸乙酯(0.181mL，1.67mmol)、乙醇钠(5.7mg，0.083mmol)，加热回流下搅拌5.5小时。将反应溶液冷却后在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～97/3)纯化，由此得到3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酸乙酯(107mg，91.2％)。
将得到的3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酸乙酯(220mg，0.314mmol)溶解于THF(4mL)，在-78℃下加入1.0mol/L二异丁基氢化铝甲苯溶液(0.943mL，0.943mmol)。一边从-78℃慢慢升温至0℃，一边搅拌2小时，反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液。用乙酸乙酯提取水层，用饱和食盐水清洗有机层，用硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/3～93/7)纯化，由此得到化合物56(113mg，54.5％)。
ESI-MS m/z：659(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(dd，J＝7.5，6.0Hz，6H)，1.26-1.40(m，32H)，1.50-1.59(m，4H)，1.66-1.73(m，2H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.56-2.79(m，8H)，2.90(dd，J＝9.7，5.7Hz，2H)，3.41(t，J＝6.6Hz，4H)，3.76-3.81(m，4H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例57]
3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酰胺(化合物57)
将实施例56中得到的3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酸乙酯(180mg，0.257mmol)溶解于乙醇(2 mL)中，加入2mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)，在室温下搅拌2小时。反应溶液中加入1mol/L盐酸水溶液调节pH为4后，用氯仿提取水层。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩，由此得到3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酸(148mg，85.8％)。
将得到的3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酸(64mg，0.095mmol)溶解于氯仿(2mL)，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU、Aldrich公司制，72mg，0.190mmol)、二异丙基乙基胺(0.083mL，0.476mmol)、2mol/L氨甲醇溶液(0.238mL，0.476mmol)，室温下彻夜搅拌。反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用水、饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～90/10)纯化，由此得到化合物57(46.1mg，72.1％)。
ESI-MS m/z：672(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.40(m，32H)，1.51-1.60(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.39(t，J＝6.0Hz，2H)，2.56(dd，J＝9.7，4.2Hz，2H)，2.63-2.80(m，6H)，2.90(dd，J＝9.7，5.9Hz，2H)，3.37-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.2Hz，2H)，5.24(br s，1H)，5.28-5.43(m，8H)，8.07(br s，1H).
[实施例58]
3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-N，N-二甲基丙酰胺(化合物58)
将在实施例57中得到的3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙酸(63mg，0.094mmol)溶解于氯仿(2mL)，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU、Aldrich公司制，71mg，0.187mmol)、2mol/L二甲基胺THF溶液(0.234mL，0.469mmol)、二异丙基乙基胺(0.082mL，0.469mmol)，室温下彻夜搅拌。反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用水、饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～95/5)纯化，由此得到化合物58(60.7mg，92.6％)。
ESI-MS m/z：700(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.26-1.40(m，32H)，1.52-1.61(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.51-2.56(m，4H)，2.70-2.83(m，6H)，2.87-2.95(m，2H)，2.93(s，3H)，3.00(s，3H)，3.37-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.8Hz，2H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例59]
(3R，4R)-1-(3-N，N-二甲基氨基丙基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物59)
将实施例56中得到的化合物56(110mg，0.167mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)，加入三乙胺(0.082mL，0.585mmol)、甲磺酸酐(58mg，0.334mmol)，在室温下搅拌4小时。用水、饱和食盐水清洗反应溶液，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩，由此得到3-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)丙基甲磺酸酯的粗产物。
将得到的粗产物溶解于THF(1mL)，加入2.0mol/L二甲基胺THF溶液(0.835mL，1.67mmol)，进行微波照射(300W，100℃，1小时)。浓缩反应溶液，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～75/25)纯化，由此得到化合物59(96.6mg，84.4％)。
ESI-MS m/z：686(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.40(m，32H)，1.52-1.62(m，4H)，1.63-1.76(m，2H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.23(s，6H)，2.29-2.52(m，6H)，2.75-2.87(m，6H)，3.37-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.8Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例60]
4-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1- 基)-1-甲基哌啶(化合物60)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)、1-甲基哌啶-4-酮(Aldrich公司制，0.205mL，1.67mmol)，得到化合物60(72.0mg，62.0％)。
ESI-MS m/z：698(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.40(m，32H)，1.52-1.62(m，6H)，1.77-1.83(m，2H)，1.89-2.08(m，11H)，2.24(s，3H)，2.53(dd，J＝9.6，4.7Hz，2H)，2.75-2.85(m，6H)，2.92(dd，J＝9.6，6.2Hz，2H)，3.37-3.49(m，4H)，3.81(t，J＝4.7Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例61]
(3R，4R)-1-(2-氨基乙酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物61)
将实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)溶解于氯仿(2mL)，加入N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(东京化成工业公司制，55mg，0.250mmol)、二异丙基乙基胺(0.146mL，0.833mmol)、HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐)(Aldrich公司制，127mg，0.333mmol)，在室温下搅拌4小时。反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用水、饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～97/3)纯化，由此得到2-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁基酯。
将得到的2-((3R，4R)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁基酯溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(0.256mL，3.33mmol)，室温下搅拌1.5小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿提取水层。用饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～85/15)纯化，由此得到化合物61(60.5 mg，55.3％)。
ESI-MS m/z：658(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.28-1.40(m，32H)，1.49-1.58(m，6H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.30-3.56(m，9H)，3.69(d，J＝12.5Hz，1H)，3.86(d，J＝4.8Hz，1H)，3.92(d，J＝3.7Hz，1H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例62]
(3R，4R)-1-(3-氨基丙酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物62)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(96mg，0.160mmol)、N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸(东京化成工业公司制，45mg，0.240mmol)，得到化合物62(52.5mg，49.1％)。
ESI-MS m/z：672(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.26-1.38(m，32H)，1.49-1.57(m，4H)，1.88(br s，2H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.43(td，J＝6.0，1.5Hz，2H)，2.77(t，J＝6.0Hz，4H)，3.03(t，J＝6.0Hz，2H)，3.37-3.67(m，8H)，3.85-3.91(m，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例63]
(3R，4R)-1-((S)-2，5-二氨基戊酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物63)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)、(S)-2，5-二(叔丁氧基羰基氨基)戊酸(渡边化学工业公司制，83mg，0.250mmol)，得到化合物63(70.5mg，59.4％)。
ESI-MS m/z：715(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.29-1.68(m，40H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.69-2.79(m，6H)，3.37-3.56(m，7H)，3.64-3.69(m，2H)，3.85-3.92(m，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例64]
(3R，4R)-1-(6-氨基己酰基)-3，4-二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)吡咯烷(化合物64)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例1中得到的化合物1(100mg，0.167mmol)、6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，58mg，0.250mmol)，得到化合物64(85.5mg，71.7％)。
ESI-MS m/z：714(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.71(m，42H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.25(t，J＝7.5Hz，2H)，2.70-2.79(m，6H)，3.37-3.65(m，8H)，3.84-3.90(m，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例65]
(3R，4R)-1-(2-氨基乙酰基)吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-烯酸酯)(化合物65)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例2中得到的化合物2(100mg，0.159mmol)、N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(东京化成工业公司制，41.8mg，0.239mmol)，得到化合物65(73.4mg，67.3％)。
ESI-MS m/z：686(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.40(m，28H)，1.56-1.65(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.27-2.34(m，4H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.38-3.53(m，3H)，3.68-3.81(m，3H)，5.20(br s，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例66]
(3R，4R)-1-((S)-2，6-二氨基己酰基)吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-烯酸酯)(化合物66)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例2中得到的化合物2(100mg，0.159mmol)、(S)-2，6-二(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，87mg，0.239mmol)，得到化合物66(73.0mg，60.7％)。
ESI-MS m/z：757(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.65(m，38H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.28-2.34(m，4H)，2.70(t，J＝6.1Hz，2H)，2.77(t，J＝6.1Hz，4H)，3.43(dd，J＝7.3，4.8Hz，1H)，3.54(d，J＝11.9Hz，1H)，3.74(br s，2H)，3.88(dd，J＝11.9，4.0Hz，1H)，5.20-5.21(m，2H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例67]
二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物67)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例19中得到的化合物VI-17(243mg，0.349mmol)，得到化合物67(212mg，69.5％)。
ESI-MS m/z：607(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25-1.35(m，44H)，1.54-1.59(m，4H)，1.65(s，1H)，1.98-2.05(m，8H)，2.80(t，J＝5.3Hz，4H)，3.42(t，J＝6.8Hz，4H)，3.53(t，J＝5.3Hz，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例68]
二(2-((Z)-十四烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物68)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例20中得到的化合物VI-18(402mg，0.688mmol)，得到化合物68(291mg，85.6％)。
ESI-MS m/z：494(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.90(t，J＝7.1Hz，6H)，1.29(br s，28H)，1.53-1.62(m，4H)，1.97-2.06(m，9H)，2.81(t，J＝5.3Hz，4H)，3.42(t，J＝6.7Hz，4H)，3.53(t，J＝5.4Hz，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例69]
二(2-(十四烷基氧基)乙基)胺(化合物69)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例21中得到的化合物VI-19(150mg，0.255mmol)，得到化合物69(79.2mg，62.4％)。
ESI-MS m/z：499(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26(br s，44H)，1.52-1.60(m，4H)，1.89(br s，1H)，2.81(t，J＝5.4Hz，4H)，3.43(t，J＝6.7Hz，4H)，3.54(t，J＝5.3Hz，4H).
[实施例70]
二(2-(十六烷基氧基)乙基)胺(化合物70)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例22中得到的化合物VI-20(389mg，0.604mmol)，得到化合物70(244mg，72.9％)。
ESI-MS m/z：555(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26(br s，52H)，1.52-1.61(m，4H)，1.91(br s，1H)，2.82(t，J＝5.4Hz，4H)，3.43(t，J＝6.7Hz，4H)，3.54(t，J＝5.4Hz，4H).
[实施例71]
二(2-(十八烷基氧基)乙基)胺(化合物71)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例23中得到的化合物VI-21(399mg，0.570mmol)，得到化合物71(151mg，43.4％)。
ESI-MS m/z：611(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(br s，60H)，1.51-1.60(m，4H)，2.08(br s，1H)，2.84(t，J＝5.3Hz，4H)，3.43(t，J＝6.6Hz，4H)，3.55(t，J＝5.4Hz，4H).
[实施例72]
二(2-((Z)-十六烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物72)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例24中得到的化合物VI-22(700mg，1.09mmol)，得到化合物72(516mg，85.9％)。
ESI-MS m/z：550(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.35(m，36H)，1.52-1.63(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.80(t，J＝5.3Hz，4H)，3.42(t，J＝6.6Hz，4H)，3.53(t，J＝5.3Hz，4H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例73]
N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)胺(化合物73)
将二(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(Aldrich公司制，600mg，2.92mmol)溶解于二氯甲烷(30mL)，加入油酸(东京化成工业公司制，1.82g，6.43mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺·盐酸盐(1.29g，6.72mmol)和4-二甲基氨基吡啶(89mg，0.731mmol)，室温下彻夜搅拌。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用饱和食盐水清洗有机层，用硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(己烷/氯仿＝50/50～0/100)纯化，得到N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.26g，58.7％)。
将得到的N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.22g，1.66mmol)溶解于二氯甲烷(30mL)，加入三氟乙酸(2.56mL，33.2mmol)，在室温下搅拌3.5小时。向反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿提取水层。用饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～96/4)纯化，由此得到化合物73(998mg，94.6％)。
ESI-MS m/z：635(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.58-1.67(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.32(t，J＝7.7Hz，4H)，2.89(t，J＝5.5Hz，4H)，4.18(t，J＝5.5Hz，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例74]
N，N-二(2-((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)乙基)胺(化合物74)
采用与实施例73相同的方法，使用二(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁基酯(Aldrich公司制，415mg，2.02mmol)、亚油酸(Aldrich公司制，1.25g，4.45mmol)，得到化合物74(494mg，82.6％)。
ESI-MS m/z：631(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.7Hz，6H)，1.31(br s，28H)，1.54(br s，1H)，1.58-1.66(m，4H)，2.00-2.09(m，8H)，2.32(t，J＝7.6Hz，4H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，2.89(t，J＝5.4Hz，4H)，4.17(t，J＝5.6Hz，4H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例75]
N-甲基-N，N-二(2-((Z)-十四烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物75)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制、25.0mg，0.210mmol)及(Z)-十四烷-9-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，152mg，0.524mmol)，得到化合物75(25.5mg，23.9％)。
ESI-MS m/z：509(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.90(t，J＝7.1Hz，6H)，1.25-1.37(m，28H)，1.51-1.62(m，4H)，1.98-2.06(m，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.7Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.29-5.41(m，4H).
[实施例76]
N，N-二(2-(十六烷基氧基)乙基)-N-甲基胺(化合物76)
采用与参考例5相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，60.0mg，0.504mmol)及甲磺酸十六烷基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，403mg，1.26mmol)，得到化合物76(135mg，47.2％)。
ESI-MS m/z：569(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26(br s，52H)，1.52-1.61(m，4H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.0Hz，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.52(t，J＝6.0Hz，4H).
[实施例77]
N-甲基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-11-烯基氧基)乙基)胺(化合物77)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，80mg，0.671mmol)及(Z)-十八烷-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，582mg，1.68mmol)，得到化合物77(198mg，47.5％)。
ESI-MS m/z：621(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.35(m，44H)，1.56(dd，J＝16.9，10.3Hz，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.0Hz，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.52(t，J＝6.0Hz，4H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例78]
N，N-二(2-((Z)-二十烷-11-烯基氧基)乙基)-N-甲胺(化合物78)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，64.1mg，0.538mmol)及(Z)-二十烷-11-烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，504mg，1.35mmol)，得到化合物78(164mg，45.1％)。
ESI-MS m/z：677(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.27(br s，52H)，1.50-1.61(m，4H)，1.96-2.06(m，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，3.41(t，J＝6.7Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例79]
N，N-二(2-((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)乙基)-N-甲胺(化合物79)
采用与参考例1相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，58.0mg，0.487mmol)及(11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基甲磺酸酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，453mg，1.22mmol)，得到化合物79(204mg，62.4％)。
ESI-MS m/z：673(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.7Hz，6H)，1.2 9(br s，40H)，1.51-1.60(m，4H)，2.01-2.09(m，8H)，2.33(s，3H)，2.64(t，J＝6.1Hz，4H)，2.77(t，J＝5.6Hz，4H)，3.41(t，J＝6.7Hz，4H)，3.52(t，J＝6.1Hz，4H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例80]
N，N-二甲基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氯化铵(化合物80)
采用与实施例22相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(104mg，0.172mmol)，得到化合物80(114mg，99.0％)。
ESI-MS m/z：635M+；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.51-1.60(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，3.44(s，6H)，3.46(t，J＝6.6Hz，4H)，3.87-3.91(m，4H)，3.97-4.01(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例81]
N，N-二甲基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)氯化铵(化合物81)
采用与实施例22相同的方法，使用实施例73中得到的化合物73(100mg，0.158mmol)，得到化合物81(86.9mg，79.0％)。
ESI-MS m/z：663M+；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.35(m，40H)，1.56-1.65(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.35(t，J＝7.7Hz，4H)，3.53(s，6H)，4.12-4.15(m，4H)，4.58-4.62(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例82]
3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙烷-1，2-二醇(化合物82)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例67中得到的化合物 67(150mg，0.247mmol)、DL-2，3-二羟基丙醛(Aldrich公司制，223mg，2.48mmol)，得到化合物82(24.2mg，14.4％)。
ESI-MS m/z：681(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.36(m，44H)，1.52-1.61(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.67-2.69(m，2H)，2.73-2.88(m，4H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.45-3.54(m，5H)，3.64-3.74(m，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例83]
3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)氨基)丙烷-1，2-二醇(化合物83)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例73中得到的化合物73(150mg，0.246mmol)、DL-2，3-二羟基丙醛(Aldrich公司制，222mg，2.46mmol)，得到化合物83(42.2mg，24.2％)。
ESI-MS m/z：709(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.56-1.66(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.31(t，J＝7.5Hz，4H)，2.59-2.72(m，2H)，2.76-2.93(m，4H)，3.45-3.52(m，1H)，3.66-3.78(m，2H)，4.09-4.21(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例84]
3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙酰胺(化合物84)
将实施例67中得到的化合物67(400mg，0.660mmol)溶解于乙醇(8mL)，加入丙烯酸乙酯(3.59mL，33.0mmol)、乙醇钠(22.5mg，0.330mmol)，加热回流下彻夜搅拌。将反应溶液冷却后在减压下蒸馏除去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～98/2)纯化，由此得到3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙酸乙酯(399mg，85.6％)。
将得到的3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙酸乙酯(200mg，0.283mmol)溶解于乙醇(4mL)，加入2mol/L氢氧化钠水溶液(3mL)，室温下搅拌6小时。反应溶液中加入1mol/L盐酸水溶液将pH调节为6后，用氯仿提取水层。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩，由此得到3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙酸(188mg，98.0％)。
将得到的3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙酸(85mg，0.125mmol)溶解于氯仿(3mL)，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU、Aldrich公司制，95mg，0.251mmol)、7mol/L氨甲醇溶液(0.090mL，0.627mmol)、二异丙基乙基胺(0.109mL，0.627mmol)，室温下彻夜搅拌。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用水、饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～88/12)纯化，由此得到化合物84(72.3mg，85.0％)。
ESI-MS m/z：678(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.48-1.57(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.36(t，J＝5.7Hz，2H)，2.72-2.80(m，6H)，3.39(t，J＝6.8Hz，4H)，3.48(t，J＝5.7Hz，4H)，5.18(br s，1H)，5.29-5.40(m，4H)，8.22(br s，1H).
[实施例85]
3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)-N，N-二甲基丙酰胺(化合物85)
将实施例84中的3-(二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基)丙酸(80mg，0.118mmol)溶解于氯仿(3mL)，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU、Aldrich公司制，90mg，0.236mmol)、2mol/L二甲基胺THF溶液(0.295mL，0.590mmol)、二异丙基乙基胺(0.103mL，0.590mmol)，室温下彻夜搅拌。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取水层。用水、饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～94/6)纯化，由此得到化合物 85(71.1mg，85.6％)。
ESI-MS m/z：706(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.51-1.59(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.56(br s，2H)，2.79-2.96(m，6H)，2.94(s，3H)，3.02(s，3H)，3.41(t，J＝6.8Hz，4H)，3.53(br s，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例86]
2-氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)乙酰胺(化合物89)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(东京化成工业公司制，43mg，0.247mmol)，得到化合物86(83.0mg，76.1％)。
ESI-MS m/z：664(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.49-1.57(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，3.39(td，J＝6.6，2.2Hz，4H)，3.48-3.51(m，4H)，3.53(s，2H)，3.56(s，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例87]
3-氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)丙酰胺(化合物87)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸(东京化成工业公司制，47mg，0.247mmol)，得到化合物87(84.2mg，75.2％)。
ESI-MS m/z：678(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.49-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.55(t，J＝6.0Hz，2H)，2.99(t，J＝6.0Hz，2H)，3.39(t，J＝6.8Hz，4H)，3.51-3.57(m，8H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例88]
6-氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)己酰胺(化合物88)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，57mg，0.247mmol)，得到化合物88(87.8mg，74.1％)。
ESI-MS m/z：720(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.38(m，44H)，1.41-1.56(m，8H)，1.60-1.70(m，2H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.39(t，J＝7.5Hz，2H)，2.69(t，J＝6.8Hz，2H)，3.39(t，J＝6.4Hz，4H)，3.49-3.56(m，8H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例89]
2-(二甲基氨基)-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)乙酰胺(化合物89)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)及N，N-二甲基甘氨酸盐酸盐(东京化成工业公司制，26mg，0.247mmol)，得到化合物89(92.1mg，80.8％)。
ESI-MS m/z：692(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.49-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.29(s，6H)，3.20(s，2H)，3.39(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50-3.57(m，6H)，3.68(t，J＝5.5Hz，2H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例90]
3-(二甲基氨基)-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)丙酰胺(化合物90)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、3-(二甲基氨基)丙酸(MATRIXScientific(MATRIX Scientific)公司制，29mg，0.247mmol)，得到化合物90(53.7mg，46.2％)。
ESI-MS m/z：706(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.49-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.26(s，6H)，2.55-2.68(m，4H)，3.39(t，J＝6.6Hz，4H)，3.50-3.59(m，8H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例91]
(S)-2-氨基-3-羟基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)丙酰胺(化合物91)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羟基丙酸(渡边化学工业公司制，51mg，0.247mmol)，得到化合物91(31.0mg，27.1％)。
ESI-MS m/z：694(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.49-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，3.37-3.45(m，5H)，3.49-3.77(m，9H)，3.92(dd，J＝6.4，4.9Hz，1H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例92]
(S)-2，3-二氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)丙酰胺(化合物92)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、(S)-2，3-二(叔丁氧基羰基氨基)丙酸·二环己胺盐(渡边化学工业公司制，120mg，0.247mmol)，得到化合物92(91.3mg，80.1％)。
ESI-MS m/z：693(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.28-1.35(m，44H)，1.50-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.70(dd，J＝12.6，7.3Hz，1H)，2.86(dd，J＝12.6，5.1Hz，1H)，3.32-3.43(m，5H)，3.47-3.58(m，5H)，3.71-3.81(m，3H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例93]
(S)-2，5-二氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)戊酰胺(化合物93)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、(S)-2，5-二(叔丁氧基羰基氨基)戊酸(渡边化学工业公司制，82mg，0.247mmol)，得到化合物93(57.5mg，48.3％)。
ESI-MS m/z：721(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.43-1.70(m，8H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.68-2.73(m，2H)，3.29-3.57(m，10H)，3.65-3.81(m，3H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例94]
(S)-2，6-二氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯基氧基)乙基)己酰胺(化合物94)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例67中得到的化合物67(100mg，0.165mmol)、(S)-2，6-二(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，90mg，0.247mmol)，得到化合物94(55.7mg，46.0％)。
ESI-MS m/z：735(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.38(m，46H)，1.41-1.62(m，8H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.69(t，J＝6.6Hz，2H)，3.28-3.57(m，10H)，3.65-3.82(m，3H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例95]
2-氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)乙酰胺(化合物95)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例73中得到的化合物73(100mg，0.158mmol)、N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(东京化成工业公司制，41.4mg，0.237mmol)，得到化合物95(72.8mg，66.7％)。
ESI-MS m/z：692(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.55-1.64(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.30(td，J＝7.7，2.6Hz，4H)，3.51(s，2H)，3.53(t，J＝7.0Hz，2H)，3.63(t，J＝5.7Hz，2H)，4.17-4.25(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例96]
2-氨基-N，N-二(2-((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)乙基)乙酰胺(化合物96)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例74中得到的化合物74(100mg，0.159mmol)，得到化合物96(36.3mg，33.3％)。
ESI-MS m/z：688(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.30(br s，28H)，1.55-1.65(m，4H)，2.01-2.08(m，8H)，2.27-2.34(m，4H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.50-3.66(m，6H)，4.16-4.27(m，4H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例97]
(S)-2，6-二氨基-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)己酰胺(化合物97)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例73中得到的化合物73(100mg，0.158mmol)、(S)-2，6-二(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，86mg，0.237mmol)，得到化合物97(49.1mg，40.8％)。
ESI-MS m/z：763(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.65(m，50H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.27-2.33(m，4H)，2.70(t，J＝6.2Hz，2H)，3.37-3.56(m，2H)，3.64-3.87(m，3H)，4.18-4.24(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例98]
2-(二甲基氨基)-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)乙酰胺(化合物98)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例73中得到的化合物73(105mg，0.166mmol)及N，N-二甲基甘氨酸盐酸盐(东京化成工业公司制，25.6mg，0.248mmol)，得到化合物98(72.1mg，60.5％)。
ESI-MS m/z：720(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.34(m，40H)，1.57-1.64(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.27-2.35(m，10H)，3.15(s，2H)，3.61(t，J＝5.9Hz，2H)，3.78(t，J＝5.9Hz，2H)，4.22(q，J＝5.5Hz，4H)，5.30-5.39(m，4H).
[实施例99]
3-(二甲基氨基)-N，N-二(2-((Z)-十八烷-9-烯氧基)乙基)丙酰胺(化合物99)
采用与实施例25相同的方法，使用实施例73中得到的化合物73(100mg，0.158mmol)、3-(二甲基氨基)丙酸(MATRIX Scientific公司制，36.2mg，0.309mmol)，得到化合物99(25.3mg，21.9％)。
ESI-MS m/z：734(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.56-1.63(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.27-2.33(m，10H)，2.52-2.68(m，4H)，3.59-3.64(m，4H)，4.18-4.23(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例100]
(S)-2，6-二氨基-N，N-二(2-((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)乙基)己酰胺(化合物100)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例74中得到的化合物74(100mg，0.159mmol)、(S)-2，6-二(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，87mg，0.238mmol)，得到化合物100(85.1mg，70.8％)。
ESI-MS m/z：759(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.65(m，38H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.30(td，J＝7.4，6.0Hz，4H)，2.70(t，J＝6.4Hz，2H)，2.77(t，J＝5.7Hz，4H)，3.37-3.57(m，2H)，3.64-3.87(m，3H)，4.21(q，J＝5.7Hz，4H)，5.28-5.44(m，8H).
[实施例101]
反式-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物101)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例25中得到的化合物VI-23(357mg，0.494mmol)，得到化合物101(252mg，80.6％)。
ESI-MS m/z：633(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.35(m，44H)，1.50-1.59(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，10H)，2.69(dd，J＝11.3，5.5Hz，2H)，3.06(dd，J＝11.3，7.1Hz，2H)，3.28-3.46(m，8H)，5.30-5.40(m，4H).
[实施例102]
反式-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物102)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例26中得到的化合物VI-24(382mg，0.532mmol)，得到化合物102(276mg，82.7％)。
ESI-MS m/z：629(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.40(m，32H)，1.50-1.59(m，4H)，1.97-2.08(m，10H)，2.69(dd，J＝11.2，5.7Hz，2H)，2.77(t，J＝6.0Hz，4H)，3.06(dd，J＝11.2，7.1Hz，2H)，3.28-3.46(m，8H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例103]
反式-3，4-二(((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物103)
采用与实施例1相同的方法，使用参考例27中得到的化合物 VI-25(420mg，0.542mmol)，得到化合物103(316mg，85.2％)。
ESI-MS m/z：685(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.40(m，40H)，1.50-1.59(m，4H)，1.97-2.08(m，10H)，2.69(dd，J＝11.1，5.8Hz，2H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.06(dd，J＝11.1，7.3Hz，2H)，3.28-3.46(m，8H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例104]
反式-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯氧基)甲基)吡咯烷(化合物104)
将参考例28中得到的化合物XIII-1(278mg，0.366mmol)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入三氟乙酸(0.563mL，7.31mmol)，在室温下搅拌3小时。反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿提取水层。用饱和食盐水清洗有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣溶解于少量的甲醇，使其吸附于填充在塑料立柱(plasticcolumn)中的BONDESIL-SCX(VARIAN公司制，6g)的上部，用甲醇清洗，接下来用氨·甲醇溶液(东京化成工业公司制，2mol/L)洗脱目标物。将含有目标物的馏分在减压下浓缩，由此得到化合物104(162mg，67.2％)。
ESI-MS m/z：661(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.56-1.64(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.09-2.16(m，2H)，2.30(t，J＝7.5Hz，4H)，2.72(dd，J＝11.3，5.5Hz，2H)，3.11(dd，J＝11.3，7.1Hz，2H)，3.99-4.12(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例105]
反式-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)甲基)吡咯烷(化合物105)
采用与实施例104相同的方法，使用参考例29中得到的化合物XIII-2(350mg，0.463mmol)，得到化合物105(224mg，73.6％)。
ESI-MS m/z：657(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.40(m，28H)，1.57-1.66(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.09-2.17(m，2H)，2.31(t，J＝7.5Hz，4H)，2.72(dd，J＝11.3，6.0Hz，2H)，2.77(t，J＝6.2Hz，4H)，3.11(dd，J＝11.3，7.3Hz，2H)，3.99-4.13(m，4H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例106]
反式-1-甲基-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物106)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例101中得到的化合物101(107mg，0.169mmol)，得到化合物106(87.3mg，79.9％)。
ESI-MS m/z：647(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.36(m，44H)，1.50-1.59(m，4H)，1.98-2.09(m，10H)，2.31(s，3H)，2.36(dd，J＝9.2，5.3Hz，2H)，2.64(dd，J＝9.2，7.0Hz，2H)，3.30-3.45(m，8H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例107]
反式-1-甲基-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物107)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例102中得到的化合物102(123mg，0.196mmol)，得到化合物107(109mg，86.7％)。
ESI-MS m/z：643(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.26-1.40(m，32H)，1.50-1.60(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，10H)，2.31(s，3H)，2.36(dd，J＝9.2，5.5Hz，2H)，2.64(dd，J＝9.2，7.0Hz，2H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，3.30-3.45(m，8H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例108]
反式-3，4-二(((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)甲基)-1甲基吡咯烷(化合物108)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例103中得到的化合物103(165mg，0.241mmol)，得到化合物108(145mg，85.9％)。
ESI-MS m/z：699(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.40(m，40H)，1.50-1.60(m，4H)，2.05(q，J＝6.2Hz，10H)，2.31(s，3H)，2.36(dd，J＝9.2，5.8Hz，2H)，2.64(dd，J＝9.2，7.3Hz，2H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.31-3.45(m，8H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例109]
反式-1-甲基-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯氧基)甲基)吡咯烷(化合物109)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例104中得到的化合物104(50mg，0.076mmol)，得到化合物109(47mg，92％)。
ESI-MS m/z：675(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.26-1.35(m，40H)，1.56-1.65(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.15-2.24(m，2H)，2.27-2.37(m，9H)，2.67(dd，J＝9.3，7.1Hz，2H)，3.99-4.12(m，4H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例110]
反式-1-甲基-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)甲基)吡咯烷(化合物110)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例105中得到的化合物105(80mg，0.12mmol)，得到化合物110(66mg，81％)。
ESI-MS m/z：671(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25-1.40(m，28H)，1.57-1.66(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.13-2.24(m，2H)，2.27-2.37(m，9H)，2.66(dd，J＝9.2，7.3Hz，2H)，2.77(t，J＝5.7Hz，4H)，3.99-4.12(m，4H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例111]
反式-1，1-二甲基-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯基氧基)甲基)吡咯烷氯化物(化合物111)
采用与实施例22相同的方法，使用实施例101中得到的化合物101(90.0mg，0.142mmol)，得到化合物111(85.9mg，86.6％)。
ESI-MS m/z：661M+；1H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.37(m，44H)，1.50-1.58(m，4H)，2.01(q，J＝5.9Hz，8H)，2.82-2.87(m，2H)，3.43(t，J＝6.6Hz，4H)，3.48(s，6H)，3.49-3.56(m，4H)，3.75(dd，J＝11.6，8.2Hz，2H)，4.10(dd，J＝11.6，8.1Hz，2H)，5.29-5.41(m，4H).
[实施例112]
反式-1，1-二甲基-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯基氧基)甲基)吡咯烷氯化物(化合物112)
采用与实施例22相同的方法，使用实施例102中得到的化合物102(100mg，0.159mmol)，得到化合物112(107mg，96.9％)。
ESI-MS m/z：657M+；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.29-1.40(m，32H)，1.50-1.58(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，2.80-2.87(m，2H)，3.43(t，J＝6.6Hz，4H)，3.48(s，6H)，3.49-3.56(m，4H)，3.74(dd，J＝11.6，8.1Hz，2H)，4.09(dd，J＝11.6，8.1Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例113]
反式-1，1-二甲基-3，4-二(((Z)-十八烷-9-烯氧基)甲基)吡咯烷氯化物(化合物113)
采用与实施例22相同的方法，使用实施例104中得到的化合物104(77.0mg，0.117mmol)，得到化合物113(69.5mg，82.0％)。
ESI-MS m/z：689M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.56-1.65(m，4H)，2.01(q，J＝5.5Hz，8H)，2.33(t，J＝7.5Hz，4H)，2.93(br s，2H)，3.57(s，6H)，3.86(dd，J＝11.9，8.6Hz，2H)，4.19-4.27(m，6H)，5.29-5.40(m，4H).
[实施例114]
反式-1，1-二甲基-3，4-二(((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯氧基)甲基)吡咯烷氯化物(化合物114)
采用与实施例22相同的方法，使用实施例105中得到的化合物105(105mg，0.160mmol)，得到化合物114(74.3mg，64.4％)。
ESI-MS m/z：685M⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.26-1.40(m，28H)，1.57-1.65(m，4H)，2.05(q，J＝6.7Hz，8H)，2.33(t，J＝7.7Hz，4H)，2.77(t，J＝5.9Hz，4H)，2.93(br s，2H)，3.56(s，6H)，3.86(dd，J＝12.1，8.4Hz，2H)，4.19-4.27(m，6H)，5.28-5.43(m，8H).
[实施例115]
反式-1-((S)-2，6-二氨基己酰基)-3，4-二(((11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基氧基)甲基)吡咯烷(化合物115)
采用与实施例61相同的方法，使用实施例103中得到的化合物103(100mg，0.146mmol)、(S)-2，6-二(叔丁氧基羰基氨基)己酸(渡边化学工业公司制，80mg，0.219mmol)，得到化合物115(72.6mg，61.2％)。
ESI-MS m/z：813(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.27-1.59(m，50H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.17-2.26(m，1H)，2.35-2.43(m，1H)，2.70(t，J＝5.7Hz，2H)，2.77(t，J＝6.0Hz，4H)，3.21-3.55(m，11H)，3.58-3.80(m，2H)，5.29-5.43(m，8H).
[实施例116]
3-(二甲基氨基)丙基二(2-((Z)-1-氧代十八烷-9-烯基氧基)乙基)氨基甲酸酯(化合物116)
将实施例73中得到的化合物73(160mg，0.252mmol)溶解于氯仿(2.5mL)，加入采用“Journal of American Chemical Society(J.Am.Chem.Soc.)”，1981年，第103卷，p.4194-4199记载的方法合成的3-(二甲基氨基)丙基4-硝基苯基碳酸酯盐酸盐(115mg，0.379mmol)及三乙胺(0.141mL，1.01mmol)，使用微波反应装置在110℃下加热搅拌30分钟。反应液中加入3-(二甲基氨基)丙基4-硝基苯基碳酸酯盐酸盐(38.4mg，0.126mmol)，使用微波反应装置在110℃下加热搅拌30分钟。用氯仿稀释反应液，用1mol/L氢氧化钠水溶液清洗3次，接着用饱和食盐水清洗，用无水硫酸镁干燥后过滤，减压下浓缩。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～95/5)纯化，由此得到化合物116(42.6mg，22.1％)。
ESI-MS m/z：764(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.24-1.37(m，40H)，1.54-1.65(m，4H)，1.78-1.89(m，2H)，1.97-2.05(m，8H)，2.23(s，6H)，2.25-2.38(m，6H)，3.48-3.58(m，2H)，3.62(q，J＝5.2Hz，2H)，4.11-4.30(m，6H)，5.28-5.41(m，4H).
[实施例117]
3-(二甲基氨基)丙基二(2-((9Z，12Z)-1-氧代十八烷-9，12-二烯基氧基)乙基)氨基甲酸酯(化合物117)
采用与实施例116相同的方法，使用实施例74中得到的化合物74(159mg，0.252mmol)，得到化合物117(60.3mg，31.5％)。
ESI-MS m/z：760(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.26-1.38(m，28H)，1.58-1.69(m，4H)，1.78-1.89(m，2H)，2.00-2.09(m，8H)，2.23(s，6H)，2.26-2.38(m，6H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.48-3.57(m，2H)，3.62(q，J＝5.3Hz，2H)，4.12-4.30(m，6H)，5.28-5.44(m，8H).
化合物118～136可以通过与实施例1～117相同的方法得到，或者可以通过与国际公开第2009/086558号小册子相同的方法得到。
参考例30(3R，4R)-1-甲基吡咯烷-3，4-二基二((9Z，12Z)-十八烷-9，12-二烯酸酯)(化合物A-3)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例2中得到的化合物2(1.20g，1.90mmol)，得到化合物A-3(1.17g，95.4％)。
ESI-MS m/z：643(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.31-1.41(m，28H)，1.56-1.66(m，4H)，2.05(q，J＝6.6Hz，8H)，2.29-2.35(m，7H)，2.48(dd，J＝10.3，4.2Hz，2H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，3.04(dd，J＝10.3，5.8Hz，2H)，5.11(dd，J＝5.8，4.2Hz，2H)，5.28-5.43(m，8H).
参考例31 (3R，4R)-1-甲基吡咯烷-3，4-二基二((Z)-十八烷-9-烯酸酯)(化合物A-4)
采用与实施例10相同的方法，使用实施例9中得到的化合物9(500mg，0.791mmol)，得到化合物A-4(481mg，94.0％)。
ESI-MS m/z：647(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.27-1.35(m，40H)，1.56-1.66(m，4H)，2.01(q，J＝6.2Hz，8H)，2.32(t，J＝7.7Hz，4H)，2.35(s，3H)，2.48(dd，J＝10.5，4.0Hz，2H)，3.04(dd，J＝10.5，5.7Hz，2H)，5.10(dd，J＝5.7，4.0Hz，2H)，5.29-5.40(m，4H).
参考例32 N-甲基-N，N-二(2-((9Z，12Z)-1-氧代十八烷-9，12-二烯基氧基)乙基)胺(化合物A-5)
采用与参考例2相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，119mg，1.00mmol)及亚油酸(Aldrich公司制，617mg，2.20mmol)，得到化合物A-5(348mg，54.0％)。
ESI-MS m/z：645(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.89(t，J＝6.8Hz，6H)，1.27-1.38(m，28H)，1.56-1.66(m，4H)，2.00-2.09(m，8H)，2.31(t，J＝7.6Hz，4H)，2.35(s，3H)，2.70(t，J＝5.9Hz，4H)，2.77(t，J＝5.8Hz，4H)，4.16(t，J＝5.9Hz，4H)，5.28-5.42(m，8H).
参考例33 N-甲基-N，N-二(2-((Z)-1-氧代十八烷-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物A-6)
采用与参考例2相同的方法，使用N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，119mg，1.00mmol)及油酸(东京化成工业公司制，621mg，2.20mmol)，得到化合物A-6(333mg，51.4％)。
ESI-MS m/z：649(M+H)⁺；¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25-1.36(m，40H)，1.56-1.67(m，4H)，1.97-2.04(m，8H)，2.30(t，J＝7.6Hz，4H)，2.35(s，3H)，2.70(t，J＝5.9Hz，4H)，4.16(t，J＝5.9Hz，4H)，5.28-5.39(m，4H).
接下来，通过实施例及试验例，针对本发明的组合物进行具体说明。但是，本发明不限于所述实施例及试验例。
[实施例118]
使用实施例1～117中得到的化合物，如下所述制造制剂。所使用的核酸是含有有义链[5’-GmUCAmUCACACmUGAAmUACCAAmU-3’(带有m的碱基上键合的糖为被2’-O-甲基取代的核糖)]、和反义链[5’-AUUGGUAUUCAGUGUGAUGACAC-3’(将5’末端磷酸化)]的碱基序列的、抑制载脂蛋白B(Apolipoprotein-B，以下表示为apo-b)基因的表达的APO-B siRNA，有义链及反义链分别由Nippon EGT公司、Gene Design公司、Invitrogen公司或者北海道System Science公司获得，通过使其退火而制备(以下称为apo-b siRNA)。
称量各试样使其溶解在90vol％乙醇中，使得实施例1～117的各实施例中得到的化合物1～117/1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DMPE，N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺钠盐，日油公司制)/二硬脂酰卵磷脂(DSPC，1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱，日油公司制)/胆固醇(Avanti Polar Lipids公司制)＝8.947/1.059/5.708/13.697mmol/L，制备构成成分的溶液。另一方面，将apo-b siRNA/蒸馏水(24mg/mL)用Tris-EDTA缓冲液(200mM Tris-HCl,20mM EDTA、Invitrogen制)及20mM柠檬酸缓冲液(pH5.0)稀释，制备1.5mg/mL的apo-b siRNA水溶液(2mM Tris-EDTA缓冲液,pH5.0)。
将得到的脂质溶液加热至37℃后，取100μL移至制剂制备用的容器中，在搅拌下加入得到的apo-b siRNA水溶液100μL。在搅拌下，在得到的脂质核酸混合悬浊液200μL中加入20mM柠檬酸缓冲液(含有300mM NaCl,pH6.0)200μL，进而滴入Dulbecco磷酸缓冲液(DPBS，Invitrogen制)662μL，使siRNA浓度为10μM，得到制剂(含有化合物1～117及核酸的组合物)。
使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)测定制剂中脂质体的平均粒径。结果示于表18。
[表18]

比较例1
将化合物1改为DOTAP(化合物A-1，Avanti Polar Lipids制)，除此之外，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为104.0nm。
比较例2
将化合物1改为DLinDMA(化合物A-2)，除此之外，与实施例 118同样地得到制剂。需要说明的是，化合物A-2根据国际公开第2005/121348号小册子公开的方法合成。
该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为131.6nm。
比较例3
使用参考例30的化合物A-3，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为141.0nm。
比较例4
使用参考例31的化合物A-4，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为131.1nm。
比较例5
使用参考例32的化合物A-5，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为136.4nm。
比较例6
使用参考例33的化合物A-6，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为139.5nm。
比较例7
使用参考例3的化合物VI-3，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为167.8nm。
比较例8
使用参考例4的化合物VI-4，与实施例118同样地得到制剂。该制剂中的阳离子性脂质/核酸复合体的平均粒径为157.8nm。
比较例中使用的化合物A-1～6及化合物VI-3～4的结构式示于表19
[表19]

试验例1
将实施例118中得到的各制剂(含有化合物1～115及核酸的组合物)及比较例1～8中得到的各制剂分别根据以下方法导入来自人肝癌的细胞株HepG2细胞(HB-8065)。
用Opti-MEM(GIBCO公司，31985)稀释各制剂使核酸的最终浓度变为3-100nM或者1-30nm，将稀释后的各制剂按照每孔20μL分别注入96孔的培养板后，将悬浊在含有1.25％胎牛血清(FBS，SAFCBiosciences公司，12203C)的最小必需培养基(MEM)中的HepG2细胞接种，使得成为细胞数6250/80μL/孔，在37℃、5％CO₂条件下培养，由此将各制剂导入HepG2细胞内。另外，作为阴性对照组，接种未作任何处理的细胞。
将导入了各制剂的细胞在37℃的5％CO₂培养箱内培养24小时，用冰冷的磷酸缓冲化生理盐水(PBS，GIBCO公司，14190)清洗，使用 Cells-to-Ct Kit(Applied Bioscience(ABI)公司，AM1728)，根据制品中附带的说明书中记载的方法，回收总RNA，并以得到的总RNA作为模板通过逆转录反应制作cDNA。
以得到的cDNA作为模板，以通用探针文库(Universal ProbeLibrary，Roche Applied Science公司，04683633001)作为探针，使用ABI7900HT Fast(ABI公司制)，根据附带的使用说明书中记载的方法使其进行PCR反应，由此使apo-b基因及作为组成型表达基因的甘油醛3-磷酸脱氢酶(D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，以下表示为gapdh)基因进行PCR反应，分别测定mRNA扩增量，以gapdh的mRNA扩增量作为内部对照，算出apo-b的mRNA的准定量值。另外，以相同方式分别测定阴性对照组中的、apo-b的mRNA量及gapdh的mRNA扩增量，以gapdh的mRNA扩增量作为内部对照，算出apo-b的mRNA的准定量值。
以阴性对照中的apo-b的mRNA的准定量值作为1算出apo-b的mRNA的准定量值，求出apo-b的mRNA的表达率结果，将实施例118的上述结果示于图1～12，将比较例1～8的上述结果示于图13。需要说明的是，纵轴表示将阴性对照作为1时的靶基因的mRNA的表达率，横轴表示核酸浓度(nM)、使用的阳离子性脂质的化合物编号及实施例编号。
由图1～12可知，将实施例118中得到的制剂(含有抑制apo-b基因的表达的APO-B siRNA、和化合物1～115中的各化合物的组合物)导入来自人肝癌的细胞株HepG2细胞内后，apo-b基因的mRNA的表达率被抑制。另一方面，由图13可知，比较例3～8中得到的制剂(含有抑制apo-b基因的表达的APO-B siRNA、和化合物A-3～6、VI-3及VI-4中的各化合物的组合物)导入到来自人肝癌的细胞株HepG2细胞内后，apo-b基因的mRNA的表达率未被抑制。
由此可知，本发明的组合物能够将核酸导入到细胞内等，本发明的阳离子性脂质是使得向细胞内的导入能够容易进行的新型阳离子性脂质。
实施例119
作为阳离子性脂质，称量表20所示的第1阳离子性脂质和第2阳离子性脂质使各个化合物为4.474/4.474mmol/L，与实施例118相同地制造制剂。
[表20]

[表21]

实施例120
使用实施例1～117中得到的化合物，如下所示地制备制剂。核酸与实施例118相同地使用apo-b siRNA。
使实施例1～117分别得到的化合物1～117/1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)＝57.26/5.521mmol/L的方式悬浊在含有盐酸及乙醇的水溶液中，重复进行用vortex搅拌混合机的搅拌及加热(50℃)，得到均匀的悬浊液。将该悬浊液在室温下通过0.2μm的聚碳酸酯薄膜过滤器31次、进而通过0.05μm的聚碳酸酯薄膜过滤器41次，得到前导(Lead)粒子的分散液。测定通过动态光散射光(DLS)得到的各前导粒子的平均粒子径，确认在30～110nm的范围内。向所得的前导粒子的分散液19.5μL中加入apo-b siRNA/蒸馏水(24mg/mL)6.5μL进行混合，进而加入蒸馏水78μL进行混合，由此制备得到阳离子性脂质/核酸复合体粒子(含有阳离子性脂质的脂质体与核酸的复合体)的分散液。
另一方面，称量各试样使其溶解于90vol％乙醇中，使得实施例1～117分别得到的化合物1～117/1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰卵磷脂(DSPC，1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱，日油公司制)/胆固醇(日油社制)为8.947/1.059/5.708/13.697mmol/L，制备脂质膜成分的溶液。将所得的脂质膜成分的溶液加热至37℃后，将100μL移至制剂制备用的容器中，在搅拌下加入所得的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液100μL，进而在搅拌下滴加蒸馏水800μL，进而在搅拌下添加22.5％食盐水41.6μL将其等渗化后，添加20.4μL生理食盐水，由此使siRNA浓度为10μM，得到制剂(是含有化合物1～117及核酸的组合物，该组合物含有核酸与由含有阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体及封入该复合体的脂质膜)。
实施例121
作为阳离子性脂质/核酸复合体粒子的阳离子性脂质，使用表20及21所示的第1阳离子性脂质，作为脂质膜成分的阳离子性脂质，使用表20及21所示的第2阳离子性脂质，与实施例120同样地制备制剂。另外，作为阳离子性脂质/核酸复合体粒子的阳离子性脂质，使用表20及21所示的第2阳离子性脂质，作为脂质膜成分的阳离子性脂质，使用表20及21所示的第1阳离子性脂质，与实施例120同样地制备制剂。
试验例2
将实施例120及121所得的各制剂与试验例1同样地导入来自人肝的细胞株HepG2细胞(HB-8065)，确认apo-b的mRNA的表达率被抑制，由此表明，在含有复合体(即，本发明的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者本发明的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子而得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜的组合物中，本发明的阳离子性脂质是使得核酸向细胞内的导入能够容易进行的、新型的阳离子性脂质。
对于实施例120及121得到的各制剂中、将表22及23所示的第1阳离子性脂质及第2阳离子性脂质分别用作阳离子性脂质/核酸复合体粒子的阳离子性脂质及脂质膜构成成分的阳离子性脂质所得的制剂，由试验例2的测定结果求出的apo-b的mRNA表达率被50％的siRNA浓度的值(IC50)，如表22及23所示。
由此表明，在含有复合体(即、本发明的阳离子性脂质与核酸的复合体、或本发明的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜的组合物中，本发明的阳离子性脂质是使得核酸向细胞内的导入能够容易进行的、新型的阳离子性脂质。
另外，制备双链核酸与含有任意的阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或本发明的化合物(I)以外的阳离子性脂质的脂质体的复合体，在水或者0～20％乙醇水溶液中使该复合体分散但不使其溶解(A液)，另外，将任意阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或本发明的化合物(I)以外的阳离子性脂质溶解于乙醇水溶液中(B液)，将A液与B液以体积比1:1混合，进而适当地加入水，由此得到含有该核酸和该阳离子性脂质的组合物，该组合物能够容易地将核酸导入细胞内等。
[表22]

[表23]

实施例122
使用实施例1～117分别得到的化合物1～117，如下所示地制备制剂。所用的核酸是含有有义链[5'-mGmGAAGCUGGCGAUUAUGCAGAUUmUmA-3'(带有m的碱基上键合的糖是被2’-O-甲基取代的核糖)]、和反义链[5'-UAAAUCUGCAUAAUCGCCAGCUUCC-3'(将5’末端磷酸化)]的碱基序列的、抑制CKAP5基因表达的CKAP5siRNA，由Nippon EGT 公司、Gene Design公司、Invitrogen公司或者北海道System Science公司获得已经退火的冻结干燥的siRNA，用蒸馏水使其溶解，由此制成24mg/mL(以下称为CKAP5siRNA溶液)。
以使实施例1～117分别得到的化合物1～117/1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺钠盐、日油社制)＝57.26/5.521mmol/L的方式，使其悬浊在含有盐酸及乙醇的水溶液中，重复进行用vortex搅拌混合机的搅拌及加热，得到均匀的悬浊液。将该悬浊液在室温下通过0.2μm的聚碳酸酯薄膜过滤器及0.05μm的聚碳酸酯薄膜过滤器，得到前导粒子的分散液。对采用动态光散射光(DLS)得到的前导粒子的平均粒子径进行测定，确认其在30～110nm的范围内。向所得的前导粒子的分散液中以3:1的比例混合CKAP5siRNA溶液，进而加入3倍量的蒸馏水进行混合，由此制备阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，称量各试样使其溶解于90vol％乙醇中，使实施例1～117分别得到的化合物1～117/1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酰胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝8.947/2.943/5.707/11.83mmol/L，制备脂质膜构成成分的溶液。
将所得的脂质膜构成成分的溶液加热后，以1:1的比例混合所得的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到粗制剂。
所得的粗制剂使用Amicon Ultra(Millipore社制)进行浓缩，进而置换成生理盐水(生理盐水)，用0.2μm的过滤器(东洋滤纸社制)在净化台内进行过滤。进而测定所得的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释使siRNA浓度为1.0mg/mL。
实施例123
作为阳离子性脂质/核酸复合体粒子的阳离子性脂质，使用表20及21所示的第1阳离子性脂质，作为脂质膜成分的阳离子性脂质，使用表20及21所示的第2阳离子性脂质，与实施例120同样地制备制剂。另外，作为阳离子性脂质/核酸复合体粒子的阳离子性脂质使用表20及21所示的第2阳离子性脂质，作为脂质膜成分的阳离子性脂质使用表20及21所示的第1阳离子性脂质，与实施例120同样地制备制剂。
试验例3
针对实施例122及123中得到的各制剂分别采用以下方法进行体内mRNA敲除(knockdown)评价试验，由此表明，在含有复合体(即，本发明的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者本发明的阳离子性脂质组合中性脂质及/或高分子而得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜的组合物中，本发明的阳离子性脂质是能够使将核酸导入细胞内、特别是肿瘤细胞内这一行为容易进行的、新型的阳离子性脂质。
来自人胰腺的细胞株即MIA PaCa-2从JCRB细胞库中获得，在含有10％灭活胎牛血清(GIBCO社制)及1vol％青霉素‐链霉素(Nacalaitesque公司制、26253-84)的高葡萄糖含量的DMEM(GIBCO社制,11995-073)中，在37℃、5％CO₂条件下进行培养。悬浊在PBS中以使MIA PaCa-2的浓度为1×10⁸cells/mL，将该细胞悬浊液100μL移植至SCID小鼠(购自日本CLEA)的背部皮下(1×10⁷cells/0.1mL PBS/head)。移植6天后，将肿瘤体积作为指标，进行分组，每组3只，将实施例122及123中得到的制剂以10mg/kg(10mL/kg)静脉给予至小鼠。作为阴性对照使用生理盐水，以10mL/kg的剂量给予。在给予前及给予48小时后测定小鼠的体重。在测定体重后将小鼠安乐死，摘出皮下肿瘤。将摘出的肿瘤立即用液氮冻结，在使用前一直保存在-80℃。
对于所得的肿瘤样品，向放入了样品的2mL圆底试管中添加1mL的Trizol reagent(Invitrogen制,15596-018)及5mm的氧化锆珠，用Tissuelyser II(QIAGEN制)在1/25freq,1.5min x2次的条件下进行破碎。破碎后离心(10000rpm,10min)，回收上清，添加200μL的氯仿，剧烈搅拌后再次进行离心(15000rpm,15min)。使用自动核酸提取机MagNAPURE96(Roche制)用Cellular RNA Large Volume Kit(Roche制,5467535)从所得的上清200μL中提取RNA。用微量吸光光度计Dropsense96(Trinean制)测定所提取出的RNA浓度，使用Transcriptor(Roche制、4897030)对相当于200-1000ng的RNA进行逆转录。反应液组成、反应条件基于所附文件。所得的cDNA样品用dH₂O稀释10倍，用作qPCR的模板。qPCR反应中使用TaqMan Gene Expression MasterMix(Applied Biosystems制,4369542),TaqMan Gene ExpressionAssays(Applied Biosystems制,4331182)。PCR反应的条件基于TaqManGene Expression所附带的使用说明书。以将生理盐水组的、CKAP5的mRNA量为1时的相对比例的形式，算出检体的mRNA量。
实施例122及123中得到的各制剂中，对于使用化合物110时的实施例122得到的制剂，给予siRNA10mg/kg后48小时后的肿瘤中CKAP5mRNA量，以将生理盐水处理组的肿瘤中CKAP5mRNA量为1时的相对值计为0.28，体内mRNA敲除率为72％。
由此表明，本发明的阳离子性脂质是使得在体内向细胞内、特别是向肿瘤细胞内转运药物能够容易进行的阳离子性脂质。另外，表明含有复合体(即，本发明的阳离子性脂质与核酸的复合体、或者本发明的阳离子性脂质中组合中性脂质及/或高分子所得的产物与核酸的复合体)以及封入该复合体的脂质膜的组合物，能够在体内将核酸容易地导入细胞内、特别是肿瘤细胞内。
另外，制备双链核酸与含有任意的阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或本发明中的化合物(I)以外的阳离子性脂质的脂质体的复合体，使该复合体在水或0～20％乙醇水溶液中分散但不溶解(A液)，另外，使任意的阳离子性脂质、优选化合物(I)及/或本发明中的化合物(I)以外的阳离子性脂质溶解于乙醇水溶液中(B液)，将A液和B液以体积比1:1进行混合，进而适当地加入水，确认了由此得到的含有该核酸和该阳离子性脂质的组合物能够将核酸容易地导入细胞内、特别是肿瘤的细胞内。
产业上的可利用性
通过将含有本发明的新型阳离子性脂质及核酸的组合物给予至哺乳类等，可以容易地将该核酸导入例如细胞内等。
序列表中文字
序列号1-siRNA有义链
序列号2-siRNA反义链
序列号2-5'-磷酸化腺苷(5'-phosphorylated Adenosine)
序列号3-siRNA有义链
序列号4-siRNA反义链
序列号4-5'-磷酸化腺苷(5'-phosphorylated Adenosine)