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1、10申请公布号CN102070646A43申请公布日20110525CN102070646ACN102070646A21申请号201110003843322申请日20110111C07D493/2020060171申请人山东省中医药研究院地址250000山东省济南市历下区燕子山西路7号72发明人闫雪生于蓓蓓74专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218代理人李桂存54发明名称一种黄独素B的提取方法57摘要本发明公开了一种黄独素B的提取方法，包括黄药子丙酮回流提取，提取液浓缩至无丙酮味，得浸膏；浸膏与硅胶拌样，加入石油醚提取，滤渣蒸干，加入氯仿提取，提取液蒸干得氯仿部位；氯仿部位与硅胶拌样，上。
2、柱，用氯仿甲醇体积比为982的混合液洗脱，分段收集洗脱液；洗脱液回收溶剂，用丙酮溶解、析晶，得结晶，滤液再上柱，用氯仿甲醇体积比为991的混合液洗脱，洗脱液回收溶剂，用丙酮溶解、析晶，结晶合并，得黄独素B。本发明通过对提取工艺及洗脱液的选择，对黄独素B进行提取，所得的提取物中，不含其他物质，不用进一步进行分离纯化。本方法操作较简单，能够有效地提取黄独素B，对进一步研究其药理及药效具有重大意义。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN102070650A1/1页21一种黄独素B的提取方法，其特征是包括以下步骤（1）将黄药子加入丙酮中，回流提取2次。
3、，合并提取液待用；（2）将上述提取液浓缩至无丙酮味，得浸膏，然后浸膏加入硅胶拌样，干燥；（3）将干燥后的硅胶加入石油醚，回流提取3次，过滤将滤渣减压蒸干，然后加入氯仿回流提取3次，过滤、合并滤液，将滤液蒸干得氯仿部位；（4）将氯仿部位用乙醇溶解，与硅胶拌样，上硅胶柱，用氯仿甲醇体积比为982的混合液洗脱，分段收集洗脱液；（5）将分段收集的洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液进行抽滤，滤饼洗涤得结晶，滤液合并进入下一步；（6）将上述步骤（5）的滤液与硅胶拌样，上柱，用氯仿甲醇体积比为991的混合液洗脱，分段收集洗脱液，洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置。
4、析晶，将有结晶析出的洗脱液抽滤、滤饼洗涤得结晶，与步骤（5）的结晶合并，得黄独素B。2根据权利要求1所述的提取方法，其特征是步骤（1）中，丙酮的加入量为黄药子质量的47倍，回流提取时，每次提取23H。3根据权利要求2所述的提取方法，其特征是步骤（1）中，丙酮的加入量为黄药子质量的5倍。4根据权利要求1所述的提取方法，其特征是步骤（2）中，浸膏和硅胶的质量比为11，将拌样后的硅胶在50下减压干燥。5根据权利要求1所述的提取方法，其特征是步骤（3）中，石油醚的用量为硅胶质量的25倍，回流提取时每次提取12H。6根据权利要求5所述的提取方法，其特征是步骤（3）中，石油醚的用量为硅胶质量的3倍。7根据。
5、权利要求1所述的提取方法，其特征是步骤（3）中，氯仿的加入量为滤渣质量的58倍，每次回流提取的时间为23H。8根据权利要求7所述的提取方法，其特征是步骤（3）中，氯仿的加入量为滤渣质量的6倍。9根据权利要求1所述的提取方法，其特征是步骤（4）中，所用的硅胶为柱层析硅胶，氯仿部位与柱层析硅胶的质量比为11。权利要求书CN102070646ACN102070650A1/3页3一种黄独素B的提取方法0001技术领域0002本发明涉及一种中药有效成分的提取方法，具体涉及一种黄药子有效成分黄独素B的提取方法，属于中药提取技术领域。背景技术0003黄药子为薯蓣科薯蓣属植物黄独DIOSCOREABULBIF。
6、ERAL的干燥块茎，又名黄药、黄独、木药子、黄药根、黄药脂、山慈菇等，在世界范围分布广泛，我国主产于湖北、湖南、江苏等地，而河南、山东、浙江、安徽、福建等省亦有生产。其性凉味苦，具有散结消瘿、清热解毒、凉血降火之功效。黄药子中含有黄独萜酯A（DIOSBULBINEA）、皂甙、鞣质和淀粉、黄独素B、C、薯蓣皂甙元等成分，其药用历史悠久，历代本草对其治疗瘿疾、血证、外科诸证的良效均有详尽记载。现代临床上常用于治疗甲状腺疾病及各种癌症，糖尿病等，均取得一定的疗效，但由于肝、肾毒性，限制了其广泛应用。研究表明，黄独的化学成分具有多种药理作用，如抗炎、抑菌、止血、抗癌、抗病毒等，其氯仿部位的黄独素B是其。
7、抗炎活性成分之一，对大鼠角叉菜胶性足跖肿及大鼠棉球肉芽肿有显著的抑制作用，同时也是抗肿瘤活性成分，尤其对于甲状腺腺瘤有独特的疗效。现今，黄药子有效成分的提取方法较少，能够单独提取黄独素B的方法更是少见，因此，寻找一种能够简单、有效地提取黄独素B的方法对更加深入的研究其药理作用具有重大意义。发明内容0004本发明针对上述不足，提供了一种黄药子有效成分黄独素B的提取方法，本方法操作简单，所得提取物中黄独素B的纯度高。0005本发明是通过以下措施实现的一种黄独素B的提取方法，其特征是包括以下步骤（1）将黄药子加入丙酮中，回流提取2次，合并提取液待用；（2）将上述提取液浓缩至无丙酮味，得浸膏，然后浸膏。
8、加入硅胶拌样，干燥；（3）将干燥后的硅胶加入石油醚，回流提取3次，过滤将滤渣减压蒸干，然后加入氯仿回流提取3次，过滤、合并滤液，将滤液蒸干得氯仿部位；（4）将氯仿部位用乙醇溶解，与硅胶拌样，上硅胶柱，用氯仿甲醇体积比为982的混合液洗脱，分段收集洗脱液；（5）将分段收集的洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液进行抽滤，滤饼洗涤得结晶，滤液合并进入下一步；（6）将上述步骤（5）的滤液与硅胶拌样，上柱，用氯仿甲醇体积比为991的混合液洗脱，分段收集洗脱液，洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液抽滤、滤饼洗涤得结晶，与步骤（5）的结晶合。
9、并，得黄独素B。说明书CN102070646ACN102070650A2/3页40006上述步骤（3）中，石油醚提取的目的是脱脂，目标成分还在滤渣中；步骤（4）和（6）中，洗脱过程中不同成分会依次被洗脱下来，应小体积分段收集以确保分离效果，然后依照薄层层析色谱确定目标物在那一段；步骤（5）和（6）中，黄独素B在丙酮中容易析出结晶，因此洗脱液蒸干后用丙酮溶解静置，随丙酮慢慢挥发便会有黄毒素B结晶析出。0007上述步骤（1）中，丙酮的加入量为黄药子质量的47倍，回流提取时，每次提取23H。0008进一步的，上述步骤（1）中，丙酮的加入量优选为黄药子质量的5倍。0009上述步骤（2）中，浸膏和硅胶的。
10、质量比为11，将拌样后的硅胶在50下减压干燥。0010上述步骤（3）中，石油醚的用量为硅胶质量的25倍，回流提取时每次提取12H；氯仿的加入量为滤渣质量的58倍，每次回流提取的时间为23H。0011进一步的，上述步骤（3）中，石油醚的用量优选为硅胶质量的3倍；氯仿的加入量优选为滤渣质量的6倍上述步骤（4）中，所用的硅胶为柱层析硅胶，氯仿部位与柱层析硅胶的质量比为11。0012上述步骤（5）和（6）中，加入丙酮的量至少应完全溶解洗脱液回收溶剂后所留下的残留物，其具体量可根据情况进行调整。0013黄药子中的有效成分很多，在提取时一般会将很多药物有效成分同时提取出来，如果需要单独研究某一成分还要进行。
11、进一步的分离纯化，不但浪费时间还不好分离。本发明通过对提取工艺及提取液、洗脱液的选择，对黄药子的有效成分进行提取，所得的提取物中，全部为黄独素B，不含其他物质，所得黄独素B纯度高，不用进一步进行分离纯化。本方法操作较简单，能够有效地提取黄独素B，对进一步研究其药理及药效具有重大意义。具体实施方式0014下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行阐述。0015本发明实施例中所用的试药与仪器如下黄药子药材经本院中药资源室林慧彬研究员鉴定为黄独DIOSCOREABULBIFERAL的干燥块茎。柱层析硅胶（100200目）、薄层层析硅胶G均为。
12、青岛海洋化工有限公司生产，丙酮、石油醚、氯仿、甲醇等试剂均为分析纯。0016晶玻HHS4数显电子恒温水浴锅，BP211D赛多利斯电子天平，XT3A显微熔点测定仪（北京市科仪电光仪器厂）。0017实施例1取黄药子药材175KG，加入5倍量的丙酮，水浴加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液合并浓缩至无丙酮味，得浸膏47G，加入等量硅胶拌样，50减压干燥。将干燥后的硅胶样品加入3倍量的石油醚，水浴加热回流提取3次，每次1小时，提取液过滤。将滤渣减压蒸干，加入6倍量氯仿，加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，滤液合并蒸干，得氯仿部位10G，用少量95乙醇加热溶解，加入等量柱层析硅胶拌样。将。
13、氯仿部位上硅胶柱（4CM13CM），氯仿甲醇（982体积比）洗脱，因为洗脱过程中不同成分会依次被洗脱下来，所以采用小体积分段收集洗脱液的方式来进行洗脱，以确保分离效果，然后依照薄层说明书CN102070646ACN102070650A3/3页5层析色谱确定目标物在那一段。本次试验以每150ML为一段，分段收集洗脱液，所得洗脱液共1950ML。各洗脱液分别回收溶剂至干得残留物，因为黄毒素B易溶于丙酮中，所以残留物用丙酮溶解、静置析晶，随着丙酮的挥发，有些洗脱液中析出大量的无色结晶，将这些洗脱液进行抽滤、丙酮洗涤，共得结晶15G。将析出结晶的抽滤液合并，用等质量柱层析硅胶拌样，上硅胶柱（25CM1。
14、6CM），氯仿甲醇（991体积比）洗脱，以每100ML为一段，分段收集洗脱液，每段洗脱液分别回收溶剂，残留物加丙酮溶解放置，随着丙酮的挥发析出无色方柱状结晶共50MG。0018用薄层层析色谱法（氯仿甲醇（131）观察分离结果，所得结晶均为同一物质，香草醛硫酸显色为单一紫红色斑点，RF值为05。测得其熔点为285288，核磁共振波谱数据与文献中黄独素B的一致，确定该化合物为黄独素B。0019实施例2取黄药子药材175KG，加入7倍量的丙酮，水浴加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液合并浓缩至无丙酮味，得浸膏，浸膏加入等量硅胶拌样，50减压干燥。将干燥后的硅胶样品加入2倍量的石油醚，水浴加。
15、热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤。将滤渣减压蒸干，加入8倍量氯仿，加热回流提取3次，每次3小时，提取液过滤，滤液合并蒸干，得氯仿部位，用少量乙醇加热溶解，加入等量柱层析硅胶拌样。将氯仿部位上硅胶柱（4CM13CM），氯仿甲醇（982体积比）洗脱，分段收集洗脱液，回收溶剂，残留物加丙酮溶解放置，析出大量无色结晶，抽滤，少量丙酮洗，得结晶保存。将析出结晶的抽滤液合并，柱层析硅胶拌样，上硅胶柱（25CM16CM），氯仿甲醇（991体积比）洗脱，分段收集洗脱液，回收溶剂，残留物加丙酮溶解放置。析出结晶，最终提取结晶质量为152G。0020薄层层析色谱法（氯仿甲醇（131）观察分离结果，所得结晶均。
16、为同一物质，香草醛硫酸显色为单一紫红色斑点，RF值为05。其熔点为285288，核磁共振波谱数据与文献7一致，确定该化合物为黄独素B。0021实施例3采用与实施例1相同的方法提取黄独素B，不同的是，所用各种提取溶剂的量不同，具体为，丙酮的加入量为黄药子质量的4倍，干燥后的硅胶样品加入5倍量的石油醚提取，提取后的滤渣中加入5质量倍的氯仿。所得的结晶质量为151KG，将检测全部为黄独素B。0022实施例4采用与实施例2相同的方法提取黄独素B，不同的是，所用各种提取溶剂的量不同，具体为，丙酮的加入量为黄药子质量的6倍，干燥后的硅胶样品加入4倍量的石油醚提取，提取后的滤渣中加入7质量倍的氯仿。所得的结晶质量为154KG，将检测全部为黄独素B。说明书CN102070646A。