作为金属蛋白酶抑制剂的芳基 - 磺酰胺二聚体 【技术领域】
本发明适用于治疗领域， 更具体地， 本发明涉及芳基 - 磺酰氨基 (sulphonamido) 化合物、 它们的制备方法、 包含它们的药物组合物、 和它们作为治疗剂、 尤其是在变性病症 (degenerative disorder) 的治疗中的应用。背景技术
已知许多生理和病理过程的特征在于细胞的显著过度增殖和迁移性。 它们包括诸 如胚胎发生或组织的发育和分化等生理过程， 以及包括肿瘤在内的病理过程， 更一般地， 累 及多个身体区域或器官的病症 ： 肺、 肌肉、 骨骼、 皮肤， 以及神经系统、 淋巴系统、 胃肠系统、 肾系统、 黄斑 - 眼 (maculo-ocular) 系统、 心血管系统等。
在病理学的或非病理学的状态中， 高细胞增殖和迁移性主要取决于锌金属蛋白酶 的活性， 所述锌金属蛋白酶是在人类中存在的一类催化蛋白酶 ( 也称作蛋白水解酶 )， 已知 所述酶在它们的催化部位配位锌离子， 且能水解蛋白肽链内的酰胺键。 锌金属蛋白酶包括胞外基质金属蛋白酶 ( 在下文中称作 MMP)、 ADAMS(A 解联蛋白 和金属蛋白酶 ) 和 ADAMT(A 解联蛋白和含有凝血酶敏感蛋白 (Trombospondin)I 型重复序 列的金属蛋白酶 )。
一旦生成后， 这些蛋白酶保持锚定在细胞膜上， 或分泌进细胞外基质 (ECM) 中， 所 述细胞外基质是一种重要的生理结构， 其包含周围组织细胞的有组织的三维网络， 所述周 围组织细胞彼此电地、 化学地和物理地相连。
这样， 它们可以在几个细胞外过程 ( 包括细胞 - 细胞和细胞 -ECM 相互作用 ) 中以 及在细胞内生理过程 ( 例如， 组织的生长、 发育和重塑， 细胞内和细胞间信号的转导， 和粘 附现象 ) 中起关键作用。
在生理条件下， 这些锌金属蛋白酶的蛋白水解活性受到内源抑制剂的高度且精 细的调节， 所述内源抑制剂称作金属蛋白酶的组织抑制剂 (TIMP)， 已经发现它们还在调节 ADAM 和 ADAMT 的活性中发挥基础作用。
因而， MMP 和它们的抑制剂之间的微秒平衡能实现涉及 MMP 的所有生理作用的适 当功能， 例如， 胚胎生长和发育、 组织形态发生、 细胞迁移和基质重塑、 生殖过程 ( 即月经周 期和排卵 )、 骨形成、 脂肪生成、 伤口愈合和血管发生或甚至作为细胞内或细胞间肽信号的 生物活性分子的释放和加工。
由于它们在人体内的扩散和它们发挥的作用， 因而显而易见， 即使上述过程之一 的调节的任何改变 ( 例如， 由于病理学， 如肿瘤， 其进展可能决定 MMP 的过表达或低表达 (under-expression))， 会几乎不可避免地导致变性过程的发生， 从而导致组织的异常进化 和 / 或发育。
上述可能涉及 MMP 的过表达或低表达、 并因而导致改变的含有失控的细胞增殖的 组织形态学的病理学的实例可以包括 ： 关节炎和结缔组织病症 ； 神经变性病症诸如多发性 硬化、 阿尔茨海默氏病、 中风和 ALS( 肌萎缩侧索硬化 ) ； 心血管病症诸如动脉粥样硬化、 动
脉瘤、 心力衰竭、 扩张型心肌病 ； 肺病诸如肺气肿或囊性纤维化病 ； 胃溃疡 ； 脓毒病和自身 免疫病症。
另外， 在组织变性过程中， 这些锌蛋白酶的改变的表达也可以取决于例如细胞类 型、 它们的酶原形式的活化、 基因转录途径以及分泌和胞吞机制。
经 常 借 助 于 其 它 金 属 蛋 白 酶 ( 如 锚 定 在 细 胞 膜 上 的 MMP， 称作膜 - 型 MMP(MT-MMPS))、 肿瘤坏死因子 α 转化酶 ( 更好地称作 TACE( 且对应 ADAM-17)) 或甚至其 它 ADAM 或 ADAMT 的催化脱落， 调节在细胞膜表面上的有活性的锌金属蛋白酶的细胞外和细 胞内阈值。
因此， 对于治疗目的， 当发生特征在于侵入的和过度增殖的细胞的细胞表面上 的金属蛋白酶的显著活性的病理学疾患时， 希望抑制那些 MT-MMP 或一些其它的 ADAM 或 ADAMT。
迄今为止， 已经将至少 23 种不同的酶 ( 已知它们属于 MMP 家族 ) 根据它们的底物 特异性分类成亚群。
作为实例， 它们包括已知作用于胶原酶的 MMP-1、 MMP-8 和 MMP-13 ； 在另一方面， 已 知靶向明胶酶的 MMP-2 和 MMP-9 ； 和已知靶向基质溶素的 MMP-3、 MMP-10 和 MMP-11。 另 外， 迄 今 为 止 已 经 鉴 别 和 表 征 了 称 作 MT-MMP 的 膜 型 MMP 的 第 4 个 亚 群， 即： MT1-MMP(MMP-14) 、MT2-MMP(MMP-15) 、MT3-MMP(MMP-16) 、MT4-MMP(MMP-17) 、 MT5-MMP(MMP-24) 和 MT6-MMP(MMP-26) ； 但是， 仅澄清了它们中的一些所发挥的作用 ( 参见， 参考文献， HG Munshi 等人， Cancer Metastasis Rev.， 2006， 25， 45-56 ； 和 VS Golubkov 等 人， J Biol.Chem， 2005， 280， 25079-25086)。
作 为 实 例， 已 知 MMP-14 负 责 一 些 细 胞 类 型 的 外 表 面 上 的 MMP 原 (pro-MMP)-2 的活化， 所述细胞类型例如血管发生过程中血管组织的平滑肌细胞 ( 参见， 参考文献， N.Koshikawa 等 人， J.Cell.Biol.2000， 148， 615-624 ；和 Y.Itoh， H.Nagase， Essays in Biochemistry， 2002， 38， 21-36)。
另外， 已知 MMP-14 在某些类型的肿瘤细胞的膜上超表达， 诸如在黑素瘤 ( 参见， 参考文献， NE Sounni 等人， Int.J.Cancer， 2002， 98， 23-28)、 乳腺癌 ( 参见， 参考文献， NE Sounni， 等人， FASEB J 2002， 16， 555-564) 和胶质瘤 (AT Belien， 等人， J Cell Biol 1999， 144， 373-384 ； 和 EIDeryugina， 等人， Cancer Res， 2002 ； 62 ： 580-588) 中。
MMP-14 还可以活化其它 MMP 原， 如 MMP 原 -13， 已知其超表达在有些细胞类型中 与肿瘤、 炎症或心血管和神经变性病症有关 ( 参见， 例如， AR Folgueras 等人， Int.J.Dev. Biol.， 2004， 48， 411-424 ； 和 JODegushi， 等人， Circulation， 2005， 2708-2715)。
甚至已知其它 MMP 会促成 MMP 原 -2 和 / 或 MMP 原 -13 和 / 或 MMP 原 -9 的活化。 作 为实例， 已知 MMP-15、 MMP-16、 MMP-17 和 MMP-24 会活化 MMP 原 -2 和 MMP 原 -13 ； MMP-17 的作 用是仅活化 MMP 原 -2， 而 MMP-26 活化 MMP 原 -2 和 MMP 原 -9 ； 参见， 参考文献， AR Folgueras 等人 (Int.J.Dev.Biol.， 2004， 48， 411-424)。
此 外， MMP-2 和 MMP-13 在 增 殖 的 和 侵 入 的 细 胞 中 生 成， 且 在 ECM 中 被 膜 表 面 MT-MMP 的催化活性活化， 或可以任何方式活化 ； 因此， 它们代表跨 ECM 的消化表面通透性的 细胞能动性的重要工具。
基于以前对所谓的 “降 解 物 组 学 (degradomics)”的 研 究 ( 参 见， 参 考 文 献，
C Lopez-Otin 等人， Nature Rev.2002， 3， 509-519 ； 和 CM Overall 等人， Nature Review Cancer， 2006， 6， 227-239)， 现在广泛承认靶向一些 MMP( 作为癌症和其它病理学的药物递 送候选物 ) 的可能性， 同时避免干扰一些其它的 MMP 所发挥的生理作用。
这样， 正在研究要用于治疗中的 MMP 抑制剂的开发， 它们能选择性地解决病理学 疾患， 且没有前述缺点。
因此， 由于一些 MMP 的活性应当受到抑制， 以便限制和抵抗正在发生的变性过程， 调节发育和形态发生的生理过程的一些其它类型的 MMP 的活性不应受损， 因为受损可能导 致不希望的副作用。
作为实例， 它们包括肌肉骨骼综合征， 已知在膝关节囊中的纤维增生效应发生于 MMP-1 发挥的正常组织重塑活性受损后。同样地， 一些参与肿瘤发生控制的 MMP( 例如， MMP-3) 的抑制， 可能造成细胞增殖和侵入的增加。
因此， 在治疗中， 非常希望缺乏对 MMP-1 和 MMP-3( 视作抗靶物 ) 的抑制。
相反， 发现对 MMP-2 和 MMP-9 的明显选择性对肿瘤细胞培养物具有促凋亡效应， 没 有显示出重要的副作用。
因此， 搜索能在失去正常机理时特异性地调节特定 MMP 的活性的分子， 会为几种 疾病的治疗提供有用的化合物。 本领域已知的多种金属蛋白酶抑制剂， 其中一些称作磺酰氨基衍生物。
作为实例， 它们包括在 WO 01/70720 中描述的含有碳环侧链的 N- 取代的金属蛋白 酶抑制剂及其药物组合物。
US 6,686,355 公开了作为 MMP 抑制剂的联苯衍生物， 其具有环状的含氮的磺酰氨 基团。
WO 2004/069365 描述了用 γ- 发射放射性核素适当标记的诊断显像剂， 其包含携 带取代的 N， N- 二烷基链磺酰氨基团的基质金属蛋白酶抑制剂。
WO 98/39329 描述了特异性地靶向 MMP-2、 MMP-9 和 MMP-13 的磺酰氨基异羟肟酸 衍生物 ； 其中例证的几种化合物包含取代的 N， N- 二烷基侧链磺酰氨基团。
US 7,067,670 公开了对 MMP-2 和 MMP-13 具有抑制活性的烷基 - 磺酰氨基异羟肟 酸衍生物。
US 6,500,948 公开了具有 MMP 抑制活性的吡啶氧基 - 和吡啶硫基 - 芳基磺酰氨基 衍生物， 其中磺酰氨基团的 N 原子是 6 元杂环的一部分， 其携带邻近上述 N 原子的碳原子。
US 6,495,568 公开了作为基质金属蛋白酶抑制剂的烷基 - 或环烷基 - 磺酰氨基异 羟肟酸衍生物。
US 5,985,900 公开了具有 MMP 抑制活性的磺酰氨基衍生物， 其特征在于苯基 - 或 亚苯基 -SO2NH- 部分。
WO 99/42443 公开了携带基团芳基 -SO2NH- 的磺酰氨基异羟肟酸衍生物， 在其中指 示作为降解基质的金属蛋白酶。
其它磺酰氨基 MMP 抑制剂是本领域已知的。它们包括 Rossello 等人在 Bioorg.& Med.Chem.12(2004)2441-2450 中公开的明胶酶 A 的选择性抑制剂 (MMP-2)。
同样地， Tuccinardi 等人 (Bioorg.& Med.Chem.14(2006)4260-4276) 也公开了显 示出良好 MMP-2/MMP-1 选择性的 MMP-2 抑制剂。
除了上面的以外， 本领域的现有工作已经指出， 舍弃一些 MMP( 诸如 MMP-1 和 MMP-3) 的选择性的 MMP-2 抑制剂的使用， 能够阻断化学侵入 (chemoinvasion) 和血管发 生模型中的 HT1080 细胞 ( 属于高侵入性纤维肉瘤 ) 和 HUVEC( 人脐静脉内皮 ) 细胞的侵 入 (A.Rossello， 等人， Bioorg & Med.Chem.， 2004， 12， 2441-2450 ； 和 A.Rossello， 等人， Bioorg &Med.Chem.Lett.， 2005， 15， 1321-1326)。
Rossello 等 人 在 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15， (2005)， 2311-2314 中也描述了二聚的磺酰氨基 MMP 抑制剂， 且在其中称作化合物 (R， R)-2a 和 (R， R)-2b， 它们的通式记载如下 ：
也公开了携带代替氧肟酸盐 (hydroxamate) 基团的羧基的对应化合物 [(R， R)-8a 和 (R， R)-8b] 及其中间体叔丁酯。
基于在分离的酶上得到的结果， 并根据 CG Knight 等人所述的方法 ( 参见， 参 考文献， FEBS Lett.1992， 296， 263 ； 和 Methods Enzymol.1995， 248， 470)， 所述方法包括 使 用 A.Rossello 等 人 在 Bioorg.Med.Chem.Lett.12(2004)， 2441-2450 中 报 道 的 荧 光 底 物 FS-1( 例 如 Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)， 证 实 了 化 合 物 (R， R)-2b 是 MMP-2(IC50 值对应 9.8±2nM) 和 MMP-14(IC50 值对应 34±14nM) 的双重抑制剂。
我们现在已经发现了具有芳基 - 磺酰胺 (sulphonamidic) 结构的一类新的二聚的 锌金属蛋白酶抑制剂， 基于抑制实验的 IC50 值 ( 在纳摩尔 / 亚纳摩尔范围内 )， 证实它们对 目标酶 ( 具体地， MMP-2、 MMP-13 和 MMP-14) 是特别有效的。
发明内容
因此， 本发明的第一个目的是， 具有下面通式 (I) 的化合物(M)-L-(M’ ) (I) 其中 M 和 M’ 彼此相同或不同地表示式 (II) 金属蛋白酶抑制剂的残基其中 ：
R 是式 -Ar-X-Ar’ (III) 的基团， 其中 Ar 是亚芳基、 亚杂芳基 (heteroarylene)、 芳基或杂芳基， 且 Ar’ 与 Ar 相同或不同且独立于 Ar 地是芳基或杂芳基或 H ； 所述 Ar 和 Ar’ 任选地被一个或多个选自下述的基团取代 ：
(i) 直链 (straight) 或分支的 (branched) 烷基、 烷氧基、 羟烷基、 烷氧基烷基、 氨 基、 氨烷基、 烷氨基、 氨酰基、 酰氨基、 羧基或全氟化的烷基， 它们各自在烷基链中具有 1-4 个碳原子 ；
(ii) 直链或分支的 C2-C6 链烯基或炔基 ；
(iii) 卤素或氰基 (-CN) 基团 ；
X 是单键， 或它是选自下述的二价连接物 (linker) ： 直链或分支的 C1-C4 亚烷基链 、 -O-、 -S-、 -S(O)2-、 -CO-、 -NR’ -、 -NR’ CO- 或 -CONR’ -， 其中 R’ 是 H 或直链或分支的 C1-C4 烷 基；
R1 是氢、 羟基或基团 -Ra 或 -ORa， 其中 Ra 选自直链或分支的 C1-C4 烷基或 C2-C4 链 烯基 ； 或 Ra 是式 (IV) 的基团
-(CH2)p-Z-(CH2)r-W (IV)
其 中 p 是 0 或 1-4 的 整 数 ； Z 是 单 键，或 选 自 下 述 的 二 价 连 接 物： -O-、 -NR’ -、 -NR’ CO- 或 -CONR’ -，其 中 R’ 如 上 面 所 定 义 ； r 是 0 或 1-4 的 整 数； 且 W 是 苯 基 或 5 或 6 元 杂 环， 它们各自任选地被一个或多个选自下述的基团取 代： -NH2、 -COR’ 、 -CONHR’ 、 -COOR’ 或 -SO2NHR’ ( 其中 R’ 如上面所定义 )， 被芳基或杂芳基 取代， 或被一个或多个上述 (i) 至 (ii) 的基团取代 ；
R2 和 R3 相同或不同且各自独立地是氢、 任选地被羟基或 C1-C4 烷氧基取代的直链 或分支的 C1-C4 烷基、 或选自下述的锌结合基团 ： -COOH、 -COORb、 -CONHOH、 -CONHORb、 -CONRb OH、 -CONHS(O)2Rb、 -CONH2、 -CONHRb 或 -P(O)(OH)2， 其中 Rb 是在烷基链中具有 1-4 个碳原子 的直链或分支的烷基、 芳烷基或杂芳烷基 ； 或上面 R2 或 R3 基团中的任一个连接到 R1 上， 从 而形成 5-7 元杂环， 其任选地被一个或多个氧代基团 ( ＝ O) 取代 ；
G 是选自下述的基团 ： 直链或分支的 C1-C6 烷基、 芳基、 杂芳基或芳烷基， 或它是基 团 -(CH2)m-N(R4)(R5) ；
R4 是 H 或选自下述的基团 ： -CORc、 -COORc、 -S(O)2Rc、 -CONHRc 或 -S(O)2NHRc， 其中 Rc 是选自下述的基团 ： C3-C6 环烷基、 直链或分支的烷基、 芳基、 杂芳基、 芳烷基、 杂芳烷基、 烷芳基、 烷基杂芳基、 5 或 6 元杂环基、 烷基杂环基或杂环烷基， 其在烷基链中具有 1-4 个碳 原子 ；
R5 是 H， 或 R4 和 R5 与它们键合的 N 原子一起形成任选地苯并稠合的 4-6 元杂环，
其任选地被上面定义的基团 Ra 取代和 / 或被一个或多个氧代 ( ＝ O) 基团取代 ；
n是1或2；
m 是 1-6 的整数 ；
L 是 键 或 连 接 部 分 M 和 M’的 连 接 物， 所 述 连 接 物 包 含 具 有 1-20 个 碳 原 子 的 烃 链， 其任选地被一个或多个选自下述的基团隔开 ： 亚 芳 基、 亚 杂 芳 基、 亚环烷基 (cycloalkylene)、 亚杂环烷基 (heterocycloalkylene)、 -O-、 -S-、 -S(O)2-、 -CO-、 -OCO-、 -C OO-、 -NR’ -、 -NR’ CO- 或 -CONR’ -， 其中 R’ 如上面所定义， 所述链任选地被氧代 ( ＝ O)、 氨基、 羟基或羧基基团取代 ；
条件是， 当式 (I) 化合物是
( 其 中 M 和 M’是 相 同 的， 且 R2 或 R3 之 一 是 氢 ) 时， R2 或 R3 中 的 另 一 个 不 t 是 -COOH、 -COO Bu 或 -CONHOH ；
及其药学上可接受的盐。
式 (I) 化合物可以具有一个或多个不对称的碳原子， 或者称作手性碳原子， 且因 而可以以单一对映异构体、 外消旋物、 非对映异构体及其任意混合物的形式存在， 预期它们 都包含在本发明的范围内。
如上所述， 本发明的式 (I) 化合物包含 2 个金属蛋白酶抑制剂部分 M 和 M’ ， 它们各 自源自式 (II) 化合物。
如下面更详细记载的， 术语 “部分” 在本文中意在定义， 一旦直接地或通过任意合 适的连接物 L 适当地结合或缀合到分子其余部分上的特定式 (II) 分子的剩余部分。
仅作为一个非限制性实例， 本发明的化合物因而可以用下式 (I) 表示 ：
其中 M 和 M’ 彼此不同 ；
M 是下面式 (II) 的第一种金属蛋白酶抑制剂的残基， 其携带氨基作为与分子其余 部分的缀合位点 ：
其中 R 是联苯 -4- 基， n＝2； R1 ＝异丙氧基， R2 或 R3 之一是氢， 且另一个 R2 或 R3 代表与分子其余部分的连接位是基团 -CONHOH， m ＝ 2， R4 和 R5 都是氢原子， 且线 点； 且
M’ 是下面式 (II) 的另一种金属蛋白酶抑制剂的残基， 其也携带氨基作为与分子 其余部分的缀合位点 ：
其中 R 是联苯 -4- 基， n＝2； R1 ＝氢， R2 或 R3 之一是氢， 且另一个 R2 或 R3 是基 代表与分子其余部分的连接位点 ； 且 连接物 L 由下面的二价基团表示 ：团 -COOH， m ＝ 2， R4 和 R5 都是氢原子， 且线
其中线表示与 M( 在左侧 ) 和 M’ ( 在右侧 ) 的连接位点。从上面， 技术人员显而易见， 本发明的式 (I) 化合物由 2 种式 (II) 的金属蛋白酶 抑制剂的残基 M 和 M’ 表示， 它们各自通过羧酰氨基 (carboxyamido) 键与连接物 L 缀合。
类似的考虑因而适用于， 例如， 式 (II) 金属蛋白酶抑制剂之一或二者携带羧基作 为与分子其余部分的连接位点的情况。
同样地， 例如在本发明的化合物 (I) 的情况下， 其中连接物 L 是键， 部分 M 和 M’ 彼 此直接连接， 例如如下 ：
其中 M 和 M’ 具有下面的含义 ：关于连接物的种类、 连接方式、 部分之间的缀合的种类、 以及它们得到本发明化合 物的连接位置的细节， 都明确记载在下面。
如 上 所述， 在本发明 的式 (I) 化合 物内， 且 更 具体 地， 在部 分 M 和 M’内， R是 式 -Ar-X-Ar’ (III) 的基团， 其中 Ar 代表连接到 -X-Ar’ 上的亚芳基或亚杂芳基， 或当 X 代 表单键且 Ar’ 是 H 时， Ar 代表芳基或杂芳基。
在该上下文中， 尽管事实上亚芳基和亚杂芳基目前意在定义二价基团 ( 例如亚苯 基 -C6H4-)， 术语芳基和亚芳基 ( 和因而杂芳基和亚杂芳基 ) 都在本文中互换使用， 除非另 外提供。
在本说明书中， 且除非另外提供， 术语芳基 ( 和因而亚芳基 ) 是指碳环芳族基团。
术语杂芳基 ( 和因而亚杂芳基 ) 是指 5 或 6 元芳族杂环， 其具有 1-3 个选自 N、 NH、 O 或 S 的杂原子或杂原子基团。
当提及 Ar 和 Ar’ 以及提及在式 (I) 化合物中存在的任何其它芳基或杂芳基时， 杂
芳基的芳基的适当实例因而可以包括苯基、 吡咯基、 呋喃基、 噻吩基、 吡唑基、 咪唑基、 唑 基、 异 唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 噻唑基等。就式 (III) 而言， 技术人员显而易见， 当 X 代表单键时， Ar 和 Ar’ 都可以彼此直接 相连， 从而得到基团 -Ar-Ar’ ， 或者， 它们可以通过属于上面指出的那些的任意合适的二价 连接物而彼此相连， 从而提供 ( 作为实例 ) 与 -Ar-O-Ar’ 、 -Ar-S-Ar’ 、 -Ar-CONR’ -Ar’ 等相 对应的 R 基团。
另外， 且当提及 Ar’ 与氢原子 H 相对应时， 任意的上述 R 基团可以分别用 -Ar 本身 ( 当 X 是键时 ) 或用基团 -Ar-OH、 -Ar-SH、 -Ar-CONR’ H 等表示。
如以前记载的， 任意的上述 Ar 和 / 或 Ar’ 基团可以任选地在任意游离位置被一个 或多个在 (i) 至 (iii) 的项目中定义的基团进一步取代。
在任选的取代基中， 且除非另外提供， 在链中具有 1-4 个碳原子的直链或分支的 烷基是指 C1-C4 烷基中的任一个， 因而包括甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 仲 丁基和叔丁基。
同样地， 当提及烷氧基时， 是指对应的烷基 - 氧基团中的任一个， 诸如甲氧基、 乙 氧基、 正丙氧基、 异丙氧基等。
从上面， 所述烷基可以被羟基 (-OH)、 氨基 (-NH2) 或甚至被前述烷氧基 (-OAlk) 基 团 进 一 步 取 代， 从 而 分 别 得 到 羟 烷 基 (HO-Alk-)、 氨 烷 基 (H2N-Alk-) 或 烷 氧 基 烷 基 (Alk-O-Alk-) 基团。
以 此 类 推， 术 语 烷 氨 基 是 指 被 任 意 前 述 烷 基 进 一 步 取 代 的 氨 基， 从而得到 Alk-NH- 基团。
除非另外提供， 术语酰基是指常规地视作 Alk(CO)- 基团的任意基团， 其中 Alk 残 基仅代表任意直链或分支的 C1-C4 烷基。
酰基基团的适当实例因而可以包括乙酰基 (CH3CO-)、 丙酰基 (CH3CH2CO-)、 丁酰基 (butirryl)[CH3(CH2)2CO-]、 异丁酰基 [(CH3)2CHCO-]、 戊酰基 [CH3(CH2)3CO-] 等。
从上面， 氨酰基因而可以包括 H2NCO- 以及任意的上述酰基， 其中烷基链适当地被 氨基取代， 例如， 氨基乙酰基 (H2NCH2CO-)、 氨基丙酰基 [H2NCH2CH2CO- 或 CH3CH(NH2)CO-] 等。
以此类推， 除非另外提供， 酰氨基可以适当地用羧酰氨基表示， 其中任一个前 述酰基键合到 -NH- 上， 例如， 乙酰氨基 (CH3CONH-)、 丙酰氨基 (CH3CH2CONH-)、 丁酰氨基 (butirramido)[CH3(CH2)2CONH-] 等。
术语全氟化的烷基是指其中所有氢原子被氟原子替换的任意前述烷基， 例如， 三 氟甲基、 -C2F5、 -C3F7 或 -C4F9 基团。
术语直链或分支的 C2-C6 链烯基或炔基分别是指， 包含至少一个双键或三键的任 意 C2-C6 烃链。
根据本发明的链烯基或炔基的适当实例因而包括乙烯基、 烯丙基、 丙烯基、 异丙烯 基、 丁烯基、 异丁烯基、 己烯基、 乙炔基、 丙炔基、 丁炔基等。
最后， 术语卤素原子是指任意的氟、 氯、 溴或碘原子。
根据本发明的第一个实施方案， 在式 (I) 化合物内， R 代表式 (III) 的基团， 其中 Ar 代表任选取代的亚苯基， X 代表单键或选自下述的二价连接物 ： -O-、 -S- 或 -NH-， 且 Ar’ 代表 H 或任选取代的苯基。
在该类别中， 优选的取代基是直链或分支的 C1-C4 烷基或烷氧基或卤素原子。
甚至更优选地， 在式 (I) 化合物内， R 代表式 (III) 的基团， 其中 Ar 代表亚苯基， X代表单键或 -O-， 且 Ar’ 代表 H 或苯基， 所述亚苯基和苯基任选地被直链或分支的 C1-C4 烷 基或烷氧基取代或被卤素原子取代。
在该类别中， 更优选的是这样的化合物， 其中 R 是选自下述的基团 ： 联苯 -4- 基、 4- 溴苯基、 4-(4’ - 甲氧基苯基 )- 苯基、 4-(4’ - 乙氧基苯基 )- 苯基、 4- 苯氧基 - 苯基、 4-(4’ 甲氧基苯氧基 )- 苯基和 4-(4’ 乙氧基苯氧基 )- 苯基。
根据本发明的一个不同的方面， R1 是氢、 羟基、 基团 -Ra 或 -ORa， 其中 Ra 是烷基或 链烯基， 或它是式 (IV) 的基团， 其中 p、 Z 和 r 如上面所定义， 且 W 是苯基或 5 或 6 元杂环， 它们各自如上所述任选地进一步被取代。
在本说明书中， 且除非另外提供， 术语 5 或 6 元杂环或杂环基团是指任意的 5 或 6 元芳族或非芳族杂环， 因此包括饱和的、 部分不饱和的或甚至完全不饱和的环， 其含有 1-3 个选自 N、 NH、 O 或 S 的杂原子或杂原子基团。
从上面， 技术人员显而易见， 前述杂环或杂环基团的定义也包括任意的完全不饱 和的杂环， 也称作杂芳基。
杂环基团 ( 不包含已经记载的落入杂芳基定义范围内的那些 ) 的适当实例因而可 以包括四氢呋喃、 吡咯啉、 吡咯烷、 吗啉、 硫代吗啉、 哌啶、 哌嗪等。
根据本发明的一个优选的实施方案， R1 是氢或基团 -Ra 或 -ORa， 其中 Ra 是上面定 义的烷基或链烯基， 或它是式 (IV) 的基团， 其中 p 是 1 或 2， Z 是单键， 或选自 -O- 或 -NH- 的 二价基团， r 是 0、 1 或 2， 且 W 是上面定义的任选被取代的苯基或杂环基团。
在该类别中， 更优选的是这样的化合物， 其中 R1 选自氢、 异丙基、 异丙氧基、 苄氧 基、 4- 苯基 - 苄氧基、 烯丙氧基、 2-[2( 哌嗪基 -1- 基 ) 乙氧基 ] 乙氧基或 2-[2(4( 乙基羰 基 ) 哌嗪基 -1- 基 ) 乙氧基 ] 乙氧基。
就 R2 和 R3 而言， 它们独立地代表 H、 任选被取代的烷基或在以前记载的那些中的 锌结合基团。
或者， R2 或 R3 可以连接到 R1 上， 从而得到 5-7 元杂环， 该杂环至少包含一个 N 杂原 子， 例如在式 (II) 中与 S 键合的 N 原子。根据一个优选的实施方案， 上述 5-7 元杂环至少 包含 2 个邻近的 N-O 杂原子， 例如在式 (II) 中与 S 键合的 N 原子， 且 O 原子是 R1 自身的一 部分。
作为一个非限制性实例， 合适的化合物 ( 其中 R2 或 R3 中的一个 ( 例如 R2) 连接到 R1 上， 从而得到上述的杂环结构 ) 因而可以包含 ：
其中上面的邻近的 N-O 杂原子用粗体表示。
根据本发明的一个优选的实施方案， R2 和 R3 各自独立地选自 ： H、 直链或分支的 C1-C4 烷基、 -COOH、 -COORb、 -CONHOH 或 -CONHORb， 其中 Rb 是在烷基链中具有 1-4 个碳原子 的直链或分支的烷基、 芳烷基或杂芳烷基。
更优选地， 在该类别中， R2 和 R3 都是 H 原子， 或它们中的一个是 H， 且另一个 R2 或 R3 是 -COOH 或 -CONHOH。
如以前记载的， G 是选自下述的基团 ： 直链或分支的 C1-C6 烷基、 芳基、 杂芳基或芳 烷基， 所述基团如上面所定义， 或者， G 是式 -(CH2)m-N(R4)(R5) 的基团， 其中 m、 R4 和 R5 如上 所述。
关于 R4 的含义， 所述基团可以代表氢原子 H 或通过上面指出的 Rc 基团进一步衍 生化的羰基、 羧基、 磺酰基、 酰氨基或磺酰氨基。
当提及 Rc 时， 且除非另外提供， 术语 C3-C6 环烷基是指任意的 3-6 元环脂族环， 诸 如环丙基、 环丁基、 环戊基和环己基。
从上面， 已经定义了烷基、 芳基、 杂芳基和杂环 ( 或杂环基 ) 的含义， 诸如芳烷基、 烷芳基、 杂芳烷基、 烷基杂芳基、 烷基杂环基或杂环基烷基等任意复合名称基团是技术人员 显而易见的。
仅仅作为实例， 且除非另外提供， 术语烷芳基是指被烷基进一步取代的任意芳基 ： 例如对 - 乙基 - 苯基 (pC2H5-C6H4-) ； 而术语芳烷基是指被芳基进一步取代的任意烷基 ： 例如 2- 苯基 - 乙基 (C6H5-CH2-CH2-) ； 等。
从上面的所有内容， 技术人员显而易见， 类似的考虑可以适用于杂芳烷基、 烷基杂 芳基、 杂环烷基或烷基杂环基基团。
关于 R5， 它代表 H， 或者， R4 和 R5 与它们键合的 N 原子一起形成任选地苯并稠合的 4-6 元杂环， 如上所述。
所述杂环 ( 例如被 Ra 和氧代基团取代 ) 的适当实例因而可以包括 ：
根据本发明的另一个优选的实施方案， G 是直链或分支的 C1-C6 烷基、 优选异丙基， 或它是式 -(CH2)m-N(R4)(R5) 的基团， 其中 R4 选自 -CORc、 -COORc 或 -S(O)2Rc， 其中 Rc 是芳 基、 直链或分支的烷基或芳烷基， 其在烷基链中具有 1-4 个碳原子 ； 且 R5 是 H。
在该类别中， 甚至更优选的是这样的式 (II) 化合物， 其中 R4 选自乙酰基、 苯甲酰 基、 苯乙酰基、 4- 苯基丁酰基、 苄氧基羰基、 甲磺酰基、 苯基磺酰基或苄基磺酰基， 且 R5 是 H。
根据本发明的另一个不同的实施方案， R4 和 R5 与它们键合的 N 原子一起， 形成 N- 邻苯二甲酰亚氨基 (N-phthalimido group)。
最后， 根据本发明的另一个优选的实施方案， 在式 (I) 化合物内， n 和 m 都是 2。
除了作为金属蛋白酶抑制剂部分 M 和 M’ 之间的连接基团以外， 连接物 ( 如果存在 的话 ) 还可以在它们之间提供适当的距离。
在这方面， 这些单元之间的最佳距离可以代表一个重要的因素， 从而得到和维持 本发明化合物对金属蛋白酶的靶向能力。实际上， 基于磺酰氨基的靶向部分的任何不适 当的或任何方式的次优衍生化， 可能导致得到的二聚化合物对靶向对象的亲和力的显著损 失。
另外， 上面的连接物可以显著地改善得到的式 (I) 化合物的亲水性， 从而提供得 到的衍生物的希望的药物代谢动力学或药效学特性。
如以前记载的， L 是键或连接部分 M 和 M’ 的连接物， 所述连接物包含具有 1-20 个 碳原子的烃链， 其任选地被一个或多个选自下述的基团隔开 ： 亚芳基、 亚杂芳基、 亚环烷基、 亚杂环烷基、 -O-、 -S-、 -S(O)2-、 -CO-、 -OCO-、 -COO-、 -NR’ -、 -NR’ CO- 或 -CONR’ -， 其中 R’ 如上面所定义， 所述链任选地被氧代 ( ＝ O)、 氨基、 羟基或羧基基团取代。
根据本发明的连接物 L 的适当实例如下所述， 所述通式是便于与分子其余部分的 缀合反应的反应官能团的综合 ：
大多数连接物是已知的， 且可商业上得到， 通式其它连接物可以根据众所周知的 方法来制备， 例如按照上面引用的参考文献。
在连接物 L 中， 特别优选的是由被亚芳基环、 优选 1， 3- 亚苯基和 1， 4- 亚苯基环隔 开的烃链表示的那些， 所述链被氧代基团进一步取代和 / 或被 -CONH- 或 -NHCO- 基团进一 步隔开。
在它们中， 甚至更优选的是下式的连接物 ：
其中线表示与分子其余部分的连接点。作为式 (II) 金属蛋白酶抑制剂的残基的部分 M 和 M’ ， 在特定缀合位点处连接到分 子其余部分上， 从而得到对应的酰氨基连接。
这样， 借助于作为式 (II) 金属蛋白酶抑制剂本身的一部分的反应官能团 ( 例如羧 基或氨基 ) 和任选的连接物， M 和 M’ ( 无论相同还是不同 ) 可以直接地或通过连接物 L 彼 此缀合。
在这方面， 在 M 和 M’ 残基内的优选的连接点因而可以由下述基团表示 ：
-R， 当 R 是式 (III) 的基团时， 其适当地被反应官能团取代， 所述反应官能团允许 与分子的其余部分缀合 ( 例如羧基或氨基 ) ；
-R1， 例如当 R1 自身是氢时， 或当它代表如以前记载的基团 -Ra 或 -ORa 时， 所述基 团被前述反应官能团 ( 例如羧基、 氨基或甚至杂环如哌嗪子基 (piperazino)) 取代 ；
- 任意 R2 和 R3， 例如当代表羧基时 ； 和
-G， 例如当代表基团 -(CH2)m-N(R4)(R5) 时， 其中任意 R4 和 / 或 R5 是氢原子或携带 前述反应官能团的杂环基团。
从上面所有内容， 本发明的优选的化合物类别由式 (I) 衍生物表示 ：
(M)-L-(M’ ) (I)
其中 M 和 M’ 彼此相同或不同地选自 ：
其中 R、 n、 R1、 R2、 R3、 m、 G、 p、 Z、 r 和 W 如上面所记载， 线代表与分子其余部分的连接点 ； 且 L 如上面所记载。
根据本发明的一个优选的实施方案， M 和 M’ 是相同的， 且更优选地， 它们与分子其 余部分连接或缀合的位置通过相同的反应官能团发生。
如以前记载的， 本发明的式 (I) 化合物也可以以药学上可接受的盐的形式存在。
本文使用的术语 “药学上可接受的盐” 是指本发明的化合物的衍生物， 其中通过用 常规地视作药学上可接受的任意碱或酸将任意游离的酸性或碱性基团 ( 如果存在的话 ) 转 化成对应的加成盐， 适当地修饰母体化合物。
除了无毒以外， 本发明的式 (I) 化合物的对应的盐的特征还在于高稳定性， 包括 在使用和给药后的生理稳定性。所述盐的适当实例因而可以包括碱性残基 ( 诸如氨基 ) 的无机或有机酸加成盐， 以及酸性残基 ( 诸如羧基、 膦酸基或硫酸基 ) 的无机或有机碱加成盐。
适用于制备本发明的盐的无机碱的优选阳离子包括碱金属或碱土金属的离子， 诸 如钾、 钠、 钙或镁。有机碱的优选阳离子包括， 除了别的以外， 伯胺、 仲胺和叔胺 ( 诸如乙醇 胺、 二乙醇胺、 吗啉、 葡萄糖胺、 N- 甲基葡萄糖胺、 N、 N- 二甲基葡萄糖胺 ) 的那些。
适用于与本发明的化合物成盐的无机酸的优选阴离子包括卤酸的离子， 诸如氯化 物、 溴化物、 碘化物或其它合适的离子诸如硫酸盐。
有机酸的优选阴离子包括在制药技术中常规地用于碱性物质的成盐的那些， 例 如， 醋酸盐、 三氟醋酸盐、 琥珀酸盐、 柠檬酸盐、 延胡索酸盐、 马来酸盐或草酸盐。
适用于与本发明的化合物成盐的优选氨基酸也可以包括， 例如， 牛磺酸、 甘氨酸、 赖氨酸、 精氨酸、 鸟氨酸、 天门冬氨酸和谷氨酸。
在下面的实验部分中， 记载了本发明的式 (I) 化合物的具体实例， 以及它们的制 备方法。
根据有机合成化学技术领域的技术人员众所周知的常规方法， 可以实现本发明的 化合物的制备方法。
优选地， 所述制备方法包括， 首先制备式 (II) 金属蛋白酶抑制剂， 然后直接地或 通过存在的任意合适的连接物 L 对它们进行缀合反应。
式 (II) 金属蛋白酶抑制剂描述在 WO 2008/113756(PCT/EP2008/053078) 中， 且它 们的制备包括 ：
(a) 使式 (V) 的化合物与式 (VI) 的化合物反应
其中 R、 R1、 R2、 R 3、 G 和 n 具有上面记载的含义， 从而得到式 (II) 化合物 ； 和， 任选地 (b) 将在步骤 (a) 中得到的式 (II) 化合物转化成另一个式 (II) 化合物和 / 或其 药学上可接受的盐 ；
(c) 直接地或通过如上定义的合适的连接物 L， 用在任意的步骤 (a) 或 (b) 中如此 得到的相同或不同的式 (II) 化合物， 缀合在任意的步骤 (a) 或 (b) 中如此得到的式 (II) 化合物。
上述方法是特别有利的， 因为它易于通过任意适当的变量来适当地控制， 从而得 到任意希望的本发明的式 (I) 化合物。
在所述方法的步骤 (a) 中， 根据制备磺酰氨基或亚磺酰氨基 (sulphinamido) 的常 规方法， 进行式 (V) 和 (VI) 的化合物之间的反应， 其中 n 分别为 2 或 1。
典型地， 在有合适的溶剂存在下， 在已知的 Mitsunobu 缩合操作条件下进行反 应， 所述溶剂包括， 除了别的以外， 四氢呋喃、 二氯甲烷、 乙腈、 N- 甲基吡咯烷酮、 苯、 甲苯、
间 - 二甲苯、 及其混合物。
在这方面， 在有合适的缩合剂存在下， 可以进行上述反应， 所述缩合剂原样使用， 或适当地负载在聚合树脂上， 包括， 例如， 偶氮二羧酸二乙酯 (DEAD)、 偶氮二羧酸二异丙酯 (DIAD)、 1， 1- 偶氮二羰基二哌啶 (ADDP)、 N， N， N’ ， N’ - 四甲基偶氮二甲酰胺 (TMAD)、 三苯基 膦 (PPh3)、 三丁基膦 (PBu3) 等。
从上面所有内容， 技术人员显而易见， 在所述方法的步骤 (a) 中， 任意 R、 R1、 R2、 R3 和 G 基团 ( 在下文中简短地称作 “R” 基团 ) 可以原样存在， 或者， 可以以任意适当保护的形 式存在。
更具体地， 在发生缩合反应之前， 需要适当保护存在于任意式 (V) 或 (VI) 的化合 物中且会产生不希望的副作用和副产物的官能团。 同样地， 在完成所述反应后， 可以随后去 保护这些受保护的基团。
在本发明中， 除非另有说明， 术语 “保护基” 是指适合保护它结合的基团的功能 的保护基团。具体地， 保护基用于保护氨基、 羟基或羧基功能。适当的保护基因而可以 包括， 例如， 苄基、 苄氧基羰基、 烷基或苄酯、 或常用于这些功能的保护的其它取代基， 它们 都是本领域技术人员熟知的 [ 参见， 一般参考文献， T.W.Green ； Protective Groups in OrganicSynthesis(Wiley， N.Y.1981)]。 同样地， 任意所述基团 ( 例如包括羧基、 羟基和氨基 ) 的选择性保护和去保护， 都 可以根据有机合成化学中常用的非常熟知的方法来实现。
除了上面的以外， 按照所述方法的步骤 (b)， 在式 (II) 化合物中的可以容易地鉴 别为衍生基团 ( 例如任意的酯或酰胺 ) 的任意 “R” 基团， 可以通过根据常规方法的操作， 从 它的来源官能团制备。
作为一个非限制性实例， 例如在制备式 (II) 化合物 ( 其中 R2 是基团 -COORb， Rb 是烷基， 且 R3 是 H) 的情况下， 根据该方法可以制备相同的化合物 ： (i) 从式 (VI) 化合物开 始， 其中 R2 和 R3 如上面所定义， 执行步骤 (a) ； 或者， (ii) 从对应的式 (II) 化合物开始， 其 中 R2 是 -COOH， 且通过将羧基适当地转化成希望的 -COORb 基团， 执行该方法的步骤 (b)。
上述反应条件是本领域熟知的用于羧酸酯的制备。
类似的考虑可以适用于， 例如， 羧酰胺 (carboxamide) 的制备， 其中使对应的羧基 衍生物与任意合适的胺适当地反应， 并根据众所周知的操作条件进行操作。
同样地， 例如在式 (II) 化合物 ( 其中 R2 是异羟肟基团 -CONHOH) 的制备中， 该方法 可以如下实现 ： 首先， 在有合适的反应物 ( 例如， O-( 叔丁基二甲基甲硅烷基 ) 羟胺、 O-( 四 氢 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 羟胺、 O- 三苯甲基羟胺或 O- 苄基羟胺， 视情况而定 ) 存在下， 使在步 骤 (a) 中得到的式 (II) 化合物 ( 其中 R2 是羧基 ) 反应。
随后去保护得到的中间体衍生物， 例如在有三氟乙酸存在的酸性水解下， 或使用 三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯， 或通过催化氢化 ( 在 O- 苄基羟胺的情况下 )， 得到希望的 化合物， 其中 R2 是 -CONHOH。
几个其它实施例是本领域已知的， 允许将式 (II) 化合物内的特定基团转化成另 一个基团。它们可以包括， 例如 ： 将氨基 (-NH2) 或羧酰氨基 (-CONH2) 转化成对应的 N- 取 代的衍生物 ； 按照众所周知的操作条件， 通过在有碳酸铯存在下与苄基溴反应， 将羧基转 化成对应的苄酯衍生物 ； 将羧基 (-COOH) 转化成对应的 (-CONHSO3H) 基团， 其中首先将
它转化成 (-CONH2)， 随后在有 2- 甲基吡啶存在下与氯磺酸反应 ； 将羧基 (-COOH) 转化成 对应的 [-CH2PO(OH)2] 基团， 其中首先将它还原成羟甲基 (-CH2OH)， 随后借助于亚硫酰氯 转化成 (-CH2Cl)， 随后与亚磷酸三乙酯反应， 得到对应的 [-CH2P(OH)2] 基团， 最后水解成 [-CH2PO(OH)2]。
所有上述反应及其操作条件是本领域熟知的， 且允许得到多种式 (II) 化合物。
显然， 也按照该方法的步骤 (b)， 存在于在步骤 (a) 中得到的式 (II) 化合物中且会 产生不希望的副产物的任意官能团， 需要在发生反应之前予以适当保护， 然后根据已知的 方法去保护。
关于在式 (II) 化合物的制备中采用的具体操作条件， 参见， 作为实例， 下面的方 案 1， 其提供了制备一些代表性化合物的合成途径。但是， 具体细节可以参见实验部分。
在下面的方案 1 中， 记载了某些代表性的式 (II) 化合物的制备， 其中 n 和 m 都是 2； R、 R1 和 R4 具有本文记载的含义， R2 或 R3 之一是 H， 且 R2 或 R3 中的另一个是羧基或异羟 肟基团 (-COOH 或 -CONHOH)， 且 R5 是 H。
方案 1
基本上， 上述制备方法包括下述步骤 ：
i) 用任意合适的保护基保护化合物 (5) 的羧基， 例如用在甲苯中的 N， N- 二甲基 甲酰胺二 - 叔丁基缩醛 ( 参见， 作为一般参考文献， Rossello 等人 Bioorg.Med.Chem.Lett， 2005， 15， 1321)， 从而提供式 (6) 的化合物 ；
ii) 通过根据众所周知的 Mitsunobu 操作条件进行操作， 例如在有偶氮二羧酸二
异丙酯 (DIAD) 和三苯基膦 (PPh3) 作为缩合剂存在下， 在合适的溶剂如四氢呋喃中， 使化合 物 (7-10) 中的任一种与式 (6) 的化合物反应， 从而得到对应的式 (11-14) 化合物 ； 并按照 下面的替代途径处理它们 ：
iii) 根据常规的方法去保护化合物 (12-13) 的氨基， 所述方法包括， 例如， 用在乙 酸中的钯或铂催化剂进行催化氢化， 从而得到化合物 (15-16) ；
iv) 适当地官能化化合物 (15-16) 的氨基， 从而得到任意希望的 -NHR4 基团， 根据 化合物 (17-22)， 例如通过与任意合适的酰化剂反应 ；
v) 在合适的水解条件下， 例如在有三氟乙酸的存在下且在合适的溶剂如二氯甲烷 中， 去保护羧酸官能团， 从而得到对应的化合物 (23-28) ；
vi) 根据已知的方法， 例如借助于在二氯甲烷中的 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷基 ) 羟 胺， 将化合物 (23-28) 的羧基转化成合适的甲硅烷基衍生物 (29-34)， 随后加入 1-[3-( 二甲 氨基 ) 丙基 ]-3- 乙基碳二亚胺 ；
vii) 和水解化合物 (29-34)， 例如用在二氯甲烷中的三氟乙酸， 从而得到希望的 式 (II) 化合物 ；
或者
iii’ ) 去保护化合物 (11 和 14) 的羧酸官能团， 从而得到化合物 (35 和 36)， 例如 通过按照步骤 (v) 操作 ；
iv’ ) 将这样得到的化合物转化成对应的甲硅烷基衍生物 (37-38)， 例如通过按照 步骤 (vi) 操作 ；
v’ ) 和水解化合物 (37-38)， 例如通过按照步骤 (vii) 操作， 从而得到希望的式 (II) 化合物。
得到后， 然后用选择的式 (II) 金属蛋白酶抑制剂 ( 产生其余部分 M’ ) 缀合选择的 式 (II) 金属蛋白酶抑制剂 ( 例如产生部分 M)， 从而得到本发明的化合物。
如下进行缀合 ： 根据已知的方法， 使在选择的与分子其余部分的连接位置携带合 适的反应官能团 ( 如氨基或羧基 ) 的式 (II) 金属蛋白酶抑制剂适当地与分子其余部分反 应。
上述缀合反应可以根据本领域已知的多种方法来实现， 例如在有合适的活化偶联 剂存在下， 从而得到对应的缀合的本发明的化合物， 例如羧酰胺。
类似的考虑适用于下述情况 ： 首先， 使任意的式 (II) 金属蛋白酶抑制剂 ( 产生部 分 M 和 M’ ) 与合适的连接物反应， 然后使得到的化合物分别与选择的残余部分 M’ 或M反 应。
显然， 可以适当地保护存在于任意金属蛋白酶抑制剂部分或任选的连接物中且不 参与上述缀合反应的任意官能团， 从而避免不希望的副产物的形成， 并最后根据已知的方 法去保护。
从上面的所有内容， 技术人员显而易见， 可以方便地调整用于制备本发明的合适 的式 (I) 化合物的上述方法、 其任意变体的综合， 从而使反应条件适合具体需要， 例如通过 选择适当的缩合剂、 溶剂和保护基， 视情况而定。
最后， 通过适当地将任意游离酸性基团 ( 例如羧酸、 硫酸、 膦酸等 ) 或游离氨基转 化成对应的药学上可接受的盐， 可以进行式 (I) 化合物的任选的成盐。也在该情况下， 用于本发明的化合物的任选的成盐的操作条件都属于技术人员的普通常识。
作为该方法的原料的式 (V) 和 (VI) 的化合物是已知的， 或可以根据已知的方法容 易地制备。
例如， 基本上如下通过使任意合适的氨基化合物与任意合适的磺酰氯衍生物反 应， 可以制备式 (V) 的磺酰氨基衍生物 ：
R1-NH2+R-S(O)2Cl → R-S(O)2NHR1
同样地， 如果本身尚未知， 上述胺和磺酰氯衍生物可以根据已知的方法从可商业 得到的化合物容易地制备。
类似的考虑可以适用于式 (VI) 化合物， 其本身如果不可商业得到， 可以根据本领 域熟知的常规方法方便地制备。
药理学 ： 抑制活性
根据本发明， 式 (I) 化合物具有对基质金属蛋白酶的抑制活性， 因此在治疗中可 用于治疗其中改变了所述酶的调节的病理学。
更具体地， 根据在实施例 19 中所述的方法， 测试了化合物， 以证实它们对 MMP-2、 MMP-13 和 MMP-14 的活性。
如其中记载的， 在简短称作 FS-6 的已知荧光底物 (Mca-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu -Dpa-Ala-Arg-NH2) 上评价了本发明的化合物的抑制活性 ( 参见， 参考文献， U.Neumann， Analytical Biochem.2004， 328， 166-173)。
通过将赖氨酸残基插入 Mca 和脯氨酸残基之间， 从类似的 FS-1 开发出所述荧光底 物 ( 参见， 参考文献， 前述 CG Knight 等人， 见 Febs Lett.1992， 296， 263-266)。
据报道， 随着 FS-6 中肽链的延长， 会提高 MMP 水解底物的能力， 推测是因为空间阻 碍的 Mca 部分， 该部分可能已经引起一些 MMP 的底物亲和力的降低， 根据该更精确的且非常 合理的方法， 基于 FS-6， 测试了本发明的化合物。
因此， 按照如此得到的实验数据及其评论 ( 参见实施例 19)， 本发明的化合物具有 对 MMP-2、 MMP-13 和 MMP-14 的抑制活性， 其显著优于结构上接近的现有化合物 ( 目前鉴别 为参照化合物 (R， R)-2b)。
由于它们的意外的活性特性， 因此， 本发明的化合物在治疗中可以有利地用于治 疗广泛地称作变性病症的那些病理学 ( 其中涉及上述酶 )。
因此， 本发明的另一个实施方案是用作药物的式 (I) 化合物及其药学上可接受的 盐。
另外， 在本发明的范围内也包括上述式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐在药物 制备中的应用， 所述药物用于治疗变性病症。
所述变性病症包括肿瘤， 和更一般地， 导致具有失控的细胞增殖的改变的组织形 态学的病理学。
所述病理学因而可以包括 ： 关节炎和结缔组织病症 ； 神经变性病症诸如多发性硬 化、 阿尔茨海默氏病、 中风和 ALS( 肌萎缩侧索硬化 ) ； 心血管病症诸如动脉粥样硬化、 动脉 瘤、 心力衰竭、 扩张型心肌病 ； 肺病诸如肺气肿或囊性纤维化病 ； 胃溃疡 ； 脓毒病和自身免 疫病症 (autoimmune disorder)。
在另一个实施方案中， 本发明涉及药物组合物， 其包含药学有效量的如上所述的式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐作为活性成分， 以及一种或多种药学上可接受的载 体、 稀释剂或赋形剂。
本发明的组合物可以根据本领域广泛已知的制备药物形式的常规方法来制备， 且 可以包含本领域已知其预期目的的任意载体、 稀释剂或赋形剂。
在另一个方面， 本发明提供了治疗上述变性病症的方法， 该方法包括， 给有此需要 的哺乳动物施用治疗有效量的式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐。
从上面所有内容， 可以容易地预见到， 本发明的化合物可以在治疗中具有广泛应 用， 且因而可以根据预期给药途径 ( 即局部给药、 口服给药和肠给药 ) 的常规方法适当地配 制。
为了更好地解释本发明， 且不对其施加任何限制， 现在给出下面的实施例。 在这方 面， 技术人员显而易见的其它用途， 包括制备方法的可能的变体， 因而视作包含在本发明范 围内。
实验部分
下面的实施例 1-15 和对应的合成方案 1-6 涉及式 (II) 金属蛋白酶抑制剂的制 备； 后面的实施例 16-18 和对应的合成方案 7-10 则涉及本发明的式 (I) 化合物的制备。
在实施例 19 中还记载了本发明的一些代表性化合物对选择的金属蛋白酶的抑制 除非另外提供， 维持在下面的方案中记载的化合物编号索引。 通过方案 1 描绘的方法， 制备目前编号为化合物 (1a-1h) 的化合物 (II)。数据。
通过用 N， N- 二甲基甲酰胺二 - 叔丁基缩醛直接酯化可商业得到的 α- 羟酸 (5)， 合成光学活性的 α- 羟基 - 叔丁酯 (6)( 参见 Rossello， A. 等人 ； Bioorg.Med.Chem.Lett， 2005， 15， 1321)。磺酰胺 (7-10) 与 α- 羟基 - 叔丁基 - 酯 (6) 的 Mitsunobu 缩合反应产生 叔丁酯 (11-14)。酯 (11， 14) 的酸裂解产生羧酸 (35， 36)， 在用 O-( 叔丁基 - 二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺处理后， 将其转化成它们的 O- 甲硅烷基酯 (O-silylate)(37， 38)。用三氟乙酸水 解 O- 甲硅烷基叔丁酯 (37， 38)， 得到异羟肟酸 (1a， 1h)。通过 (12， 13) 的 Pd- 催化的氢化， 继之以商业的酰氯的酰化， 得到叔丁酯 (17-22)。 酯 (17-22) 的酸裂解产生羧化物 (23-28)， 随后将其转化成它们各自的 O- 甲硅烷基叔丁酯 (29， 34)。然后通过用三氟乙酸处理 (29， 34)， 得到异羟肟酸 (1b-1g)。
也根据方案 2 制备编号为化合物 (2-4) 的其它式 (II) 化合物。
通过使用 N， N- 二甲基甲酰胺二 - 叔丁基缩醛直接酯化可商业得到的 α- 羟酸 (39)， 得到 (S)-α- 羟基 - 叔丁酯 (40)。用 α- 羟基 - 叔丁基 - 酯 (40) 对磺酰胺 (9， 41 和42) 进行 Mitsunobu 偶联， 得到叔丁酯 (43-45)。(43， 44) 的酸裂解产生羧酸 (46， 47)， 在用 O-( 叔丁基 - 二甲基甲硅烷基 ) 羟胺处理后， 将其转化成它们的 O- 甲硅烷基酯 (48， 49)。 用 三氟乙酸水解 O- 甲硅烷基叔丁酯 (48， 49)， 得到异羟肟酸 (2 和 3)。用酯 (45) 对可商业得 到的 4- 乙氧基苯基硼酸进行 Suzuki 偶联， 得到联苯酯 (50)， 使用上述方法， 将其转化成异 羟肟酸 (4)。
按照下面的方案 5， 通过可商业得到的醇 (63) 和磺酰胺 (8) 之间的 Mitsunobu 缩合反应， 制备了另一种式 (II) 的金属蛋白酶抑制剂， 其目前指示为化合物 (64)， 其中式 (II) 中的 R2 和 R3 都是 H 原子，
如方案 3 所示， 制备在方案 1 和 2 中使用的磺酰胺 (7-10 和 41， 42)。在用 N- 甲基 吗啉处理后， 用适当的 O- 烷基羟胺 (53-55) 偶联可商业得到的芳基磺酰氯 (56-59)( 参见 Rossello， A. 等人 ； Bioorg.Med.Chem.2004， 12， 2441)。而 O- 烷基羟胺 (53 和 54) 是可商 业得到的， 如方案 4 所述制备 (55)。在与二碳酸二叔丁酯反应后， 对商业的氨基醇 (60) 进 行 N- 保护， 得到哌嗪衍生物 (61)。 与 N- 羟基邻苯二甲酰亚胺的 Mitsunobu 反应产生 (62)， 通过用在乙醇中的水合肼进行肼解， 将其转化成 (55)。
还制备了具有下式的编号为化合物 (1i-1k) 的其它式 (II) 化合物 ：
通过如以前记载的在 Mitsunobu 偶联条件下使磺酰氨基衍生物 (65) 与方案 1 的 化合物 (6) 适当反应， 如方案 6 所示制备化合物 (1i) 和 (1j)。然后用三氟乙酸去保护得到 的化合物 (66)， 从而得到化合物 (1i)， 为二 - 三氟醋酸盐。
然后如以前记载的， 将该后一种羧酸转化成对应的异羟肟酸衍生物 (1j) 二 - 三氟 醋酸盐。
然后通过在有三乙胺存在下根据常规方法操作， 用 2， 5- 二氧吡咯烷 -1- 基丙酸酯 在哌嗪子基 N 原子处酰化化合物 (1j)， 从而得到对应的化合物 (1k)。
以此类推， 如方案 3 和 4 记载的， 得到用于制备化合物 (10) 的原料 (65)。
在 Varian Gemini 200(200MHz) 上 记 录 1H-NMR 波 谱， 使 用 CDCl3、 DMSO-d6 或 (CD3)2CO 作为溶剂。 在 GC/MS Trace GCQ Plus ThermoQuest Finnigan 光谱仪上记载质谱。
方案 1
方案 2
方案 3
方案 4
方案 5
方案 6
方案 7在用 N- 甲基吗啉处理后， 使可商业得到的联苯 -4- 磺酰氯与 O- 苄基羟胺盐酸化 物偶联 ( 参见 Rossello， A. 等人 ； Bioorg.Med.Chem.2004， 12， 2441)， 得到磺酰胺 4。磺酰 胺 4 与 α- 羟基 - 叔丁基 - 酯 5 的 Mitsunobu 缩合反应 ( 参见 Rossello， A. 等人 ； Bioorg. Med.Chem.Lett， 2005， 15， 1321)， 生成叔丁酯 6。如下得到二聚的叔丁酯 9 ： 对 6 进行 Pd- 催 化的氢化， 随后用酰氯 8 酰化。后者如 Rossello， A. 等人 Bioorg.Med.Chem.Lett.2005， 15， 2311-2314 所报道地合成。9 的酸裂解， 生成羧化物 (carboxylate)1a， 随后将其转化成
O- 甲硅烷基叔丁酯。然后通过用三氟乙酸处理 O- 甲硅烷基叔丁酯， 得到异羟肟酸 1b。
还根据下面的方案 8 和 9， 制备了本发明的其它式 (I) 化合物 (2a， b)。
方案 8
方案 9在与二碳酸二叔丁酯反应后， 商业的 1-[2-(2- 羟基乙氧基 ) 乙基 ] 哌嗪的 N- 保护 生成哌嗪衍生物 (10)。与 N- 羟基邻苯二甲酰亚胺的 Mitsunobu 反应， 生成 (11)， 通过用在 乙醇中的水合肼进行肼解， 将其转化成 (12)。在用 N- 甲基吗啉处理后， 使可商业得到的联 苯 -4- 磺酰氯与 (12) 偶联， 得到磺酰胺 (13)。磺酰胺 (13) 与 α- 羟基 - 叔丁基 - 酯 (5) 的 Mitsunobu 缩合反应 ( 如上所述 )， 生成叔丁酯 (14)。14 的酸裂解生成羧化物 (15)， 通 过与间苯二甲酰氯反应， 将其酰化。将二聚的酸 (2a) 转化成 O- 甲硅烷基叔丁酯， 随后通过 三氟乙酸处理， 水解成异羟肟酸 (2b)。
还根据下面的方案 10， 制备了本发明的其它式 (I) 化合物 (3a， 3b)。
方案 10
通过方案 10 描绘的方法， 制备了式 (3a， b) 的二聚的抑制剂。 通过在有三乙胺存在 下与联苯 -4- 磺酰氯反应， 将 D- 缬氨酸酰化， 得到 (16)。通过与 N， N- 二甲基甲酰胺二 - 叔 丁基缩醛反应， 将后者作为叔丁酯保护， 然后通过 Mitsunobu 反应， 与醇 (10) 缩合 ( 如上所 述 )。 (18) 的酸裂解， 生成羧化物 (19)， 通过与间苯二甲酰氯反应， 将其酰化， 得到 (3a)。 将 二聚的酸 (3a) 转化成 O- 甲硅烷基叔丁酯， 随后通过三氟乙酸处理， 水解成异羟肟酸 (3b)。
实施例 1 式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1a) ： (R)- 苄基 3-(N-( 苄氧基 ) 联苯 -4- 基磺酰氨基 )-4-( 羟氨基 )-4- 氧代丁基氨基甲酸酯
化合物 (6) 的制备
将 含 有 N， N- 二 甲 基 甲 酰 胺 二 - 叔 丁 基 缩 醛 (18.92mL， 78.96mmol) 的 (S)-(+)-Z-4- 氨 基 -2- 羟 基 丁 酸 (5)(5g， 19.74mmol) 在 甲 苯 (38mL) 中 的 溶 液 加 热 至 95℃ 3h。然后蒸发溶剂， 并通过硅胶上的快速色谱法 ( 正己烷 /EtOAc ＝ 7 ∶ 4) 纯化粗产 物， 得到 (6)(3.4g， 55.7％产率 )， 为黄色固体。 20
Mp 42-44℃ ； [α] D ＝ -5.9° (c ＝ 10.1mg/ml， CHCl3) 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.47(s， 9H) ； 1.76-1.85(m， 1H) ； 1.94-2.09(m， 1H) ； 2.74(br s， 1H) ； 3.36(dd， J ＝ 6.04Hz， J ＝ 11.99Hz， 2H) ； 4.10(dd， J ＝ 4.02Hz， J ＝ 8.05Hz， 1H) ； 5.09(s， 2H) ； 5.21(br s， 1H) ； 7.31-7.37(m， 5H)
C16H23NO5 的分析计算值 ： C， 62.12 ； H， 7.49 ； N， 4.53. 实测值 ： C， 62.22 ； H， 7.48 ； N， 4.53。
化合物 (7) 的制备
将联苯 -4- 磺酰氯 (56)(3.17g， 12.53mmol) 在无水 THF(32mL) 中的溶液逐滴加入 搅拌的且冷却的 (0℃ )O- 苄基羟胺盐酸化物 (53)(2g， 12.53mmol) 和 N- 甲基吗啉 (2.75mL， 25.06mmol) 在无水 THF(32mL) 中的溶液中。在这些条件下 30min 后， 将反应混合物在室温 搅拌 3 天， 然后用 AcOEt 稀释， 并用 H2O 洗涤， 在后处理后， 得到磺酰胺 (7)(3.62g， 85％ )， 为白色固体。
熔点＝ 130-132℃ ； 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 5.01(s ， 2H) ； 7.01(s ， 1H) ； 7.35(m ， 5H) ； 7.44-7.51(m ， 3H) ； 7.57-7.62(m， 2H) ； 7.70-7.75(m， 2H) ； 7.97-8.01(m， 2H)。
化合物 (11) 的制备
在氮气氛下在 0℃， 将偶氮二羧酸二异丙酯 (DIAD)(1.28mL， 6.52mmol) 逐滴加入 仲醇 (6)(0.8g， 2.61mmol)、 磺酰胺 (7)(1.3g， 3.91mmol) 和三苯基膦 (2.05g， 7.83mmol) 在 无水 THF(45mL) 中的溶液。将得到的溶液在室温搅拌 5h， 并在减压下蒸发， 得到粗产物， 将 其通过硅胶上的快速色谱法 ( 正己烷 /EtOAc ＝ 3 ∶ 1) 进行纯化， 得到化合物 (11)(0.95g， 58％产率 )， 为纯的黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.25(s， 9H) ； 1.90-2.04(m， 2H) ； 3.16-3.40(m， 2H) ； 4.16(t， J＝ 7.1Hz， 1H) ； 4.93-5.00(m， 1H) ； 5.07-5.19(m， 4H) ； 7.33-7.37(m， 10H) ； 7.41-7.59(m， 5H) ； 7.66-7.70(m， 2H) ； 7.92-7.97(m， 2H)。 13
C-NMR(CDCl3)δ ： 22.09 ； 27.87 ； 37.59 ； 62.75 ； 66.76 ； 80.87 ； 82.56 ； 127.43 ； 127.67 ； 128.16 ； 128.56 ； 128.72 ； 128.92 ； 129.14 ； 129.89 ； 129.94 ； 133.89 ； 134 ； 80 ； 139.17 ； 146.84 ； 156.27。
化合物 (35) 的制备
将 三 氟 乙 酸 (0.9mL， 57.00mmol) 逐 滴 加 入 搅 拌 的 冷 却 至 0 ℃ 的 叔 丁 酯 (11) (136mg， 0.21mmol) 在新鲜蒸馏的 CH2Cl2(1.0mL) 中的溶液中。将溶液在 0℃搅拌 5h， 并在 真空下去除溶剂， 得到化合物 (35)(128mg， 100％产率 )， 为油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.60-1.70(m， 1H) ； 1.88-2.08(m， 1H) ； 3.19(m， 2H) ； 4.30(t， J＝ 6.9Hz， 1H) ； 5.02-5.17(m， 4H) ； 7.28-7.34(m， 10H) ； 7.40-7.51(m， 3H) ； 7.55-7.59(m， 2H) ；7.65-7.70(m， 2H) ； 7.91-7.95(m， 2H)。
化合物 (37) 的制备
向冷却至 0℃的羧酸 (35)(117mg， 0.2mmol) 和 O-( 叔丁基二甲基 - 甲硅烷基 ) 羟 胺 (44mg， 0.3mmol) 在新鲜蒸馏的 CH2Cl2(3.6mL) 中的溶液中， 分批加入 1-[3-( 二甲氨基 ) 丙基 ]-3- 乙基碳二亚胺盐酸化物 (EDCI)(57.5mg， 0.3mmol)。在室温搅拌 20h 后， 用 H2O 洗 涤混合物， 并在真空中干燥和蒸发有机相。通过硅胶上的快速色谱法 ( 正己烷 /EtOAc ＝ 2.5 ∶ 1) 纯化残余物， 得到化合物 (37)(28mg， 20％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.13(s， 6H) ； 0.90(s， 9H) ； 1.90-2.11(m， 2H) ； 2.80-3.40(m， 2H) ； 4.13-4.22(m ， 1H) ； 5.02-5.27(m ， 4H) ； 7.31-7.46(m ， 13H) ； 7.53-7.58(m ， 2H) ； 7.64-7.68(m， 2H) ； 7.84-7.88(m， 2H)。
标题化合物 (1a) 的制备
将三氟乙酸 (0.15mL， 1.85mmol) 逐滴加入搅拌的冷却至 0℃的化合物 (37)(23mg， 0.03mmol) 在新鲜蒸馏的 CH2Cl2(1mL) 中的溶液中。将溶液在 0℃搅拌 5h， 并在真空下去除 溶剂， 得到粗产物， 将其从 Et2O 和正己烷中重结晶， 得到 (1a)(10mg， 53％产率 )， 为固体。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.99(m， 2H) ； 3.00-3.35(m， 2H) ； 4.29(m， 1H) ； 5.08-5.26(m， 4H) ； 7.34-7.45(m， 13H) ； 7.53-7.58(m， 2H) ； 7.66-7.70(m， 2H) ； 7.87-7.91(m， 2H)。
实施例 2
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1b) ： (R)-N-(4-( 羟氨基 )-3-(N- 异丙氧基联 苯 -4- 基磺酰氨基 )-4- 氧代丁基 ) 苯甲酰胺
化合物 (8) 的制备
如 Rossello， A. 等人 (Bioorg.Med.Chem.2004， 12， 2441) 以前所述， 制备 N- 异丙 氧基 -1， 1’ - 联苯 -4- 磺酰胺。
化合物 (12) 的制备
按照以前关于化合物 (11) 的制备所述的操作， 如实施例 1 所述， 从磺酰胺衍生物 (8)(1.08g， 3.72mmol) 和醇 (6)(0.76g， 2.48mmol) 制备叔丁酯 (12)。通过快速色谱法 ( 正 己烷 /AcOEt ＝ 5 ∶ 1) 纯化粗反应混合物， 得到 (12)(1.14g， 79％产率 )， 为黄色油。 20
[α] D ＝ +55° (c ＝ 9.1mg/L， CHCl3) ； 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.22-1.25(m， 15H) ； 2.04(m， 2H) ； 3.22-3.37(m， 2H) ； 4.12(dd， J ＝ 7.14Hz， J ＝ 14.29Hz， 1H) ； 4.43( 七重峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 5.08(s， 2H) ； 7.34(m， 5H) ； 7.42-7.53(m， 3H) ； 7.55-7.61(m， 2H) ； 7.7-7.74(m， 2H) ； 7.94-7.98(m， 2H)。
化合物 (15) 的制备
在氢气氛下， 在有 10 ％ Pd-C(0.20g) 和冰醋酸 (80mL) 存在下， 将化合物 (12) (0.74g， 1.27mmol) 在 MeOH(80mL) 中的溶液在室温搅拌 17h。在硅藻土上过滤得到的混合 物， 并在减压下蒸发滤液， 得到 (15)(0.60g， 93％产率 )， 为褐色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.10(brs， 9H) ； 1.20(t， J ＝ 4.4Hz， 6H) ； 2.16-2.30(m， 2H) ； 3.16(m， 2H) ； 4.34-4.46(m， 2H) ； 7.40-7.51(m， 3H) ； 7.56-7.59(m， 2H) ； 7.71-7.75(m， 2H) ； 8.00-8.04(m， 2H)。 13
C-NMR(CDCl3)δ ： 21.15 ； 21.22 ； 27.72 ； 36.70 ； 62.97 ； 80.03 ； 82.49 ； 127.03 ； 127.45 ； 127.59 ； 127.76 ； 128.67 ； 129.14 ； 130.49 ； 133.60 ； 139.30 ； 146.89。化合物 (17) 的制备
用苯甲酰氯 (0.08mL， 0.70mmol) 和 i-Pr2NEt(0.20mL， 1.18mmol) 处理化合物 (15) (0.30g， 0.59mmol) 在干燥的 DMF(6mL) 中的溶液。将反应混合物在室温搅拌 17h， 然后用 醋酸乙酯稀释， 用 H2O 洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 并蒸发。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2.5 ∶ 1) 纯化粗产物， 得到 (17)(112mg， 34％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.13(brs， 9H) ； 1.23(d， J ＝ 5.1Hz， 3H) ； 1.26(d， J ＝ 4.4Hz， 3H) ； 2.10-2.21(m， 2H) ； 3.34-3.50(m， 1H) ； 3.80-3.92(m， 1H) ； 4.23(t， J ＝ 7.1Hz， 1H) ； 4.45( 七重峰， 1H) ； 7.39-7.59(m， 10H) ； 7.69-7.73(m， 2H) ； 7.93-7.98(m， 2H)。
化合物 (23) 的制备
按照以前关于化合物 (35) 的制备所述的操作， 按照实施例 1， 从酯衍生物 (17) (0.10g， 0.18mmol) 制备羧酸 (23)(89mg， 100％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.20(t， J ＝ 5.1Hz， 6H) ； 1.80-2.28(m， 2H) ； 3.40-3.55(m， 1H) ； 3.60-3.82(m， 1H) ； 4.30-4.50(m， 2H) ； 6.56(brs， 1H) ； 7.43-7.58(m， 10H) ； 7.66-7.69(m， 2H) ； 7.91-7.94(m， 2H)。
化合物 (29) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基 - 甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (23)(90mg， 0.18mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 得到 希望的产物 (30mg， 27％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.16(s， 6H) ； 0.93(s， 9H) ； 1.22(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.28(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.02-2.16(m， 2H) ； 3.20(m， 1H) ； 3.43(m， 1H) ； 4.06-4.20(m， 1H) ； 4.46( 七 重 峰， 1H) ； 6.76(brs， 1H) ； 7.35-7.65(m， 10H) ； 7.73-7.77(m， 2H) ； 7.87-7.91(m， 2H) ； 9.01(brs， 1H)。
标题化合物 (1b) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (29)(30mg， 0.05mmol)， 在从 Et2O 中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (15mg， 60.5％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.24(t， J ＝ 6.5Hz， 6H) ； 1.44-1.69(m， 1H) ； 2.05-2.21(m， 1H) ； 3.10-3.50(m， 2H) ； 4.20-4.50(m， 2H) ； 7.10(brs， 1H) ； 7.30-7.55(m， 10H) ； 7.59-7.63(m， 2H) ； 7.86-7.90(m， 2H)。
实施例 3
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1c) ： (R)-N- 羟基 -2-(N- 异丙氧基联苯 -4- 基 磺酰氨基 )-4-( 甲基磺酰氨基 ) 丁酰胺
化合物 (18) 的制备
用甲磺酰氯 (0.05mL， 0.60mmol) 和 N- 甲基吗啉 (0.13mL， 1.2mmol) 处理根据实施 例 2 制备的化合物 (15)(0.30g， 0.60mmol) 在干燥的 THF(3mL) 中的溶液。将反应混合物 在室温搅拌过夜， 然后用 AcOEt 稀释， 用 H2O 洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 并蒸发。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 3 ∶ 2) 纯化粗产物， 得到 (18)(100mg， 32％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.14(brs ， 9H) ； 1.20-1.26(m ， 6H) ； 2.04(brs ， 2H) ； 2.95(s ， 3H) ； 3.29(brs， 2H) ； 4.25(t， J ＝ 7.1Hz， 1H) ； 4.42( 七 重 峰， 1H) ； 7.43-7.54(m， 3H) ； 7.58-7.62(m， 2H) ； 7.74-7.78(m， 2H) ； 7.96-8.00(m， 2H)。化合物 (24) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯衍生物 (18) (100mg， 0.19mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的羧酸 (24)(73mg， 79 ％产 率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.22(d ， J ＝ 6.2Hz ， 6H) ； 2.06-2.17(m ， 2H) ； 2.91(s ， 3H) ； 3.21(brs， 2H) ； 4.34-4.44(m， 2H) ； 7.42-7.53(m， 3H) ； 7.61-7.66(m， 2H) ； 7.74-7.78(m， 2H) ； 7.95-7.99(m， 2H)。
化合物 (30) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (24)(70mg， 0.15mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 1) 得到 希望的产物 (32mg， 33％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.15(s， 6H) ； 0.93(s， 9H) ； 1.20(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.25(d， J ＝ 5.8Hz， 3H) ； 2.00-2.15(m， 2H) ； 2.83(s， 3H) ； 2.89-2.99(m， 2H) ； 4.23-4.29(m， 1H) ； 4.40( 七重峰， 1H) ； 7.42-7.52(m， 3H) ； 7.61-7.66(m， 2H) ； 7.79-7.83(m， 2H) ； 7.96-8.00(m， 2H) ； 8.64(brs， 1H)。
标题化合物 (1c) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (30)(30mg， 0.05mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (15mg， 60％产 率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.24(t ， J ＝ 6.4Hz ， 6H) ； 2.01-2.18(m ， 2H) ； 2.88(s ， 3H) ； 3.00-3.20(m， 2H) ； 4.40-4.48(m， 2H) ； 4.88(brs， 1H) ； 7.42-7.53(m， 3H) ； 7.62-7.66(m， 2H) ； 7.78-7.83(m， 2H) ； 7.95-7.99(m， 2H)。
实施例 4
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1d) ： (R)-4- 乙酰氨基 -N- 羟基 -2-(N- 异丙氧 基联苯 -4- 基磺酰氨基 ) 丁酰胺
化合物 (19) 的制备
按照与实施例 2 中化合物 (17) 的制备类似的操作， 用乙酰氯酰化酯衍生物 (15) (0.30g， 0.59mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 1) 得到希望的产物 (19)(60mg， 22％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3 ) δ ： 1.19-1.24(m ， 15H) ； 1.90-2.01(m ， 5H) ； 3.13-3.23(m ， 1H) ； 3.53(m， 1H) ； 4.12(m， 1H) ； 4.40( 七 重 峰， 1H) ； 6.11(brs， 1H) ； 7.41-7.52(m， 3H) ； 7.57-7.61(m， 2H) ； 7.72-7.76(m， 2H) ； 7.94-7.98(m， 2H)。 13
C-NMR(CDCl3)δ ： 21.17 ； 23.48 ； 27.76 ； 36.17 ； 63.59 ； 79.80 ； 82.25 ； 127.39 ； 127.52 ； 128.72 ； 129.16 ； 130.14 ； 133.80 ； 139.19 ； 146.84 ； 170.22。
化合物 (25) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯衍生物 (19) (60mg， 0.12mmol)， 得到希望的羧酸 (25)(60mg， 100％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.16(d， J ＝ 2.01， 3H) ； 1.19(d， J ＝ 2.01， 3H) ； 1.92-2.10(m， 5H) ； 3.15-3.60(m ， 2H) ； 4.20-4.39(m ， 2H) ； 6.73(brs ， 1H) ； 7.42-7.52(m ， 3H) ；7.59-7.63(m， 2H) ； 7.73-7.77(m， 2H) ； 7.93-7.97(m， 2H) ； 10.24(brs， 1H)。
化合物 (31) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (25)(60mg， 0.14mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 2) 得到 希望的产物 (12mg， 16％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.15(s， 6H) ； 0.93(s， 9H) ； 1.21(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.25(d， J＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.90-2.05(m， 5H) ； 2.80-3.26(m， 2H) ； 4.06-4.16(m， 1H) ； 4.44( 七 重 峰， 1H) ； 5.95(brs， 1H) ； 7.42-7.53(m， 3H) ； 7.58-7.65(m， 2H) ； 7.76-7.80(m， 2H) ； 7.92-7.96(m， 2H) ； 8.90(brs， 1H)。
标题化合物 (1d) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁 酯 (31)(12mg， 0.02mmol)， 得到希望的异羟肟酸 (11mg， 90％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.23(d， J ＝ 6.7， 6H) ； 1.90-2.08(m， 5H) ； 3.04-3.35(m， 2H) ； 4.22(m， 1H) ； 4.40( 七 重 峰， 1H) ； 6.73(brs， 1H) ； 7.42-7.52(m， 3H) ； 7.59-7.63(m， 2H) ； 7.76-7.80(m， 2H) ； 7.92-7.96(m， 2H)。
实施例 5
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1e) ： (R)-N- 羟基 -2-(N- 异丙氧基联苯 -4- 基 磺酰氨基 )-4-(2- 苯基乙酰氨基 ) 丁酰胺
化合物 (20) 的制备
按照与实施例 2 中化合物 (17) 的制备类似的操作， 用苯基乙酰氯酰化酯衍生物 (15)(0.30g， 0.59mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 得到希望的产物 (55mg， 16％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.10-1.22(m ， 15H) ； 1.81-2.05(m ， 2H) ； 3.00-3.21(m ， 1H) ； 3.50-3.60(m， 3H) ； 3.96(t， J ＝ 7.5Hz， 1H) ； 4.38( 七 重 峰， 1H) ； 7.28-7.37(m， 5H) ； 7.43-7.54(m， 3H) ； 7.57-7.62(m， 2H) ； 7.68-7.73(m， 2H) ； 7.80-7.84(m， 2H)。
化合物 (26) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯衍生物 (20) (55mg， 0.09mmol)， 得到希望的羧酸 (26)(53mg， 100％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.14(d， J ＝ 3.4， 3H) ； 1.17(d， J ＝ 3.4， 3H) ； 1.93-2.10(m， 2H) ； 3.14(m， 1H) ； 3.47(m， 1H) ； 3.61(s， 2H) ； 4.13(t， J ＝ 7.3Hz， 1H) ； 4.33( 七 重 峰， 1H) ； 5.32(brs， 1H) ； 6.14(brs， 1H) ； 7.22-7.26(m， 1H) ； 7.30-7.37(m， 4H) ； 7.42-7.53(m， 3H) ； 7.58-7.63(m， 2H) ； 7.67-7.73(m， 2H) ； 7.82-7.86(m， 2H)。
化合物 (32) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (26)(53mg， 0.10mmol)， 得到化合物 (32)(54mg， 80％产率 )。
标题化合物 (1e) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (32)(54mg， 0.08mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (30mg， 68％产 率 )。48102105456 A CN 102105459
1说明书40/54 页H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.18-1.32(m ， 6H) ； 1.83-2.22(m ， 2H) ； 3.10-3.28(m ， 2H) ； 3.48(s ， 2H) ； 4.11(m ， 1H) ； 4.39( 七 重 峰， 1H) ； 6.23(brs ， 1H) ； 7.16-7.36(m ， 5H) ； 7.43-7.47(m， 3H) ； 7.57-7.61(m， 2H) ； 7.67-7.72(m， 2H) ； 7.86-7.90(m， 2H)。
实施例 6
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1f) ： (R)-4- 乙酰氨基 -N- 羟基 -2-(N- 异丙氧 基 -4′ - 甲氧基联苯 -4- 基磺酰氨基 ) 丁酰胺
化合物 (9) 的制备
将可商业得到的 4’ - 甲氧基 - 联苯 -4- 基磺酰氯 (1g， 3.53mmol) 在无水 THF(8mL) 中的溶液， 逐滴加入到搅拌的且冷却的 (0℃ )O- 异丙基羟胺盐酸化物 (0.4g， 3.53mmol) 和 N- 甲基吗啉 (0.77mL， 7.06mmol) 在无水 THF(8mL) 中的溶液。在这些条件下 30min 后， 将反 应混合物在室温搅拌 3 天， 然后用 AcOEt 稀释， 并用 H2O 洗涤， 在后处理后， 得到磺酰胺 (9) (0.94g， 83％产率 )， 为白色固体。
熔点＝ 162-163℃ ； 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.20(d， J ＝ 6.2Hz， 6H) ； 3.86(s， 3H) ； 4.28( 七重峰， J ＝ 6.0Hz， 1H) ； 6.80(s， 1H) ； 6.97-7.04(m， 2H) ； 7.53-7.60(m， 2H) ； 7.68-7.72(m， 2H) ； 7.93-7.97(m， 2H)。
化合物 (13) 的制备
按照以前实施例 1 关于化合物 (11) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (9)(482mg， 1.5mmol) 和醇 (6)(310mg， 1.0mmol) 制备叔丁酯 (13)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 5 ∶ 2) 纯化粗反应混合物， 得到 (13)(455mg， 74％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.21-1.32(m ， 15H) ； 1.90-2.10(m ， 2H) ； 3.10-3.50(m ， 2H) ； 3.86(s， 3H) ； 4.06-4.16(m， 1H) ； 4.43( 七重峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 5.08(s， 2H) ； 6.97-7.02(m， 2H) ； 7.34(m， 5H) ； 7.51-7.56(m， 2H) ； 7.65-7.70(m， 2H) ； 7.90-7.94(m， 2H)。
化合物 (16) 的制备
按 照 与 化 合 物 (15) 的 制 备 类 似 的 操 作， 在 有 10 ％ Pd-C 存 在 下 氢 化 酯 (13) (450mg， 0.73mmol)， 得到 (16)(428mg， 100％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.15-1.27(m， 15H) ； 2.04-2.10(m， 2H) ； 3.06(m， 2H) ； 3.86(s， 3H) ； 4.27(m， 1H) ； 4.41( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.98-7.02(m， 2H) ； 7.52-7.56(m， 2H) ； 7.68-7.72(m， 2H) ； 7.95-7.99(m， 2H)。
化合物 (21) 的制备
按照与实施例 2 中化合物 (17) 的制备类似的操作， 用乙酰氯酰化酯 (16)(215mg， 0.40mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2 ∶ 3) 得到希望的产物 (86mg， 42％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.19-1.25(m ， 15H) ； 1.90-2.04(m ， 5H) ； 3.13-3.50(m ， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 4.12(m， 1H) ； 4.41( 七 重 峰， 1H) ； 6.99-7.03(m， 2H) ； 7.53-7.57(m， 2H) ； 7.69-7.73(m， 2H) ； 7.91-7.95(m， 2H)。
化合物 (27) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (21)(81mg， 0.15mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的羧酸 (27)(50mg， 67％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.15-1.22(m ， 6H) ； 1.88-2.05(m ， 5H) ； 3.19-3.35(m ， 2H) ；3.84(s ， 3H) ； 4.24(t ， 1H) ； 4.37( 七 重 峰， 1H) ； 6.30(brs ， 1H) ； 6.96-7.00(m ， 2H) ； 7.53-7.58(m， 2H) ； 7.67-7.71(m， 2H) ； 7.89-7.94(m， 2H)。
化合物 (33) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (27)(50mg， 0.10mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 2) 得到 希望的产物 (45mg， 71％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.15(s， 6H) ； 0.92(s， 9H) ； 1.23-1.27(m， 6H) ； 1.91-2.00(m， 5H) ； 3.00-3.20(m， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 4.06-4.13(m， 1H) ； 4.43( 七 重 峰， 1H) ； 5.89(brs， 1H) ； 6.98-7.03(m ， 2H) ； 7.56-7.60(m ， 2H) ； 7.72-7.76(m ， 2H) ； 7.88-7.93(m ， 2H) ； 8.80(brs， 1H)。
标题化合物 (1f) 的制备
按照与化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (33) (43mg， 0.07mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (31mg， 90 ％产 率 )。
熔点＝ 83-85℃ ； 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.20-1.26(m ， 6H) ； 1.94-2.04(m ， 5H) ； 3.02-3.40(m ， 2H) ； 3.86(s ， 3H) ； 4.22(m ， 1H) ； 4.45( 七 重 峰， 1H) ； 6.09(brs ， 1H) ； 6.98-7.02(m ， 2H) ； 7.55-7.59(m， 2H) ； 7.71-7.75(m， 2H) ； 7.89-7.94(m， 2H)。
实施例 7
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1g) ： (R)-N- 羟基 -2-(N- 异丙氧基 -4′ - 甲氧 基联苯 -4- 基磺酰氨基 )-4-(2- 苯基乙酰氨基 ) 丁酰胺
化合物 (22) 的制备
按照与实施例 2 中化合物 (17) 的制备类似的操作， 用苯基乙酰氯酰化酯 (16) (200mg， 0.37mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 3 ∶ 2) 得到希望的产物 (53mg， 24％ 产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.16-1.25(m， 15H) ； 1.90-2.05(m， 2H) ； 3.12(m， 2H) ； 3.57(s， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 3.94(t， J ＝ 7.5Hz， 1H) ； 4.37( 七 重 峰， 1H) ； 6.98-7.04(m， 2H) ； 7.31-7.37(m， 5H) ； 7.52-7.57(m， 2H) ； 7.64-7.68(m， 2H) ； 7.77-7.81(m， 2H)。
化合物 (28) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (22)(48mg， 0.08mmol)， 得到希望的羧酸 (28)(46mg， 100％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.15(d， J ＝ 1.8Hz， 3H) ； 1.18(d， J ＝ 1.8Hz， 3H) ； 1.93-2.10(m， 2H) ； 3.10(m ， 2H) ； 3.56(s ， 2H) ； 3.86(s ， 3H) ； 4.15(m ， 1H) ； 4.37( 七 重 峰， 1H) ； 6.98-7.02(m， 2H) ； 7.30-7.39(m， 5H) ； 7.54-7.58(m， 2H) ； 7.63-7.67(m， 2H) ； 7.80-7.84(m， 2H)。
化合物 (34) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (28)(42mg， 0.07mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 得到 希望的产物 (17mg， 32％产率 )。50102105456 A CN 102105459
1说明书42/54 页H-NMR(CDCl3)δ ： 0.15(s， 6H) ； 0.92(s， 9H) ； 1.17-1.25(m， 6H) ； 1.91-1.95(m， 2H) ； 3.00-3.20(m， 2H) ； 3.50(s， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 4.01-4.06(m， 1H) ； 4.39( 七 重 峰， 1H) ； 5.75(brs， 1H) ； 6.98-7.02(m， 2H) ； 7.21-7.34(m， 5H) ； 7.54-7.59(m， 2H) ； 7.67-7.71(m， 2H) ； 7.82-7.87(m， 2H)。
标题化合物 (1g) 的制备
按照与化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (34) (15mg， 0.02mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (10mg， 77 ％产 率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.19-1.22(m ， 6H) ； 1.94-1.98(m ， 2H) ； 3.00-3.20(m ， 2H) ； 3.51(s ， 2H) ； 3.86(s ， 3H) ； 4.10-4.16(m ， 1H) ； 4.41( 七 重 峰， 1H) ； 5.89(brs ， 1H) ； 6.97-7.01(m， 2H) ； 7.21-7.32(m， 5H) ； 7.53-7.57(m， 2H) ； 7.65-7.69(m， 2H) ； 7.83-7.87(m， 2H)。
实施例 8
式 (II) 的 中 间 体 的 制 备 ： 化 合 物 (1h) ： (R)- 苄 基 4-( 羟 氨 基 )-4- 氧 代 -3-(N-(2-(2-( 哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 联苯 -4- 基磺酰氨基 ) 丁基氨基甲酸酯
化合物 (61) 的制备
向 1-[2-(2- 羟基乙氧基 ) 乙基 ] 哌嗪 (60)(5.0g， 28.7mmol) 在 CH2Cl2(20mL) 中 的溶液中， 逐滴加入在 0℃的二碳酸二叔丁酯 (6.9g， 31.5mmol) 在 CH2Cl2(20mL) 中的溶液。 在室温搅拌 12h 后， 用 Et2O 稀释溶液， 用饱和的 NaHCO3 溶液、 盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4) 并浓 缩， 得到 Boc- 保护的衍生物 (61)(7.2g， 92％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.43(s， 9H) ； 2.45(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.57(t， J ＝ 5.3Hz， 2H) ； 3.44(t， J ＝ 5.1Hz， 4H) ； 3.56-3.67(m， 6H) ； 4.17(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)。 13
C-NMR(CDCl 3) δ ： 28.47 ； 43.46 ； 53.16 ； 57.97 ； 61.86 ； 67.69 ； 72.44 ； 79.69 ； 155.00
化合物 (62) 的制备
在氮气氛下， 将偶氮二羧酸二乙酯 (DEAD)(2.15mL， 13.65mmol) 逐滴加入到醇 (61)(2.50g， 9.10mmol)、 N- 羟基邻苯二甲酰亚胺 (1.48g， 9.10mmol) 和三苯基膦 (3.58g， 13.6mmol) 在无水 THF(100mL) 中的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌过夜， 并在减压下蒸 发， 得到粗产物， 将其通过硅胶上的快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 4 ∶ 1) 进行纯化， 得到 (62)(4.30g， 98％产率 )， 为纯的黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.44(s， 9H) ； 2.38(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.50(t， J ＝ 5.6Hz， 2H) ； 3.39(t， J ＝ 5.3Hz， 4H) ； 3.64(t， J ＝ 5.6Hz， 2H) ； 3.82(t， J ＝ 4.2Hz， 2H) ； 4.37(t， J＝ 4.3Hz， 2H) ； 7.72-7.86(m， 4H)。
化合物 (55) 的制备
将 水 合 肼 (1.73mL， 35.87mmol) 加 入 化 合 物 (62)(4.30g， 10.25mmol) 在 乙 醇 (210mL) 中的溶液。在室温搅拌 14h 后， 过滤混合物， 并浓缩滤液。用 AcOEt 稀释残余物， 通 过过滤去除沉淀物， 并蒸发滤液， 得到希望的 O- 烷基羟胺 (55)(2.15g， 72.6％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.45(s， 9H) ； 2.45(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.61(t， J ＝ 5.8Hz， 2H) ； 3.43(t， J ＝ 5.1Hz， 4H) ； 3.58-3.65(m， 4H) ； 3.80-3.85(m， 2H)。化合物 (10) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (7) 的制备类似的操作， 使 O- 烷基羟胺 (55)(2.85g， 9.86mmol) 与联苯 -4- 磺酰氯 (56) 反应。 硅胶柱色谱法 (AcOEt) 得到希望的磺酰胺 (3.05g， 61％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.44(s， 9H) ； 2.44(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.58(t， J ＝ 5.6Hz， 2H) ； 3.43(t， J ＝ 5.3Hz， 4H) ； 3.61(t， J ＝ 5.5Hz， 2H) ； 3.67-3.71(m， 2H) ； 4.10-4.15(m， 2H) ； 7.41-7.53(m， 3H) ； 7.58-7.63(m， 2H) ； 7.71-7.75(m， 2H) ； 7.97-8.01(m， 2H)。
化合物 (14) 的制备
按照以前实施例 1 中关于化合物 (11) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (10)(1.18g， 2.33mmol) 和醇 (6) 制备叔丁酯 (14)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 5) 纯化粗 反应混合物， 得到希望的产物 (1.39g， 75％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.33(s ， 9H) ； 1.43(s ， 9H) ； 1.74-1.98(m ， 2H) ； 2.42(m ， 4H) ； 2.58(t， J ＝ 5.3Hz， 2H) ； 3.12-3.26(m， 2H) ； 3.40(m， 4H) ； 3.56-3.65(m， 4H) ； 4.09-4.41(m， 3H) ； 5.05(s， 2H) ； 5.22(br s， 1H) ； 7.32(m， 5H) ； 7.40-7.74(m， 7H) ； 7.96-8.00(m， 2H)。
化合物 (36) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (14)(1.39g， 1.74mmol)， 在从 Et2O 中重结晶后， 得到希望的羧酸 (36)(1.30g， 86％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.80-2.05(m， 2H) ； 3.19-3.29(m， 6H) ； 3.40(m， 4H) ； 3.62(m， 10H) ； 4.15(m， 2H) ； 4.29(t， J ＝ 6.5Hz， 1H) ； 5.01(s， 2H) ； 5.35(brs， 1H) ； 7.29(m， 5H) ； 7.43-7.52(m， 3H) ； 7.57-7.63(m， 2H) ； 7.70-7.74(m， 2H) ； 7.90-7.94(m， 2H)。
标题化合物 (1h) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基甲硅烷 基 ) 羟胺偶联羧酸 (36)(0.14g， 0.16mmol)。硅胶柱色谱法 (CHCl3/MeOH ＝ 9 ∶ 1) 得到希 望的异羟肟酸 (13mg， 12％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.80-2.00(m， 2H) ； 2.47-3.17(m， 16H) ； 4.13(m， 3H) ； 4.92(s， 2H) ； 6.25(brs， 1H) ； 7.18(m， 5H) ； 7.38-7.64(m， 7H) ； 7.96(m， 2H)。
实施例 9
式 (II) 的 中 间 体 的 制 备 ： 化 合 物 (2) ： (R)-4-(1， 3- 二 氧 代 异 吲 哚 啉 (isoindolin)-2- 基 )-N- 羟基 -2-(N- 异丙氧基 -4′ - 甲氧基联苯 -4- 基磺酰氨基 ) 丁酰 胺
化合物 (40) 的制备
按照与实施例 1 中化合物 (6) 的制备类似的操作， 用 N， N- 二甲基甲酰胺二 - 叔丁 基缩醛处理 (S)-α- 羟基 -1， 3- 二氧代 -2- 异吲哚啉丁酸 (39)(1.0g， 4.0mmol)。硅胶柱色 谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 3 ∶ 2) 得到希望的酯 (530mg， 43％产率 )， 为白色固体。
熔点＝ 122-123℃ ； 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.46(s ， 9H) ； 1.87-2.23(m ， 2H) ； 3.02(d ， J ＝ 5.3Hz ， 1H) ； 3.86(t， J ＝ 7.3Hz， 2H) ； 4.07-4.16(m， 1H) ； 7.69-7.75(m， 2H) ； 7.80-7.87(m， 2H)。
化合物 (43) 的制备
按照以前关于化合物 (11) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (9)(400mg， 1.24mmol) 和醇 (40)(250mg， 0.82mmol) 制备叔丁酯 (43)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 纯化粗反应混合物， 得到希望的产物 (217mg， 43％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.24-1.29(m ， 15H) ； 2.10-2.30(m ， 2H) ； 3.51-3.74(m ， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 4.06-4.23(m， 1H) ； 4.46( 七重峰， 1H) ； 6.98-7.03(m， 2H) ； 7.52-7.88(m， 10H)。
化合物 (46) 的制备
按照与化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (43)(205mg， 0.33mmol)， 在 从 Et2O 中重结晶后， 得到希望的羧酸 (46)(135mg， 74％产率 )。
熔点＝ 185-187℃ ； 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.21(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.27(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.10-2.28(m， 2H) ； 3.61(m， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 4.33(m， 1H) ； 4.46( 七 重 峰， 1H) ； 6.98-7.02(m， 2H) ； 7.50-7.54(m， 4H) ； 7.65-7.85(m， 6H)。
化合物 (48) 的制备
按照与化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基 - 甲硅烷基 ) 羟胺偶 联羧酸 (46)(130mg， 0.23mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 3 ∶ 2) 得到希望的产物 (110mg， 70％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.26(s， 6H) ； 1.00(s， 9H) ； 1.23(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.30(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.15-2.30(m， 2H) ； 3.30-3.60(m， 2H) ； 3.89(s， 3H) ； 4.03(m， 1H) ； 4.43( 七 重 峰， 1H) ； 6.98-7.02(m， 2H) ； 7.16(m， 2H) ； 7.36-7.41(m， 2H) ； 7.61(m， 4H) ； 7.68-7.72(m， 2H) ； 8.72(brs， 1H)。
化合物 (2) 的制备
按照与化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (48) (100mg， 0.14mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (61mg， 77％ )。
熔点＝ 75-76℃ ； 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.23(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.30(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.12-2.32(m， 2H) ； 3.40-3.53(m， 2H) ； 3.88(s， 3H) ； 4.02-4.20(m， 1H) ； 4.46( 七 重 峰， 1H) ； 6.98-7.02(m， 2H) ； 7.29-7.39(m， 2H) ； 7.42-7.46(m， 2H) ； 7.63(m， 4H) ； 7.72-7.76(m， 2H)。
实施例 10
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (3)(R)-4-(1， 3- 二氧代异吲哚啉 -2- 基 )-N- 羟 基 -2-(N- 异丙氧基 -4- 苯氧基苯基磺酰氨基 ) 丁酰胺
化合物 (41) 的制备
按照与化合物 (7) 的制备类似的操作， 使 O- 异丙基羟胺 (54)(415mg， 3.72mmol) 与 4- 苯氧基苯磺酰氯 (58) 反应， 得到希望的磺酰胺 (41)(989mg， 86％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.19(d， J ＝ 6.2Hz， 6H) ； 4.25( 七重峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.71(s， 1H) ； 7.03-7.10(m， 4H) ； 7.19-7.27(m， 1H) ； 7.38-7.46(m， 2H) ； 7.83-7.88(m， 2H)。
化合物 (44) 的制备
按照以前关于化合物 (11) 所述的操作， 从磺酰胺 (41)(378mg， 1.23mmol) 和醇 (40) 制备叔丁酯 (44)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 7 ∶ 2) 纯化粗反应混合物， 得 到希望的产物 (253mg， 51％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.18-1.45(m ， 15H) ； 1.99-2.38(m ， 2H) ； 3.56-3.74(m ， 2H) ；4.06-4.15(m， 1H) ； 4.43( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.94-6.98(m， 2H) ； 7.09-7.12(m， 2H) ； 7.21-7.28(m， 2H) ； 7.39-7.47(m， 2H) ； 7.67-7.83(m， 5H)。
化合物 (47) 的制备
按照与化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (44)(250mg， 0.42mmol)， 在 从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的羧酸 (47)(164mg， 71％ )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.20(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.25(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.10-2.30(m， 2H) ； 3.55-3.75(m， 2H) ； 4.25-4.35(m， 1H) ； 4.44( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.88-6.92(m， 2H) ； 7.09-7.13(m， 2H) ； 7.21-7.28(m， 2H) ； 7.39-7.47(m， 2H) ； 7.69-7.84(m， 5H)。
化合物 (49) 的制备
按照与化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基 - 甲硅烷基 ) 羟胺偶 联羧酸 (47)(160mg， 0.30mmol)， 得到希望的产物 (178mg， 87％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.26(s， 6H) ； 1.00(s， 9H) ； 1.21(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.26(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.10-2.31(m， 2H) ； 3.40-3.65(m， 2H) ； 3.90-4.10(m， 1H) ； 4.40( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.59(brs， 1H) ； 7.08-7.13(m， 2H) ； 7.22-7.30(m， 2H) ； 7.41-7.49(m， 2H) ； 7.58-7.62(m， 2H) ； 7.69-7.83(m， 5H)。
标题化合物 (3) 的制备
按照与化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (49) (170mg， 0.25mmol)， 在从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的异羟肟酸 (3)(97mg， 68％产 率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.22(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.26(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 2.07-2.28(m， 2H) ； 3.43-3.65(m， 2H) ； 4.05-4.20(m， 1H) ； 4.44( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.70-6.83(m， 2H) ； 7.09-7.13(m， 2H) ； 7.22-7.29(m， 2H) ； 7.40-7.48(m， 2H) ； 7.64-7.83(m， 5H)。
实施例 11
式 (II) 的 中 间 体 的 制 备 ：化 合 物 (4)(R)-4-(1， 3- 二 氧 代 异 吲 哚 啉 -2- 基 )-2-(4′ - 乙氧基 -N- 异丙氧基联苯 -4- 基磺酰氨基 )-N- 羟基丁酰胺
化合物 (42) 的制备
按照与化合物 (7) 的制备类似的操作， 使 O- 异丙基羟胺 (54)(436mg， 3.91mmol) 与 4- 溴苯磺酰氯 (59) 反应， 得到希望的磺酰胺 (42)(870mg， 75％ )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.18(d， J ＝ 6.2Hz， 6H) ； 4.25( 七重峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.80(s， 1H) ； 7.66-7.70(m， 2H) ； 7.75-7.80(m， 2H)。
化合物 (45) 的制备
按照以前关于化合物 (11) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (42)(864mg， 2.94mmol) 和醇 (40) 制备叔丁酯 (45)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 5 ∶ 1) 纯化粗反应混合 物， 得到希望的产物 (720mg， 63％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.19-1.40(m ， 15H) ； 2.05-2.20(m ， 2H) ； 3.55-3.80(m ， 2H) ； 4.02-4.20(m， 1H) ； 4.43( 七重峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 7.60-7.76(m， 6H) ； 7.80-7.87(m， 2H)。
化合物 (50) 的制备
在 氮 下， 将 酯 (45)(200mg， 0.34mmol)、 4- 乙 氧 基 苯 基 硼 酸 (96mg， 0.58mmol)、 Pd(PPh3)4(20mg， 0.017mmol) 和 K3PO4(166mg， 0.78mmol) 在 4.5mL 二 烷 /H2O(5 ∶ 1) 中的混合物加热至 85℃。2h 后， 用饱和的 NaHCO3 溶液稀释反应混合物， 用 ACOEt 萃取， 并经 Na2SO4 干燥。在真空中浓缩有机层， 并通过硅胶上的快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 4 ∶ 1) 纯化粗产物， 得到 (50)(193mg， 88％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.20-1.39(m， 15H) ； 1.45(t， J ＝ 6.9Hz， 3H) ； 2.04-2.35(m， 2H) ； 3.50-3.80(m， 2H) ； 4.05-4.15(m， 3H) ； 4.46( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.97-7.01(m， 2H) ； 7.51-7.88(m， 10H)。
化合物 (51) 的制备
按照与化合物 (35) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (50)(193mg， 0.30mmol)， 在 从 Et2O 和正己烷中重结晶后， 得到希望的羧酸 (51)(150mg， 87％ )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.21(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.24(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.46(t， J＝ 6.9Hz， 3H) ； 2.10-2.30(m， 2H) ； 3.50-3.75(m， 2H) ； 4.10(q， J ＝ 6.9Hz， 2H) ； 4.22-4.50(m， 2H) ； 6.97-7.01(m， 2H) ； 7.48-7.53(m， 4H) ； 7.65-7.85(m， 6H)。
化合物 (52) 的制备
按照与化合物 (37) 的制备类似的操作， 用 O-( 叔丁基二甲基 - 甲硅烷基 ) 羟胺偶 联羧酸 (51)(140mg， 0.25mmol)。硅胶柱色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 2 ∶ 1) 得到希望的产物 (120mg， 71％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.26(s， 6H) ； 1.00(s， 9H) ； 1.23(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.30(d， J＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.47(t， J ＝ 6.9Hz， 3H) ； 2.10-2.30(m， 2H) ； 3.30-3.60(m， 2H) ； 3.90-4.05(m， 1H) ； 4.11(q， J ＝ 6.9Hz， 2H) ； 4.43( 七 重 峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.99-7.01(m， 2H) ； 7.10-7.22(m， 2H) ； 7.35-7.39(m， 2H) ； 7.60-7.71(m， 6H) ； 8.70(brs， 1H)。
标题化合物 (4) 的制备
按照与化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理 O- 甲硅烷基叔丁酯 (52) (120mg， 0.17mmo1)， 在 从 Et2O 和 正 己 烷 中 重 结 晶 后， 得 到 希 望 的 异 羟 肟 酸 (4)(83mg， 82％ )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.24(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.30(d， J ＝ 6.2Hz， 3H) ； 1.46(t， J＝ 6.9Hz， 3H) ； 2.10-2.35(m， 2H) ； 3.40-3.60(m， 2H) ； 4.05-4.16(m， 3H) ； 4.46( 七 重 峰， J＝ 6.2Hz， 1H) ； 6.96-7.01(m， 2H) ； 7.31-7.44(m， 4H) ； 7.63-7.75(m， 6H)。
实施例 12
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (64) ： 苄基 3-(N- 异丙氧基联苯 -4- 基磺酰氨 基 ) 丙基氨基甲酸酯
按照以前关于化合物 (11) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (8)(400mg， 1.37mmol) 和 商业的醇 (63) 制备氨基甲酸酯 (64)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 3 ∶ 1) 纯化粗 反应混合物， 得到希望的产物 (400mg， 87％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.23-1.27(m， 8H) ； 1.76-1.89(m， 2H) ； 3.30(q， J ＝ 62Hz， 2H) ； 4.54( 七重峰， J ＝ 6.2Hz， 1H) ； 5.08(s， 2H) ； 7.34(m， 5H) ； 7.41-7.53(m， 3H) ； 7.59-7.63(m， 2H) ； 7.72-7.76(m， 2H) ； 7.88-7.93(m， 2H)
实施例 13
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1i)
化合物 (65) 的制备向 0℃的实施例 8 的化合物 (55)(1.76g ； 6mmol) 在 THF(15ml) 中的溶液中， 加入 N- 甲基吗啉 (0.66ml， 6mmol) 和 4’ - 甲氧基 [1， 1’ - 联苯 ]-4- 磺酰氯 (1.69g， 6mmol) 在 THF(15ml) 中的溶液。将反应混合物在室温搅拌 3 天， 然后浓缩。将残余物用醋酸乙酯溶 解， 用水洗涤， 并浓缩有机相， 得到橙色油。通过快速色谱法 (EtOAc) 纯化粗产物， 得到化合 物 (65)， 为黄色油， 75％产率。
1H-NMR(CDCl 3， 200MHz) ： 7.95(d ， 2H) ； 7.68(d ， 2H) ； 7.55(d ， 2H) ； 7.0(d ， 2H) ； 4.12(m， 2H) ； 3.86(s， 3H) ； 3.67(m， 4H) ； 3.6(m， 4H) ； 3.42(t， J ＝ 5.3Hz， 4H) ； 2.56(t， J＝ 5.6Hz， 2H) ； 2.42(t， J ＝ 4.95Hz， 4H) ； 1.44(s， 9H)。
化合物 (66) 的制备
将 0℃的 DEAD(0.153ml， 0.97mmol) 逐滴加入到磺酰胺 (65)(458.8mg ； 0.97mmol)、 实 施 例 1 的 化 合 物 (6)(300mg， 0.97mmol) 和 三 苯 基 膦 (255mg ； 0.97mmol) 在 干 燥 的 THF(16ml) 中的溶液。
将混合物在室温搅拌过夜， 然后浓缩， 并通过快速色谱法 ( 己烷 / 醋酸乙酯 1/5) 纯化， 得到化合物 (66)， 为油， 70％产率。
1H-NMR(CDCl 3， 200MHz) ： 7.95(d， J ＝ 8.6Hz ， 2H) ； 7.57(m ， 4H) ； 7.26(s ， 5H) ； 7.0(d， J ＝ 8.8Hz， 2H) ； 5.18(m， 1H) ； 5.06(s， 2H) ； 4.33(m， 1H) ； 4.14(m， 2H) ； 3.87(s， 3H) ； 3.62(m， 4H) ； 3.39(m， 4H) ； 3.21(m， 2H) ； 2.56(t， J ＝ 5.4Hz， 2H) ； 2.4(m， 4H) ； 1.92(m， 2H) ； 1.44(s， 9H)， 1.34(s， 9H)。
化合物 (1i) 的制备
向叔丁酯 (66)(800mg， 0.966mmol) 在干燥的 CH2Cl2(12ml) 中的溶液中， 逐滴加入 0℃的 TFA(7.4ml， 96.6mmol)。将反应混合物在 0℃搅拌 1h， 然后在室温搅拌 4h。真空去除 溶剂和 TFA， 得到羧酸 (1i)， 为二 - 三氟醋酸盐， 为白色泡沫， 79％产率。 + +
1H-NMR(CDCl3， 200MHz) ： 9.45(bs，NH2，NH) ； 8.0(d， J ＝ 7.8Hz， 2H) ； 7.68(m， 4H) ； 7.4(s， 5H) ； 7.1(d， J ＝ 8.2Hz， 2H) ； 5.6(s， 1H) ； 5.13(s， 2H) ； 4.27(m， 3H) ； 3.97(s， 3H) ； 3.78(m， 10H) ； 3.44(m， 4H) ； 1.98(m， 2H)。
实施例 14
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1j)
向酸 (1i)(150mg， 0.167mmol) 在干燥的 CH2Cl2(4ml) 中的溶液中， 加入 O-( 叔丁基 二甲基甲硅烷基 ) 羟胺 (79mg， 0.534mmol) 和 EDCI(96mg， 0.501mmol)。将反应混合物在室 温搅拌 5h， 然后浓缩， 将残余物溶于 EtOAc 中， 并用水洗涤。有机相经干燥 (Na2SO4)， 并真空 蒸发。将如此得到的白色固体 (140mg) 溶于干燥的 CH2Cl2(3ml) 中， 并用 TFA(0.8ml) 处理。 将反应混合物在 0℃搅拌 1h， 然后使其达到室温， 并搅拌 4h。浓缩溶液， 得到褐色油， 将其 与 CH2Cl2/Et2O 的混合物一起研磨， 得到褐色固体异羟肟酸 (1j)， 为二 - 三氟醋酸盐， 50％产 率。
1H-NMR(CDCl 3， 200MHz) ： 7.86(d ， J ＝ 7.2Hz ， 2H) ； 7.56(m ， 4H) ； 7.24(s， 5H) ； 6.94(d， J ＝ 8.2Hz， 2H) ； 5.73(s， 1H) ； 5.1(s， 2H) ； 4.1(m， 4H) ； 3.82(s， 3H) ； 3.53(m， 8H) ； 3.25(m， 4H) ； 2.05(m， 2H)。
实施例 15
式 (II) 的中间体的制备 ： 化合物 (1k)向 (1j)(40mg， 0.04mmol) 在干燥的 DMSO(1ml) 中的溶液中， 加入 2， 5- 二氧吡咯 烷 -1- 基丙酸酯 (10mg， 0.534mmol) 和 TEA(10 滴， pH ＝ 8)。将反应混合物在室温搅拌 24h， 然后加入 10ml Et2O。停止反应， 将溶液冷却至 -15℃， 然后使其达到 0℃。倾析乙醚层， 并 在真空中浓缩残余的黄色油。在色谱法 (CH2Cl2/MeOH) 后得到纯的化合物 (1k)， 为无色油， 24％产率。
1H-NMR(CDCl 3， 200MHz) ： 7.88(d ， J ＝ 8.2Hz ， 2H) ； 7.6(m ， 4H) ； 7.26(s ， 5H) ； 6.96(d， J ＝ 8.8Hz， 2H) ； 5.09(s， 2H) ； 4.34(m， 3H) ； 3.87(s， 3H) ； 3.62(m， 6H) ； 3.45(m， 4H) ； 2.59(m， 2H) ； 2.46(m， 4H) ； 2.28(q， J ＝ 7.5Hz， 2H) ； 1.68(m， 2H) ； 1.11(t， J ＝ 7.5Hz， 3H)。
实施例 16
式 (I) 的化合物 - 参见方案 7 的化合物 (1a) 和 (1b)
化合物 (4) 的制备
将联苯 -4- 磺酰氯 (3.17g， 12.53mmol) 在无水 THF(32mL) 中的溶液， 逐滴加入 搅拌的且冷却的 (0 ℃ )O- 苄基羟胺盐酸化物 (2g， 12.53mmol) 和 N- 甲基吗啉 (2.75mL， 25.06mmol) 在无水 THF(32mL) 中的溶液中。在这些条件下 30min 后， 将反应混合物在室温 搅拌 3 天， 然后用 AcOEt 稀释， 并用 H2O 洗涤， 在后处理后， 得到磺酰胺 (4)(3.62g， 85％ )， 为白色固体。
熔点＝ 130-132℃ ； 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 5.01(s ， 2H) ； 7.01(s ， 1H) ； 7.35(m ， 5H) ； 7.44-7.51(m ， 3H) ； 7.57-7.62(m， 2H) ； 7.70-7.75(m， 2H) ； 7.97-8.01(m， 2H)。
化合物 (6) 的制备
在氮气氛下， 将偶氮二羧酸二异丙酯 (DIAD)(1.28mL， 6.52mmol) 逐滴加入在 0℃ 的仲醇 (5)(0.8g， 2.61mmol)、 磺酰胺 (4)(1.3g， 3.91mmol) 和三苯基膦 (2.05g， 7.83mmol) 在无水 THF(45mL) 中的溶液。将得到的溶液在室温搅拌 5h， 并在减压下蒸发， 得到粗产物， 将其通过硅胶上的快速色谱法进行纯化 ( 正己烷 /EtOAc ＝ 3 ∶ 1)， 得到化合物 (6)(0.95g， 58％产率 )， 为纯的黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.25(s， 9H) ； 1.90-2.04(m， 2H) ； 3.16-3.40(m， 2H) ； 4.16(t， J＝ 7.1Hz， 1H) ； 4.93-5.00(m， 1H) ； 5.07-5.19(m， 4H) ； 7.33-7.37(m， 10H) ； 7.41-7.59(m， 5H) ； 7.66-7.70(m， 2H) ； 7.92-7.97(m， 2H)。 13
C-NMR(CDCl3)δ ： 22.09 ； 27.87 ； 37.59 ； 62.75 ； 66.76 ； 80.87 ； 82.56 ； 127.43 ；
127.67 ； 128.16 ； 128.56 ； 128.72 ； 128.92 ； 129.14 ； 129.89 ； 129.94 ； 133.89 ； 134 ； 80 ； 139.17 ； 146.84 ； 156.27。
化合物 (7) 的制备
在 氢 气 氛 下， 在 有 10 ％ Pd-C(0.40g) 和 冰 醋 酸 (90mL) 存 在 下， 将 化 合 物 (6) (0.8g， 1.27mmol) 在 MeOH(90mL) 中的溶液在室温搅拌 17h。 在硅藻土上过滤得到的混合物， 并在减压下蒸发滤液， 得到 (7)(0.56g， 98％产率 )， 为澄清油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.18(s， 9H) ； 3.10-3.30(m， 2H) ； 3.93(br s， 1H) ； 5.0(br s， 1H) ； 7.39-7.57(m， 5H) ； 7.65-7.69(m， 2H) ； 7.90-7.94(m， 2H) ； 8.51(br s， 1H)。
EI-MS， m/z ： 91(100) ； 152(25) ； 217(23) ； 260(52) ； 391(M， 5)。
化合物 (9) 的制备
用 酰 氯 (8)(164mg， 0.44mmol) 和 i-Pr2NEt(0.30mL， 1.76mmol) 处 理 化 合 物 (7) (0.40g， 0.88mmol) 在干燥的 DMF(6mL) 中的溶液。将反应混合物在室温搅拌 17h， 然后用 醋酸乙酯稀释， 用 H2O 洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 并蒸发。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 2) 纯化粗产物， 得到 (9)(120mg， 25％产率 )， 为澄清油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.14(s， 18H) ； 2.09-2.31(m， 8H) ； 2.58(t， J ＝ 7.8Hz， 4H) ； 3.38-3.53(m， 2H) ； 3.77-3.87(m， 4H) ； 3.96(t， J ＝ 7.1Hz， 4H) ； 5.42(d， J ＝ 9.3Hz， 2H) ； 7.40-7.59(m， 10H) ； 7.67-7.72(m， 4H) ； 7.92-7.96(m， 4H) ； 8.11-8.15(m， 4H)。
化合物 (1a) 的制备
将三氟乙酸 (0.48mL， 6.27mmol) 逐滴加入叔丁酯 (9)(120mg， 0.11mmol) 在新鲜蒸 馏的 CH2Cl2(1.0mL) 中的搅拌溶液中， 冷却至 0℃。将溶液在 0℃搅拌 5h， 并在真空下去除 溶剂， 得到化合物 (1a)(109mg， 100％产率 )， 为固体。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 2.07-2.19(m， 8H) ； 2.57(t， J ＝ 7.8Hz， 4H) ； 3.45-3.54(m， 2H) ； 3.62-3.80(m， 2H) ； 3.94(t， J ＝ 6.9Hz， 4H) ； 3.99-4.10(m， 2H) ； 5.42(d， J ＝ 8.0Hz， 2H) ； 7.15(t， J ＝ 5.8Hz， 2H) ； 7.40-7.58(m， 10H) ； 7.65-7.69(m， 4H) ； 7.83-7.95(m， 8H)。
标题化合物 (1b) 的制备
向冷却至 0℃的羧酸 (1a)(80mg， 0.08mmol) 和 O-( 叔丁基二甲基 - 甲硅烷基 ) 羟胺 (36mg， 0.24mmol) 在新鲜蒸馏的 CH2Cl2(3.0mL) 中的溶液中， 分批加入 1-[3-( 二甲氨基 ) 丙 基 ]-3- 乙基碳二亚胺盐酸化物 (EDC)(47.2mg， 0.24mmol)。在室温搅拌 20h 后， 用 H2O 洗涤 混合物， 并在真空中干燥和蒸发有机相。通过硅胶上的快速色谱法 (CHCl3/MeOH ＝ 15 ∶ 1) 纯化残余物， 得到 O- 甲硅烷基叔丁酯衍生物 (14mg， 14％产率 )， 为黄色油。
将 三 氟 乙 酸 (0.10mL， 1.3mmol) 逐 滴 加 入 O- 甲 硅 烷 基 叔 丁 酯 衍 生 物 (14mg， 0.01mmol) 在新鲜蒸馏的 CH2Cl2(1mL) 中的搅拌溶液中， 冷却至 0℃。将溶液在 0℃搅拌 5h， 并在真空下去除溶剂， 得到粗产物， 将其从 Et2O 和 CH2Cl2 重结晶， 得到 (1b)(10mg， 91％产 率 )， 为固体。 1
H-NMR(CD3)2COδ ： 1.91-2.06(m， 8H) ； 2.56(t， J ＝ 7.7Hz， 4H) ； 3.34-3.50(m， 4H) ； 3.92(t， J ＝ 7.1Hz， 4H) ； 3.95-4.10(m， 2H) ； 7.03(br s， 2H) ； 7.45-7.50(m， 7H) ； 7.66-8.08(m， 15H)。
实施例 17
式 (I) 的化合物 - 参见方案 9 的化合物 (2a) 和 (2b)方案 8 的化合物 (10) 的制备
向 1-[2-(2- 羟基乙氧基 ) 乙基 ] 哌嗪 (5.0g， 28.7mmol) 在 CH2Cl2(20mL) 中的溶 液中， 逐滴加入 0℃的二碳酸二叔丁酯 (6.9g， 31.5mmol) 在 CH2Cl2(20mL) 中的溶液。在室 温搅拌 12h 后， 用 Et2O 稀释溶液， 用饱和的 NaHCO3 溶液、 盐水洗涤， 干燥 (Na2SO4) 并浓缩， 得 到 Boc- 保护的衍生物 (10)(7.2g， 92％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.43(s， 9H) ； 2.45(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.57(t， J ＝ 5.3Hz， 2H) ； 3.44(t， J ＝ 5.1Hz， 4H) ； 3.56-3.67(m， 6H) ； 4.17(t， J ＝ 5.6Hz， 1H)。
13C-NMR(CDCl 3) δ ： 28.47 ； 43.46 ； 53.16 ； 57.97 ； 61.86 ； 67.69 ； 72.44 ； 79.69 ；155.00 化合物 (11) 的制备
在氮气氛下， 将偶氮二羧酸二乙酯 (DEAD)(2.15mL， 13.65mmol) 逐滴加入醇 (10) (2.50g， 9.10mmol)、 N- 羟 基 邻 苯 二 甲 酰 亚 胺 (1.48g， 9.10mmol) 和 三 苯 基 膦 (3.58g， 13.6mmol) 在无水 THF(100mL) 中的溶液中。将得到的溶液在室温搅拌过夜， 并在减压下蒸 发， 得到粗产物， 将其通过硅胶上的快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 4 ∶ 1) 进行纯化， 得到 (11)(4.30g， 98％产率 )， 为纯的黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.44(s， 9H) ； 2.38(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.50(t， J ＝ 5.6Hz， 2H) ； 3.39(t， J ＝ 5.3Hz， 4H) ； 3.64(t， J ＝ 5.6Hz， 2H) ； 3.82(t， J ＝ 4.2Hz， 2H) ； 4.37(t， J＝ 4.3Hz， 2H) ； 7.72-7.86(m， 4H)。
化合物 (12) 的制备
将 水 合 肼 (1.73mL， 35.87mmol) 加 入 化 合 物 (11)(4.30g， 10.25mmol) 在 乙 醇 (210mL) 中的溶液。在室温搅拌 14h 后， 过滤混合物， 并浓缩滤液。用 AcOEt 稀释残余物， 通 过过滤去除沉淀物， 并蒸发滤液， 得到希望的化合物 (12)(2.15g， 72.6％产率 )。
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.45(s， 9H) ； 2.45(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.61(t， J ＝ 5.8Hz， 2H) ； 3.43(t， J ＝ 5.1Hz， 4H) ； 3.58-3.65(m， 4H) ； 3.80-3.85(m， 2H)。
化合物 (13) 的制备
按 照 与 实 施 例 16 中 化 合 物 (4) 的 制 备 类 似 的 操 作， 使 化 合 物 (12)(2.85g， 9.86mmol) 与联苯 -4- 磺酰氯反应。 硅胶柱色谱法 (AcOEt) 得到希望的磺酰胺 (13)(3.05g， 61％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.44(s， 9H) ； 2.44(t， J ＝ 4.94Hz， 4H) ； 2.58(t， J ＝ 5.6Hz， 2H) ； 3.43(t， J ＝ 5.3Hz， 4H) ； 3.61(t， J ＝ 5.5Hz， 2H) ； 3.67-3.71(m， 2H) ； 4.10-4.15(m， 2H) ； 7.41-7.53(m， 3H) ； 7.58-7.63(m， 2H) ； 7.71-7.75(m， 2H) ； 7.97-8.01(m， 2H)。
59化合物 (14) 的制备
按照以前关于实施例 16 中化合物 (6) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (13)(1.18g， 2.33mmol) 和醇 (5) 制备叔丁酯 (14)。通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 5) 纯化粗 反应混合物， 得到希望的产物 (14)(1.39g， 75％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.33(s ， 9H) ； 1.43(s ， 9H) ； 1.74-1.98(m ， 2H) ； 2.42(m ， 4H) ； 2.58(t， J ＝ 5.3Hz， 2H) ； 3.12-3.26(m， 2H) ； 3.40(m， 4H) ； 3.56-3.65(m， 4H) ； 4.09-4.41(m， 3H) ； 5.05(s， 2H) ； 5.22(br s， 1H) ； 7.32(m， 5H) ； 7.40-7.74(m， 7H) ； 7.96-8.00(m， 2H)。
化合物 (15) 的制备
按照与实施例 16 中化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (14)(1.39g， 1.74mmol)， 在从 Et2O 重结晶后， 得到希望的羧酸 (15)(1.30g， 86％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 1.80-2.05(m， 2H) ； 3.19-3.29(m， 6H) ； 3.40(m， 4H) ； 3.62(m， 10H) ； 4.15(m， 2H) ； 4.29(t， J ＝ 6.5Hz， 1H) ； 5.01(s， 2H) ； 5.35(brs， 1H) ； 7.29(m， 5H) ； 7.43-7.52(m， 3H) ； 7.57-7.63(m， 2H) ； 7.70-7.74(m， 2H) ； 7.90-7.94(m， 2H)。
化合物 (2a) 的制备
按照与实施例 16 中化合物 (9) 的制备类似的操作， 使 (15)(1.30g， 1.5mmol) 与间 苯二甲酰氯反应， 在反相色谱法 (H2O/MeOH ＝ 4.5 ∶ 5.5) 纯化后， 得到希望的羧酸 (2a)， 为 白色固体 (0.23g， 22％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 2.04-2.17(m， 4H) ； 2.81(m， 12H) ； 3.23(m， 4H) ； 3.62-3.91(m， 16H) ； 4.13-4.36(m， 6H) ； 5.03(s， 4H) ； 5.34(br s， 2H) ； 7.28(m， 10H) ； 7.41-7.50(m， 10H) ； 7.56-7.61(m， 4H) ； 7.68-7.73(m， 4H) ； 7.91-7.95(m， 4H)。
标题化合物 (2b) 的制备
按照与实施例 16 中化合物 (1b) 的制备类似的操作， 通过与 O-( 叔丁基二甲基 - 甲 硅烷基 ) 羟胺反应， 随后用 TFA 水解， 从羧酸 2a(0.20g， 0.14mmol) 得到二聚的异羟肟酸 (2b)。
从 Et2O 重结晶粗产物， 得到 (2b)， 为固体 (13mg， 65％产率 )。 1
H-NMR(CDCl 3) δ ： 1.90-2.05(m ， 4H) ； 2.88-3.90(m ， 32H) ； 4.06-4.20(m ， 6H) ； 4.94(s ， 4H) ； 5.80(br s ， 2H) ； 7.24(m ， 10H) ； 7.41(m ， 10H) ； 7.54(m ， 4H) ； 7.69(m ， 4H) ； 7.86-7.89(m， 4H) ； 10.60(br s， 2H)。
实施例 18
式 (I) 的化合物 - 参见方案 10 的化合物 (3a) 和 (3b)
化合物 (16) 的制备
向 D- 缬 氨 酸 (5.0g， 42.68mmol) 和 TEA(8.92ml， 64.02mmol) 在 H2O/diossano 1 ∶ 1(66.7ml) 中的溶液中， 加入联苯 -4- 磺酰氯 (11.86g， 46.95mmol)。在室温搅拌 20h 后， 用 CH2Cl2 稀释混合物， 用 1N HCl 洗涤， 并在真空中干燥和蒸发有机相。从正己烷重结晶 后， 得到希望的羧酸 (16)， 为白色固体 (7.72g， 54.2％产率 )。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.83(d， J ＝ 6.7Hz， 3H) ； 0.95(d， J ＝ 6.7Hz， 3H) ； 2.00-2.16(m， 1H) ； 2.46(br s， 1H) ； 3.76-3.83(dd， J ＝ 4.4Hz， J ＝ 9.8Hz， 1H) ； 5.15(d， J ＝ 9.8Hz， 1H) ； 7.42-7.70(m， 7H) ； 7.84-7.88(m， 2H)。
化合物 (17) 的制备
将 (16)(3.47g， 10.4mmol) 在含有 N， N- 二甲基甲酰胺二 - 叔丁基缩醛 (10.0ml， 41.6mmol) 的甲苯 (20.0ml) 中的溶液， 加热至 95℃ 3h。然后蒸发溶剂， 并通过硅胶上的快 速色谱法 ( 正己烷 /EtOAc ＝ 4 ∶ 1) 纯化粗产物， 得到 (17)(1.7g， 42％产率 )， 为粉红色固 体。
熔点＝ 119-121℃ ； 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.86(d， J ＝ 6.7Hz， 3H) ； 1.02(d， J ＝ 6.7Hz， 3H) ； 1.19(s， 9H) ； 1.98-2.14(m， 1H) ； 3.63-3.70(dd， J ＝ 4.6Hz， J ＝ 10.0Hz， 1H) ； 5.15(d， J ＝ 9.8Hz， 1H) ； 7.41-7.58(m， 5H) ； 7.66-7.70(m， 2H) ； 7.88-7.92(m， 2H)。
化合物 (18) 的制备
按照以前关于实施例 16 中化合物 (6) 的制备所述的操作， 从磺酰胺 (17)(0.80g， 2.05mmol) 和醇 (10)(0.56g， 2.05mmol) 制备叔丁酯 (18)。 通过快速色谱法 ( 正己烷 /AcOEt ＝ 1 ∶ 1) 纯化粗反应混合物， 得到希望的产物 (18)(0.85g， 64％产率 )， 为黄色油。 1
H-NMR(CDCl3)δ ： 0.94(d， J ＝ 6.6Hz， 3H) ； 1.03(d， J ＝ 6.6Hz， 3H) ； 1.23(s， 9H) ； 1.45(s， 9H) ； 1.99-2.14(m， 1H) ； 2.43(t， J ＝ 4.9Hz， 4H) ； 2.56(t， J ＝ 5.8Hz， 2H) ； 3.43(t， J ＝ 5.1Hz， 4H) ； 3.53-3.77(m， 6H) ； 3.97(d， J ＝ 10.4Hz， 1H) ； 7.40-7.59(m， 5H) ； 7.65-7.69(m， 2H) ； 7.89-7.93(m， 2H)。
化合物 (19) 的制备
按照与实施例 16 中化合物 (1a) 的制备类似的操作， 用 TFA 处理酯 (18)(0.85g， 1.32mmol)， 得到希望的羧酸 (19)(100％产率 )， 为褐色油。 1
H-NMR(CDCl 3 ) δ ： 0.61(d ，J ＝ 6.4Hz ， 3H) ； 0.94(d ，J ＝ 6.41Hz ， 3H) ； 1.98-2.07(m ， 1H) ； 3.32-3.94(m ， 17H) ； 7.43-7.63(m ， 5H) ； 7.73-7.77(m ， 2H) ； 7.84-7.88(m， 2H) ； 9.00(br s， 2H) ； 10.33(br s， 1H)
化合物 (3a) 的制备
按照与实施例 16 中化合物 (9) 的制备类似的操作， 使 19(2.10g， 2.92mmol) 与间 苯二甲酰氯反应， 在反相色谱法 (H2O/MeOH ＝ 1 ∶ 1) 纯化后， 得到希望的羧酸 (3a)， 为黄色 固体 (0.14g， 10％产率 )。
熔点＝ 128-130℃ ； 1
H-NMR(CD3OD)δ ： 0.90(d， J ＝ 6.6Hz， 6H) ； 0.99(d， J ＝ 6.4Hz， 6H) ； 2.06-2.20(m， 1H) ； 2.80-3.15(m， 12H) ； 3.39-3.75(m， 20H) ； 4.00(d， J ＝ 10.8Hz， 2H) ； 7.38-8.15(m， 22H)。标题化合物 (3b) 的制备
按照与实施例 16 中化合物 (1b) 的制备类似的操作， 通过与 O-( 叔丁基二甲基 - 甲 硅烷基 ) 羟胺反应， 随后用 TFA 水解， 从羧酸 (3a)(0.12g， 0.109mmol) 得到二聚的异羟肟酸 (3b)。
通过反相色谱法 (CH3CN) 纯化粗产物， 得到 (3b)， 为固体 (3mg， 10％产率 )。 1
H-NMR(DMSO-d 6 ) δ ： 0.83-0.90(m ， 12H) ； 2.07(m ， 2H) ； 3.16-4.06(m ， 32H) ； 4.12(d， J ＝ 5.5Hz， 2H) ； 7.45-7.94(m， 22H) ； 9.60(br s， 2H) ； 10.20(br s， 2H) ； 11.35(s， 2H)。
实施例 19
MMP 抑制试验
重组人 MMP 原 -2 由 Gillian Murphy 教授 ( 英国剑桥大学肿瘤学系 ) 提供， 而 MMP 原 -13 和 MMP 原 -14 购自 Calbiochem。 在即将与对 - 氨基苯汞乙酸盐一起使用之前， 活化酶 原 ( 对于 MMP 原 -2， 是 2mMAPMA、 1h、 37℃， 对于 MMP 原 -13， 是 1mM APMA、 30min、 37℃ )。在 37℃用胰蛋白酶 5μg/mL 活化 MMP 原 -1415min， 继之以大豆胰蛋白酶抑制剂 (SBTI)23μg/ ml。关于试验测量， 对于在荧光测定缓冲液 (FAB ： Tris50mM， pH ＝ 7.5、 NaCl 150mM、 CaCl2 10mM、 Brij 35 0.05％和 DMSO1％ ) 中的每种 MMP， 在 7 个不同的浓度 (0.01nM-100μM) 进 一步稀释抑制剂储备溶液 (DMSO， 100mM)。在 25℃， 在测定缓冲液中温育活化的酶 ( 终浓 度分别为 2.9nM(MMP-2)、 1nM(MMP-14)、 0.33nM(MMP-13)) 和抑制剂溶液 4h。加入荧光底 物 Mca-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2(Bachem)( 参见， 参考文献， Neumann， U. ； Kubota， H. ； Frei， K. ； Ganu， V. ； Leppert， D.Anal.Biochem.2004， 328， 166) 的 200μM 溶液 ( 对于 DMSO 中的所有酶， 终浓度 2μM) 后， 每 15 秒监测水解， 持续 20min， 使用 Molecular DeviceSpectraMax Gemini XS 平板读数器记录荧光的增加 (λex ＝ 325nm， λem ＝ 395nm)。
一式三份进行试验， 总体积为 200μl/ 孔， 在 96- 孔微孔滴定板 (Corning， 黑色， NBS) 中。对照孔缺少抑制剂。以相对荧光单位 (RFU)， 表示 MMP 抑制活性。从不含抑制剂 的对照反应， 计算抑制百分比。使用下式测定 IC50 ： Vi/Vo ＝ 1/(1+[I]/IC50)， 其中 Vi 是在有 浓度为 [I] 的抑制剂存在下底物裂解的初速率， Vo 是在没有抑制剂存在下的初速率。使用 SoftMax Pro 软件和 GraFit 软件， 分析结果。
表1
上表 1 清楚地表明， 本发明的式 (I) 化合物被证实具有对 MMP-2、 MMP-13 和 MMP-14 的显著抑制活性， 且因而在治疗中可以用于治疗涉及这些酶的变性病症。
令人惊奇地， 基于该非常合理的评估对测试酶的抑制活性的方法， 本发明的化合 物被证实具有比现有技术中结构上最接近的参照化合物 (R， R)-2b 明显更高的抑制活性。
值得注意的是， 除了特别有效地抑制上述金属蛋白酶 MMP-2、 MMP-13 和 MMP-14( 各 自单独考虑 ) 以外， 本发明的化合物可有效地抑制所有这些酶的事实， 在已知它们都在变 性过程中起作用的治疗中是特别有利的。63