技术领域
本发明涉及藻酸的制备，尤其是一种利用海黍子提取褐藻多糖硫酸酯的方法。
背景技术
褐藻多糖硫酸酯是褐藻独具的一类硫酸化多糖,是褐藻的细胞间产物，又被称为褐藻糖胶或岩藻聚糖，由Kylin于1913年第一次从掌状海带中提取到并命名为Fucoidan。现在人们对褐藻多糖硫酸酯的组成有较为清晰的了解，它是一类化学组成和结构非常复杂的多糖，以岩藻糖和硫酸基为主，随着藻的种类不同还含有半乳糖、木糖、糖醛酸等其他成分。褐藻多糖硫酸酯组成很复杂,在不同褐藻中变化很大,既存在简单的岩藻多糖硫酸酯,也有由多种单糖组成的结构复杂的杂多糖。由于具有独特的结构和优异的生理活性，如调节血脂、降血糖、降血压、抗凝血、抗肿瘤、抗突变和防辐射、抗病毒、增强免疫功能等，褐藻糖胶已成为本世纪海洋药物研究的热点之一。
海黍子为马尾藻科、马尾藻属，又称草茜、解氏马尾藻，多生长生长在低潮带石沼中以至大干潮线下4M深处的岩石上，在我国黄、渤海沿岸分布广泛，是北方沿海重要的海藻资源，其生物量大、易于采集。海黍子过去仅作为肥料，近代研究发现海黍子中总糖含量丰富。目前，尚未发现利用海黍子为原料提取褐藻多糖硫酸酯的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺合理、操作可行、设备投入少、产品纯度高的利用海黍子提取褐藻多糖硫酸酯的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用海黍子提取褐藻多糖硫酸酯的方法，其特征在于：经过下列工艺步骤：
（1）浸泡
选取洗净的海黍子为原料，加水浸泡，调节浸泡液pH值为4～5；
（2）加热提取
将步骤（1）中调节pH值后的浸泡液及海黍子进行加热提取，然后沥出固体物，得到提取液；
（3）制取上清液
将步骤（2）中得到的提取液调节pH值为6～7，然后进行离心处理，去除沉淀，留取上清液，备用；
（4）层析
将步骤（3）中得到的上清液通过以聚四氟乙烯粉为填料的树脂柱，收集滤过液；
（5）膜分离
将步骤（4）中得到的滤过液通过截留分子量为100～150KDa膜进行分离，收集截留液；
（6）褐藻多糖硫酸酯的制取
将步骤（5）中得到的截留液加入乙醇至乙醇终浓度为50～80%，进行沉淀，离心，收集沉淀；将沉淀干燥，制得褐藻多糖硫酸酯干品；
或者将步骤（5）中得到的截留液进行喷雾干燥或冷冻干燥，制得褐藻多糖硫酸酯干品
所述的海黍子与水的质量比例为1:3～10。
所述的调节pH值后的浸泡液及海黍子加热提取的温度为50～65℃，提取时间为3～6h。
所述提取液调节pH值后进行的离心处理是将提取液调节pH值后依次经三足式离心机、碟片式离心机、管式离心机进行离心处理。
所述的聚四氟乙烯粉的颗粒度为30～100目。
所述的将沉淀干燥是将沉淀42℃恒温干燥。
本发明经过酸提、亲和层析、纳滤、醇沉、干燥等步骤，最终从海黍子中提取褐藻多糖硫酸酯。其中，利用了pH值为4～5的浸泡液对海黍子进行提取，在弱酸的环境下，可以减少海黍子中蛋白、褐藻胶的溶出，避免了后续除蛋白、除褐藻胶的步骤；采用了聚四氟乙烯粉为填料的层析步骤，该步骤去除了海黍子提取液中的中性多糖等杂多糖；使用纳滤膜进行分离，纳滤膜能对小分子有机物等与水、无机盐进行分离，实现脱盐与浓缩的同时进行，并且在有效脱除盐分的同时，还去除了海黍子提取液中的氨基酸、甾醇、小分子糖等小分子化合物，进一步提高了终产物纯度。通过该方法提取获得的褐藻多糖硫酸酯纯度高，有效成分含量在85%以上。该技术方法操作简单、工艺步骤合理、设备投入小。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种利用海黍子提取褐藻多糖硫酸酯的方法，其经过下列工艺步骤：
（1）浸泡
选取洗净的海黍子为原料，加水浸泡，海黍子与水的质量比例为1:5，并调节浸泡液pH值为4.5；
（2）加热提取
将步骤（1）中调节pH值后的浸泡液及海黍子进行加热提取，其中，加热提取控制温度为60℃，提取时间为4h，然后沥出固体物，得到提取液；
（3）制取上清液
将步骤（2）中得到的提取液调节pH值为6.5，然后依次经三足式离心机（转速2000rpm）、碟片式离心机（转速6000rpm）、管式离心机（转速15000rpm）进行离心处理，去除沉淀，留取上清液，备用；
（4）层析
将步骤（3）中得到的上清液通过以聚四氟乙烯粉为填料的树脂柱，收集滤过液；其中，聚四氟乙烯粉的颗粒度为60目；
（5）膜分离
将步骤（4）中得到的滤过液通过截留分子量为120KDa膜进行分离，收集截留液；
（6）褐藻多糖硫酸酯的制取
将步骤（5）中得到的截留液加入乙醇至乙醇终浓度为70%，进行沉淀，再经三足式离心机（转速2000rpm）离心，收集沉淀；将沉淀42℃恒温干燥，制得褐藻多糖硫酸酯干品。
本实施例所提供的提取方法工艺步骤合理、操作简单、设备投入小。通过该方法提取获得的褐藻多糖硫酸酯纯度高，经测定：褐藻多糖硫酸酯含量达到90%。
实施例2
一种利用海黍子提取褐藻多糖硫酸酯的方法，其经过下列工艺步骤：
（1）浸泡
选取洗净的海黍子为原料，加水浸泡，海黍子与水的质量比例为1:10，并调节浸泡液pH值为4；
（2）加热提取
将步骤（1）中调节pH值后的浸泡液及海黍子进行加热提取，其中，加热提取控制温度为50℃，提取时间为6h，然后沥出固体物，得到提取液；
（3）制取上清液
将步骤（2）中得到的提取液调节pH值为6，然后依次经三足式离心机（转速2000rpm）、碟片式离心机（转速6000rpm）、管式离心机（转速15000rpm）进行离心处理，去除沉淀，留取上清液，备用；
（4）层析
将步骤（3）中得到的上清液通过以聚四氟乙烯粉为填料的树脂柱，收集滤过液；其中，聚四氟乙烯粉的颗粒度为100目；
（5）膜分离
将步骤（4）中得到的滤过液通过截留分子量为100KDa膜进行分离，收集截留液；
（6）褐藻多糖硫酸酯的制取
将步骤（5）中得到的截留液进行冷冻干燥，制得褐藻多糖硫酸酯干品。
本实施例所提供的提取方法工艺合理、操作方便、设备投入小、生产成本低，易实现规模化生产。通过该方法提取获得的褐藻多糖硫酸酯纯度高，经测定：褐藻多糖硫酸酯含量达到85%。
实施例3
一种利用海黍子提取褐藻多糖硫酸酯的方法，其经过下列工艺步骤：
（1）浸泡
选取洗净的海黍子为原料，加水浸泡，海黍子与水的质量比例为1:3，并调节浸泡液pH值为5；
（2）加热提取
将步骤（1）中调节pH值后的浸泡液及海黍子进行加热提取，其中，加热提取控制温度为65℃，提取时间为3h，然后沥出固体物，得到提取液；
（3）制取上清液
将步骤（2）中得到的提取液调节pH值为7，然后依次经三足式离心机（转速2000rpm）、碟片式离心机（转速6000rpm）、管式离心机（转速15000rpm）进行离心处理，去除沉淀，留取上清液，备用；
（4）层析
将步骤（3）中得到的上清液通过以聚四氟乙烯粉为填料的树脂柱，收集滤过液；其中，聚四氟乙烯粉的颗粒度为30目；
（5）膜分离
将步骤（4）中得到的滤过液通过截留分子量为150KDa膜进行分离，收集截留液；
（6）褐藻多糖硫酸酯的制取
将步骤（5）中得到的截留液进行喷雾干燥，制得褐藻多糖硫酸酯干品。
本实施例所提供的提取方法工艺合理、操作简单、设备投入小。通过该方法提取获得的褐藻多糖硫酸酯纯度高，经测定：褐藻多糖硫酸酯含量达到83%。