氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101591412 B (45)授权公告日 2011.05.18 CN 101591412 B *CN101591412B* (21)申请号 200910072166.3 (22)申请日 2009.06.03 C08F 220/06(2006.01) C08F 222/14(2006.01) C08F 2/14(2006.01) C08J 9/26(2006.01) (73)专利权人 中国农业科学院农业质量标准与 检测技术研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12 号 (72)发明人 王静 佘永新 王荣艳 王培龙 (74)专利代理机构 哈尔滨市松花江专。

2、利商标事 务所 23109 代理人 何强 CN 1811411 A,2006.08.02, 全文 . CN 1811409 A,2006.08.02, 全文 . WO 2008007359 A,2008.01.17, 全文 . 王荣艳 , 王培龙 , 王静 , 王锡昌 , 钟耀广 . 氯霉素分子印迹聚合物的合成及应用 .2008, 第 27 卷 ( 第 9 期 ),947-950. 王永向， 刘冬梅， 刘秋明， 王琛毅， 戎非， 付德 刚. “氯霉素分子印迹聚合物的合成及其在固相萃 取中的应用” .环境化学 .2008, 第 27 卷 ( 第 3 期 ),378-379. (54) 发明名称 。

3、氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法 (57) 摘要 氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法， 它 涉及一种聚合物微球的制备方法。本发明解决了 采用本体聚合法得到的分子印迹聚合物颗粒不规 则、 容易团聚的问题。本方法如下 ： 1. 将甲基丙 烯酸与氯霉素溶于乙腈中震荡后再加入乙二醇二 甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈， 得到混合物， 将混 合物超声处理， 再充氮气除氧后密封 ； 2. 将密封 后的混合物加热聚合数小时后冷却、 离心， 再将沉 淀物自然干燥 ； 3. 将沉淀物脱除去氯霉素， 再用 甲醇洗涤 5h、 干燥， 即得氯霉素分子印迹聚合物 微球。采用本发明方法得到的氯霉素分子印迹聚 合物微球的颗粒形。

4、状规则， 大小均一， 没有团聚现 象， 增加了氯霉素分子印迹聚合物微球的比表面 积， 从而提高了吸附性。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 刘瑶 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 CN 101591412 B1/1 页 2 1. 氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法， 其特征在于氯霉素分子印迹聚合物微球的 制备方法如下 ： 一、 将甲基丙烯酸与氯霉素按照 2 1 的摩尔比溶于乙腈中， 其中氯霉素与 乙腈的比为 1mmol 100mL， 然后在震荡频率为 110Hz 的条件下震荡 5h， 再加入乙二醇二甲 基丙。

5、烯酸酯和偶氮二异丁腈， 得到混合物， 将混合物在超声频率为 40KHz、 超声功率为 150W 条件下超声处理 5min， 再充氮气除氧后密封 ； 二、 将密封后的混合物在 60恒温水浴中加 热 24h， 然后冷却、 离心、 弃去上清液， 得到沉淀物， 再将沉淀物自然干燥 ； 三、 将步骤二得到 的沉淀物用体积浓度为 10的乙酸甲醇溶液洗涤脱除去氯霉素， 直至用高效液相色谱检测 不到氯霉素， 再用甲醇洗涤 5h、 干燥， 即得氯霉素分子印迹聚合物微球 ； 步骤一中乙二醇二 甲基丙烯酸酯与氯霉素的摩尔比为 26 1 ； 步骤一中乙二醇二甲基丙烯酸酯与偶氮二异丁 腈的比为 26mmol 8mg。 。

6、2. 根据权利要求 1 所述的氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法， 其特征在于步骤三 中用乙酸甲醇溶液洗涤步骤二得到的沉淀物是在索氏提取器中进行的。 权 利 要 求 书 CN 101591412 B1/5 页 3 氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种聚合物微球的制备方法。 背景技术 0002 氯霉素 (Chloramphenicol， CAP) 是一种杀菌力极强的广谱抗生素， 由于其优良的 抗菌性、 稳定的药性、 低廉的价格， 而广泛作为饲料添加剂， 用于治疗细菌性疾病。 但研究发 现 CAP 对骨髓和新生儿有较大的毒性， 易引起人体血中毒、 导致不可逆的再生。

7、障碍性贫血 等严重的毒副作用， 对人类的健康构成巨大的潜在威胁。 0003 痕量CAP检测方法(微生物法、 免疫分析法、 色谱法、 色谱质谱联用法、 超临界流体 色谱法等 ) 已经比较成熟。但由于样品中 CAP 残留浓度低， 基体成分复杂， 且常规样品前处 理方法步骤繁琐， 严重限制了常规快速检测方法和仪器分析方法对样品中 CAP 残留的有效 检测。并且常用的吸附剂选择性较差， 在富集分析物的同时， 大量基体和干扰物质也被富 集， 导致洗脱液中仍含有基体和杂质， 干扰最后的色谱分析。 0004 分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers， MIPs)是一种具有。

8、较强分子 识别能力的新型高分子仿生材料， 其具有类抗体的特异性、 高选择性、 高强度等优点， 具有 预定性、 识别性和实用性等特点， 可以满足作为吸附剂的要求。 分子印迹聚合物的制备多采 用本体聚合法， 此制备方法虽然简单， 但是其后处理过程过于冗长和繁琐 ( 要经过研磨、 筛 分、 漂洗， 加之得到的颗粒不规则， 严重影响了聚合物对模板分子的特异性选择。目前制备 分子印迹微球(molecularly imprinted polymeric microspheres， MIPM)的方法主要有分 散聚合法、 多步溶胀法和沉淀聚合法等， 采用分散聚合法可以制备粒径可控、 形状规则的分 子印迹微球，。

9、 但是所使用的全氟代高聚合物分散剂价格昂贵 ； 而多步溶涨法虽然可以在极 性溶剂中制备印迹微球， 但是操作过程繁琐。 发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题是为了解决采用本体聚合法得到的分子印迹 聚合物 颗粒不规则、 容易团聚的问题， 提供了一种氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法。 0006 本发明氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法如下 ： 一、 将甲基丙烯酸与氯霉素 按照 2 1 的摩尔比溶于乙腈中， 其中氯霉素与乙腈的比为 1mmol 100mL， 然后在震荡 频率为 110Hz 的条件下震荡 5h， 再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈， 得到混合 物， 将混合物在超声频率为4。

10、0KHz、 超声功率为150W条件下超声处理5min， 再充氮气除氧后 密封 ； 二、 将密封后的混合物在 60恒温水浴中加热 24h， 然后冷却、 离心、 弃去上清液， 得 到沉淀物， 再将沉淀物自然干燥 ； 三、 将步骤二得到的沉淀物用体积浓度为 10的乙酸甲 醇溶液洗涤脱除去氯霉素， 直至用高效液相色谱检测不到氯霉素， 再用甲醇洗涤 5h、 干燥， 即得氯霉素分子印迹聚合物微球 ； 步骤一中乙二醇二甲基丙烯酸酯与氯霉素的摩尔比为 26 1 ； 步骤一中乙二醇二甲基丙烯酸酯与偶氮二异丁腈的比为 26mmol 8mg。 0007 采用本发明方法得到的氯霉素分子印迹聚合物微球的颗粒形状规则， 。

11、大小均一， 说 明 书 CN 101591412 B2/5 页 4 没有团聚现象， 增加了氯霉素分子印迹聚合物微球的比表面积， 从而提高了氯霉素分子印 迹聚合物微球的吸附性。 本发明方法简单， 所用的原材料氯霉素分子可以回收利用， 减少了 生产成本， 本发明所得的氯霉素分子印迹聚合物微球具有预定性、 识别性和实用性的特点， 可以用做固相萃取柱和基质固相分散技术的填料， 能够分离、 富集样品中的痕量氯霉素。 沉 淀聚合又称非均相溶液聚合， 是指聚合反应所使用的单体和交联剂及引发剂可溶于分散剂 中， 产生的聚合物不溶而易沉淀， 而本发明方法不需在反应体系中加入任何稳定剂， 因此制 备的聚合物微球表。

12、面洁净， 可避免由稳定剂或表面活性剂对模板分子的非选择性吸附。 附图说明 0008 图 1 是具体实施方式一所得氯霉素分子印迹聚合物微球的扫描电镜显微照片。 图2是具体实施方式一所得氯霉素分子印迹聚合物单个微球放大20000倍的扫描 电镜显微照片。 具体实施方式 0009 本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式， 还包括各具体实施方 式间 的任意组合。 0010 具体实施方式一 ： 本实施方式中氯霉素分子印迹聚合物微球的制备方法如下 ： 一、 将甲基丙烯酸与氯霉素按照 2 1 的摩尔比溶于乙腈中， 其中氯霉素与乙腈的比为 1mmol 100mL， 然后在震荡频率为 110Hz 的条件下震。

13、荡 5h， 再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯 和偶氮二异丁腈， 得到混合物， 将混合物在超声频率为 40KHz、 超声功率为 150W 条件下超声 处理 5min， 再充氮气除氧后密封 ； 二、 将密封后的混合物在 60恒温水浴中加热 24h， 然后 冷却、 离心、 弃去上清液， 得到沉淀物， 再将沉淀物自然干燥 ； 三、 将步骤二得到的沉淀物用 体积浓度为 10的乙酸甲醇溶液洗涤脱除去氯霉素， 直至用高效液相色谱检测不到氯霉 素， 再用甲醇洗涤 5h、 干燥， 即得氯霉素分子印迹聚合物微球 ； 步骤一中乙二醇二甲基丙烯 酸酯与氯霉素的摩尔比为 26 1 ； 步骤一中乙二醇二甲基丙烯酸酯与偶氮二异丁。

14、腈的比为 26mmol 8mg。 0011 图 1 是本实施方式所得所得氯霉素分子印迹聚合物微球放大 5000 倍的扫描电镜 显微照片。由图 1 可以看出采用本发明方法得到的氯霉素分子印迹聚合物微球的颗粒形状 规则， 大小均一， 没有团聚现象， 增加了氯霉素分子印迹聚合物微球的比表面积， 从而提高 了氯霉素分子印迹聚合物微球的吸附性。 0012 图2是本实施方式所得氯霉素分子印迹聚合物单个微球放大20000倍的扫描电镜 显微照片。由图 2 可知在氯霉素分子印迹聚合物微球表面结构中有孔穴， 此孔穴在痕量检 测氯霉素时， 有利于氯霉素的富集。 0013 具体实施方式二 ： 本实施方式与具体实施方式。

15、一不同的是步骤三中用乙酸甲醇溶 液洗涤步骤二得到的沉淀物是在索氏提取器中进行的。其他与具体实施方式一相同。 0014 具体实施方式三 ： 本实施方式中利用沉淀聚合法制备不加氯霉素模板分子的空白 聚合物的制备方法如下 ： 一、 将 2mmol 甲基丙烯酸溶于 100mL 乙腈中， 然后在震荡频率为 110Hz 的条件下震荡 5h， 再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈， 得到混合物， 将混 合物在超声频率为 40KHz、 超声功率为 150W 条件下超声处理 5min， 再充氮气除氧后密封 ； 说 明 书 CN 101591412 B3/5 页 5 二、 将密封后的混合物在 60恒温水浴中加。

16、热 24h， 然后冷却、 离心、 弃去上清液， 得到沉淀 物， 再将沉淀物自然干燥 ； 三、 将步骤二得到的沉淀物用体积浓度为 10的乙酸甲 醇溶液 洗涤脱除去残余的单体和交联剂等物质， 再用甲醇洗涤 5h 去除乙酸、 干燥， 即得氯霉素分 子印迹聚合物 ； 步骤一中乙二醇二甲基丙烯酸酯与偶氮二异丁腈的比为 26mmol 8mg。 0015 分别称取具体实施方式一所得的氯霉素分子印迹聚合物微球和具体实施方式三 所得的空白聚合物微球 30.00mg， 然后分别置于两个磨口锥形瓶中， 再向两个磨口锥形瓶 中加入 5mL 氯霉素浓度为 1g/ml 的氯霉素乙腈溶液， 恒温振荡 12h， 然后过滤， 。

17、采用美国 Waters 公司生产的型号为 2695 的高效液相色谱仪对滤液进行测试， 平行测定 3 次， 取平均 值， 分别计算平衡吸附液中游离氯霉素的浓度， 计算氯霉素分子印迹聚合物和空白聚合物 对氯霉素的吸附量 Q(g/g)， 计算结果如表 1 ： 0016 表 1 0017 说 明 书 CN 101591412 B4/5 页 6 聚合物 吸附量 Q(g/g) 吸附率 ( ) 相对标准偏差 RSD( ) 具体实施方式一所得氯霉素分 子印迹聚合物微球 5112 93.2 104 2.8 空白印迹聚合物微球 423 40 47 1.6 0018 由表 1 看出采用具体实施方式一的方法制备的氯霉素分子印迹聚合物微球对氯 说 明 书 CN 101591412 B5/5 页 7 霉素的吸附量、 吸附率均比空白聚合物的吸附量、 吸附率高， 即采用具体实施方式一的方法 制备的氯霉素分子印迹聚合物微球对氯霉素的吸附效果好。 说 明 书 CN 101591412 B1/1 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 。