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1、(10)授权公告号 CN 101487042 B (45)授权公告日 2012.05.30 CN 101487042 B *CN101487042B* (21)申请号 200810025867.7 (22)申请日 2008.01.18 C12Q 1/68(2006.01) C12Q 1/70(2006.01) (73)专利权人 中山大学达安基因股份有限公司 地址 510665 广东省广州市高新技术开发区 科学城香山路 19 号 专利权人 广州达泰生物工程技术有限公司 (72)发明人 胡守旺 张帆 李明 程钢 何蕴韶 CN 1948503 A,2007.04.18, CN 1544654 A,2。
2、004.11.10, WO 2007017699 A2,2007.02.15, CN 1814796 A,2006.08.09, CN 101082064 A,2007.12.05, WO 03076667 A1,2003.09.18, WO 2006060872 A1,2006.06.15, WO 0168915 A1,2001.09.20, CN 1687451 A,2005.10.26, WO 2006077102 A2,2006.07.27, (54) 发明名称 HPV 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片 (57) 摘要 本发明涉及一种 DNA 微阵列芯片， 特别是涉 及人乳头瘤病。
3、毒 (HPV) 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片。 采用固相载体基片， 配合HPV各亚型 的寡核苷酸探针， 制备成 DNA 微阵列芯片， 可以高 灵敏度、 高特异性的一次性同时检测多个样本的 HPV高危和低危型亚型， 可以广泛应用于HPV病毒 感染定性和分型检测。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 周洋 权利要求书 2 页 说明书 19 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 2 页 说明书 19 页 附图 2 页 1/2 页 2 1. 一种人乳头瘤病毒 (HPV) 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片， 该 DNA 微阵列。
4、芯片 将28对寡核苷酸探针作为一组， 点制在玻片上， 配以8种引物以及常规组分， 其特征在于所 用的 28 对寡核苷酸探针序列分别为 ： 权 利 要 求 书 CN 101487042 B 2 2/2 页 3 2. 根据权利要求 1 所述的 DNA 微阵列芯片， 其特征还在于所使用的 8 种引物序列分别 为 ： PH1 ： 5 -TTTGTTACTGTIGTIGATACIAC-3 PH1-1 ： 5 -GCACAGGGICAIAAIAATGG-3 PH2-1 ： 5 -GAAAAATAAACTGTAAITCAIAITC-3 PH2-2 ： 5 -AAATAAACTGCAAATCAIAITCITC。
5、-3 PH2-3 ： 5 -GTTGAAAAACAAACTGTAIITCAIA-3 PH2-4 ： 5 -CAAACTGTAAATCAAACTCTTCTGC-3 PH2-5 ： 5 -AAATAAACTGCAAATCAAACTCCTC-3 PH2-6 ： 5 -ATTGAAATATAAATTGCACATCATA-3 。 3.根据权利要求1所述的DNA微阵列芯片， 其特征还在于探针点样的载体是玻片、 尼龙 膜。 4. 根据权利要求 1 所述的 DNA 微阵列芯片， 其特征是还在于 DNA 微阵列芯片用于临床 HPV 感染辅助诊断以及高危和低危型别分辨诊断。 权 利 要 求 书 CN 101487。
6、042 B 3 1/19 页 4 HPV 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片 0001 所属技术领域 0002 本发明涉及一种 DNA 微阵列芯片， 特别是涉及人乳头瘤病毒 (HPV) 亚型基因分型 DNA 微阵列芯片。采用固相载体基片， 针对 HPV 各亚型的寡核苷酸探针， 制备成 DNA 微阵列 芯片， 可以高灵敏度、 高特异性的一次性同时检测多个样本的 HPV 高危和低危亚型， 可以广 泛应用于 HPV 病毒感染定性和分型检测。 0003 技术背景 0004 人乳头瘤病毒(human papilloma virus， HPV)是一种最小的DNA(脱氧核糖核酸) 病毒。主要感染上皮细胞。
7、。到目前为止， 已鉴定出 HPV 达 80 多个亚型， 有资料报道为 100 种以上 HPV 亚型。HPV 在人类感染率很高， 自然人群中 HPV 感染率从低于 1到高达 50， 性活跃人群中 20 80以上的人有 HPV 感染史。 0005 HPV 感染最常见的部位之一是肛门外生殖器， 引起肛门外生殖器尖锐湿疣， 近年 来， 尖锐湿疣发病率逐年升高， 目前已在性病属性传播疾病中排第二的位置， 发病率仅次于 淋病。是除艾滋病外对患者影响最大的传染疾病。 0006 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一， 死亡率仅次于乳腺癌。我国患病人数和死亡 人数均占全世界 1/3， 每年新发病例约有 13 万。在临。
8、床病理检查中， 宫颈癌患者几乎 100 的有高危型人乳头瘤病毒 (HPV) 的感染， 可以肯定地说， HPV 感染是宫颈癌患发的主要原 因。宫颈癌是目前为数不多的已经明确了病因的癌肿， 又是一种可预防、 可治愈的疾病， 关 键在于早发现， 治疗宫颈癌前病变， 终止其向宫颈癌的发展。在女性体检中， 开展 HPV 基因 检测对宫颈癌的早期诊断具有重要的临床诊断和预防、 治疗意义。因此 2003 年 8 月 30 日 美国 FDA 将 HPV 基因检测作为妇女常规检测项目。我国近年临床上已经启动此项检测， 部 分经济发达省市有列入妇女常规体检和普查项目的计划。 0007 HPV 是一组病毒的总称， 。
9、组成一个科， 其病毒形态类似， 但 DNA 限制性内切酶图谱 各异， 核壳体蛋白质的抗原性不同。目前已经确定的 HPV 型别大约有 80 余种， 依其感染的 上皮所在部位分为皮肤型 HPV 和生殖道上皮 HPV， 大约 35 种型别可感染妇女生殖道， 约 20 种与肿瘤相关。依据不同型别 HPV 与肿瘤发生的危险性高低分为低危险型别和高危险型 别 HPV， 低危险型别 HPV 包括 HPV6， 11， 32， 34， 40， 42， 43， 54， MM8 等型别， 常引起外生殖器湿 疣等良性病变包括宫颈上皮内低度病变 (CINI)， 高危险型 HPV 包括 HPV16， 18， 26， 31。
10、， 33， 35， 39， 45， 51， 52， 53， 56， 58， 59， 66， 68， 73， 83， MM4 等型别， 与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变 (CIN II/III) 的发生相关， 尤其是 HPV16 和 18 型。 0008 鉴于以上 HPV 感染和危害情况， 发明一种快速、 高准确度、 高通量的 HPV 分型检测 产品具有重要意义。 0009 由于 HPV 体外增殖非常困难， 到目前为止尚无可靠的血清学分型方法。传统的方 法是通过形态学和免疫学方法对其进行检测， 如巴氏涂片法， 液基薄层细胞学检查， 阴道镜 检查， 组织病理学检查， 电镜检查， 发射免疫法和酶联免疫法。
11、测定血清抗体水平等。这些传 统的 HPV 检测方法灵敏度和特异性均不好， 存在较高的假阳性和假阴性率， 并且不能分型。 0010 近年来， 随着分子生物学的发展， 科学工作者采用现代分子生物学方法， 包括核算 说 明 书 CN 101487042 B 4 2/19 页 5 杂交法、 PCR 法、 荧光定量 PCR 法等进行 HPV 检测， 但这些方法仍然存在灵敏度、 特异性、 通 量等方面的问题， 不能很好的适应临床要求。 0011 本世纪 90 年代， 诞生了基因微阵列芯片技术， 该技术具有高通量、 集约化、 低成 本、 高准确性等特点， 是融微电子学、 生物学、 物理学、 化学、 计算机科。
12、学为一体的高度交叉 的新技术， 具有重大的基础研究价值， 又具有明显的产业化前景。 由于用该技术可以将极其 大量的探针同时固定于支持物上， 所以一次可以对大量的生物分子进行检测分析， 从而解 决了传统核酸印迹杂交技术复杂、 自动化程度低、 检测目的分子数量少、 低通量等不足。而 且， 通过设计不同的探针阵列、 使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值， 该技术为 HPV 基因分型检测提供了合适的解决办法。 发明内容 0012 为了克服现有技术的缺陷和不足， 本发明的目的是提供一种人乳头瘤病毒 (HPV) 全亚型基因分型 DNA 微阵列芯片。这种具有高通量、 高准确性的 DNA 微阵列。
13、芯片， 可以对 HPV 高危型和低危型进行全面分型检测。 0013 本发明所采用的技术方案是 ： 采用固相载体基片， 配合针对 HPV 各亚型的寡核苷 酸探针， 制备成 DNA 微阵列芯片， 再配以特殊 PCR 系统， 每张芯片可以一次性同时检测多个 样本的 HPV 所有亚型。 0014 本发明针对HPV不同型别的基因序列， 设计一套特异性寡核苷酸探针(附表1)， 采 用自动点样机器人， 将探针印制在一张玻片的特定区域， 每张玻片印制 10 个微阵列矩阵， 这样就制成 DNA 微阵列芯片， 一张芯片可以检测 10 个样本， 再配以其它必要的组份， 如 PCR 引物 ( 附表 2)， 组成完整的。
14、产品。实际检测时， 取 10 份人基因组 DNA 溶液， 采用 CY3 标记 引物和不对称 PCR 方法， 扩增出 HPV 基因组 CY3 标记靶标片段。取 DNA 微阵列芯片一张， 在 10 个杂交区分别加入 10 种 PCR 产物 2ul 和杂交液 8ul。将芯片放在自动杂交洗涤仪的杂 交槽内， 杂交温度设定为 45， 杂交时间 30 分钟， 自动洗涤吹干。取出玻片， 放入 GenePix 4100A 扫描仪进行扫描， 使用分析软件对扫描图像信号进行图像数据转换处理， 并分析产生 样本型别结果。 0015 本产品的片基载体可以是玻片、 尼龙膜或其它可以附着探针的载体。 0016 表 1 寡。
15、核苷酸探针序列以及所检测的型别 0017 名称 序列 (5 -3 ) 基因型别 PR1 tgtgctgccatatctacttc gaagtagatatggcagcaca 16 PR2 cctgggcaatatgatgctac gtagcatcatattgcccagg 18 PR3 agtacattatctgcagcatc gatgctgcagataatgtact 26 PR4 gctgcaattgcaaacagtga tcactgtttgcaattgcagc 31 PR5 actagtgacagtacatata tatatgtactgtcactagt 33 说 明 书 CN 10148704。
16、2 B 5 3/19 页 6 PR6 ctagtgacagtacatataa ttatatgtactgtcactag 35 PR7 atagagtcttccataccttc gaaggtatggaagactctat 39 PR8 tatgaccctactaagttta taaacttagtagggtcata 45 PR9 ctgcggtttccccaacatt aatgttggggaaaccgcag 51 PR10 actttatgtgctgaggtta taacctcagcacataaagt 52 PR11 catgactctttccgcaacc ggttgcggaaagagtcatg 53。
17、 PR12 tagtactgctacagaacag ctgttctgtagcagtacta 56 PR13 ctgaagtaactaaggaagg ccttccttagttacttcag 58 PR14 ccaatctttctgtgtgtgc gcacacacagaaagattgg 59 PR15 catgactattaatgcagct agctgcattaatagtcatg 66 PR16 ctaataaatttaaggaata tattccttaaatttattag 68 PR17 actaatttttctgtatgtg cacatacagaaaaattagt 73 PR18 atatta。
18、ctatttcagctgc gcagctgaaatagtaatat 83 PR19 accattagcactgctgtta taacagcagtgctaatggt MM4 PR20 gtgcatccgtaactacatc gatgtagttacggatgcac 6 PR21 tgtgcatctgtgtctaaat atttagacacagatgcaca 11 PR22 tgtgctactgtaacaactg cagttgttacagtagcaca 32 PR23 acttttcagtttgtgtagg cctacacaaactgaaaagt 34 PR24 tgccacacagtcccccac。
19、a tgtgggggactgtgtggca 40 PR25 tgactttgtgtgccactgc gcagtggcacacaaagtca 42 PR26 gtacaaacttgacgttatg cataacgtcaagtttgtac 43 PR27 actaacctaacattgtgtg cacacaatgttaggttagt 54 PR28 attttactattagtgctgc gcagcactaatagtaaaat 84 说 明 书 CN 101487042 B 6 4/19 页 7 0018 表 2 引物序列 0019 名称 序列 (5 -3 ) 碱基数 PH1 TTTGTTACTG。
20、TIGTIGATACIAC 23 PH1-1 GCACAGGGICAIAAIAATGG 20 PH2-1 GAAAAATAAACTGTAAITCAIAITC 25 PH2-2 AAATAAACTGCAAATCAIAITCITC 25 PH2-3 GTTGAAAAACAAACTGTAIITCAIA 25 PH2-4 CAAACTGTAAATCAAACTCTTCTGC 25 PH2-5 AAATAAACTGCAAATCAAACTCCTC 25 PH2-6 ATTGAAATATAAATTGCACATCATA 25 0020 以下结合附图说明本发明的具体实施。 附图说明 0021 图 1 为 HPV 。
21、高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片示意图 0022 1 芯片整体外观 0023 2 杂交区以及探针微阵列 0024 图 2 为 HPV 16 型阳性扫描图 0025 图 3H 为 PV 18 型阳性扫描图 0026 图 4 为 HPV 11 型阳性扫描图 0027 图 5 为 HPV16、 18 混合型阳性扫描图 0028 图 6 为 HPV11、 16 型阳性扫描图 具体实施方式 0029 本发明用下列实施例进行解释， 目的只是为了解释而不是以任何方式限制本发 明。 0030 实施例一 ： 0031 方法 1 ： HPV 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片 PCR 引物和探针的设计 。
22、0032 在 HPV 基因组序列多态性比较集中的 L 区， 设计和合成特异性 PCR 引物， 5 端引物 PH1， PH1-1， CY3 标记 ； 3 端引物 P2-1， P2-2， P2-3， P2-4， P2-5， P2-6， 引物序列见表 2。采 用多重不对称 PCR 一管扩增。 0033 针对 HPV L 区各亚型基因序列的多态性特性， 设计和合成亚型探针 28 对， 另外设 计阳性和阴性对照探针各一对。亚型分型探针序列， 见表 1。 说 明 书 CN 101487042 B 7 5/19 页 8 0034 方法 2 ： HPV 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片的制备 0035 。
23、微阵列芯片制备需要每对探针的其中一条。采用基因芯片自动点样仪， 将 28 条分 型探针和两条对照探针的其中一条， 点制到玻片的特定区域， 制成 DNA 微阵列。 0036 (1) 点样探针溶液 ： 将探针稀释到 5SSC、 0.05 SDS 溶液中， 终浓度为 30uM ； 0037 (2)点样矩阵 ： (如图1)将探针点制在玻片上， 每个探针横向重复3点点制在杂交 区内， 每行 9 点， 共 10 行， 90 个点 ； 杂交区分成 10 个区， 可以同时检测 10 份样本。 0038 实施例二 ： 使用本发明产品检测 10 份临床样本 0039 取 10 份样本， 提取病毒 DNA， 先进行。
24、 DNA 测序， 测序结果如下 ： 0040 样本号 测序结果 (HPV 型别 ) 样本号 测序结果 (HPV 型别 ) 01 16 06 阴性 02 18 07 阴性 03 11 08 阴性 04 16， 18 09 阴性 05 11， 16 10 阴性 0041 采用本发明的 HPV 高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片对以上 10 份样本进行一 次性检测。取 10 管 PCR 反应液， 分别加入 10 种样本 DNA 提取液， 5ul/ 管， PCR 循环参数为 ： 94 5 ； 94 30” ， 50 30” ， 72 30” ， 45 循环 ； 72 5 。 0042 取一张微阵列。
25、芯片， 分别取 10 种 PCR 产物各 2ul 加到芯片的 10 孔， 再在各孔加入 杂交液 (5XSSC)8ul， 芯片放到自动杂交洗涤仪的槽内， 设定杂交温度 50， 杂交时间 40 分 钟。杂交后自动洗涤和风干。 0043 采用GnenPix4100A扫描仪， 扫描杂交信号， 得到杂交结果扫描图(见图2-图11)， 并将图像转换成数据。 0044 采用分析软件， 将以上数据自动分析转换成为各个样本的基因型别， 检测结果与 样本测序结果完全相相符。见表 3。 0045 表 3 本次检测结果与样本测序结果的比较 0046 样本编号 测序结果 本次试验结果 是否相符 说 明 书 CN 101。
26、487042 B 8 6/19 页 9 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 16 型 18 型 11 型 16， 18 型混合 11， 16 型混合 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 16 型 18 型 11 型 16， 18 型混合 11， 16 型混合 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 0047 实施例说明了本发明产品在检测通量方面的优势(一次检测10个样本， 可以同时 检测所有高危和低危型别)和检测准确性方面的可靠性(检测结果与样本测序结果完全相 符 )。 0048 序列表 0049 中山大学达安基因股份有限公司 0050 HPV 。
27、高危和低危亚型分型 DNA 微阵列芯片 0051 0052 0053 64 0054 1 0055 20 0056 DNA 0057 人工序列 0058 0059 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0060 1 0061 TGTGCTGCCATATCTACTTC 0062 2 0063 20 0064 DNA 0065 人工序列 0066 0067 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0068 2 0069 GAAGTAGATATGGCAGCACA 0070 3 0071 20 0072 DNA 0073 人工序列 说 明 书 CN 101487042 B 9。
28、 7/19 页 10 0074 0075 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0076 3 0077 CCTGGGCAATATGATGCTAC 0078 4 0079 20 0080 DNA 0081 人工序列 0082 0083 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0084 4 0085 GTAGCATCATATTGCCCAGG 0086 5 0087 20 0088 DNA 0089 人工序列 0090 0091 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0092 5 0093 AGTACATTATCTGCAGCATC 0094 6 0095 20。
29、 0096 DNA 0097 人工序列 0098 0099 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0100 6 0101 GATGCTGCAGATAATGTACT 0102 7 0103 20 0104 DNA 0105 人工序列 0106 0107 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0108 7 0109 GCTGCAATTGCAAACAGTGA 0110 8 0111 20 0112 DNA 说 明 书 CN 101487042 B 10 8/19 页 11 0113 人工序列 0114 0115 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0116。
30、 8 0117 TCACTGTTTGCAATTGCAGC 0118 9 0119 19 0120 DNA 0121 人工序列 0122 0123 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0124 9 0125 ACTAGTGACAGTACATATA 0126 10 0127 19 0128 DNA 0129 人工序列 0130 0131 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0132 10 0133 TATATGTACTGTCACTAGT 0134 11 0135 19 0136 DNA 0137 人工序列 0138 0139 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交。
31、反应探针。 0140 11 0141 CTAGTGACAGTACATATAA 0142 12 0143 19 0144 DNA 0145 人工序列 0146 0147 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0148 12 0149 TTATATGTACTGTCACTAG 0150 13 0151 20 说 明 书 CN 101487042 B 11 9/19 页 12 0152 DNA 0153 人工序列 0154 0155 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0156 13 0157 ATAGAGTCTTCCATACCTTC 0158 14 0159 20 01。
32、60 DNA 0161 人工序列 0162 0163 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0164 14 0165 GAAGGTATGGAAGACTCTAT 0166 15 0167 19 0168 DNA 0169 人工序列 0170 0171 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0172 15 0173 TATGACCCTACTAAGTTTA 0174 16 0175 19 0176 DNA 0177 人工序列 0178 0179 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0180 16 0181 TAAACTTAGTAGGGTCATA 0182 。
33、17 0183 19 0184 DNA 0185 人工序列 0186 0187 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0188 17 0189 CTGCGGTTTCCCCAACATT 0190 18 说 明 书 CN 101487042 B 12 10/19 页 13 0191 19 0192 DNA 0193 人工序列 0194 0195 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0196 18 0197 AATGTTGGGGAAACCGCAG 0198 19 0199 19 0200 DNA 0201 人工序列 0202 0203 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯。
34、片杂交反应探针。 0204 19 0205 ACTTTATGTGCTGAGGTTA 0206 20 0207 19 0208 DNA 0209 人工序列 0210 0211 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0212 20 0213 TAACCTCAGCACATAAAGT 0214 21 0215 19 0216 DNA 0217 人工序列 0218 0219 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0220 21 0221 CATGACTCTTTCCGCAACC 0222 22 0223 19 0224 DNA 0225 人工序列 0226 0227 根据特定核。
35、苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0228 22 0229 GGTTGCGGAAAGAGTCATG 说 明 书 CN 101487042 B 13 11/19 页 14 0230 23 0231 19 0232 DNA 0233 人工序列 0234 0235 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0236 23 0237 TAGTACTGCTACAGAACAG 0238 24 0239 19 0240 DNA 0241 人工序列 0242 0243 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0244 24 0245 CTGTTCTGTAGCAGTACTA 024。
36、6 25 0247 19 0248 DNA 0249 人工序列 0250 0251 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0252 25 0253 CTGAAGTAACTAAGGAAGG 0254 26 0255 19 0256 DNA 0257 人工序列 0258 0259 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0260 26 0261 CCTTCCTTAGTTACTTCAG 0262 27 0263 19 0264 DNA 0265 人工序列 0266 0267 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0268 27 说 明 书 CN 1014870。
37、42 B 14 12/19 页 15 0269 CCAATCTTTCTGTGTGTGC 0270 28 0271 19 0272 DNA 0273 人工序列 0274 0275 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0276 28 0277 GCACACACAGAAAGATTGG 0278 29 0279 19 0280 DNA 0281 人工序列 0282 0283 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0284 29 0285 CATGACTATTAATGCAGCT 0286 30 0287 19 0288 DNA 0289 人工序列 0290 0291 根据特。
38、定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0292 30 0293 AGCTGCATTAATAGTCATG 0294 31 0295 19 0296 DNA 0297 人工序列 0298 0299 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0300 31 0301 CTAATAAATTTAAGGAATA 0302 32 0303 19 0304 DNA 0305 人工序列 0306 0307 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 说 明 书 CN 101487042 B 15 13/19 页 16 0308 32 0309 TATTCCTTAAATTTATTAG 0。
39、310 33 0311 19 0312 DNA 0313 人工序列 0314 0315 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0316 33 0317 ACTAATTTTTCTGTATGTG 0318 34 0319 17 0320 DNA 0321 人工序列 0322 0323 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0324 34 0325 CACATACAGAAAAATTAGT 0326 35 0327 19 0328 DNA 0329 人工序列 0330 0331 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0332 35 0333 ATATTACTA。
40、TTTCAGCTGC 0334 36 0335 19 0336 DNA 0337 人工序列 0338 0339 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0340 36 0341 GCAGCTGAAATAGTAATAT 0342 37 0343 19 0344 DNA 0345 人工序列 0346 说 明 书 CN 101487042 B 16 14/19 页 17 0347 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0348 37 0349 ACCATTAGCACTGCTGTTA 0350 38 0351 19 0352 DNA 0353 人工序列 0354 0355 根。
41、据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0356 38 0357 TAACAGCAGTGCTAATGGT 0358 39 0359 19 0360 DNA 0361 人工序列 0362 0363 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0364 39 0365 GTGCATCCGTAACTACATC 0366 40 0367 19 0368 DNA 0369 人工序列 0370 0371 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0372 40 0373 GATGTAGTTACGGATGCAC 0374 41 0375 19 0376 DNA 0377 人工序列。
42、 0378 0379 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0380 41 0381 TGTGCATCTGTGTCTAAAT 0382 42 0383 19 0384 DNA 0385 人工序列 说 明 书 CN 101487042 B 17 15/19 页 18 0386 0387 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0388 42 0389 ATTTAGACACAGATGCACA 0390 43 0391 19 0392 DNA 0393 人工序列 0394 0395 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0396 43 0397 TGTGCTA。
43、CTGTAACAACTG 0398 44 0399 19 0400 DNA 0401 人工序列 0402 0403 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0404 44 0405 CAGTTGTTACAGTAGCACA 0406 45 0407 19 0408 DNA 0409 人工序列 0410 0411 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0412 45 0413 ACTTTTCAGTTTGTGTAGG 0414 46 0415 19 0416 DNA 0417 人工序列 0418 0419 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0420 46 。
44、0421 CCTACACAAACTGAAAAGT 0422 47 0423 19 0424 DNA 说 明 书 CN 101487042 B 18 16/19 页 19 0425 人工序列 0426 0427 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0428 47 0429 TGCCACACAGTCCCCCACA 0430 48 0431 19 0432 DNA 0433 人工序列 0434 0435 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0436 48 0437 TGTGGGGGACTGTGTGGCA 0438 49 0439 19 0440 DNA 0441 人工。
45、序列 0442 0443 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0444 49 0445 TGACTTTGTGTGCCACTGC 0446 50 0447 19 0448 DNA 0449 人工序列 0450 0451 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0452 50 0453 GCAGTGGCACACAAAGTCA 0454 51 0455 19 0456 DNA 0457 人工序列 0458 0459 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0460 51 0461 GTACAAACTTGACGTTATG 0462 52 0463 19 说 明 。
46、书 CN 101487042 B 19 17/19 页 20 0464 DNA 0465 人工序列 0466 0467 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0468 52 0469 CATAACGTCAAGTTTGTAC 0470 53 0471 19 0472 DNA 0473 人工序列 0474 0475 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0476 53 0477 ACTAACCTAACATTGTGTG 0478 54 0479 19 0480 DNA 0481 人工序列 0482 0483 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0484 5。
47、4 0485 CACACAATGTTAGGTTAGT 0486 55 0487 19 0488 DNA 0489 人工序列 0490 0491 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0492 55 0493 ATTTTACTATTAGTGCTGC 0494 56 0495 19 0496 DNA 0497 人工序列 0498 0499 根据特定核苷酸序列设计， 以用作芯片杂交反应探针。 0500 56 0501 GCAGCACTAATAGTAAAAT 0502 57 说 明 书 CN 101487042 B 20 18/19 页 21 0503 23 0504 DNA 0505 。
48、人工序列 0506 0507 根据特定核苷酸序列设计， 以用作 PCR 引物。 0508 57 0509 TTTGTTACTGTIGTIGATACIAC 0510 58 0511 20 0512 DNA 0513 人工序列 0514 0515 根据特定核苷酸序列设计， 以用作 PCR 引物。 0516 58 0517 GCACAGGGICAIAAIAATGG 0518 59 0519 25 0520 DNA 0521 人工序列 0522 0523 根据特定核苷酸序列设计， 以用作 PCR 引物。 0524 59 0525 GAAAAATAAACTGTAAITCAIAITC 0526 60 0527 25 0528 DNA 0529 人工序列 0530 0531 根据特定核苷酸序列设计， 以用作 PCR 引物。 0532 60 0533 AAATAAACTGCAAATCAIAITCITC 0534 61 0535 25 0536 DNA 0537 人工序列 0538 0539 根据特定核苷酸序列设计， 以用作 PCR 引物。 0540 61 0541 GTTGAAAAACAAACTGTAIITCAIA 说 明 书 CN 101487042 B 21 19/19 页 22 0542 62 0543 25 0544 DNA 0545 人工序列 0546 0547 根据。