一种单分散荧光微球制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610330702.5 (22)申请日 2016.05.18 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105859973 A (43)申请公布日 2016.08.17 (73)专利权人 苏州知益微球科技有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济开发 区长安路东侧 （科技创业园） (72)发明人 阳承利李雪夏梦雨夏丽玲 (51)Int.Cl. C08F 257/02(2006.01) C08F 226/02(2006.01) C08F 220/06(2006.。

2、01) C08F 220/32(2006.01) C08F 220/60(2006.01) C08F 216/14(2006.01) C09K 11/02(2006.01) C09K 11/06(2006.01) (56)对比文件 US 5786219 A,1998.07.28, CN 103242476 A,2013.08.14, US 4326008 A,1982.04.20, 武照强等.乙烯基荧光功能单体的合成及与 牛血清白蛋白的相互作用. 武汉大学学报 .2006,第52卷(第2期), 王明珍等.两种可聚合荧光标记单体的合成 与性能. 陕西师范大学学报 .2002,第30卷(第1 期)。

3、, 李鑫.荧光微球的分散聚合法制备与表征. 中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (硕士) 工程科技 辑 .2007,B016-49. 审查员 刘青 (54)发明名称 一种单分散荧光微球制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种单分散荧光微球制备方 法， 包括步骤： 1.制备荧光单体， 将荧光单体加入 分散剂/溶剂中搅拌均匀， 得荧光单体悬浮液； 将 聚合物种子加入含有分散剂的水溶液中， 得种子 悬浮液； 将引发剂加入含有分散剂的水溶液中， 得引发剂悬浮液； 然后将引发剂悬浮液和荧光单 体悬浮液加入种子悬浮液中， 反应， 反应后再将 上述所得置于25-40的条件下真空搅拌0.5- 2h， 得单分散荧。

4、光微球悬浮液， 本方法制得的荧 光微球的粒径均一、 颗粒粒径可控、 稳定性强， 荧 光效率高， 在标记、 示踪、 检测等生物医药领用具 有潜在应用价值。 权利要求书1页 说明书6页 CN 105859973 B 2018.07.06 CN 105859973 B 1.一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 包括步骤： (1)合成以下荧光单体： 荧光单体a： 在冰水浴中， 以丙酮和二氯甲烷的混合溶液为溶剂， 用丹磺酰氯和烯丙基 胺合成丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 荧光单体b： 以1-芘基丁酸和L-苯丙氨酸为原料， 依次经过步骤： 酯化、 偶合、 酰化合成 N-丙烯酰胺乙基-2-(1-芘基丁酰胺。

5、基)苯丙酰胺荧光单体； 荧光单体c： 以邻氨基苯甲酰胺和3-氯丙烯为原料， 经烯丙基化反应得N-烯丙基邻氨基 苯甲酰胺荧光单体； 荧光单体d： 以2-萘酚-6， 8-二磺酸钾和3-氯丙烯为原料， 合成体2烯丙氧基萘-6， 8- 二磺酸钾荧光单体； (2)将荧光单体a或荧光单体b或荧光单体c或荧光单体d加入分散剂/溶剂混合溶液中， 搅拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， 荧光单体a或荧光单体b或荧光单体c或荧光单体d重量占 荧光单体悬浮液重量的60以下； (3)将聚合物种子加入含有分散剂的水溶液中， 充分搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮 液， 聚合物种子占种子悬浮液重量的60以下； (4)将引发剂加入含。

6、有分散剂的水溶液中， 充分搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂占引 发剂悬浮液重量的1-10； (5)在70-80的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮液 中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为1-20g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为0.5-8g/ min， 荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应2-6h， 得聚合物微球悬浮 液， 然后停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在25-40的条件下真空搅拌0.5-2h， 得单分散荧 光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥， 得荧光微球； 所述分散剂为聚乙二醇或/和糊精。 2.根据权利要求1所述的一种单分散荧光微球制备方法， 。

7、其特征在于， 所述引发剂为偶 氮类水溶性引发剂。 3.根据权利要求2所述的一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 所述引发剂为偶 氮二异丁咪唑啉盐酸盐或偶氮二异丁基脒盐酸盐。 4.根据权利要求1-3任一项所述的一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 所述聚 合物种子为苯乙烯均聚物或苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。 5.根据权利要求1所述的一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中溶剂 为C1-C3的低级醇。 6.根据权利要求1或5所述的一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中分 散剂重量是荧光单体a或荧光单体b或荧光单体c或荧光单体d重量的1-20， 步骤(3)。

8、中分 散剂重量是聚合物种子重量的1-10， 步骤(4)中分散剂重量是引发剂重量的1-5。 7.根据权利要求1所述的一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 荧光微球的粒径 大小为0.1-300 m。 8.根据权利要求1所述的一种单分散荧光微球制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中还加 入有功能性单体， 所述功能性单体选自丙烯酸， 甲基丙烯酸和甲基丙烯酸缩水甘油酯中的 一种或多种。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105859973 B 2 一种单分散荧光微球制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种高分子微球的制备方法， 具体涉及一种单分散荧光微球的制备方 法。 背景技术 0002 荧光。

9、微球一般指微球表面标有荧光物质或微球体内结构韩有荧光物质 （如包埋或 聚合） 的微球， 受到外界能量刺激能激发荧光。 它是一种载有荧光分子的功能性微球， 其外 形多为球形。 关于荧光微球的制备方法有多种， 一般分为物理吸附法、 自组装法、 包埋发、 化 学键合法、 共聚法等， 其中物理吸附法中荧光物质暴露在微球外表， 容易受到外界环境和介 质的影响， 稳定性和重现性都不佳， 而共聚法制得的荧光微球各项性能均有很大改善， 是最 受欢迎的方法之一。 0003 现有技术制备的荧光微球往往粒径分布较宽， 稳定性也有待提高。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷， 提供一种单分。

10、散荧光微球制备 方法， 由该制备方法获得的荧光微球粒径可控且粒径均一， 微球荧光性能稳定性高。 0005 为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案是： 0006 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0007 （1） 合成以下荧光单体： 0008 荧光单体a： 在冰水浴中， 以丙酮和二氯甲烷的混合溶液为溶剂， 用丹磺酰氯和烯 丙基胺合成丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 0009 荧光单体b： 以1-芘基丁酸和L-苯丙氨酸为原料， 依次经过步骤： 酯化、 偶合、 酰化 合成N-丙烯酰胺乙基-2-(1-芘基丁酰胺基)苯丙酰胺荧光单体； 0010 荧光单体c： 以邻氨基苯甲酰胺和3-氯丙烯为原料， 。

11、经烯丙基化反应得N-烯丙基邻 氨基苯甲酰胺荧光单体； 0011 荧光单体d： 以2-萘酚-6， 8-二磺酸钾和3-氯丙烯为原料， 合成体2烯丙氧基萘- 6， 8-二磺酸钾荧光单体； 0012 （2） 将荧光单体a或荧光单体b或荧光单体c或荧光单体d加入分散剂/溶剂混合溶 液中， 搅拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， 荧光单体a或荧光单体b或荧光单体c或荧光单体d重 量占荧光单体悬浮液重量的60%以下； 0013 （3） 将聚合物种子加入含有分散剂的水溶液中， 充分搅拌， 形成均匀分散的种子悬 浮液， 聚合物种子占种子悬浮液重量的60%以下； 0014 （4） 将引发剂加入含有分散剂的水溶液中， 充。

12、分搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂 占引发剂悬浮液重量的1-10%； 0015 （5） 在70-80的恒温条件下， 优选为70， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同 时加入种子悬浮液中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为1-20g/min， 所述引发剂悬浮液加 说明书 1/6 页 3 CN 105859973 B 3 入速度为0.5-8g/min， 荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应2-6h， 得 聚合物微球悬浮液， 然后停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在25-40的条件下真空搅拌0.5- 2h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥， 得荧光微球； 所述分散剂为聚乙二醇或/和。

13、糊 精。 0016 优选地， 所述引发剂为偶氮类水溶性引发剂。 0017 优选地， 所述引发剂为偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐或偶氮二异丁基脒盐酸盐。 0018 优选地， 所述聚合物种子为苯乙烯均聚物或苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。 0019 优选地， 步骤 （2） 中溶剂为C1-C3的低级醇。 0020 优选地， 步骤 （2） 中分散剂重量是荧光单体a或荧光单体b或荧光单体c或荧光单体 d重量的1-20%， 步骤 （3） 中分散剂重量是聚合物种子重量的1-10%， 步骤 （4） 中分散剂重量是 引发剂重量的1-5%。 0021 优选地， 荧光微球的粒径大小为0.1-300 m。 0022 优选地， 步骤。

14、 （2） 中还加入有功能性单体， 所述功能性单体选自丙烯酸， 甲基丙烯 酸和甲基丙烯酸缩水甘油酯中的一种或多种。 0023 本发明所达到的有益效果： 0024 本发明方法制备的荧光微球的粒径均一、 颗粒粒径可控、 稳定性强， 荧光效率高， 在标记、 示踪、 检测等生物医药领用具有潜在应用价值。 具体实施方式 0025 下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。 以下实施例仅用于更加清楚地说明 本发明的技术方案， 而不能以此来限制本发明的保护范围。 0026 实施例1 0027 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0028 （1） 在冰水浴中， 以1:1体积比的丙酮/二氯甲烷混合溶液为溶剂，。

15、 用丹磺酰氯和烯 丙基胺合成丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 0029 （2） 将丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体加入聚乙二醇/甲醇混合溶液中， 搅拌均匀， 形 成荧光单体悬浮液， 丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体占荧光单体悬浮液重量的50%； 分散剂重量 是丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体重量的8%， 0030 （3） 将苯乙烯均聚物种子 （粒度0.50 m， CV=3%） 加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充 分搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯均聚物种子占种子悬浮液重量的50%； 分散剂 聚乙二醇重量是苯乙烯均聚物种子重量的5%， 0031 （4） 将偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐引发剂加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分。

16、搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的2%； 分散剂聚乙二醇重量是引发剂重量 的3%。 0032 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为10g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为2g/min， 荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应2-h， 得聚合物微球悬浮液， 然后 停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在30的条件下真空搅拌0.5h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥， 得荧光微球； 说明书 2/6 页 4 CN 105859973 B 4 0033 采用Beckman Counte。

17、r测定其粒径及粒径分布得： 粒径为1.5 m， CV （coefficient of variation） 为2.5%， 微球的荧光发射峰位在510nm， 将荧光微球放置6个月、 13个月后， 发 现微球分散性和荧光性能均未见明显变化。 0034 实施例2 0035 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0036 （1） 在冰水浴中， 以丙酮和二氯甲烷的混合溶液为溶剂， 用丹磺酰氯和烯丙基胺合 成丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 0037 （2） 将丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体加入糊精/乙醇混合溶液中， 搅拌均匀， 形成荧 光单体悬浮液， 丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体占荧光单体悬浮液重量的55%； 糊精。

18、重量是丹磺 酰氯烯丙基胺荧光单体重量的15% 0038 （3） 将苯乙烯-二乙烯基苯共聚物种子 （粒度55 m， CV=3%） 加入含有糊精的水溶液 中， 充分搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯-二乙烯基苯共聚物种子占种子悬浮液 重量的45%； 糊精重量是聚合物种子重量的8%； 0039 （4） 将偶氮二异丁基脒盐酸盐引发剂加入含有糊精的水溶液中， 充分搅拌， 形成引 发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的5%； 糊精重量是引发剂重量的2%； 0040 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 荧光单体悬浮液的加入速度为15g/min， 所。

19、述引发剂悬浮液加入速度为5g/min， 荧光 单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应4h， 得聚合物微球悬浮液， 然后停止 搅拌， 将聚合物微球悬浮液在25的条件下真空搅拌2h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗 涤、 干燥， 得荧光微球； 0041 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 粒径为120 m， CV （coefficient of variation） 为2.8%， 微球的荧光发射峰位在515nm， 将荧光微球放置13个月后， 发现微球 分散性和荧光性能均未见明显变化。 0042 实施例3 0043 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0044 。

20、（1） 在冰水浴中， 以丙酮/二氯甲烷混合溶液为溶剂， 用丹磺酰氯和烯丙基胺合成 丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 0045 （2） 将丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体和丙烯酸单体加入聚乙二醇/甲醇混合溶液中， 搅拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， 丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体占荧光单体悬浮液重量的 40%； 分散剂重量是丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体重量的8%， 0046 （3） 将苯乙烯均聚物种子 （粒度4.6 m， CV=3%） 加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分 搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯均聚物种子占种子悬浮液重量的30%； 分散剂聚 乙二醇重量是苯乙烯均聚物种子重量的5%， 0047 （4） 将。

21、偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐引发剂加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的2%； 分散剂聚乙二醇重量是引发剂重量 的3%。 0048 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为10g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为2g/min， 荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应2h， 得聚合物微球悬浮液， 然后 说明书 3/6 页 5 CN 105859973 B 5 停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在30的条件下真空搅拌0.5h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥。

22、， 得荧光微球； 0049 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 平均粒径为10m， CV （coefficient of variation） 为2.4%， 微球氯仿溶液的荧光发射峰位在510nm， 制备的微球 中每平方微米上有2107分子的荧光物质， 将荧光微球放置13个月后， 发现微球分散性和 荧光性能均未见明显变化。 0050 实施例4 0051 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0052 （1） 在冰水浴中， 以丙酮和二氯甲烷的混合溶液为溶剂， 用丹磺酰氯和烯丙基胺合 成丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 0053 （2） 将丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体和甲基丙烯酸。

23、单体加入糊精/乙醇混合溶液中， 搅拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， 丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体占荧光单体悬浮液重量的 55%； 糊精重量是丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体重量的6%； 0054 （3） 将苯乙烯-二乙烯基苯共聚物种子 （粒度15 m， CV=3%） 加入含有糊精的水溶液 中， 充分搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯-二乙烯基苯共聚物种子占种子悬浮液 重量的45%； 糊精重量是聚合物种子重量的3%； 0055 （4） 将偶氮二异丁基脒盐酸盐引发剂加入含有糊精的水溶液中， 充分搅拌， 形成引 发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的2%； 糊精重量是引发剂重量的1%； 0056 （5）。

24、 在75的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 荧光单体悬浮液的加入速度为5g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为0.6g/min， 荧光 单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应4h， 得聚合物微球悬浮液， 然后停止 搅拌， 将聚合物微球悬浮液在30的条件下真空搅拌1h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗 涤、 干燥， 得荧光微球； 0057 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 粒径为31 m， CV （coefficient of variation） 为2.8%， 微球氯仿溶液的荧光发射峰位在515nm， 将荧光微球放置13个。

25、月后， 发现微球分散性和荧光性能均未见明显变化。 0058 实施例5 0059 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0060 （1） 在冰水浴中， 以1:1体积比的丙酮/二氯甲烷混合溶液为溶剂， 用丹磺酰氯和烯 丙基胺合成丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体； 0061 （2） 将丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体和甲基丙烯酸缩水甘油酯单体加入聚乙二醇/ 甲醇混合溶液中， 搅拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， 丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体占荧光单体 悬浮液重量的55%； 分散剂重量是丹磺酰氯烯丙基胺荧光单体重量的20%， 0062 （3） 将苯乙烯均聚物种子 （粒度152 m， CV=3%） 加入含有聚乙二醇的水溶液。

26、中， 充分 搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯均聚物种子占种子悬浮液重量的50%； 分散剂聚 乙二醇重量是苯乙烯均聚物种子重量的10%， 0063 （4） 将偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐引发剂加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的8%； 分散剂聚乙二醇重量是引发剂重量 的5%。 说明书 4/6 页 6 CN 105859973 B 6 0064 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为20g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为8g/min， 荧光单体悬浮液和引发剂悬。

27、浮液添加完成后继续搅拌反应2h， 得聚合物微球悬浮液， 然后 停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在30的条件下真空搅拌0.5h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥， 得荧光微球； 0065 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 粒径为300 m， CV （coefficient of variation） 为3%， 微球氯仿溶液的荧光发射峰位在510nm， 将荧光微球放置13个月后， 发 现微球分散性和荧光性能均未见明显变化。 0066 实施例6 0067 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0068 （1） 合成荧光单体b： 以1-芘基丁酸和L-苯丙氨酸为原料。

28、， 依次经过步骤： 酯化、 偶 合、 酰化合成N-丙烯酰胺乙基-2-(1-芘基丁酰胺基)苯丙酰胺荧光单体； 0069 （2） 将N-丙烯酰胺乙基-2-(1-芘基丁酰胺基)苯丙酰胺荧光单体和丙烯酸单体加 入糊精/乙醇混合溶液中， 搅拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， N-丙烯酰胺乙基-2-(1-芘基丁 酰胺基)苯丙酰胺荧光单体占荧光单体悬浮液重量的55%； 糊精重量是N-丙烯酰胺乙基-2- (1-芘基丁酰胺基)苯丙酰胺荧光单体重量的15% 0070 （3） 将苯乙烯-二乙烯基苯共聚物种子 （粒度55 m， CV=3%） 加入含有糊精的水溶液 中， 充分搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯-二乙。

29、烯基苯共聚物种子占种子悬浮液 重量的45%； 糊精重量是聚合物种子重量的8%； 0071 （4） 将偶氮二异丁基脒盐酸盐引发剂加入含有糊精的水溶液中， 充分搅拌， 形成引 发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的5%； 糊精重量是引发剂重量的2%； 0072 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 荧光单体悬浮液的加入速度为15g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为5g/min， 荧光 单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应4h， 得聚合物微球悬浮液， 然后停止 搅拌， 将聚合物微球悬浮液在25的条件下真空搅拌2h， 得单分散荧光微球悬浮。

30、液， 再洗 涤、 干燥， 得荧光微球； 0073 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 粒径为110 m， CV （coefficient of variation） 为2%， 微球的荧光发射峰位在415nm， 将荧光微球放置8个月后， 发现微球分 散性和荧光性能均未见明显变化。 0074 实施例7 0075 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0076 （1） 合成荧光单体c： 以邻氨基苯甲酰胺和3-氯丙烯为原料， 经烯丙基化反应得N- 烯丙基邻氨基苯甲酰胺荧光单体； 0077 （2） 将N-烯丙基邻氨基苯甲酰胺荧光单体加入聚乙二醇/甲醇混合溶液中， 搅拌均 匀，。

31、 形成荧光单体悬浮液， N-烯丙基邻氨基苯甲酰胺荧光单体占荧光单体悬浮液重量的 40%； 分散剂重量是N-烯丙基邻氨基苯甲酰胺荧光单体重量的8%， 0078 （3） 将苯乙烯均聚物种子 （粒度4.6 m， CV=3%） 加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分 搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯均聚物种子占种子悬浮液重量的30%； 分散剂聚 乙二醇重量是苯乙烯均聚物种子重量的5%， 说明书 5/6 页 7 CN 105859973 B 7 0079 （4） 将偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐引发剂加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的2%； 分散剂聚乙。

32、二醇重量是引发剂重量 的3%。 0080 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为10g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为2g/min， 荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应2h， 得聚合物微球悬浮液， 然后 停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在30的条件下真空搅拌0.5h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥， 得荧光微球； 0081 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 平均粒径为10m， CV （coefficient of variation） 为3%， 微球氯仿溶液的。

33、荧光发射峰位在420nm， 将荧光微球放 置8个月后， 发现微球分散性和荧光性能均未见明显变化。 0082 实施例8 0083 一种单分散荧光微球制备方法， 包括步骤： 0084 （1） 合成荧光单体d： 以2-萘酚-6， 8-二磺酸钾和3-氯丙烯为原料， 合成2烯丙氧 基萘-6， 8-二磺酸钾荧光单体即荧光单体d； 0085 （2） 将2烯丙氧基萘-6， 8-二磺酸钾荧光单体加入聚乙二醇/甲醇混合溶液中， 搅 拌均匀， 形成荧光单体悬浮液， 2烯丙氧基萘-6， 8-二磺酸钾荧光单体占荧光单体悬浮液 重量的50%； 分散剂重量是2烯丙氧基萘-6， 8-二磺酸钾荧光单体重量的8%， 0086 （。

34、3） 将苯乙烯均聚物种子 （粒度0.50 m， CV=3%） 加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充 分搅拌， 形成均匀分散的种子悬浮液， 苯乙烯均聚物种子占种子悬浮液重量的50%； 分散剂 聚乙二醇重量是苯乙烯均聚物种子重量的5%， 0087 （4） 将偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐引发剂加入含有聚乙二醇的水溶液中， 充分搅拌， 形成引发剂悬浮液， 引发剂占引发剂悬浮液重量的2%； 分散剂聚乙二醇重量是引发剂重量 的3%。 0088 （5） 在70的恒温条件下， 将荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液同时加入种子悬浮 液中， 所述荧光单体悬浮液的加入速度为10g/min， 所述引发剂悬浮液加入速度为2g/min，。

35、 荧光单体悬浮液和引发剂悬浮液添加完成后继续搅拌反应2-h， 得聚合物微球悬浮液， 然后 停止搅拌， 将聚合物微球悬浮液在30的条件下真空搅拌0.5h， 得单分散荧光微球悬浮液， 再洗涤、 干燥， 得荧光微球； 0089 采用Beckman Counter测定其粒径及粒径分布得： 粒径为1.1 m， CV （coefficient of variation） 为3%， 微球的荧光发射峰位在460nm， 将荧光微球放置8个月后， 发现微球分 散性和荧光性能均未见明显变化。 0090 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明技术原理的前提下， 还可以做出若干改进和变形， 这些改进和变形 也应视为本发明的保护范围。 说明书 6/6 页 8 CN 105859973 B 8 。