猪总产仔数性状相关基因MMP3的分离核酸序列.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101481740 B (45)授权公告日 2011.06.08 CN 101481740 B *CN101481740B* (21)申请号 200910045962.8 (22)申请日 2009.01.22 C12Q 1/68(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (73)专利权人 上海交通大学 地址 200240 上海市闵行区东川路 800 号 (72)发明人 潘玉春 吴潇 高运臻 谭桂芳 王起山 (74)专利代理机构 上海交达专利事务所 31201 代理人 王锡麟 王桂忠 CN 1733938 A,2006.02.15, 肖正中， 邬苏晓 .。

2、 影响猪产仔数性状候选基 因的研究进展 .遗传育种 .2009, (54) 发明名称 猪总产仔数性状相关基因 MMP3 的分离核酸 序列 (57) 摘要 本发明涉及的是一种基因工程技术领域的猪 总产仔数性状相关基因 MMP3 的分离核酸序列， 所 分离核酸序列具有 SEQ ID ： 1 所示的序列， 长 为1346bp。 在所述的核酸序列显示了长度为20bp 1 对等位基因特异性的核酸引物， 且特异性地杂 交， 并扩增出含有猪 MMP3 基因第八外显子、 第九 外显子和第八内含子的 SEQ ID ： 1 所示序列。 本发明的实施应用可以用以检测判断猪总产仔数 性状的优劣， 并在猪的育种中应用该。

3、分子标记进 行标记辅助选择， 从而弥补猪繁殖性状常规选育 的不足， 具有重要的实际意义。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 于仁涛 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 8 页 CN 101481740 B1/1 页 2 1. 一种法系大白猪总产仔数性状相关基因 MMP3 的分离核酸序列， 其特征在于， 分离核 酸序列具有 SEQ ID No ： 1 所示的序列， 长为 1346bp。 2.根据权利要求1所述的法系大白猪总产仔数性状相关基因MMP3的分离核酸序列， 其 特征是， 序列表SEQ ID No ： 1的第816位碱基处有一。

4、个碱基突变816T-816C， 导致TaaI-RFLP 多态性 ； 第 919 位碱基处有一个碱基突变 919G-919T， 导致 DraI-RFLP 多态性 ； 第 1038 位碱 基处有一个碱基颠倒 1038A-1038T， 导致 Ksp22I-RFLP 多态性， 突变均位于第八内含子中。 权 利 要 求 书 CN 101481740 B1/8 页 3 猪总产仔数性状相关基因 MMP3 的分离核酸序列 技术领域 0001 本发明涉及的是一种基因工程技术领域的猪的核酸序列， 特别是一种猪总产仔数 性状相关基因 MMP3 的分离核酸序列。 背景技术 0002 母猪的总产仔数性状是重要的经济性状。

5、， 提高母猪的猪总产仔数能给现代养猪生 产带来巨大的经济效益。由于猪总产仔数等繁殖性状属于低遗传力的数量性状， 常规选择 的选育效果不很理想。随着猪分子遗传标记 (molecule genetic marker) 研究的深入与一 些分子实验技术的应用， 使某些控制数量性状的主效基因基因型之间的差异清晰地展现在 研究者眼前， 为选种、 选配开创了新的途径。1994 年， Rothschild 等发现 ESR 基因是产仔数 性状的主效基因或与产仔数主基因紧密连锁的基因， 在 PvuI 酶切位点上将该基因分为 AA、 BB 和 AB 三种基因型， 分析发现 BB 基因型为产仔数有利基因型， 比 AA。

6、 型母猪总胎产仔数和 产活仔数分别高出 1.40 3.37 头和 0.63 3.58 头。催乳素受体 (prolactin receptor， PRLR) 基因是一个窝产仔数的候选基因， 该基因在维持妊娠中发挥着一定作用， 其双等位 基因多态性与窝产仔数的差异有关 (Vincent 等， 1998 ； Southwood 等， 1999 ； Drogemuller 等， 2001)， 促红细胞生成素受体 (erythropoietin receptor， EPOR) 可调控胎儿红细胞的 终端分化和数量 (Moritz 等， 1997)。因此， 对促红细胞生成素受体基因中的单核苷酸多态 性进行了。

7、研究， 以确定其同窝产仔数和子宫容量是否有关。分析结果表明， 胎儿基因型与 窝产仔数显著相关， 而母猪的基因型与子宫容量也显著相关 (Vallet 等， 2005)。促红细胞 生成素受体与窝产仔数的关系在约克夏杂交猪群、 长白猪和杜洛克杂交猪群中都得到证实 (Vallet 等， 2005)。骨桥蛋白 (Osteopontin， OPN) 基因参与了 Ca2+从母体循环系统向孕体 的转移和缓冲， 被认为是窝产仔数的候选基因。 Van der Steen(1997)等对梅山猪3个合成 系的数据进行分析， 表明 OPN 基因型影响总产仔数和产活仔数。备解素因子 (properdin， BF) 基因位。

8、于猪 7 号染色体 7cM 处。Buske 等 (2005) 研究表明 BF 基因在商品猪群中与总 产仔数和产活仔数呈显著的正相关， 因此BF基因可作为产仔数的候选基因。 BF基因是补体 系统替代途径中一种血浆蛋白， 在增加血管生成中起着重要的作用。 0003 产 仔 数 取 决 于 妊 娠 过 程， 胚 胎 的 植 入 是 妊 娠 过 程 的 第 一 步， 直 接 影 响 到 胚 胎 的 存 活。 胚 胎 的 植 入 需 要 一 类 重 要 的 蛋 白 水 解 酶， 即 基 质 金 属 蛋 白 酶 (matrixmetalloproteinases， MMP)，其 可 以 降 解 多 糖 以。

9、 外 的 细 胞 外 基 质 (extracellularmatrix， ECM) 的多种成分， 在组织塑型过程中影响着 ECM 的代谢、 新生血管 的形成等过程， 在胚胎植入、 胎盘形成及子宫螺旋动脉重构中发挥重要作用。MMP 在滋养层 不同类型细胞中的分布存在特异性， 在不同时期胎盘中的表达和活性也有所不同， 妊娠期 MMP 的调控直接影响胎盘的发育， 对维持正常妊娠至关重要。MMP 家族依据蛋白结构的相似 性以及降解底物不同分为5个亚类。 通过研究， 已经发现MMP2和MMP9在在胎盘植入中作用 尤为重要， MMP9 是胚胎滋养细胞侵入过程的限速酶 ( 李向红等， 2007)。到目前为止。

10、， MMP 家 族拥有26位成员， 很多成员的功能尚不确定， 基质溶解素MMP3便是其一。 人的MMP3基因定 说 明 书 CN 101481740 B2/8 页 4 位在染色体 11q22.3 位置， 长度约 7.8kb， 包括 10 个外显子和 9 个内含子。由于猪 MMP3 基 因与猪总产仔数性状间的关系尚不明确， 而研究猪 MMP3 基因突变位点在群体中的多态性， 并进行性状关联分析是研究该基因功能的一个非常有力的手段， 因此对这个基因进行了多 态研究和关联分析， 以期能够得到与猪总产仔数性状相关的分子标记。 发明内容 0004 本发明的目的在于克服现有技术的不足， 提供一种猪总产仔数。

11、性状相关基因 MMP3 的分离核酸序列。克隆出猪 MMP3 基因的部分基因组 DNA 序列， 在猪的育种中应用进行辅助 选择。 0005 本发明是通过以下技术方案实现的 ： 0006 本发明分离核酸序列具有 SEQ ID No ： 1 所示的序列， 其中包含猪 MMP3 基因部分 外显子八， 部分的外显子九和完整的内含子八的序列 ； 序列表 SEQ ID No ： 1 的第 816 位 碱基处有一个碱基突变 (816 T-816C)， 导致 TaaI-RFLP(Restriction FragmentLength Polymorphism) 多态性 ； 第 919 位碱基处有一个碱基颠倒 (9。

12、19T-919G)， 导致 DraI-RFLP 多 态性 ； 第 1038 位碱基处有一个碱基突变 (1038T-1038A)， 导致 Ksp22I-RFLP 多态性， 突变均 位于第 8 内含子中。 0007 本发明分离猪 MMP3 基因第八外显子、 第八内含子和第九外显子多态性位点的基 因序列， 所说的 “分离” 是指在基因组 DNA 水平上， 利用引物对来扩增多态性位点的基因序 列。通过对猪 MMP3 基因的突变位点的寻找， 发现了 3 个突变位点， 分别是 SEQ IDNo ： 1 所示 序列的第 816 位存在 T C 多态性 ； 第 919 位存在 T G 多态性 ； 第 1038。

13、 位存在 T A 的 多态性。 并通过与猪总产仔数估计育种值的关联分析发现， SEQ ID No ： 1所示序列的第919 位点与猪总产仔数估计育种值存在关联。 0008 在所述的核酸序列显示了长度为 20bp 1 对等位基因特异性的核酸引物， 且特异 性地杂交， 并扩增出含有猪 MMP3 基因第八外显子、 第九外显子和第八内含子的 SEQ IDNo ： 1 所示序列。 0009 本发明的实施应用可以用以检测判断猪总产仔数的估计育种值的优劣， 并在猪的 育种中应用该分子标记进行标记辅助选择， 从而克服繁殖性状常规选择的不足， 具有重要 的实际意义。 具体实施方式 0010 下面结合具体实施例，。

14、 进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用 于限制本发明的范围。下列实施例中的实验方法按照常规条件， 注明具体条件的实验方法 按照注明条件 ： 0011 下列实施例注明条件具体如下 ： 0012 在市售的宁乡猪、 梅山猪、 浦东白猪、 美系大白猪和法系大白猪中各自随机挑选 2 个体， 用发明中的引物进行 PCR 扩增， PCR 产物回收后克隆测序 ； 生物学软件对同一引物扩 增的序列进行两两比对， 发现 3 个突变位点 ； 0013 下列实施例很多种技术方法可用于检测本发明中猪 MMP3 基因的 3 个所述位点是 否存在单核苷酸多态性。这些技术包括 ( 并不限于 ) ： DNA 测序。

15、、 杂交测序、 限制性酶切片段 说 明 书 CN 101481740 B3/8 页 5 长度多态性、 寡核苷酸阵列 ( 或称 DNA 芯片 )， 变性高效液相色谱 (DHPLC) 等等。 0014 下列实施例采用 PCR-RFLP 技术检测猪 MMP3 基因的突变位点， 应用 SAS(8.02 版 ) 的 GLM 程序进行突变位点与猪总产仔数估计育种值的关联分析。本发明为猪繁殖性状的选 育提供了 1 个新的分子标记， 为研究猪 MMP3 基因的功能奠定基础。 0015 下列实施例用于寻找突变位点的， 包括市售的宁乡猪 (2 头 )、 美系大白 (2 头 )、 梅 山猪 (2 头 )、 浦东白猪。

16、 (2 头 ) 和法系大白 (2 头 ) ； 用于分析分子标记与猪总产仔数性状关 联的试验猪群是法系大白猪 (164 头 )， 产仔数资料和系谱资料均由上海市总猪场记录， DNA 样品均由本实施例提取， DNA保存于-20， 所述的DNA样品没有特别限制， 对于检测突变位 点而言， 可以是从耳组织、 血液等样品中抽提出的 DNA。 0016 下列实施例涉及到的大肠杆菌 Dh5 为公开的技术信息， 可以通过市售购买， 如 ： 购自天根生化科技有限公司。 0017 在上述的基础上， 下列实施例采用常规的PCR-RFLP技术检测3个突变位点在法系 大白猪试验群体中的分布情况， 并且进行标记性状关联分。

17、析。 0018 实施例 1 0019 猪 MMP3 的部分基因组 DNA 序列的获得 0020 (1) 引物设计 0021 利用同源性基因克隆原理， 采用人 MMP3 基因 eDNA(GenBank 收录号 ： NM_002422) 为模版用软件 Primer1.0 设计引物 1 对 ： 0022 PL ： 5 -CTGGGCTATCAGAGGAAATG-3 0023 PR ： 5 -CAGCATCCACTTTTGGTTCA-3 0024 (2)PCR 反应 0025 PCR 反应总体积为 20l， 其中猪基因组 DNA 约 100ng， 含 1buffer(Promega)， 1.5mmol。

18、/L MgCl2， dNTP 终浓度为 150mol/L， 引物终浓度为 0.2mol/L， 2U TaqDNA 聚合 酶 (Promega)。PCR 扩增程序是 ： 94 4min， 然后循环 30 次 94 30s， 56 30s， 72 30s， 最后 72延伸 10min。PCR 反应产物用 1.5琼脂糖凝胶电泳检测。 0026 (3) 测序 0027 将PCR产物回收后同PMD18-T Vector(TaKaRa)相连接， 连接反应总体积是10l， 其中包括5l solution I， 0.5l的T载体， 2.5l的纯化PCR产物， 最后加入2l灭菌 水置 4水浴过夜。 0028 转。

19、化 ： 无菌状态下取 100 120l 感受态细胞于 1.5ml Ependorff 管中， 将 5l 的连接产物加入混匀， 在冰上放置 30min， 42热激 90s， 其间不要摇动 Ependorff 管， 取出 后冰浴 3 4min， 加入 400l 无抗生素的 LB 液体培养基， 振荡培养 45min， 取 100l 涂布 于琼脂平板上， 37平放 1h 后倒置培养。挑取平板上的单个 Dh5 大肠杆菌， 加入到装有 800lLB 液体培养基 ( 加有抗生素 ) 的离心管中振荡培养 8 小时。 0029 菌落 PCR 鉴定 ： 以上述步骤中 Dh5 大肠杆菌单菌落的 LB 培养液作为 P。

20、CR 扩增的 模板， 按照实施例1(1)中的引物及PCR扩增条件进行扩增， 用琼脂糖凝胶电泳检测， 将扩增 条带与实施例 1(2) 中 PCR 产物大小相同的菌液测序， 序列经拼接后为 1346bp。 0030 (3)DNA 序列同源性检索鉴定 ： 0031 通 过 美 国 国 家 生 物 技 术 信 息 中 心 (NCBI， National Center for 说 明 书 CN 101481740 B4/8 页 6 BiotechNOlogyInformation， http:/www.ncbi.nlm.nih.gov) 网站的 BLAST(Basic Local AlignmentSe。

21、arch Tool)软件， 将测序后获得的DNA序列与GenBank数据库中公布的已知生 理功能基因进行序列同源性比较， 以鉴定和获得该 DNA 序列的功能信息。结果发现所克隆 的猪 MMP3 基因的部分 DNA 序列与人的 MMP3 基因有高度同源性， 为 91。 0032 实施例 2 0033 猪 MMP3 基因组序列中突变位点的寻找 0034 通过对不同来自不同猪品种的个体 DNA 的 PCR 扩增产物进行测序， 使用生物分析 软件对同一引物扩增的序列进行比对， 发现MMP3基因的SEQ ID No ： 1所示序列的第816位 有 C 和 T 两种等位基因， 第 919 位处有 T 和 。

22、G 两种等位基因， 第 1038 位处有 A 和 T 两种等 位基因。 0035 实施例 3 0036 猪 MMP3 突变位点的检测方法 0037 (1) 引物序列 ( 同实施例 1) 0038 PL ： 5 -CTGGGCTATCAGAGGAAATG-3 ( 序列表 SEQ ID No ： 2) 0039 PR ： 5 -CAGCATCCACTTTTGGTTCA-3 ( 序列表 SEQ ID No ： 3) 0040 (2)PCR 扩增条件 0041 PCR 反应总体积为 20l， 其中猪基因组 DNA 约 100ng， 含 1buffer(Promega)， 1.5mmol/L MgCl2。

23、， dNTP 终浓度为 150mol/L， 引物终浓度为 0.2mol/L， 2U TaqDNA 聚合 酶(Promega)。 PCR扩增程序是 ： 94 4min， 然后循环35次94 30s， 56 30s， 72 30s， 最后 72延伸 10min。PCR 反应产物用 1.5琼脂糖凝胶电泳检测。 0042 (3)RFLP 检测条件 0043 PCR 产物酶切反应体积是 10l， 其中 1buffer 1l， PCR 产物 35l， 限制性 内切酶 NheI 或 EcoRV 为 0.5l(5U)， 用 H2O 补足 10l， 将样品混匀后离心， 酶切 8h。 0044 (4)RFLP 分。

24、型 0045 用 1.5的琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果， 记录基因型。 0046 TaaI 酶切位点 (ACN GT)， 该基因座由两个等位基因控制， T 等位基因只有 1346bp 一个片段， C 等位基因有 817bp+529bp 两个片段。这两个等位基因可组成三种基因 型 TT， TC， CC。 0047 DraI 酶切位点 (TTT AAA)， 该基因座由两个等位基因控制， G 等位基因只有 1346bp 一个片段， T 等位基因有 919bp+427bp 两个片段。这两个等位基因可组成三种基因 型 GG， GT， TT。 0048 Ksp22I 酶切位点 (T GATCA)， 该基因座。

25、由两个等位基因控制， A 等位基因只有 1346bp 一个片段， T 等位基因有 1038bp+308bp 两个片段。这两个等位基因可组成三种基因 型 AA， AT， TT。 0049 实施例 4 0050 标记性状关联分析 0051 利用上海市种猪场法系大白猪群试验群体做性状关联分析， 164 个 DNA 样品用于 基因型检测。 0052 所分析的繁殖性状， 用 GBS4.0 软件计算总产仔数的 EBV( 估计育种值 )， 母猪繁殖 说 明 书 CN 101481740 B5/8 页 7 性能育种值的估计模型如下 ： 0053 yijk +hysi+lj+aijk+pijk+eijk 005。

26、4 其中， yijk表示第 i 个场 - 年 - 季组、 第 k 头母猪的总产仔数观察值 ； 表示总平 均数 ； hysi表示母猪产仔时第 i 个场 - 年 - 季组固定效应 ； lj表示母猪产仔时第 j 窝的窝 效应， 服从 N(0， Il2) 分布， I 为单位矩阵， l2为窝效应方差 ； aijk表示第 i 个场 - 年 - 季 组、 第 j 窝、 第 k 头母猪的随机遗传效应， 服从 N(0， Aa2) 分布， A 指个体间分子亲缘系数 矩阵， a2为性状的育种值方差 ； pijk表示第 i 个场 - 年 - 季组、 第 j 窝、 第 k 头母猪的永久 环境效应， 服从 N(0， Ip。

27、2) 分布， I 为单位矩阵， p2为母猪永久环境效应方差 ； eijk表示第 i 个场 - 年 - 季组、 第 j 窝、 第 k 头母猪的随机剩余效应， 服从 N(0， Ie2) 分布， I 为单位矩 阵， e2为随机误差方差。 0055 考虑所有的多态位点， 采用逐步回归中的前进法分析各位点对 EBV 的影响， 构建 了如下逐步回归模型 ： 0056 yi b0+b1xi1+b2xi2+bnxin+ei 0057 其中， yi是第 i 个个体的育种值， b0为截据， b1， b2bn为基因型效应， xi为基因型 指示变量。ei为随机误差， 服从 N(0， e2) 分布。采用 SAS(8.0。

28、2) 软件对数据进行统计分 析。 0058 在法系大白试验猪群中， 按照实施例 3 所述， 对猪 MMP3 基因的 3 个位点进行基因 型检测。检测结果表明 ： 在法系大白 164 个个体中， 对于 TaaI-RFLP 多态性位点， CC 基因型 有 29 个， CT 基因型有 91 个个体， TT 基因型有 44 个个体 ； 对于 DraI-RFLP 多态性位点， GG 基因型有 54 个， GT 基因型有 82 个个体， TT 基因型有 28 个个体 ； 对于 Ksp22I-RFLP 多态性 位点， AA 基因型有 155 个， AT 基因型有 9 个个体， TT 基因型有 0 个个体。 。

29、0059 继而对猪MMP3基因3个位点进行与总产仔数EBV值的逐步回归分析， 发现猪MMP3 基因 DraI-RFLP 多态性对 EBV 值的影响极显著 (P 0.01)， 其余位点影响不显著。 0060 表 1 猪 MMP3 基因 DraI-RFLP 不同基因型与 EBV 值的关联分析 0061 指标GGGTTT EBV 值0.18370.1154a0.36880.0570a0.66470.0825b 0062 注 ： 同一行字母不同者表示差异极显著 (P 0.01) 0063 由表可见 TT 基因型对应的 EBV 值明显高于 GG 基因型和 GT 基因型， GG 基因型对 应的 EBV 值。

30、最低， GT 基因型居中 ； 经统计检验， TT 基因型个体 EBV 值与 GG、 GT 基因型个体 差异极显著， 因此 T 等位基因为有利基因。 0064 序列表 0065 上海交通大学 0066 猪总产仔数性状相关 MMP3 的分离核酸序列 0067 3 0068 1 0069 1346 0070 DNA 说 明 书 CN 101481740 B6/8 页 8 0071 猪 (Sus scrofa) 0072 0073 gene 0074 (1).(1346) 0075 0076 0077 mutation 0078 (816) 0079 n t 或 c 0080 0081 mutatio。

31、n 0082 (919) 0083 n g 或 t 0084 0085 mutation 0086 (1038) 0087 n t 或 a 0088 exon 0089 (1).(150) 0090 0091 0092 intron 0093 (151).(1257) 0094 0095 0096 exon 0097 (1258).(1346) 0098 0099 1 0100 c tgg gct atc aga gga aat gat gta caa cca ggt tac cca aga agt atc 49 0101 Trp Ala Ile Arg Gly Asn Asp Val Gln。

32、 Pro Gly Tyr Pro Arg Ser Ile 0102 1 5 10 15 0103 cac acc ctg ggt ttt cct tca aca gta aag aaa ata gat gca gct att 97 0104 His Thr Leu Gly Phe Pro Ser Thr Val Lys Lys Ile Asp Ala Ala Ile 0105 20 25 30 0106 tct gat aag gag acg aag aaa aca tac ttc ttc gta gag gac aaa tac 145 0107 Ser Asp Lys Glu Thr Lys。

33、 Lys Thr Tyr Phe Phe Val Glu Asp Lys Tyr 0108 35 40 45 0109 tgg ag gtatttgatt gggatgactt tgtatgagcc cagttaggga aattatttcc 200 说 明 书 CN 101481740 B7/8 页 9 0110 Trp Arg 0111 50 0112 tttctctaaa gaaattccct tactctttac cctgcatccc tcgcactagg gacagtgggg 260 0113 ctttagacaa ctgtggggaa gtgcttactt tcaaatacag a。

34、agtgcctga taacaggggt 320 0114 ttcttgggct ctcctgttct gagtcccatg tacaataagc tggagcctca tgtgctgttg 380 0115 ccccatctgc ctggaatgac ttcccttctc catctgccaa attccaccca tccttcgtat 440 0116 cctggctcag gttccactgc ttcaaatgaa gctttctctg ctaagctccc aaacccaaat 500 0117 gggcttttct tttttgaaag aagtcttgag aattcaggtg a。

35、cagggacaa cattcctttc 560 0118 tccttgtttt attgtccatg ccttgtctca ctgagcattt gttctgtctt cccactgtgc 620 0119 tatgtgattc tcaaaggctt cccttaacct catccattca ttacctcggt ttaagaggat 680 0120 ggtgagcatt aataatttag ctttatagat agaatctggg attcacagaa aggctagttc 740 0121 ttgggctatc tgcccaggct ctgagacatc tgaacagacc a。

36、ggcaaggtc cagctaacaa 800 0122 tcaaaaatgg acttantgtg ctttgcttct agtctcaatc ccttttgata ggaggctgcc 860 0123 ataggaaatc tgtgcagggt agggacaaca tataggaacc aagtattata gagaagttna 920 0124 aatttgtatt tgagatgaac gattcaattc actttatgtt catgtcttta tgatagaaag 980 0125 acgactaaag ttctttctgt ccagatctaa gaaatatggt a。

37、ataaagagc atctgccnga 1040 0126 tcaggatgtt gcctctgttt caggtagaga tagaatttta agagctaagt ttacaatgcc 1100 0127 attaaagtca catttaagtg gtgctaaaca tatttatgaa ttttgctaag atgacctcta 1160 0128 tgcaatgctg agctttcttt cttttacttg gatctgacat ttatttgcag cacttagaaa 1220 0129 gtttgctaga attatacatt aaacctaaca tgtgcag 。

38、a ttt gat gag aag aga 1273 0130 Phe Asp Glu Lys Arg 0131 55 0132 caa tcc atg gag cca ggt ttt ccc aag caa ata gtg gaa gac ttt cca 1321 0133 Gln Ser Met Glu Pro Gly Phe Pro Lys Gln Ile Val Glu Asp Phe Pro 0134 55 60 65 0135 ggg gtt gaa cca aaa gtg gat gct g 1346 0136 Gly Val Glu Pro Lys Val Asp Ala 0137 70 0138 2 0139 20 0140 DNA 0141 猪 (Sus scrofa) 0142 0143 primer_bind 0144 (1).(20) 0145 0146 2 0147 ctgggctatc agaggaaatg 20 0148 3 说 明 书 CN 101481740 B8/8 页 10 0149 20 0150 DNA 0151 猪 (Sus scrofa) 0152 0153 primer_bind 0154 (1).(20) 0155 0156 3 0157 cagcatccac ttttggttca 20 说 明 书 。