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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310711436.7 (22)申请日 2013.12.20 C07K 1/14(2006.01) C12P 21/06(2006.01) (73)专利权人 广西大学 地址 530004 广西壮族自治区南宁市大学路 100 号 (72)发明人 赵钟兴 刘杰婷 谢美萱 韦藤幼 廖丹葵 孙建华 童张法 (74)专利代理机构 广西南宁汇博专利代理有限 公司 45114 代理人 朱萍球 (54) 发明名称 一种蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法 (57) 摘要 本发明公开了一种蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的 脱色方法， 调节蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的 p。
2、H 值 为 58， 加入皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土混 合物为脱色剂， 脱色剂与蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽 液的质量体积比为 5g/L30g/L， 在 3545下超 声振荡脱色 2030 min 后， 离心分离， 所得上清液 为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽。本发明 利用皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土混合物为 脱色剂， 使得在保证较高脱色率的同时， 还有效保 留了抗氧化抑制活性 （DPPH 抑制活性） 。 (51)Int.Cl. 审查员 刘婷 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 CN 103804466 B 2016.05.25 CN 1038。
3、04466 B 1.一种蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 调节蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽 液的pH值为58， 加入皂土： 活性白土： 碱性钙基膨润土重量比1:0.5-1.5:0.5-1.5的混合物 为脱色剂， 脱色剂与蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的质量体积比为5g/L30g/L， 在3545下超 声振荡脱色2030min后， 离心分离， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽。 2.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白酶解降血压肽的脱色方法， 其特征在于： 所述皂土： 活性白土： 碱性钙基膨润土重量比为1:0.81.2:0.81.2。 3.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白酶解降血压肽的脱色方法， 。
4、其特征在于： 所述皂土： 活性白土： 碱性钙基膨润土重量比为1:1:1。 4.根据权利要求13任一所述的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 所述 脱色剂与蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的质量体积比为20g/L25g/L。 5.根据权利要求4所述的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 所述调节蚕 蛹蛋白酶解抗氧化肽液的pH值为7.07.5。 6.根据权利要求13任一所述的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 所述 超声功率30W60W。 7.根据权利要求6所述的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 所述离心分 离为转速30004000rmin1离心2030min。
5、。 8.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 所述蚕蛹蛋 白酶解抗氧化肽液的制备方法为蚕蛹蛋白水溶液中加入中性蛋白酶作为水解酶， 中性蛋白 酶的加入量为蚕蛹蛋白质量的12%， 控制在pH为7.07.5的环境下酶解45h， 灭酶即可得到 蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液。 9.根据权利要求8所述的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 其特征在于： 所述蚕蛹蛋 白水溶液中蚕蛹蛋白与水的质量体积比为20g/L30g/L。 权利要求书 1/1 页 2 CN 103804466 B 2 一种蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法 技术领域 0001 本发明涉及食品脱色技术领域， 具体地说是涉及蚕。
6、蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方 法。 背景技术 0002 蚕蛹(Silkwormpupa)为蚕蛾科昆虫家蚕蛾的蛹， 是丝绸工业的大宗副产品。 根据 中华人民共和国商务部的统计， 在2009年丝绸原料干蚕茧的产量达到78.21万吨。 蚕茧干重 的一半是蚕蛹。 由于缺乏深加工技术， 大量蚕蛹都作为饲料和肥料使用， 资源利用率和附加 值低。 蚕蛹蛋白质量占干蚕蛹质量的45%-50%， 经测定在蚕蛹蛋白中含有18种人体所需的氨 基酸， 是一种较为理想的优质纯天然全价蛋白质。 从目前研究结果看， 将蚕蛹蛋白酶解后产 物具有较好的抗氧化抑制活性 （DPPH抑制） ， 可以作抗氧化活性肽来源应用到食品和医药行 。
7、业。 但是蚕蛹蛋白酶解液为棕褐色， 如果直接应用到食品添加剂或药物在色泽上不易被消 费者接受， 因此需要对酶解液进行脱色处理。 目前常用的脱色方法有， 有活性炭法、 离子交 换树脂脱色法、 有机溶剂脱色法等， 但这些方法导致蛋白损失率高、 造价高昂或造成二次污 染等问题。 0003 皂土也称膨润土， 是一种含天然水硅酸铝的矿物石， 是一种很有净化效果的天然 黏土。 皂土经酸处理后， 称为酸性白土也称活性白土。 它的主要成分是硅藻土， 其本身就已 有活性。 白土为灰白色颗粒粉末， 具有较大的比表面积和孔容， 同时由于层间的金属离子被 氢离子所置换， 在层间形成了酸性中心， 因而具有对碱性物质的吸。
8、附能力和离子交换性能， 有较强的脱色能力和活性， 且脱色后稳定性能好。 0004 碱性钙基膨润土是天然膨润土经过酸活化、 碱负载后得到的一种阴离子型层状黏 土材料， 与其它改性膨润土相比， 其制备方法简单、 材料环保安全、 成本低廉， 同时由于在膨 润土层间形成羟基结构使其形成碱性中心对酸性物质吸附能力较强。 中国专利 ZL200510101332.X中公开了其制备方法。 同传统的膨润土相比， 碱性钙基膨润土具有性能 良好的阴离子交换功能， 可用于油脂、 染料的等体系的脱色。 0005 人类已知的很多严重疾病和衰老都与氧自由基对体内各组织细胞的破坏有关， 通 过外源性抗氧化肽特别是抗氧化肽食品。
9、的摄入， 对预防和治疗心血管病、 糖尿病、 癌症和衰 老等慢性病有极大帮助。 随着人民生活水平的不断提高， 膳食结构也在不断改变， 利用含有 生物活性肽的功能食品调节生理水平的观点已经被人民群众广泛接受。 通过长期服用含有 抗氧化活性抑制肽的功能食品可以达到减缓衰老、 预防各类疾病的作用， 对功能性食品的 开发具有重要的理论意义和应用价值。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法。 本发明利用皂 土、 活性白土和碱性钙基膨润土混合物为脱色剂， 使得在保证较高脱色率的同时， 还有效保 留了抗氧化抑制活性 （DPPH抑制活性） ， 并可广泛应用于蚕蛹多肽及其他活。
10、性肽生产过程 说明书 1/5 页 3 CN 103804466 B 3 中。 0007 本发明的技术方案如下： 0008 一种蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法， 调节蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的pH值为 58， 加入皂土： 活性白土： 碱性钙基膨润土重量比1:0.5-1.5:0.5-1.5的混合物为脱色剂， 脱色剂与蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的质量体积比为5g/L30g/L， 在3545下超声振荡 脱色2030min后， 离心分离， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽。 0009 本发明中脱色剂的优选配比， 皂土： 活性白土： 碱性钙基膨润土重量比为1:0.8 1.2:0.81.2， 在这个配。
11、比， 脱色剂的活性特别高， 综合性能良好， 脱色效果好， 同时抗氧化 抑制活性活性保留率好。 0010 作为脱色剂的进一步优选， 皂土： 活性白土： 碱性钙基膨润土重量比为1:1:1， 此时 蚕蛹蛋白酶解降血压肽的脱色效果达到最优值。 0011 本发明中采用脱色剂与蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的质量体积比为20g/L25g/L， 调节蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的pH值为7.07.5时， 得到的脱色处理后的蚕蛹蛋白酶解抗 氧化肽的脱色效果最好， 脱色率可达到94%， 氮保留率较高，（DPPH抑制活性） 也达到了优值， 原始蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的DPPH抑制活性为52.50%， 脱色后DPPH抑制活性为4。
12、0%以上。 0012 本发明中优选超声功率30W60W。 离心分离的转速30004000rmin-1离心20 30min时效果最好。 0013 本发明蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的制备方法为蚕蛹蛋白水溶液中加入中性蛋白 酶作为水解酶， 中性蛋白酶的加入量为蚕蛹蛋白质量的12%， 控制在pH为7.07.5的环境 下酶解45h， 灭酶即可得到蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液。 蚕蛹蛋白水溶液中蚕蛹蛋白与水的 质量体积比为20g/L30g/L。 0014 本发明的蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽的脱色方法也可应用到采用其他方法制备得到 的抗氧化肽液的脱色过程中。 0015 本发明利用皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土混合物为脱色。
13、剂。 皂土起传统物理 吸附作用； 活性白土由于在层间具有酸性中心， 由于扩散作用能使蛋白酶解液中部分具有 碱性的有机物 （有色物质） 被吸附而产生脱色效果； 碱性钙基膨润土层间的氢氧根除了具有 阴离子交换功能外， 还能与水分子形成氢键， 可针对蛋白酶解液选择性的吸附反应体系中 的部分有机物 （有色物质） ， 而对蛋白质影响、 破坏较小， 将皂土、 活性白土和碱性钙基膨润 土混合使用使其同时具有物理吸附和化学吸附两种功效， 并且由于活性白土的酸性中心和 碱性钙基膨润土的碱性中心都在膨润土的层间相互之间无法发生酸碱中和反应， 互不影 响； 在它们作用下， 蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液的氮保留率较高， D。
14、PPH抑制活性也保留得较 好， 且脱色效果良好。 0016 本发明与现有技术比较具有以下优点： 0017 1） 本发明的脱色方法简单、 操作易行， 处理过程温和， 对设备要求不高。 0018 2） 本发明采用皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土混合物为脱色剂， 在物理吸附和 化学吸附双重作用下， 蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液脱色率为90%以上， 氮保留率为80%以上， DPPH抑制活性为40%以上， 可广泛用于蚕蛹多肽及其他活性肽生产的保健食品行业。 具体实施例 说明书 2/5 页 4 CN 103804466 B 4 0019 下面通过具体实施例进一步说明本发明。 应该理解的是， 本发明的实施例仅仅是。
15、 用于本发明， 而不是对本发明的限制， 在本发明的的构思前提下对本发明的制备方法的简 单改进都属于本发明要求保护的范围。 0020 实施例1 0021 一、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的制备： 将40g蚕蛹蛋白粉溶入2L水中形成蚕蛹蛋白 水溶， 加入中性蛋白酶作为水解酶， 中性蛋白酶的加入量为蚕蛹蛋白质量的1%， 控制在pH为 7.0的环境下酶解4h， 用NaOH溶液维持pH值恒定， 灭酶即可得到蚕蛹蛋白酶解降血压肽液。 经测定： DPPH抑制活性为52.50%， 其中酶解液蛋白含量为10mgL-1， DPPH抑制活性蛋白检测 量为200 g。 0022 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的脱色 002。
16、3 将制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到6.0， 脱色剂中皂土、 活性白土 和碱性钙基膨润土质量比为1:1.2:0.8， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质量体积 比为15gL-1， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至45， 超声功率30W， 脱色20min后； 离心 分离转速4000rmin-1离心20min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液， 经过检测最终脱色率为90.1%， 氮保留率为86.4%， DPPH抑制活性保留率为44.15%。 0024 实施例2 0025 一、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的制备同实施例1。 0026 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的脱色 。
17、0027 将实施例1制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到6.5， 脱色剂中皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土质量比为1:0.5:1， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质 量体积比为20g/L， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至35， 超声功率35W， 脱色20min后； 离心分离转速4000rmin-1离心20min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽 液， 经过检测最终脱色率为90.2%， 氮保留率为84.7%， DPPH抑制活性保留率为41.5%。 0028 实施例3 0029 一、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的制备同实施例1。 0030 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的脱。
18、色 0031 将实施例1制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到7.0， 脱色剂中皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土质量比为1:1:1， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质量 体积比为25g/L， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至40， 超声功率30W， 脱色30min后； 离 心分离转速4000rmin-1离心20min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽 液， 经过检测最终脱色率为94.7%， 氮保留率为83.7%， DPPH抑制活性保留率为45.3%。 0032 实施例4 0033 一、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的制备同实施例1。 0034 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的。
19、脱色 0035 将制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到7.5， 脱色剂中皂土、 活性白土 和碱性钙基膨润土质量比为1:0.5:1.5， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质量体积 比为30g/L， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至40， 超声功率30W， 脱色20min后； 离心分 离转速4000rmin-1离心20min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液， 经 过检测最终脱色率为96.8%， 氮保留率为81.2%， DPPH抑制活性保留率为40.3%。 说明书 3/5 页 5 CN 103804466 B 5 0036 实施例5 0037 一、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽。
20、液的制备同实施例1。 0038 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的脱色 0039 将制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到7.0， 脱色剂中皂土、 活性白土 和碱性钙基膨润土质量比为1:0.8:1.2， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质量体积 比为20g/L， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至40， 超声功率30W， 脱色30min后； 离心分 离转速4000rmin-1离心20min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液， 经 过检测最终脱色率为94.8%， 氮保留率为83.2%， DPPH抑制活性保留率为44.9%。 0040 实施例6 0041 一、 蚕蛹蛋白酶解降血。
21、压肽液的制备： 将60g蚕蛹蛋白粉溶入2L水中形成蚕蛹蛋白 水溶， 加入中性蛋白酶作为水解酶， 中性蛋白酶的加入量为蚕蛹蛋白质量的2%， 控制在pH为 7.5的环境下酶解5h， 用NaOH溶液维持pH值恒定， 灭酶即可得到蚕蛹蛋白酶解降血压肽液。 经测定： DPPH抑制活性为53.10%， 其中酶解液蛋白含量为10mgL-1， DPPH抑制活性蛋白检测 量为300 g。 0042 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的脱色 0043 将制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到8.0， 脱色剂中皂土、 活性白土 和碱性钙基膨润土质量比为1:1.5:1.5， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质量体积。
22、 比为30gL-1， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至50， 超声功率60W， 脱色20min后； 离心 分离转速3000rmin-1离心30min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液， 经过检测最终脱色率为91.0%， 氮保留率为82.6%， DPPH抑制活性保留率为44.9%。 0044 实施例7 0045 一、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的制备： 将60g蚕蛹蛋白粉溶入2L水中形成蚕蛹蛋白 水溶， 加入中性蛋白酶作为水解酶， 中性蛋白酶的加入量为蚕蛹蛋白质量的2%， 控制在pH为 7.5的环境下酶解5h， 用NaOH溶液维持pH值恒定， 灭酶即可得到蚕蛹蛋白酶解降血压肽液。 。
23、经测定： DPPH抑制活性为53.10%， 其中酶解液蛋白含量为10mgL-1， DPPH抑制活性蛋白检测 量为300 g。 0046 二、 蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的脱色 0047 将制备得到的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的pH值调到5.0， 脱色剂中皂土、 活性白土 和碱性钙基膨润土质量比为1:0.5:0.5， 该脱色剂与蚕蛹蛋白酶解降血压肽液的质量体积 比为5gL-1， 在超声振荡中， 调节超声起始温度至50， 超声功率40W， 脱色25min后； 离心分 离转速3000rmin-1离心30min， 所得上清液为经脱色处理的蚕蛹蛋白酶解降血压肽液， 经 过检测最终脱色率为89.8%， 氮保留率为。
24、81.9%， DPPH抑制活性保留率为43.5%。 0048 对蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液 （SN1） 、 活性炭脱色处理后蚕蛹蛋白酶解抗氧化肽液 （SN2） 和皂土、 活性白土和碱性钙基膨润土混合物 （简称混合脱色剂） 脱色处理后蚕蛹蛋白 酶解抗氧化肽液 （SN3） 中的蛋白质损失率、 脱色率和DPPH抑制活性进行分析 （活性炭和混合 脱色剂脱色条件相同） ， 结果如表1所示。 0049 表1SN1、 SN2和SN3酶解液性能比较 0050 氨基酸SN1SN2SN3 说明书 4/5 页 6 CN 103804466 B 6 蛋白损失率/%0.082.916.3 脱色率/%0.091.394.7 DPPH/%52.57.945.3 0051 从表1可以看出， 经活性炭处理后酶解液DPPH抑制率和蛋白损失量同色素脱色率 成正比下降， 说明活性炭对色素和蛋白的吸附是没有选择性的， 而经混合脱色剂脱色处理 的酶解液在色素脱色率下降的同时蛋白总量和DPPH抑制活性并没有显著下降， 说明混合脱 色剂对色素和蛋白的吸附具有良好的选择性。 说明书 5/5 页 7 CN 103804466 B 7 。