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1、(10)申请公布号 CN 103923199 A (43)申请公布日 2014.07.16 CN 103923199 A (21)申请号 201310009731.8 (22)申请日 2013.01.11 C07K 14/435(2006.01) C07K 1/14(2006.01) (71)申请人 青岛亚博生物科技有限公司 地址 266300 山东省青岛市胶州市海尔大道 东侧 10 路北 (72)发明人 李萍 张永勤 曲辉 张春革 (74)专利代理机构 山东清泰律师事务所 37222 代理人 聂磊 (54) 发明名称 一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法 (57) 摘要 本发明名称为一种鳕鱼硫酸鱼。
2、精蛋白的制备 方法， 涉及生物医药领域。 本发明申请所要解决的 技术问题为克服现有工艺生产鱼精蛋白周期长、 酒精用量大等不足， 提供一种利用硫酸提取、 有机 溶剂纯化与硅藻土吸附相结合对鳕鱼鱼精蛋白进 行分离纯化的方法。本方法避免了传统工艺中采 用多次乙醇溶解再沉淀的过程， 大大减少了有机 溶剂的用量， 降低生产成本的同时缩短了生产周 期， 且产品纯度好， 活性收率高。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103923199 A CN 103923199 A。
3、 1/1 页 2 1. 一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法， 其特征包括如下步骤 ： （1） 预处理 ： 取解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中， 加入 NaCl 溶液， 用三层纱布 过滤得浆液 ； （2） （离心 ： 3500r/min 15 分钟， 去上清， 收集沉淀 ； （3） 提取 ： 向沉淀中加入硫酸进行提取 ； （4） 过滤 ： 收集滤液 ； （5） 吸附 ： 在滤液中加入硅藻土， 搅拌 1-2 小时 ； （6） 过滤 ： 收集滤液 ； （7） 用乙醇进行沉淀、 脱水、 干燥。 2. 根据权利要求 1 所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法， 其特征是所述步骤 （1） 中 NaCl 溶液的浓度。
4、为 0.5%-3%。 3. 根据权利要求 1 所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法， 其特征是所述步骤 （3） 中硫酸溶液浓度为 3%-10%， 提取时间为 1-4 小时。 4. 根据权利要求 1 所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法， 其特征是所述步骤 （5） 中所加硅藻土的质量分数为 1%-10%。 5. 根据权利要求 1 所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法， 其特征是所述步骤 （7） 中， 所用乙醇的量为使得沉淀后的酒精度为 60%-85%， 沉淀 10 小时以上。 权 利 要 求 书 CN 103923199 A 2 1/3 页 3 一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法 技术领域 0001。
5、 本发明涉及生物医药领域， 尤其涉及一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的提取方法。 背景技术 0002 鱼精蛋白是一类从鱼类的鱼白组织中提取的碱性蛋白质， 临床上可以作为胰岛素 的载体， 延长胰岛素的半衰期， 从而使药物注射间隔时间延长 ； 同时， 鱼精蛋白可用于因肝 素注射过量引起的出血， 且目前无其他药物可以代替 ； 另外， 鱼精蛋白在中性和碱性介质中 显示出很强的抑菌能力， 并有较高的热稳定性， 在 210条件下加热仍具有活性， 同时其抑 菌范围和食品仿佛范围均较广， 对枯草杆菌、 芽孢杆菌、 干酪乳杆菌、 胚芽乳杆菌、 乳酸菌、 霉菌、 芽孢耐热菌和革兰氏阳性菌等均有较强的抑制作用， 经毒理实验证明。
6、， 鱼精蛋白作为 防腐剂无味无臭， 对人体无害， 因而使用量不受任何限制， 可根据需要添加到满意的抑菌效 果， 综上， 鱼精蛋白具有广阔的市场。 目前已有很多鲤鱼、 鲢鱼、 马哈鱼等鱼精蛋白制备方法 的文献报道， 但还没有鳕鱼鱼精蛋白制备方法的报道。 0003 由于鱼精蛋白通常是以核酸 - 蛋白质的形式存在于鱼的精子中， 核蛋白结合键不 牢固， 所以现有的提取技术通常采用硫酸使其与核酸分离， 制得鱼精蛋白的硫酸盐， 即硫酸 鱼精蛋白， 后采用有机溶剂进行纯化， 申请号为 20121028815991 的专利采用硫酸提取、 升 温提取、 低温析出、 干燥工序的工艺进行硫酸鱼精蛋白的制备， 而在硫。
7、酸提取、 升温提取和 干燥工序的过程中采用了多次乙醇沉淀再溶解的方法， 致使酒精用量大， 使生产成本增高， 生产周期较长， 且通过硫酸提取、 有机溶剂纯化的方法得到的鱼精蛋白通常仍还有核酸等 杂质， 产品活性收率低。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是提供一种利用硫酸提取、 有机溶剂纯化与硅藻土吸附 相结合对鳕鱼鱼精蛋白进行分离纯化的方法， 该方法克服了鱼精蛋白生产周期长、 酒精用 量大、 活性收率低等不足。 0005 本发明采用的技术方案如下 ： 一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法， 包括以下步骤 ： （1） 预处理 ： 取解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中， 加入 NaCl 溶液， 用三。
8、层纱布 过滤得浆液 ； （2） 离心 ： 3500r/min 15 分钟， 去上清， 收集沉淀 ； （3） 提取 ： 向沉淀中加入硫酸进行提取 ； （4） 过滤 ： 收集滤液 ； （5） 吸附 ： 在滤液中加入硅藻土， 搅拌 1-2 小时 ； （6） 过滤 ： 收集滤液 ； （7） 用乙醇进行沉淀、 脱水、 干燥。 0006 优化地， 所述步骤 （1） 中 NaCl 溶液的浓度为 0.5%-3%。 说 明 书 CN 103923199 A 3 2/3 页 4 0007 优化地， 所述步骤 （3） 中硫酸溶液浓度为 3%-10%， 提取时间为 1-4 小时。 0008 优化地， 所述步骤 （5）。
9、 中所加硅藻土的质量分数为 1%-10%。 0009 优化地， 所述步骤 （7） 中， 所用乙醇的量为使得沉淀后的酒精度为 60%-85%， 沉淀 10 小时以上。 0010 本发明的有益效果为通过采用硫酸提取、 有机溶剂纯化与吸附纯化相结合的方式 对鱼精蛋白进行提取纯化， 避免了传统工艺中采用多次乙醇溶解再沉淀的过程， 大大减少 了有机溶剂的用量， 降低生产成本的同时缩短了生产周期， 且产品纯度高， 活性收率高。 具体实施方式 0011 下面对本发明作进一步的详细说明。 0012 实施例 1 （1） 预处理 ： 取 100g 解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中， 加入 100ml 0.5%NaC。
10、l 溶 液， 用三层纱布过滤得浆液 ； （2） 离心 ： 3500r/min 15 分钟， 去上清， 收集沉淀 ； （3） 提取 ： 向沉淀中加入 50ml 3% 的硫酸提取 1 小时 ； （4） 过滤 ： 收集滤液 ； （5） 吸附 ： 在滤液中加入 1% 的硅藻土， 搅拌 1 小时 ； （6） 过滤 ： 收集滤液 ； （7） 用乙醇进行沉淀、 脱水、 干燥。滤液中加入 95% 的乙醇， 使得酒精度为 60%， 静置 10 小时， 离心， 收集沉淀， 用无水乙醇脱水， 真空干燥。 0013 对产品各项指标进行检测， 将结果记录于表 1。 0014 实施例 2 （1） 预处理 ： 取 100g。
11、 解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中， 加入 300ml 2%NaCl 溶液， 用三层纱布过滤得浆液 ； （2） 离心 ： 3500r/min 15 分钟， 去上清， 收集沉淀 ； （3） 提取 ： 向沉淀中加入 150ml 5% 的硫酸提取 2.5 小时 ； （4） 过滤 ： 收集滤液 ； （5） 吸附 ： 在滤液中加入 5% 的硅藻土， 搅拌 1.5 小时 （6） 过滤 ： 收集滤液 ； （7） 用乙醇进行沉淀、 脱水、 干燥。滤液中加入 95% 的乙醇， 使得酒精度为 75%， 静置 14 小时， 离心， 收集沉淀， 用无水乙醇脱水， 真空干燥。 0015 对产品各项指标进行检测， 将结果记。
12、录于表 1。 0016 实施例 3 （1） 预处理 ： 取 100g 解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中， 加入 500ml 3%NaCl 溶液， 用三层纱布过滤得浆液 ； （2） 离心 ： 3500r/min 15 分钟， 去上清， 收集沉淀 ； （3） 提取 ： 向沉淀中加入 300ml 10% 的硫酸提取 4 小时 ； （4） 过滤 ： 收集滤液 ； （5） 吸附 ： 在滤液中加入 10% 的硅藻土， 搅拌 2 小时 ； 说 明 书 CN 103923199 A 4 3/3 页 5 （6） 过滤 ： 收集滤液 ； （7） 用乙醇进行沉淀、 脱水、 干燥。滤液中加入 95% 的乙醇， 使得酒精。
13、度为 85%， 静置 16 小时， 离心， 收集沉淀， 用无水乙醇脱水， 真空干燥。 0017 对产品各项指标进行检测， 将结果记录于表 1。 0018 对比例 （1） 预处理 ： 取 100g 解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中， 加入 500ml 3%NaCl 溶液， 用三层纱布过滤得浆液 ； （2） 离心 ： 3500r/min 15 分钟， 去上清， 收集沉淀 ； （3） 提取 ： 向沉淀中加入 300ml 10% 的硫酸提取 4 小时 ； （4） 过滤 ： 收集滤液 ； （5） 用乙醇进行沉淀、 脱水、 干燥。滤液中加入 95% 的乙醇， 使得酒精度为 80%， 静置 12 小时， 离心。
14、， 收集沉淀， 用无水乙醇脱水， 真空干燥。 0019 对产品各项指标进行检测， 将结果记录于表 1。 0020 表 1 重量收率效价活性收率 实施例 1 0.52%150u/mg 780u/g 实施例 2 0.68%130u/mg 884u/g 实施例 3 0.75%120u/mg 900u/g 对比例2.5%30u/mg750u/g 通过表 1， 可见通过本方法制得的鳕鱼硫酸鱼精蛋白的效价明显高于对比例方法制得 的产品， 而产品效价的高低有效反应了其活性情况， 即实施例产品的效价明显优于对比例 ； 虽然对比例产品重量收率高于实施例， 但结合其活性数值， 分析得对比例所得产品纯度低 于实施例， 故其活性收率低于实施例， 由此可见， 通过本方法制得的产品与现有技术制得的 产品相比， 具有较高的纯度和活性收率， 且生产过程有机溶剂用量少， 缩短了生产周期， 利 于应用及生产。 说 明 书 CN 103923199 A 5 。