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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810641747.3 (22)申请日 2018.06.21 (71)申请人 赤峰制药股份有限公司 地址 024000 内蒙古自治区赤峰市红山区 一东街84号 (72)发明人 张国银付桂杰胡建华刘俊芳 崔广义袁志新高峰高鹏飞 黄秀国王经纬 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种核黄素生产菌种培养基 (57)摘要 本发明公开了一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖3050g。
2、/L、 甜菜碱 15g/L、 酵母粉38g/L、 玉米浆1030g/L、 磷 酸氢二钾13.5g/L、 磷酸二氢钾0.52.5g/L、 硫酸铵210g/L、 硫酸镁0.41g/L、 硫酸锌0.01 0.025g/L、 生物素0.0050.01g/L、 消泡剂0.2 0.8g/L、 氯霉素1020u/ml、 四环素1040u/ ml。 用它生产核黄素生产菌种质量稳定、 生产能 力强、 成本低廉、 经济效益显著。 权利要求书1页 说明书3页 CN 108795811 A 2018.11.13 CN 108795811 A 1.一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖3050g/L、。
3、 甜菜碱1 5g/L、 酵母粉38g/L、 玉米浆1030g/L、 磷酸氢二钾13.5g/L、 磷酸二氢钾0.52.5g/L、 硫酸铵210g/L、 硫酸镁0.41g/L、 硫酸锌0.010.025g/L、 生物素0.0050.01g/L、 消泡 剂0.20.8g/L、 氯霉素1020u/ml、 四环素1040u/ml。 2.根据权利要求1所述的核黄素生产菌种培养基， 其特征在于： 它包含如下含量的组 分： 蔗糖40g/L、 甜菜碱3g/L、 酵母粉5.5g/L、 玉米浆20g/L、 磷酸氢二钾2.2g/L、 磷酸二氢钾 1.5g/L、 硫酸铵6g/L、 硫酸镁0.7g/L、 硫酸锌0.03g。
4、/L、 生物素0.012g/L、 消泡剂0.5g/L、 氯霉 素15u/ml、 四环素25u/ml。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108795811 A 2 一种核黄素生产菌种培养基 技术领域 0001 本发明属于菌种培养基技术领域， 尤其是一种核黄素生产菌种培养基。 背景技术 0002 核黄素学名是维生素B2(VB2)， 在工业上应用较多的核黄素生产方法有酵母菌发酵 法、 枯草芽孢杆菌发酵法、 化学合成法和化学半合成法。 其中， 枯草芽孢杆菌发酵法生产核 黄素， 因具有生产工艺经济有效、 易于自动化控制、 产品无毒、 纯度高等优点， 被广泛用于核 黄素的工业生产。 目前， 工业生产中主。
5、要以枯草芽孢杆菌(Bcillus subtiltis)的基因工程 菌作为核黄素生产菌种。 0003 随着人们生活水平的提高， 人们对医药安全的要求更高， 用发酵法生产的医药的 质量要求也越来越高。 枯草芽孢杆菌发酵法生产核黄素， 生产菌种的质量很关键， 生产菌种 质量除菌种自身因素外， 培养基配方中主要原辅料质量至关重要。 所以， 研究开发出一种生 产能力强、 质量稳定， 成本低廉的核黄素生产菌种培养基具有十分重要的意义。 发明内容 0004 本发明的目的在提供一种核黄素生产菌种培养基， 用它生产核黄素生产菌种质量 稳定、 生产能力强、 成本低廉、 经济效益显著。 0005 本发明的技术方案是。
6、这样实现的： 0006 一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖3050g/L、 甜菜碱1 5g/L、 酵母粉38g/L、 玉米浆1030g/L、 磷酸氢二钾13.5g/L、 磷酸二氢钾0.52.5g/L、 硫酸铵210g/L、 硫酸镁0.41g/L、 硫酸锌0.010.025g/L、 生物素0.0050.01g/L、 消泡 剂0.20.8g/L、 氯霉素1020u/ml、 四环素1040u/ml。 0007 进一步， 所述的核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖40g/L、 甜菜 碱3g/L、 酵母粉5.5g/L、 玉米浆20g/L、 磷酸氢二钾2.2g/L、 。
7、磷酸二氢钾1.5g/L、 硫酸铵6g/L、 硫酸镁0.7g/L、 硫酸锌0.03g/L、 生物素0.012g/L、 消泡剂0.5g/L、 氯霉素15u/ml、 四环素 25u/ml。 0008 进一步， 所述的玉米浆是制玉米淀粉的副产物， 原料为玉米糁、 水、 玉米汁； 制造玉 米淀粉须将玉米粒先用亚硫酸浸泡， 浸泡液浓缩即制成黄褐色的液体， 叫玉米浆。 所述玉米 浆其固形物的浓度为4550。 0009 进一步， 所述的酵母粉优选酿酒酵母粉或者面包酵母粉。 0010 进一步， 所述的消泡剂为乳化硅油、 高碳醇脂肪酸酯复合物、 聚氧乙烯聚氧丙烯季 戊四醇醚、 聚氧乙烯聚氧丙醇胺醚、 聚氧丙烯甘油。
8、醚、 聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚、 聚二甲基 硅氧烷中的一种或多种组成。 0011 本发明和现有技术相比的优点为： 0012 1)现有技术中， 普遍使用糖蜜作为碳源提供菌种代谢所需要的能量和碳骨架。 糖 蜜是制糖工业的副产品， 组成因制糖原料、 加工条件的不同而有差异， 另外糖蜜是粘稠液 说明书 1/3 页 3 CN 108795811 A 3 体， 在运输、 存储、 配制上存在明显弊端且容易污染。 本发明使用蔗糖代替糖蜜， 克服了以糖 蜜为核黄素生产菌种培养基的主要原料， 生产菌种使用不方便、 质量没有保证等缺点。 0013 2)蔗糖是双糖， 在发酵过程中边水解边利用， 发酵液中葡萄糖浓度较低，。
9、 发酵液中 基本检测不到溢流代谢的产物乳酸， 几乎不分解代谢产物阻遏作用， 对菌体生长和VB2合成 都有利。 0014 3)核黄素发酵菌枯草芽孢杆菌经过磷酸戊糖途径和参与嘌呤合成， 生产三磷酸鸟 苷(GTP)， 作为核黄素合成的直接前体物进入核黄素合成途径。 甜菜碱即三甲基甘氨酸， 是 高效的甲基供体， 参与体内氨基酸、 甲基代谢， 具有一定的调节渗透压的作用， 促进菌种的 生长。 0015 4)本发明配方合理、 成分稳定、 由此培养的生产菌种稳定性好， 由此生产的核黄素 产品质量稳定。 具体实施方式 0016 为使本发明的技术方案更加清楚， 下面通过具体实施例对本发明实施方式作进一 步地详细。
10、描述。 0017 实施例1： 一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖50g/L、 甜菜 碱1g/L、 酵母粉3g/L、 玉米浆10g/L、 磷酸氢二钾1.5g/L、 磷酸二氢钾2.5g/L、 硫酸铵2g/L、 硫 酸镁0.4g/L、 硫酸锌0.025g/L、 生物素0.005g/L、 消泡剂0.3g/L、 氯霉素10u/ml、 四环素20u/ ml。 0018 实施例2： 一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖30g/L、 甜菜 碱5g/L、 酵母粉5g/L、 玉米浆30g/L、 磷酸氢二钾2.5g/L、 磷酸二氢钾1.5g/L、 硫酸铵5g/L、 硫 酸镁。
11、0.5g/L、 硫酸锌0.025g/L、 生物素0.005g/L、 消泡剂0.5g/L、 氯霉素20u/ml、 四环素20u/ ml。 0019 实施例3： 一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖30g/L、 甜菜 碱3.5g/L、 酵母粉5g/L、 玉米浆30g/L、 磷酸氢二钾2.5g/L、 磷酸二氢钾1.5g/L、 硫酸铵2g/L、 硫酸镁0.4g/L、 硫酸锌0.025g/L、 生物素0.005g/L、 消泡剂0.5g/L、 氯霉素10u/ml、 四环素 20u/ml。 0020 实施例4： 一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 蔗糖40g/L、 甜菜 。
12、碱3g/L、 酵母粉5.5g/L、 玉米浆20g/L、 磷酸氢二钾2.3g/L、 磷酸二氢钾1.5g/L、 硫酸铵6g/L、 硫酸镁0.7g/L、 硫酸锌0.018g/L、 生物素0.008g/L、 消泡剂0.5g/L、 氯霉素15u/ml、 四环素 25u/ml。 0021 对照例： 一种核黄素生产菌种培养基， 它包含如下含量的组分： 废糖蜜30g/L、 酵母 粉5g/L、 玉米浆24g/L、 磷酸氢二钾2.5g/L、 磷酸二氢钾1.5g/L、 硫酸铵5g/L、 硫酸镁0.5g/L、 葡萄糖7.5g/L、 消泡剂0.5g/L、 氯霉素20u/ml、 红霉素20u/ml、 四环素10u/ml。。
13、 0022 种子培养试验： 0023 将10枯草芽孢杆菌悬液分别接种到实施例1、 2、 3和对照例四种配方种子罐内的 核黄素生产菌种培养基中， 在温度为37.51条件下， 培养1416小时。 检测菌液OD值、 固 形物含量、 pH值和种龄， 显微镜下观测菌体形态， 种子培养试验检测结果如表1所示。 0024 表1 种子罐菌种生长代谢数据 说明书 2/3 页 4 CN 108795811 A 4 0025 0026 由表1数据可知： 种子试验罐种龄、 菌浓、 含量、 PH、 菌体形态等移种指标与对照相 当， 符合菌种移种条件。 故本发明的培养基菌种生长繁殖代谢指标均达到预期标准。 镜检菌 体形态。
14、均匀、 整齐、 色兰、 量大， 符合优良种子移种条件。 0027 发酵生产试验： 0028 将上述种子培养试验制得的对照例生产菌种、 实施例1生产菌种、 实施例2生产菌 种、 实施例3生产菌种分别接种于50L中试罐发酵培养。 控制培养温度391， 转速400 600rpm， 罐压0.05MPa， 培养时间(周期)5054小时。 检测最终发酵产物VB2的含量： 0029 表2 50L中试罐发酵培养试验数据 0030 0031 由表2数据可知： 本发明的三种核黄素生产菌种培养基条件下培养的菌种， VB2产 量达到或高于对照培养基条件下培养的菌种。 说明书 3/3 页 5 CN 108795811 A 5 。