一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法和SNP位点及其引物.pdf

本发明公开了一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，首先SNP panel设计：选取近交系小鼠品系，筛选与其它品系特异性区分位点和常规遗传质量监控位点，前者以染色体为单位，SNP panel中应包括至少5对含特异性区分位点的染色体，且每对染色体应含有2个以上特异性区分位点；后者在特异性区分位点的基础上，按照每对染色体4‑5个等间距位点原则将SNP panel的位点补足为96个；然后设计SNP位点引物；再提取样本DNA，用KASP法进行基因分型，并与NCBI上的SNP位点信息比较，完成近交系小鼠遗传质量监控。本发明还公开了一种近交系遗传质量监控的SNP位点及SNP位点引物。

1.一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)SNPpanel的设计：确定近交系小鼠品系，筛选出C57BL/6品系与其它品系的可特异性区分位点和品系常规遗传质量监控位点，所述特异性区分位点如下：C57BL/6品系位点的碱基与129S1/SvIm、BALB/C、A/J、CBA、DBA、FVB、NOD品系中对应的碱基不同，以染色体为单位，SNPpanel中应包括至少5对含特异性区分位点的染色体，且每对染色体应含有2个以上特异性区分位点；所述品系常规遗传质量监控位点如下：在所述特异性区分位点的基础上，按照每对染色体上4-5个位点原则，等间距地进行位点的补足，将C57BL/6品系的SNPpanel位点补足为96个；所述SNPpanel可用于C57BL品系近交系小鼠及相应突变系小鼠的遗传质量检测及品系污染情况检测以及C57BL品系小鼠与其他品系的有效鉴别；(2)设计并合成上述SNPpanel位点的引物，不需设计探针；SNPpanel位点上下游序列使用编程工具在小鼠基因组序列中进行拉取；其中，5’端上游引物设计：5’端上游引物共有两条，均包括引物前体和一段可识别FAM或HEX信号的序列；所述引物前体设在每个SNPpanel位点的上游，长度为20-30bp，在引物前体的末端分别为SNPpanel位点的两个突变碱基；所述可识别FAM或HEX信号的序列设在所述引物前体的5’端，长度约为20bp；3’端下游引物为一条，其长度约18-29bp；将上述3条引物同时进行PCR扩增，若体系中产生其中一个信号，则说明样品模板中含有该碱基突变类型；对96个位点使用对照品系进行引物测试，若成功分型，则表示引物测试成功，否则对测试失败的位点在染色体相应位置的上下游寻找替换位点；测试成功的96个位点及PCR引物测试条件及体系确定为最终检测方案；(3)提取待测样本DNA，样品浓度大于10ng/uL时，用KASP法对每个样本的96个SNPpanel位点进行基因分型，分析数据并与NCBI上的SNP位点信息比较，完成近交系小鼠遗传质量监控与品系鉴定。 2.如权利要求1所述的一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，近交系小鼠品系为A/J、129S1/SvIm、BALB/C、C57BL/6、CBA、DBA、FVB、NOD；所述C57BL/6的亚系C57BL/6J品系与其他7个品系的特异性可区分位点有69个，具体如下： 3.如权利要求1或2所述的一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，待测样本DNA的浓度需求＝5ng/uL×待测物种基因组大小/人类基因组大小。 4.如权利要求1或2所述的一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，其特征在于，所述KASP法的反应体系如下：包括浓度为5-50ng/uL的DNA在每个反应孔的体积为0.8uL，2×KASPMastermix在每个反应孔的体积为0.778uL，KASPPrimermix在每个反应孔的体积为0.022uL。 5.如权利要求1或2所述的一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，其特征在于，所述KASP法的反应程序如下：或或 6.一组位点在近交系遗传质量监控中作为SNP位点的应用，其特征在于，所述一组位点有96个，具体如下*为特异性区分位点。 7.一种近交系遗传质量监控的SNP位点引物，其特征在于，所述位点引物如SEQIDNO.1至SEQIDNO.288所示。

技术领域

本发明属于近交系小鼠品系遗传背景鉴定与遗传污染检测领域，涉及一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，尤其涉及一种基于KASP法进行SNP分型的检测方法及SNP位点和其引物。

背景技术

实验动物质量控制是实验动物行业健康发展的核心问题，小鼠微生物质量控制及遗传背景质量控制是其中的重要控制因素。国内的遗传质量监控缺少成熟的行业标准，建立一种快速且精准性高的高通量基因分型技术平台至关重要。

用于遗传背景质量控制检测方法主要有3种：生化标记分析法、微卫星DNA、SNP(单核苷酸的多态性)检测等。目前国际所规定的遗传检测方法是生化标记分析法，这一方法是检测同工酶或异构蛋白酶的变化来推测相应的基因变化；使用此方法进行检测，存在准确度低、灵敏度低、检测位点有限、反映遗传概貌有限等弊端。而分子遗传标记可以对实验动物进行更精细的监管，是一种更完善的实验动物质量检测手段；其中SNP检测作为分子遗传标记的一门技术，在基因组水平上检测由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性；SNP所表现的多态性可以监测到单个碱基的变异，具有密度高、代表性、遗传稳定性等特点，能够全面地反映基因组的遗传及变异情况。

KASP法是指竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR)，以高灵敏度的荧光检测为基础，对目标SNPs进行精准的双等位基因分型。与传统Taqman技术不同的是，此种方法无需对靶点即特异性引物/探针进行标记，不需要根据每个SNP位点合成特异的荧光引物，其独特的ARM PCR原理，让所有的位点检测最终都使用通用荧光引物扩增，大大降低了实验成本。优化的PCR体系可满足不同位点高通量反应的需求，既有金标准的准确，又降低了使用成本，比Taqman具有更好的位点适应性。KASP技术将传统检测等位基因的2个反应合成了1个反应，成本低。SNPs检测不但弥补了传统PCR、切胶、测序流程时间长的缺点，而且大大节省了测序的费用。

发明内容

目前的SNP检测panel由于受到操作技术及检测成本的制约，导致样本检测通量较低、位点的选择受到限制，针对现有技术中存在的缺点，本发明的目的在于提供一种高通量、多位点、低成本、快速用于近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法

本发明的目的还在于提供一组位点在近交系遗传质量监控中作为的SNP位点的应用。

本发明的目的还在于提供一种近交系遗传质量监控的SNP位点引物。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，包括如下步骤：

(1)SNP panel的设计：确定近交系小鼠品系，筛选出C57BL/6品系与其它品系的可特异性区分位点和品系常规遗传质量监控位点，所述特异性区分位点如下：C57BL/6品系位点的碱基与129S1/SvIm、BALB/C、A/J、CBA、DBA、FVB、NOD品系中对应的碱基不同，以染色体为单位，SNP panel中应包括至少5对含特异性区分位点的染色体，且每对染色体应含有2个以上特异性区分位点；所述品系常规遗传质量监控位点如下：在所述特异性区分位点的基础上，按照每对染色体上4-5个位点原则，等间距地进行位点的补足，将C57BL/6品系的SNPpanel位点补足为96个；所述SNP panel可用于C57BL品系近交系小鼠及相应突变系小鼠的遗传质量检测及品系污染情况检测以及C57BL品系小鼠与其他品系的有效鉴别；

(2)设计并合成上述SNP panel位点的引物，不需设计探针；SNP panel位点上下游序列各100bp序列使用编程工具在小鼠基因组序列中进行拉取；其中，5’端上游引物设计：5’端上游引物共有两条，均包括引物前体和一段可识别FAM或HEX信号的序列；所述引物前体设在每个SNP panel位点的上游，长度为20-30bp，在引物前体的末端分别为SNP panel位点的两个突变碱基；所述可识别FAM或HEX信号的序列设在所述引物前体的5’端，长度约为20bp；3’端下游引物为一条，其长度约18-29bp；

将上述3条引物同时进行PCR扩增，若体系中产生其中一个信号，则说明样品模板中含有该碱基突变类型；对96个位点使用对照品系129S1/Svlm亚系129S1/SvlmJNju及C57BL/6亚系C57BL/6JNju进行引物测试，若成功分型，则表示引物测试成功，否则对测试失败的位点在染色体相应位置的上下游寻找替换位点；测试成功的96个位点及PCR引物测试条件及体系确定为最终检测方案；

(3)提取待测样本DNA，样品浓度大于10ng/uL时，用KASP法对每个样本的96个SNP panel位点进行基因分型，分析数据并与NCBI上的SNP位点信息比较，完成近交系小鼠遗传质量监控与品系鉴定。

进一步地，所述步骤(1)中，近交系小鼠品系为A/J、129S1/SvIm、BALB/C、C57BL/6、CBA、DBA、FVB、NOD；所述C57BL/6品系与其他7个品系的特异性可区分位点有69个，具体如下：

进一步地，所述步骤(3)中，待测样本DNA的浓度需求＝5ng/uL×待测物种基因组大小/人类基因组大小。

进一步地，所述KASP法的反应体系如下：包括DNA(5-50ng/uL，以人或小鼠为例)在每个反应孔的体积为0.8uL，2×KASP Master mix在每个反应孔的体积为0.778uL，KASP Primer mix在每个反应孔的体积为0.022uL。

进一步地，所述KASP法的反应程序如下：

或

或

一组96个位点在近交系遗传质量监控中作为SNP位点的应用，所述96个位点如下：

*为特异性区分位点。

一种近交系遗传质量监控的SNP位点引物，所述引物序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.288所示。

本发明具有的有益效果如下：

本发明检测方法完成1个项目的36个样品的位点检测(每个样品检测96个位点)，需要的总周期仅仅为6个工作日。本发明方法提高了单个样品的可检测位点数、而且高通量检测使得实验周期大大缩短，此外在提高通量的同时保证了结果的准确性。

本发明使用的C57BL SNP panel共含有96个位点，除用于C57BL品系及相关突变品系的常规遗传质量监控外，可用于与A/J、129S1/SvIm、BALB/C、CBA、DBA、FVB、NOD品系的区分。

本发明使用无需对靶点即特异性引物进行标记，不需要设计探针，不需要根据每个SNP位点合成特异的荧光引物，所有的位点检测最终都使用通用荧光引物扩增，不需要传统PCR的跑胶、切胶、测序等流程，节省了检测时间，而且大大节省了测序的费用；此外KASP法对目标SNPs进行双等位基因分型，将传统检测等位基因的2个反应合成了1个反应，成本降低。

附图说明

图1为本发明检测方法的流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。

本实施例的近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法，其流程如图1所示，具体步骤详见如下：

实施例1：SNP panel设计

1、确定SNP panel中包含的近交品系

选取13种近交系小鼠品系进行常规SNP检测(如表1)，13种近交系小鼠品系均由南京大学-南京生物医药研究院(NBRI)提供(公开销售)，在筛选过程中发现，C57BL/6J与C57BL/6N、C57BL/10J、C57BLKS/J、B6(Cg)-Tyrc-2J遗传背景相似；同时，DBA/1与DBA/2遗传背景相似。因此，C57BL中选取C57BL/6J作为代表，DBA中选取DBA/1作为代表，最终确定8个近交系来建立C57BL/6近交品系的SNP检测panel(如表2)。在后续实验中C57BL/6品系SNP panel可用于常规SNP检测，用于与A/J、129S1/SvIm、BALB/C、CBA、DBA、FVB、NOD品系的区分；同时可以用于C57BL/6N、C57BL/10、C57BLKS、B6(Cg)-Tyrc-2J等C57BL品系及相关突变品系的常规遗传质量监控。

表1研究院近交系列表

序号 品系名称 1 C57BL/6NNju 2 C57BL/6JNju 3 CBA/CaJNju 4 DBA/2JNju 5 A/JNju 6 BALB/cJNju 7 C57BL/10JNju 8 FVB/NJNju 9 C57BLKS/JNju 10 DBA/1JNju 11 NOD/ShiLtJNju 12 B6(Cg)-Tyrc-2J/Nju 13 129S1/SvImJNju

表2用于建立C57BL/6SNP检测panel的近交系列表

2、SNP Panel设计方向

以LGC公司提供的数据库<mouse-marker-excel-file>进行筛选。SNP panel设计主要从两大方面进行：筛选出与其它品系能够特异性区分的位点——用于品系污染检测；筛选品系常规遗传质量监控的位点。

3、筛选近交系与其它品系间特异性区分的位点

a)筛选目的：用于品系污染检测。

b)设计原则：以染色体为单位，SNP panel中应包括至少5对含特异性区分位点的染色体，且每对染色体应含有2个以上特异性区分位点，则认为特异性区分panel可将品系小鼠与其它近交系进行区分。可特异性区分位点：在某一品系中，位点与其它品系位点均不相同。如果一个SNP检测位点不能够完全与其它品系进行区分，检测后若出现突变，则不能确定是遗传漂变还是品系污染。

遗传质量监控的频率为1年/次，若出现污染，则最长污染周期应为1年，污染小鼠代数最长为4代。第四代小鼠出现染色体污染的概率最低为5条(按照F1代与其它品系配繁，后续小鼠全部与纯背景品系进行回交计算。则F2代污染染色体为全部，F3污染染色体为10条，F4污染染色体条数为5条)。

以此概率进行计算，若5条以上染色体含有特异性位点，则panel能够将品系小鼠与其它近交系进行区分。每条染色体上含有2个以上位点则认为检测结果具有参考性。

c)筛选结果：C57BL/6近交系小鼠共筛选出69个与其他品系可特异性区分位点。该panel用于C57BL品系及相关突变系的SNP检测，可用于与A/J、129S1/SvIm、BALB/C、CBA、DBA、FVB、NOD品系的区分。

品系特异性区分位点使用编程的方式进行筛选，筛选原则为同一品系中，筛选与其它品系均不相同的位点。筛选出的位点根据在染色体上等间距的原则进行人工二次筛选(每条染色体上位点数为4-5个，特异性位点数应不少于2个)，确定每个品系的特异性区分panel。

4、筛选品系常规遗传质量监控的位点

a)筛选目的：用于品系常规遗传质量监控。

b)设计原则：品系特异性位点通常数量过少，不够用于常规遗传质量监控。在确定上述特异性区分位点panel的基础上，我们将每个品系检测panel SNP数量补足为96个，其作用如下：既可以保证SNP检测结果可靠性，又方便鉴定操作。

在特异性位点的基础上，按照每条染色体上4-5个等间距位点原则进行常规位点的补足；同时，优先选取在多种品系panel中多适用性的位点。

c)筛选结果：共筛选出包含96个位点的C57BL/6J品系遗传质量监控SNP检测panel，如下表(即表3)所示。

表3C57BL/6品系遗传质量监控SNP检测panel

备注：*为特异性区分位点。

实施例2：SNP位点引物设计

SNP位点筛选完成后，SNP位点上下游序列各100bp序列使用编程工具在小鼠基因组序列中进行拉取；5’端引物设计：在SNP位点的上游分别设计20-30bp的引物，在引物的末端分别为SNP的两个突变碱基，引物5’端增加一段约20bp的分别识别不同信号的序列，如FAM及HEX信号；3’设计下游引物，长度约18-29bp。

Tm(℃)在55-65℃之间，GC％在34％-60％之间，共设计引物288条，具体引物序列详见下表。对每个样品安排96个位点的PCR扩增检测，每个位点的3条引物同时进行PCR扩增，若体系中产生其中一个信号，则说明样品模板中含有该碱基突变类型。

表4位点引物信息

实施例3：KASP法进行基因分型

1、提取待检测样品的DNA作为模板

使用LGC公司的oKtopureTM高通量DNA提取仪提取近交系小鼠的鼠尾DNA。提取步骤参照仪器说明。可有效提高DNA的提取通量，3,500个样本/天；提取速度：20-30mg起始样本量，8×96≤1.5h，80-100mg起始样本量，8×96≤2h。

2、DNA浓度需求

大多数KASP检测的每个反应需要5-50ng DNA；DNA浓度需求依据基因组大小变化：待测物种DNA浓度需求＝5ng/uL×待测物种基因组大小/人类基因组大小。

3、PCR反应体系的配制

使用LGC公司的IntelliQube仪器自动进行反应体系的配制。KASP基因分型反应体系，如下表所示：

表5KASP基因分型反应体系

4、PCR反应

PCR反应选用KASP法，使用LGC公司的Hydrocycler2TM水浴PCR热循环仪水浴系统进行PCR反应。KASP基因分型反应程序可分为以下三种，任意一种均可完成操作，如表6-8所示。

表6KASP基因分型反应程序(1)

或 表7KASP基因分型反应程序(2)

或 表8KASP基因分型反应程序(3)

5、高通量基因分型及数据分析

使用IntelliQube荧光检测进行读数，使用IntelliScore进行PCR后的数据分析，自动导出基因型进行分析。

6、对C57BL/6亚系C57BL/6JNju小鼠进行SNP分型鉴定

以129S1/SvImJNju小鼠作为对照品系，对C57BL/6JNju进行96个位点的引物测试及小鼠的基因分型；结果表明C57BL/6JNju在96个位点中与NCBI上登记的位点信息全部一致，详见下表9。

表9C57BL/6JNju亚系SNP检测结果

实施案例：

检测步骤及方法均一致，不同的是样本DNA不同。共选取10个品系，分别包含C57BL相关品系以及C57BL/6的突变系小鼠进行SNP位点检测，查看小鼠遗传质量情况，结果显示C57BL/10JNju小鼠18号染色体上一个位点rs3725940与NCBI数据库不一致，且为突变纯合；C57BL/6突变系小鼠中，9个品系的位点与C57BL/6J一致，具体见下表。

表10 10个C57BL近交系及突变系小鼠SNP检测结果

SEQUENCE LISTING

<110> 江苏集萃药康生物科技有限公司

<120> 一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法和SNP位点及其引物

<130> 1

<160> 288

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gaaggtgacc aagttcatgc tggaatcata caacatactg aaccac 46

<210> 2

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gaaggtcgga gtcaacggat tggaatcata caacatactg aaccat 46

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

ccctaaagtt gctcacgcta aa 22

<210> 4

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

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<210> 5

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

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<210> 6

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

cccttccaaa tatctcagct tcac 24

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc tgcttttttt ttccctagcc cctac 45

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<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

gaaggtcgga gtcaacggat tgcttttttt ttccctagcc cctaa 45

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<212> DNA

<213> 人工序列

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tcatctgtta ggtttccctt cttct 25

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<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

gaaggtgacc aagttcatgc tggtgctgga aaccacactc aa 42

<210> 14

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

gaaggtcgga gtcaacggat tggtgctgga aaccacactc ag 42

<210> 15

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gagagggtgc tcagcgagta a 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc tgttccagaa gtaagtgttt gggg 44

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtcgga gtcaacggat tgttccagaa gtaagtgttt gggc 44

<210> 18

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

gtgccaagga aaccccctaa 20

<210> 19

<211> 44

<212> DNA

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gaaggtgacc aagttcatgc taaccaagat gcaaggaaaa ttct 44

<210> 20

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

gaaggtcgga gtcaacggat taaccaagat gcaaggaaaa ttca 44

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaatgggtta gggagtgttt ctta 24

<210> 22

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

gaaggtgacc aagttcatgc tgggtgtgtt aggtgggtga g 41

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtcgga gtcaacggat tgggtgtgtt aggtgggtga c 41

<210> 24

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

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<210> 25

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc tcttgattga atttccaata atgg 44

<210> 26

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtcgga gtcaacggat tcttgattga atttccaata atgc 44

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<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

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ctttcaacat gaagtcattg cta 23

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc taacagcaag ctgactgggt gc 42

<210> 29

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

gaaggtcgga gtcaacggat taacagcaag ctgactgggt gt 42

<210> 30

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

cttgtgagat tacatgtccc ttcag 25

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<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc ttgagtcttt aactggtagt ttcata 46

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

gaaggtcgga gtcaacggat ttgagtcttt aactggtagt ttcatt 46

<210> 33

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

tagggataat aaagaacagc aggga 25

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<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc taataaagtt ccatttaagg ctacac 46

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<213> 人工序列

<400> 35

gaaggtcgga gtcaacggat tataaagttc catttaaggc tacat 45

<210> 36

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<212> DNA

<213> 人工序列

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ctggaagaaa tcacagttgg aagc 24

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<212> DNA

<213> 人工序列

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gaaggtgacc aagttcatgc tcaaagtgaa gctaaacaag agaaga 46

<210> 38

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

gaaggtcgga gtcaacggat tcaaagtgaa gctaaacaag agaagt 46

<210> 39

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

tcgggtttga agtaaaggct acata 25

<210> 40

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

gaaggtgacc aagttcatgc tcagccggct ttctcatgag ta 42

<210> 41

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

gaaggtcgga gtcaacggat tcagccggct ttctcatgag tg 42

<210> 42

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

ttaacatcca ggatgtgctc tgg 23

<210> 43

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

gaaggtgacc aagttcatgc tgtgcccact acaagatcag tgact 45

<210> 44

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

gaaggtcgga gtcaacggat ttgcccacta caagatcagt gacc 44

<210> 45

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

gtttggttga tgctatggcg a 21

<210> 46

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

gaaggtgacc aagttcatgc tgctgagtat gccattatca aaggaa 46

<210> 47

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gaaggtcgga gtcaacggat tgctgagtat gccattatca aaggag 46

<210> 48

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

agaaagcaga ggatgcagaa cc 22

<210> 49

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gaaggtgacc aagttcatgc tctccactag tccctatttt ctccca 46

<210> 50

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

gaaggtcgga gtcaacggat tctccactag tccctatttt ctcccc 46

<210> 51

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

gtgaaagggt tgtggtagga atg 23

<210> 52

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

gaaggtgacc aagttcatgc tcagttggga gtgtttaagg ttgtat 46

<210> 53

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 53

gaaggtcgga gtcaacggat tcagttggga gtgtttaagg ttgtag 46

<210> 54

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 54

tctcttatcc cagggtgggt tca 23

<210> 55

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 55

gaaggtgacc aagttcatgc ttgtgggact gttgggaata actg 44

<210> 56

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 56

gaaggtcgga gtcaacggat ttgtgggact gttgggaata actc 44

<210> 57

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

cttccacctc taccctaaga tttcta 26

<210> 58

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

gaaggtgacc aagttcatgc tttaccagtt ttggcttaat ttccg 45

<210> 59

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

gaaggtcgga gtcaacggat tcttaccagt tttggcttaa tttcca 46

<210> 60

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

aatggaatat gggagtgagg ga 22

<210> 61

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 61

gaaggtgacc aagttcatgc tcttgtccca ggtctagatt taa 43

<210> 62

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 62

gaaggtcgga gtcaacggat tcttgtccca ggtctagatt tag 43

<210> 63

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 63

ggcagagtag gctaatagaa t 21

<210> 64

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 64

gaaggtgacc aagttcatgc tcaagtctgg taagattgag gatga 45

<210> 65

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

gaaggtcgga gtcaacggat tcaagtctgg taagattgag gatgg 45

<210> 66

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

caacaatgtg gaagattgac 20

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<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

gaaggtgacc aagttcatgc tcaggaaagg gaaggctcac ca 42

<210> 68

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

gaaggtcgga gtcaacggat tcaggaaagg gaaggctcac cc 42

<210> 69

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

ccagcagtgg caaaggatgt g 21

<210> 70

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

gaaggtgacc aagttcatgc taactgctcc aagtcctgta ttga 44

<210> 71

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

gaaggtcgga gtcaacggat taactgctcc aagtcctgta ttgg 44

<210> 72

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 72

ttccaaaatc ccatgctttc c 21

<210> 73

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 73

gaaggtgacc aagttcatgc tccagcatta ccttaatcca aaggat 46

<210> 74

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 74

gaaggtcgga gtcaacggat tccagcatta ccttaatcca aaggac 46

<210> 75

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 75

ttgtcaaggt gggtttctct agc 23

<210> 76

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 76

gaaggtgacc aagttcatgc ttgtgatcct gatgtctgga gtcg 44

<210> 77

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

gaaggtcgga gtcaacggat ttgtgatcct gatgtctgga gtca 44

<210> 78

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

ccaaaccttt gttgtatcaa cattg 25

<210> 79

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 79

gaaggtgacc aagttcatgc taacccatgt ctgtctgcag tgc 43

<210> 80

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 80

gaaggtcgga gtcaacggat taacccatgt ctgtctgcag tgt 43

<210> 81

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 81

ggacatcgta gagcgtctca gct 23

<210> 82

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 82

gaaggtgacc aagttcatgc ttgtgacaga acggtcaggt cg 42

<210> 83

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 83

gaaggtcgga gtcaacggat tctgtgacag aacggtcagg tct 43

<210> 84

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 84

tgcctcacac agtcctctct cc 22

<210> 85

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 85

gaaggtgacc aagttcatgc taaatactct tgtaggtcag aagttga 47

<210> 86

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 86

gaaggtcgga gtcaacggat taaatactct tgtaggtcag aagttgg 47

<210> 87

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 87

agacagatta ttttcacctt agtgtc 26

<210> 88

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 88

gaaggtgacc aagttcatgc ttcaaagtct tccaaaagtt ttcac 45

<210> 89

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 89

gaaggtcgga gtcaacggat tcaaagtctt ccaaaagttt tcat 44

<210> 90

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 90

caaaccatcc ctttacttct gt 22

<210> 91

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 91

gaaggtgacc aagttcatgc tatggggctc agttgggcg 39

<210> 92

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 92

gaaggtcgga gtcaacggat tgatggggct cagttgggca 40

<210> 93

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 93

tttgtggtgc tgggaatgaa c 21

<210> 94

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 94

gaaggtgacc aagttcatgc taggcgatct gccagatgct g 41

<210> 95

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 95

gaaggtcgga gtcaacggat taggcgatct gccagatgct a 41

<210> 96

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 96

gctgagaggc tcttgagaca ttc 23

<210> 97

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 97

gaaggtgacc aagttcatgc tagagccagt cgtggtaggt cac 43

<210> 98

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 98

gaaggtcgga gtcaacggat tgagccagtc gtggtaggtc aa 42

<210> 99

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 99

gacaatgaag gaaccgaggc 20

<210> 100

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 100

gaaggtgacc aagttcatgc tactgtccat catcggcagc g 41

<210> 101

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 101

gaaggtcgga gtcaacggat tctgtccatc atcggcagca 40

<210> 102

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 102

aacttccctc ccctgttcac c 21

<210> 103

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 103

gaaggtgacc aagttcatgc tcttatatgg aggtcttcca attctgtt 48

<210> 104

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 104

gaaggtcgga gtcaacggat tttatatgga ggtcttccaa ttctgtc 47

<210> 105

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 105

ctcacccact agagtactga catacaga 28

<210> 106

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 106

gaaggtgacc aagttcatgc tggactctct gccttttact ggct 44

<210> 107

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 107

gaaggtcgga gtcaacggat tgactctctg ccttttactg gcc 43

<210> 108

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 108

gctgcctgtg actatttgag atgtc 25

<210> 109

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 109

gaaggtgacc aagttcatgc tgaggcaagt aagctctgct acat 44

<210> 110

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 110

gaaggtcgga gtcaacggat tgaggcaagt aagctctgct acac 44

<210> 111

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 111

gcagaaacag cctctaatcc 20

<210> 112

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 112

gaaggtgacc aagttcatgc tcagtgcaac atgggaaata tgac 44

<210> 113

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 113

gaaggtcgga gtcaacggat tcagtgcaac atgggaaata tgag 44

<210> 114

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 114

cttgtgcgac agcgtgga 18

<210> 115

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 115

gaaggtgacc aagttcatgc ttatttccag aacagcgggc a 41

<210> 116

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 116

gaaggtcgga gtcaacggat ttatttccag aacagcgggc g 41

<210> 117

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 117

gctggctagt ttgacatctt tgag 24

<210> 118

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 118

gaaggtgacc aagttcatgc tctttcaagg aaatggtagg tgtct 45

<210> 119

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 119

gaaggtcgga gtcaacggat tctttcaagg aaatggtagg tgtcg 45

<210> 120

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 120

tgaaagacgc caggaagacc 20

<210> 121

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 121

gaaggtgacc aagttcatgc tcctccacat tggtttctat agtggt 46

<210> 122

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 122

gaaggtcgga gtcaacggat tctccacatt ggtttctata gtggc 45

<210> 123

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 123

tctacacact gttgatggga tgct 24

<210> 124

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 124

gaaggtgacc aagttcatgc tctgaatcac acttctggtt gtcatta 47

<210> 125

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 125

gaaggtcgga gtcaacggat ttgaatcaca cttctggttg tcattg 46

<210> 126

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 126

agaccaagaa gtcctgtgat ttgc 24

<210> 127

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 127

gaaggtgacc aagttcatgc tctaggatca gtctcccata gtcttaga 48

<210> 128

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 128

gaaggtcgga gtcaacggat ttaggatcag tctcccatag tcttagg 47

<210> 129

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 129

acctgaggtg agttctattt atgtcc 26

<210> 130

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 130

gaaggtgacc aagttcatgc taagctgtgc cttgtgtggc ac 42

<210> 131

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 131

gaaggtcgga gtcaacggat tagctgtgcc ttgtgtggca t 41

<210> 132

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 132

gtggatatgt gggaaagtat gacg 24

<210> 133

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 133

gaaggtgacc aagttcatgc tacccactat ctatcagtgt gttcc 45

<210> 134

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 134

gaaggtcgga gtcaacggat tacccactat ctatcagtgt gttct 45

<210> 135

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 135

agagttcctg ttgctccatg tc 22

<210> 136

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 136

gaaggtgacc aagttcatgc tgatctggag tctatgccag cg 42

<210> 137

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 137

gaaggtcgga gtcaacggat tgatctggag tctatgccag ca 42

<210> 138

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 138

ggaggaaggc tatgagaatc ac 22

<210> 139

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 139

gaaggtgacc aagttcatgc ttgcacacag gtacacacat gg 42

<210> 140

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 140

gaaggtcgga gtcaacggat ttgcacacag gtacacacat ga 42

<210> 141

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 141

tgagtgctta tggatgggtc 20

<210> 142

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 142

gaaggtgacc aagttcatgc tggtctctgg ctggagtgta taat 44

<210> 143

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 143

gaaggtcgga gtcaacggat tggtctctgg ctggagtgta taac 44

<210> 144

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 144

aacccaagaa aagacaacca g 21

<210> 145

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 145

gaaggtgacc aagttcatgc tttgccactt gacctgagcc t 41

<210> 146

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 146

gaaggtcgga gtcaacggat tttgccactt gacctgagcc c 41

<210> 147

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 147

cctcacaaga agaaaggcaa agt 23

<210> 148

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 148

gaaggtgacc aagttcatgc tgcacatttg taagcagcaa tgag 44

<210> 149

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 149

gaaggtcgga gtcaacggat tcgcacattt gtaagcagca atgaa 45

<210> 150

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 150

aggagtgatg atgtctcaga tgga 24

<210> 151

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 151

gaaggtgacc aagttcatgc tccctgttcc ccacttataa cttaa 45

<210> 152

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 152

gaaggtcgga gtcaacggat tccctgttcc ccacttataa cttac 45

<210> 153

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 153

tctacctgcc tgttaggact gag 23

<210> 154

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 154

gaaggtgacc aagttcatgc tagaccaggg tctctaatga gtgg 44

<210> 155

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 155

gaaggtcgga gtcaacggat tagaccaggg tctctaatga gtgt 44

<210> 156

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 156

gtgaatgcaa acagaaattg taagtc 26

<210> 157

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 157

gaaggtgacc aagttcatgc tgtttgggtc cttttgtgct ca 42

<210> 158

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 158

gaaggtcgga gtcaacggat tgtttgggtc cttttgtgct cg 42

<210> 159

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 159

aggagcacgg aagcagagga 20

<210> 160

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 160

gaaggtgacc aagttcatgc tctcagtggc ttaccactca tagaac 46

<210> 161

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 161

gaaggtcgga gtcaacggat tctcagtggc ttaccactca tagaaa 46

<210> 162

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 162

aatgttgaat tttctagaga gcagg 25

<210> 163

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 163

gaaggtgacc aagttcatgc tcaggcagga aactgaggga 40

<210> 164

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 164

gaaggtcgga gtcaacggat tcaggcagga aactgagggg 40

<210> 165

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 165

gatgctctta atgtgatgtg ggg 23

<210> 166

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 166

gaaggtgacc aagttcatgc tcttttcttt ttgagagtcc acactt 46

<210> 167

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 167

gaaggtcgga gtcaacggat tcttttcttt ttgagagtcc acactg 46

<210> 168

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 168

gtcctaagac tcaaagccat cag 23

<210> 169

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 169

gaaggtgacc aagttcatgc ttctaactct ataatgtggg gaaacg 46

<210> 170

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 170

gaaggtcgga gtcaacggat ttctaactct ataatgtggg gaaacc 46

<210> 171

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 171

ttcttctctg cctcttcatc cct 23

<210> 172

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 172

gaaggtgacc aagttcatgc ttgaaaagag gcagtgagcc atc 43

<210> 173

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 173

gaaggtcgga gtcaacggat ttgaaaagag gcagtgagcc att 43

<210> 174

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 174

catggctcct cccagacatt c 21

<210> 175

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 175

gaaggtgacc aagttcatgc taaatattgt gcatagtgct agagtcag 48

<210> 176

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 176

gaaggtcgga gtcaacggat taaatattgt gcatagtgct agagtcaa 48

<210> 177

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 177

tggtggtgta gatcaaagta taggc 25

<210> 178

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 178

gaaggtgacc aagttcatgc tcaagaaggg atgaagtcag agga 44

<210> 179

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 179

gaaggtcgga gtcaacggat tcaagaaggg atgaagtcag aggg 44

<210> 180

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 180

aatggccgtt ccctcacttg 20

<210> 181

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 181

gaaggtgacc aagttcatgc ttgtcttctg tttcctgtat tatcttcg 48

<210> 182

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 182

gaaggtcgga gtcaacggat ttgtcttctg tttcctgtat tatcttcc 48

<210> 183

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 183

gaaagcaact ctgacaaaca ccc 23

<210> 184

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 184

gaaggtgacc aagttcatgc ttgctaaacc cagcgaatcc tc 42

<210> 185

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 185

gaaggtcgga gtcaacggat ttgctaaacc cagcgaatcc tt 42

<210> 186

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 186

ctgcccacat gctttgttct g 21

<210> 187

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 187

gaaggtgacc aagttcatgc tcagactcag ccttcatcca cc 42

<210> 188

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 188

gaaggtcgga gtcaacggat tccagactca gccttcatcc act 43

<210> 189

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 189

gcaccctgag tcagacttgt ggt 23

<210> 190

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 190

gaaggtgacc aagttcatgc tccaaactgg tcaaagccat atct 44

<210> 191

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 191

gaaggtcgga gtcaacggat tccaaactgg tcaaagccat atcc 44

<210> 192

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 192

ccattgactt gctggtggaa 20

<210> 193

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 193

gaaggtgacc aagttcatgc tgctttaggt ctgtctgttg gtctca 46

<210> 194

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 194

gaaggtcgga gtcaacggat tgctttaggt ctgtctgttg gtctcc 46

<210> 195

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 195

gttagttagc agcgagtgac aggt 24

<210> 196

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 196

gaaggtgacc aagttcatgc taccttcaga agtgagagac aagca 45

<210> 197

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 197

gaaggtcgga gtcaacggat taccttcaga agtgagagac aagcc 45

<210> 198

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 198

gcactctcag gtgatccaag aaac 24

<210> 199

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 199

gaaggtgacc aagttcatgc ttgaccttta gtccacgccc act 43

<210> 200

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 200

gaaggtcgga gtcaacggat ttgaccttta gtccacgccc acc 43

<210> 201

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 201

gccctcattc accactacac ca 22

<210> 202

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 202

gaaggtgacc aagttcatgc tggaacctta aacaaaatca tgcg 44

<210> 203

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 203

gaaggtcgga gtcaacggat tggaacctta aacaaaatca tgcc 44

<210> 204

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 204

atttgcctgg tgtgagcaac a 21

<210> 205

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 205

gaaggtgacc aagttcatgc taatggaggg gaaggactat agttg 45

<210> 206

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 206

gaaggtcgga gtcaacggat taatggaggg gaaggactat agtta 45

<210> 207

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 207

tgacctgatg tgttgcctga ct 22

<210> 208

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 208

gaaggtgacc aagttcatgc tatagggcta gtgcactgta tgaaac 46

<210> 209

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 209

gaaggtcgga gtcaacggat tatagggcta gtgcactgta tgaaat 46

<210> 210

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 210

aggggagaca ttcaactatc tccat 25

<210> 211

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 211

gaaggtgacc aagttcatgc tggagttttg gtagtaatag gctgatg 47

<210> 212

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 212

gaaggtcgga gtcaacggat tggagttttg gtagtaatag gctgatt 47

<210> 213

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 213

ggaactagga cagtgtatga atgtga 26

<210> 214

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 214

gaaggtgacc aagttcatgc tgctgttacg gagaagccga ga 42

<210> 215

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 215

gaaggtcgga gtcaacggat tgctgttacg gagaagccga gg 42

<210> 216

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 216

ggaaggtcag tcctgactct cacttt 26

<210> 217

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 217

gaaggtgacc aagttcatgc tatcaccaac ttaaacaatt gccattctta t 51

<210> 218

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 218

gaaggtcgga gtcaacggat tcaccaactt aaacaattgc cattcttac 49

<210> 219

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 219

gagccatcca atattgggct tt 22

<210> 220

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 220

gaaggtgacc aagttcatgc tggagaatgc atggcaaaca ttagg 45

<210> 221

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 221

gaaggtcgga gtcaacggat tggagaatgc atggcaaaca ttagt 45

<210> 222

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 222

cccaaggaga aagccttgag gactat 26

<210> 223

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 223

gaaggtgacc aagttcatgc ttaaggacct acctcaaaga gttgttc 47

<210> 224

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 224

gaaggtcgga gtcaacggat tgtaaggacc tacctcaaag agttgttt 48

<210> 225

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 225

tctgtggtga cctttgccgc aata 24

<210> 226

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 226

gaaggtgacc aagttcatgc tctcaactct aagaagtcca tcatatga 48

<210> 227

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 227

gaaggtcgga gtcaacggat tctcaactct aagaagtcca tcatatgg 48

<210> 228

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 228

cctgcaactc acagctcagt caata 25

<210> 229

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 229

gaaggtgacc aagttcatgc tacataatag gaaccagaag gaaactga 48

<210> 230

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 230

gaaggtcgga gtcaacggat tacataatag gaaccagaag gaaactgc 48

<210> 231

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 231

atgcccagcc agtggtcgtg cttt 24

<210> 232

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 232

gaaggtgacc aagttcatgc tatgctgacc gtccaacaca tcac 44

<210> 233

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 233

gaaggtcgga gtcaacggat tatgctgacc gtccaacaca tcaa 44

<210> 234

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 234

ctacctgtgc atccattggt gtcttt 26

<210> 235

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 235

gaaggtgacc aagttcatgc tcaatacagg gaaggtctct tcatga 46

<210> 236

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 236

gaaggtcgga gtcaacggat taatacaggg aaggtctctt catgc 45

<210> 237

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 237

tcagtatcca acctgggagg ctta 24

<210> 238

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 238

gaaggtgacc aagttcatgc tttacactgt ttggtcgttg gagacg 46

<210> 239

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 239

gaaggtcgga gtcaacggat tttacactgt ttggtcgttg gagaca 46

<210> 240

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 240

tgagaaagga actcaccgct cctt 24

<210> 241

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 241

gaaggtgacc aagttcatgc tttctctacc ctgaagcatc aggac 45

<210> 242

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 242

gaaggtcgga gtcaacggat tttctctacc ctgaagcatc aggat 45

<210> 243

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 243

gccaagtaca taagcaacgt ggat 24

<210> 244

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 244

gaaggtgacc aagttcatgc ttgatgttga attaggaatt aagaaacttc g 51

<210> 245

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 245

gaaggtcgga gtcaacggat tgttgatgtt gaattaggaa ttaagaaact tct 53

<210> 246

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 246

gataagtcaa gtctagcctt gccacaat 28

<210> 247

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 247

gaaggtgacc aagttcatgc tcaggaagca gagtctgtga aacg 44

<210> 248

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 248

gaaggtcgga gtcaacggat tgcaggaagc agagtctgtg aaaca 45

<210> 249

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 249

ccaacatgtc cctattaccc aa 22

<210> 250

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 250

gaaggtgacc aagttcatgc tatctgtatt gaacaggccc aggc 44

<210> 251

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 251

gaaggtcgga gtcaacggat tatctgtatt gaacaggccc aggg 44

<210> 252

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 252

cagcccatag acattgtatc acctcta 27

<210> 253

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 253

gaaggtgacc aagttcatgc ttacaaaatc aggccaattg agttcagt 48

<210> 254

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 254

gaaggtcgga gtcaacggat taaatcaggc caattgagtt cagc 44

<210> 255

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 255

tctaagccaa ccaggaacgg tcaa 24

<210> 256

<211> 50

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 256

gaaggtgacc aagttcatgc ttaacctaag aaatgcacaa tgaacattca 50

<210> 257

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 257

gaaggtcgga gtcaacggat tacctaagaa atgcacaatg aacattcg 48

<210> 258

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 258

cttctcccag agtctctgtt tccaa 25

<210> 259

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 259

gaaggtgacc aagttcatgc tgaggaaagt gaagcagaag aggg 44

<210> 260

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 260

gaaggtcgga gtcaacggat tggaggaaag tgaagcagaa gagga 45

<210> 261

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 261

cagccacaac tcctaccgta atgta 25

<210> 262

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 262

gaaggtgacc aagttcatgc tcgttctaat tctcagaaca ttaagcacaa c 51

<210> 263

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 263

gaaggtcgga gtcaacggat tcgttctaat tctcagaaca ttaagcacaa t 51

<210> 264

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 264

ctctcctcca tccacttcca t 21

<210> 265

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 265

gaaggtgacc aagttcatgc tcccagcaac caagtataca acctg 45

<210> 266

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 266

gaaggtcgga gtcaacggat tcccagcaac caagtataca accta 45

<210> 267

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 267

aagctaatag aaccggttgc cctaa 25

<210> 268

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 268

gaaggtgacc aagttcatgc tggatactga gaaaggccca gtgta 45

<210> 269

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 269

gaaggtcgga gtcaacggat tgatactgag aaaggcccag tgtg 44

<210> 270

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 270

ggagcccact cattcctttg tt 22

<210> 271

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 271

gaaggtgacc aagttcatgc tgcggagtac ctgggtcctt c 41

<210> 272

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 272

gaaggtcgga gtcaacggat tgcggagtac ctgggtcctt t 41

<210> 273

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 273

tgggagatcc cttcctgttg acta 24

<210> 274

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 274

gaaggtgacc aagttcatgc tcactgtgcc tagtgactag acg 43

<210> 275

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 275

gaaggtcgga gtcaacggat tcactgtgcc tagtgactag acc 43

<210> 276

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 276

tatgctggga gcatgagaag gcttt 25

<210> 277

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 277

gaaggtgacc aagttcatgc ttccccgttt tcagagaaca gcaca 45

<210> 278

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 278

gaaggtcgga gtcaacggat tcccgttttc agagaacagc acg 43

<210> 279

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 279

accacatgag ccagctagag ccatt 25

<210> 280

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 280

gaaggtgacc aagttcatgc tttgctacct tccagttgat ggaga 45

<210> 281

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 281

gaaggtcgga gtcaacggat tttgctacct tccagttgat ggagg 45

<210> 282

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 282

ggtgctgcca tcctaaagag gaaa 24

<210> 283

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 283

gaaggtgacc aagttcatgc tctatctccc tattgacctc cttca 45

<210> 284

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 284

gaaggtcgga gtcaacggat tctatctccc tattgacctc cttcg 45

<210> 285

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 285

cacctacttt caacacttgc agcacaa 27

<210> 286

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 286

gaaggtgacc aagttcatgc tcctgcacat gtaactacaa tgcaatca 48

<210> 287

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 287

gaaggtcgga gtcaacggat tctgcacatg taactacaat gcaatcg 47

<210> 288

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 288

cctgtgaaga tttaccacac tgcttgtta 29