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1、(10)申请公布号 CN 102584993 A (43)申请公布日 2012.07.18 CN 102584993 A *CN102584993A* (21)申请号 201210042678.7 (22)申请日 2012.02.24 C07K 16/12(2006.01) C07K 16/06(2006.01) (71)申请人 湖南康润药业有限公司 地址 414000 湖南省岳阳市巴陵东路 380 号 (72)发明人 毛金武 柳克华 周咏武 (54) 发明名称 一种高效价人破伤风免疫血浆及其制备工艺 (57) 摘要 本发明涉及一种高效价人破伤风免疫血浆及 其制备工艺。通过对健康献浆员进行破伤。
2、风类毒 素免疫， 待献血员体内抗体达每毫升 12 国际单位 以上时， 对献浆员施行血浆单采术。 采得的免疫血 浆经常规检测后冻存。用本发明方法制得的免疫 血浆具有高效价、 高特异性、 高度安全以及在人体 内持续时间长等优势， 延长了伤者的被保护期， 增 加了免疫预防效果。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种高效价人破伤风免疫血浆， 其特征在于， 所述抗破伤风抗体效价 12IU/ml ； 丙 氨酸氨基转移酶(ALT赖氏法)25IU ； 破伤风表面抗原。
3、阴性 ； 梅毒检查阴性 ； HIV-1、 HIV-2 抗体检测阴性 ； HCV 抗体测定阴性 ； 血浆蛋白含量 6 (g/ml)。 2. 根据权利要求 1 所述高效价人破伤风免疫血浆的制备工艺， 其特征在于， 包括以下 步骤 ： 1) 按单采血浆技术规程进行， 选择身体健康、 符合国家单采血浆献浆标准的献血员， 经 乙型肝炎疫苗免疫后， 再以破伤风类毒素进行免疫， 其免疫程序为 ： 首次注射破伤风类毒素 0.5ml， 间歇 6-8 周再进行每二次注射 0.5ml ； 2) 待被免疫献血员体内抗破伤风抗体达 12IU/ml 以上时， 按照卫生部颁发的单采血浆 术规程对献血员实行血浆单采术 ； 3。
4、) 采用 S/D 病毒灭活与紫外线照射法相结合的方式对血浆进行灭菌， 无菌塑料血袋分 装， 采集 6 小时内 -20以下速冻， 并在 -10下储存 ； 4) 按照 2005 版药典三部中对血液制品原料血浆规程对上述产品进行各项指标的检 测。所的指标全部合格后才在规定温度下运往生产厂家。 3. 根据权利要求 2 所述高效价人破伤风免疫血浆的制备工艺， 其特征在于， 1) 步骤实 用的破伤风类毒素效价 2.5IU/ 支。 权 利 要 求 书 CN 102584993 A 2 1/3 页 3 一种高效价人破伤风免疫血浆及其制备工艺 技术领域 0001 本发明涉及一种血液制品原料及其制备方法。 具体涉。
5、及一种高效价人破伤风免疫 血浆及其制备工艺。 背景技术 0002 破伤风主要是由于破伤风杆菌通过破损的皮肤和黏膜 ( 如伤口、 骨折、 烧伤、 木刺 或锈针刺伤等 ) 而侵入人体， 并在伤口深部缺氧环境中生长繁殖， 产生大量破伤风杆菌外 毒素作用于神经系统， 引起全身特异性感染。此类破伤风也叫伤后破伤风， 其潜伏期不规 律， 一般 5-10 天， 个别达 20 天以上， 通常创伤部位越靠近神经中枢， 潜伏期愈短， 病情也愈 重 ； 此外还有一种特殊的破伤风， 是由于新生儿断脐所致， 俗称脐风、 撮口， 因其常在断脐后 7 日左右发病， 故又称 “七日风” 。 0003 破伤风杆菌是一种革兰氏阳。
6、性厌氧芽孢杆菌， 广泛存在于土壤和草食动物的粪便 中， 对环境有很强的抵抗力。 与其他病原菌不同， 破伤风杆菌或其产生的外毒素在伤口均不 产生明显的病理改变， 它是通过分泌外毒素并扩散致全身而导致发病， 其外毒素对神经有 特别的亲和力， 经吸收后分布于骨髓、 脑干等处。因其产生的外毒素毒力强， 发作快而易危 及生命， 因此必须及时治疗。 马血清破伤风抗毒素(Tetanus Antitoxin， TAT)和人破伤风免 疫球蛋白 (Human Tetanus Immunglobulin， TIG) 能预防创伤后破伤风的发生， 在给患者注 射后， 患者体内立即获得了抗伤风的抗体， 能特异的中和破伤风。
7、毒素， 使其失去毒性作用。 0004 马血清破伤风抗毒素是采集经破伤风类毒素免疫马所得的血浆， 经胃酶消化后纯 化制成的液体抗毒素球蛋白制剂。人类应用马血清抗毒素防治破伤风历史已近百年， 在我 国使用也长达半个多世纪， 该方法成功挽救了无数人生命， 但马血清蛋白对人体有很强的 过敏原性， 故马血清抗毒素常常引起下列两类过敏反应 ： 一是过敏性休克， 即注射过和注射 后数分钟至一小时内， 患者突然感到胸闷、 气急、 脉搏细数速、 血压下降、 发冷， 直至神志昏 迷。重者抢救不及， 可迅速死亡。此系 I 型过敏反应， 即人体曾注射或接触过马血清 ； 二是 血清病 (Serum Sikness)， 。
8、即注射 TAT 后 1-2 周出现荨麻疹、 发热、 淋巴结肿大， 脸部浮肿， 偶有蛋白尿、 呕吐及关节疼痛。有的可延时很长， 可能发展成过敏性脑炎及其他神经炎。此 系 III 型过敏反应。因此使用 TAT 时必须做皮试， 皮试阴性者， 注射时仍有可能发生过敏反 应。大量临床资料表明， TAT 引起过敏反应率真为 5 -30， 其中约 1/10 万的致死率。为 此， 上世纪 60 年代欧美各国相继研制出 TIG 用于临床， 并逐渐取代 TAT。 0005 人破伤风免疫球蛋白是采集经乙肝疫苗免疫后再经破伤风类毒素 (Tetanus Toxoid， TD) 免疫的供血浆者中具有高效价破伤风抗体的血浆。
9、， 经低温乙醇分离法提纯， 并 经病毒灭活处理的特异免疫球蛋白， 用于防治破伤风。 目前， 人破伤风免疫球蛋白已广泛应 用于临床并逐渐取代 TAT。由于 TIG 是人源性产品， 人体接种后不会发生超敏反应， 作用安 全， 在体内存留时间长， 预防和治疗效果都优于马血清。 该类产品尤其适用于对马血清严重 过敏者。 0006 作为人破伤风免疫球蛋白生产原料的破伤风免疫血浆， 尤其是高效价的免疫血浆 说 明 书 CN 102584993 A 3 2/3 页 4 无疑处于举足轻重的地位。由于免疫程序不尽合理、 病毒灭活工艺落后加上血源安全性得 不到保障等原因， 导致国内破伤风免疫血浆大多存在效价低、 。
10、安全性难以保证等诸多不足， 优质破伤风免疫血浆的生产能力十分有限， 已成为了制约破伤风人免疫球蛋白产量的主要 瓶颈。 0007 在血浆的病毒灭活方面， 目前国内血液制品厂家大多采用以下几种， 然而单一灭 活法均不能得到令人满意的效果 ： 比如 BMM 膜法能有效除去绝大部分病毒， 但其在处理大 分子量样品时易堵塞， 并且不能保下完全去除 B19 病毒， 缺乏经济实用性 ； 干热处理法能有 效灭活脂包膜和非脂包膜病毒， 但对 B19 病毒无效， 并且在温度控制和产品质量方面有很 高的要求 ； 酸孵放法也仅适用于丙种球蛋白。S/D 法对脂包膜病毒的灭活很有效， 相对来说 灭活病毒效果较彻底， 但近。
11、年有报道只用 S/D 方法进行病毒灭活处理和血液制品可传播甲 型肝炎， 因该法对非包膜病毒无效。而紫外线照射法能有效灭活非脂包膜病毒， 我们将 S/D 法与紫外照射法进行有机结合， 取得了十分满意的效果。 发明内容 0008 本发明的目的是针对国内现有破伤风免疫血浆效价低、 非脂包膜病毒难以完全除 去等不足， 提供一种效价高、 安全性好的高效价抗破伤风免疫血浆。 0009 实现本发明目的技术方案是 ： 0010 一种用于生产人破伤风免疫球蛋白的免疫血浆 ： 抗破伤风抗体效价 12 国际单 位 / 毫升 (IU/ml) ； 丙氨酸氨基转移酶 (ALT 赖氏法 ) 25 单位 ； 破伤风表面抗原 。
12、( 使用敏 感度为 1ng/ml 以下的试剂盒检测 ) 阴性质 ； 梅毒检查阴性 ； HIV-1、 HIV-2 抗体检测阴性 ； HCV 抗体测定阴性 ； 血浆蛋白含量 6 (g/ml)。 0011 本发明的另一目的是提供上述高效价抗破伤风免疫血浆的制备工艺。 0012 一种抗破伤风免疫血浆的制备工艺， 按单采血浆技术规程进行， 选择身体健康、 符 合国家单采血浆献浆标准的献血员， 经乙型肝炎疫苗免疫后， 再以破伤风类毒素进行免疫， 其免疫程序为 ： 首次注射破伤风类毒素0.5ml， 间歇6-8周再进行每二次注射0.5ml， 待被免 疫献血员体内抗破伤风抗体达 12IU/ml 以上时， 按照卫。
13、生部颁发的 “单采血浆术规程” 对献 血员实行血浆单采术。采用 S/D 病毒灭活与紫外线照射法相结合的方式对血浆进行灭菌， 无菌塑料血袋分装， 采集 6 小时内 -20以下速冻， 并在 -10下储存。按照 2005 版药典三 部中对血液制品原料血浆规程对上述产品进行各项指标的检测。 所的指标全部合格后才在 规定温度下运往生产厂家。 0013 所使用的破伤风类毒素的效价 2.5IU/ 支。 0014 本发明的有益效果如下 ： 0015 1、 对血源信息全部采用计算机管理， 公司与单采血浆站进行了微机联网， 在掌握 各个献血员具体情况的基础上制定出合理的免疫程序及血浆采用周期， 与国内外同类产品 。
14、比较， 该原料血浆中具有免疫球蛋白效价高， 单个献浆员可献浆时间长， 总体献浆量大等特 点， 免疫群体90以上破伤风免疫球蛋白效价高于12IU/ml， 持续时间超过18个月， 其混合 破伤风特免血浆的效价平均可达到 20IU/ml 以上。 0016 2、 单采血浆站均采用全套进口的美国HAEMONETICS公司的PCS全自动单采血浆机 和先进检测仪器。 原料血浆经过严格的检测程序后进行无菌分装， 能很好的保证血浆质量。 说 明 书 CN 102584993 A 4 3/3 页 5 0017 3、 我们在比较了 S/D 病毒灭活法、 BMM 膜法、 干热处理法与紫外线 / 光敏物质灭活 法的优缺。
15、点后， 制定出了改良 S/D 病毒灭活法， 采用有机溶剂和表面活动性剂进行协同处 理， 并结合紫外线照射法， 能有效除去有传染 HIV， HBV 和 HCV 等膜包膜病毒及 HAV 和 B19 等 非脂包膜病毒。此方法具有温和、 生产程序较简单、 技术容易掌握等优点， 而且对血浆制品 不会产生任何不良影响， 保持了血浆成分的天然属性。多次小试及中试证明该工艺基本稳 定， S/D 残留量达到国家标准， 产品的各项技术指标已达到甚至超过 OctapharmaAG 公司同 类产品。 0018 4、 本发明的生产工艺简单， 便于推广应用。 具体实施方式 0019 本发明的实施例如下 ： 0020 1、。
16、 按单采血浆技术规程进行， 选择身体健康、 符合国家单采血浆献浆标准的献血 员， 经乙型肝炎疫苗免疫后， 再以破僵风类毒素进行免疫， 其免疫程序为 ： 首次注射破伤风 类毒素进行免疫， 其免疫程序为 ： 首次注射破伤风类毒素 0.5ml， 隔 5 周后再注射 0.5ml。 0021 2、 待被免疫献血员体内抗破伤风抗体达 12IU/ml 以上时， 采用美国 HAEMONETICS 公司的 PCS 全自动单采血浆机完成采浆， 每次每人份采浆 500-600ML， 在此过程中加入 4 高效价枸橼酸钠 (C6H5NA3O7。2H2O) 作抗凝剂。所用抗凝剂无菌无热源且不含防腐剂的， PH7.2-7.。
17、6。在 10-20进行离心分出血浆， 将红细胞还输给献血员。由此得到抗破伤风免 疫血浆， 献血员体内破伤风抗体的含量越高， 所采集的免疫血浆质量越好。 0022 3、 在无菌净化室内采用改良 S/D 病毒灭活法对血浆进行灭菌 ： 采用有机溶剂和表 面活性剂进行协同处理， 用于灭活血浆制品中的脂包膜病毒如HIV， HBV和HCV等， 结合紫外 照射法以灭活血浆制品中的非脂包膜病毒如 HAV， B19 等。 0023 4、 采用无菌、 无热源塑料血袋分装， 采集6小时内-20以下速冻， 并在-10下储 存。按照 2005 版药典三部中对血液制品原料血浆规程对上述产品进行检测， 本发明的原料 血浆能。
18、达到以下指标 ： 外观淡黄色或黄色， 无纤维蛋白析出， 丙氨酸氨基转移酶 (ALT 赖氏 法)25单位 ； 破伤风表面抗原(使用敏感度为1NG/ML以下的试剂盒检测)阴性 ； 梅毒检 测阴性 ； HIV-1、 HIV-2 抗体检测阴性 ； HCV 抗体测定阴性。血浆蛋白含量 6 (g/ml) ； 抗 破伤风抗体效 12IU/ml， 液体血浆在 2-8运输， 冰冻血浆于度下运输。 0024 上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述， 并非对本发明的范 围进行限定， 在不脱离本发明设计精神前提下， 本领域普通工程技术人员对本发明技术方 案做出的各种变形和改进， 均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。 说 明 书 CN 102584993 A 5 。