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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610610810.8 (22)申请日 2016.07.29 (71)申请人 太仓市雅丰农场专业合作社 地址 215400 江苏省苏州市太仓市璜泾镇 雅鹿村 (72)发明人 张茜茜 (74)专利代理机构 北京高航知识产权代理有限 公司 11530 代理人 赵永强 (51)Int.Cl. C12N 9/50(2006.01) (54)发明名称 一种木瓜蛋白酶的提炼方法 (57)摘要 本发明公开了一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 其特征在于： 包括以下步骤： a、 将尼龙膜先在盐 酸。
2、中进行水解， 然后浸入甲醛溶液， 加入磷酸， 待 反应完全后， 浸入到壳聚糖溶液中， 室温反应后 进行烘干， 最后用醋酸和去离子水洗涤； b、 利用 超声波粉碎木瓜， 然后再用步骤a中的尼龙膜进 行粗酶分离； c、 利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤 维素和葡聚糖进行双水相萃取， 提纯精酶。 本发 明的有益效果是： 进行粗酶的分离， 省去了反复 沉淀步骤， 使活力回收大大提高， 由于原料本身 不含有害物质， 在操作过程中也没有引人有害杂 质， 得到的木瓜酶制品可以直接用于食品的深加 工。 权利要求书1页 说明书2页 CN 106148305 A 2016.11.23 CN 106148305 A 1。
3、.一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 其特征在于： 包括以下步骤： a、 将尼龙膜先在盐酸中进行水解， 然后浸入甲醛溶液， 加入磷酸， 待反应完全后， 浸入 到壳聚糖溶液中， 室温反应后进行烘干， 最后用醋酸和去离子水洗涤； b、 利用超声波粉碎木瓜， 然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离； c、 利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取， 提纯精酶。 2.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 其特征在于： 所述步骤a中盐酸 水解温度为20-23， 水解的时间控制在15-20小时之间。 3.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 其特征在于： 所述步骤a中甲醛 溶液、 。
4、磷酸、 壳聚糖溶液的质量比为20:0.5： 10。 4.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 其特征在于： 所述步骤a中醋酸 与去离子水的质量比为1:1。 5.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 其特征在于： 所述步骤a烘干的 温度控制在40-50之间。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106148305 A 2 一种木瓜蛋白酶的提炼方法 技术领域 0001 本发明涉及一种提炼方法， 尤其涉及一种木瓜蛋白酶的提炼方法。 背景技术 0002 木瓜蛋白酶简称木瓜酶， 又称为木瓜酵素， 是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁， 采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品， 它是。
5、一类含巯基(SH)蛋白酶， 具 有蛋白酶和酯酶的活性， 其广泛的特异性对动植物蛋白、 多肽、 酯、 酰胺等有较强的水解能 力， 能催化各种蛋白质， 水解成一系列长短不一的短肽或氨基酸， 还能把蛋白水解物合成为 类蛋白质， 由于它的热稳定性好及天然卫生安全等特点， 广泛应用于食品、 皮革、 纺织、 日化 和制药行业， 提高产品质量与档次， 降低成本。 0003 目前， 木瓜蛋白酶的提取纯化主要是采用沉淀法， 但是这种方法工艺繁琐， 产品中 仍然混有其它的蛋白酶， 纯度不高， 不能达到制药工业的需求。 随着人们对纯度和安全性提 出进一步的要求， 色谱技术应用于木瓜蛋白酶的纯化， 如离子交换色谱、 。
6、亲和色谱， 该类填 料特异性高， 纯化倍数高， 但分离速度受粒间扩散和低的轴向速率限制， 压降大， 分离时间 长， 处理量小， 不能使用高的加料速度。 而膜分离是一种根据分子的大小进行分离的技术， 特点是表面积大、 扩散路径短、 操作压低、 处理量大， 但传统膜分离技术只有分离相对分子 质量相差10倍以上的物系， 不能满足生化分离的需要。 0004 因此， 为解决上述问题， 特提供一种新的技术方案。 发明内容 0005 本发明提供一种木瓜蛋白酶的提炼方法。 0006 本发明采用的技术方案是： 一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 包括以下步骤： a、 将尼龙膜先在盐酸中进行水解， 然后浸入甲醛溶液， 加。
7、入磷酸， 待反应完全后， 浸入 到壳聚糖溶液中， 室温反应后进行烘干， 最后用醋酸和去离子水洗涤； b、 利用超声波粉碎木瓜， 然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离； c、 利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取， 提纯精酶。 0007 优选地， 所述步骤a中盐酸水解温度为20-23， 水解的时间控制在15-20小时之 间。 0008 优选地， 所述步骤a中甲醛溶液、 磷酸、 壳聚糖溶液的质量比为20:0.5： 10。 0009 优选地， 所述步骤a中醋酸与去离子水的质量比为1:1。 0010 优选地， 所述步骤a烘干的温度控制在40-50之间。 0011 本发明的有益效果是：。
8、 进行粗酶的分离， 省去了反复沉淀步骤， 使活力回收大大提 高， 由于原料本身不含有害物质， 在操作过程中也没有引人有害杂质， 得到的木瓜酶制品可 以直接用于食品的深加工。 说明书 1/2 页 3 CN 106148305 A 3 具体实施方式 0012 为了加深对本发明的理解， 下面将结合实施例对本发明作进一步详述， 该实施例 仅用于解释本发明， 并不构成对本发明的保护范围的限定。 0013 实施例1 一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 包括以下步骤： a、 将尼龙膜先在盐酸中进行水解， 盐酸水解温度为20， 水解的时间控制在15小时， 然 后浸入20ml甲醛溶液， 加入0.5ml磷酸， 待反应完全。
9、后， 浸入到10ml壳聚糖溶液中， 室温反应 后进行烘干， 烘干的温度控制在40， 最后用50ml醋酸和50ml去离子水洗涤； b、 利用超声波粉碎木瓜， 然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离； c、 利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取， 提纯精酶。 0014 实施例2 一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 包括以下步骤： a、 将尼龙膜先在盐酸中进行水解， 盐酸水解温度为22， 水解的时间控制在17小时， 然 后浸入20ml甲醛溶液， 加入0.5ml磷酸， 待反应完全后， 浸入到10ml壳聚糖溶液中， 室温反应 后进行烘干， 烘干的温度控制在45， 最后用50ml醋酸和50ml去离。
10、子水洗涤； b、 利用超声波粉碎木瓜， 然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离； c、 利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取， 提纯精酶。 0015 实施例3 一种木瓜蛋白酶的提炼方法， 包括以下步骤： a、 将尼龙膜先在盐酸中进行水解， 盐酸水解温度为23， 水解的时间控制在20小时， 然 后浸入20ml甲醛溶液， 加入0.5ml磷酸， 待反应完全后， 浸入到10ml壳聚糖溶液中， 室温反应 后进行烘干， 烘干的温度控制在50， 最后用50ml醋酸和50ml去离子水洗涤； b、 利用超声波粉碎木瓜， 然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离； c、 利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取， 提纯精酶。 0016 本发明的有益效果是： 进行粗酶的分离， 省去了反复沉淀步骤， 使活力回收大大提 高， 由于原料本身不含有害物质， 在操作过程中也没有引人有害杂质， 得到的木瓜酶制品可 以直接用于食品的深加工。 0017 以上所述， 仅是本发明的较佳实施例而已， 并非是对本发明作任何其他形式的限 制， 而依据本发明的技术实质所作的任何修改或等同变化， 仍属于本发明所要求保护的范 围。 说明书 2/2 页 4 CN 106148305 A 4 。