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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510171960.9 (22)申请日 2015.04.13 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105087769 A (43)申请公布日 2015.11.25 (73)专利权人 厦门艾德生物医药科技有限公司 地址 361000 福建省厦门市海沧区新阳街 道翁角路289号科创中心2号厂房5层 (72)发明人 卢皇彬林清华林煌艺曾伶俐 阮力宋庆涛 (74)专利代理机构 厦门市首创君合专利事务所 有限公司 35204 代理人 张松亭 (51)Int.Cl. C12。
2、Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6841(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 103409504 A,2013.11.27, CN 104195246 A,2014.12.10, CN 103409504 A,2013.11.27, Shelly Gunn， et al.Clinical array- based karyotyping of breast cancer with equivocal HER2 status resolves gene copy number and reveals chromosome 17 co。
3、mplexity. BMC Cancer .2010, (第10期),396 （1-8页） . Shelly Gunn， et al.Clinical array- based karyotyping of breast cancer with equivocal HER2 status resolves gene copy number and reveals chromosome 17 complexity. BMC Cancer .2010, (第10期),396 （1-8页） . De-Hua Yu， et al.Oncogenic HER2 fusions in gastric ca。
4、ncer. Journal of Translational Medicine .2015, (第13期),116 （1-15页） . De-Hua Yu， et al.Oncogenic HER2 fusions in gastric cancer. Journal of Translational Medicine .2015, (第13期),116 （1-15页） . 审查员 刘东吉 (54)发明名称 一种用于检测HER-2基因扩增的探针和试剂 盒 (57)摘要 本发明公开了检测HER-2基因扩增的荧光原 位 杂 交 探 针 和 试 剂 盒 ， 涉 及 一 种 F I S H (Fluo。
5、rescenceinsituhybridization)试剂 盒。 所述检测HER-2基因扩增的荧光原位杂交试 剂盒包括LSPHER-2/CSP17探针和DAPI复染液； 所用探针采用随机引物法标记， 为荧光原位杂交 双色探针， HER-2基因由红色信号指示， 内对照 CSP17由绿色信号指示。 以FFPE组织切片为检测 样本， 采用FISH方法检测人类HER-2基因扩增状 态， 可用于浸润性乳腺癌、 胃癌的分子标志物诊 断， 辅助临床用药的选择。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图2页 CN 105087769 B 2019.02.12 CN 105087769 B 1.检测HER。
6、-2基因扩增的荧光原位杂交双色探针， 其特征在于包括LSP HER-2/CSP17探 针， 其中， 所述HER-2/CSP17探针采用随机引物法分别标记HER-2 DNA和CSP17 DNA模板序列 而得， 为荧光原位杂交双色探针， 所述的探针标记时采用的HER-2 DNA为克隆号RP11-2456M7的BAC克隆， 所述的探针标记时采用的CSP17 DNA为17号染色体着丝粒特异的 -卫星DNA， 其序列 为： gggaaatatc ttcaaataaa aaccagacag aatcattctc agaaaattct ttgtgatgtg tgcgttcaac tcacatagtt taa。
7、cctttct tttcatagag cagtttggaa acactctgtt tgtaaagtct gcaagtggat atatggaccg cattgaggcc ttcgttggaa acgggatttc ttcatttcat gctagacaga agaattctca gtaacttctt tgtgctgtgt gtattcaact cacagagtgg aacgtccctt tgcacagagc agatttgaaa cactcttttt gtggaatttg caagtggaga tttcaagcga tttgatgcca acagtagaaa。 2.如权利要求1所述的检测HER。
8、-2基因扩增的荧光原位杂交双色探针， 其特征在于： HER-2和CSP17探针之间的质量比为1： 1。 3.一种试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1中所述的检测HER-2基因扩增的荧光原位 杂交双色探针， 和DAPI复染液， 这2种组份分别装于不同管内。 4.对HER-2基因进行检测的方法， 采用如权利要求1至2任一项所述的探针， 用于非疾病 诊断和治疗目的， 包括如下步骤： 1） 对FFPE样本进行预处理， 2） 在避光条件下， 将探针与玻片上的待测组织进行变性、 杂交， 3） 在避光条件下， 对玻片进行洗涤， 4） 在避光条件下， 使用复染液对玻片上的杂交区域进行复染， 5） 在避光条件。
9、下， 使用荧光显微镜观察玻片的杂交区域， 进行结果判读。 5.如权利要求4所述的对HER-2基因进行检测的方法， 其特征在于： 步骤1） 包括如下步 骤： （1） 烤片 （2） 二甲苯脱蜡 （3） 梯度乙醇水化 （4） 预处理液处理 （5） 蛋白酶K消化 （6） 梯度乙 醇逐步脱水。 6.如权利要求4所述的对HER-2基因进行检测的方法， 其特征在于： 步骤2） 包括以下步 骤： （1） 打开杂交仪， 设定或选择已保存的程序： 85变性5 min， 37杂交过夜； （2） 将杂交仪的湿条用水浸湿， 放入杂交仪中， 使杂交在一定的湿度条件下进行； （3） 取10 L探针加在样本中心区域， 小心盖。
10、上盖玻片， 避免产生气泡， 然后用封片胶 （RUBBER CEMENT） 封住盖玻片； （4） 将玻片轻放于杂交仪中， 启动杂交程序。 7.如权利要求4所述的对HER-2基因进行检测的方法， 其特征在于： 步骤3） 包括以下步 骤： （1） 杂交结束后， 从杂交仪中取出玻片， 用镊子去掉封片胶； （2） 室温下， 将玻片浸入2SSC溶液中， 浸泡5 min， 脱去盖玻片； （3） 慢洗方案步骤： 将玻片浸入预热至46的慢洗洗涤液中， 洗涤7 min； 快洗方案步 骤： 将玻片浸入预热至72的快洗洗涤液中， 洗涤2 min； 权利要求书 1/2 页 2 CN 105087769 B 2 （4） 。
11、逐步脱水： 将玻片依次浸入70%乙醇1 min、 85%乙醇1 min、 无水乙醇3 min， 取出平 放于超净工作台或通风橱中晾干。 8.如权利要求4所述的对HER-2基因进行检测的方法， 其特征在于： 步骤4） 包括以下步 骤： （1） 取10 L DAPI复染液加在样本中心区域， 小心盖上盖玻片并压紧， 避免产生气泡； （2） 室温下， 静置15 min。 9.如权利要求4所述的对HER-2基因进行检测的方法， 其特征在于： 步骤5） 包括以下步 骤： （1） 在油镜下， 对红、 绿荧光信号进行计数， 计数30个细胞， 分别计算Ratio值和每个细胞平均的HER-2信号数； （2） 根据。
12、结果判读依据得出结论。 权利要求书 2/2 页 3 CN 105087769 B 3 一种用于检测HER-2基因扩增的探针和试剂盒 技术领域 0001 本发明属于生物技术领域， 具体地涉及一种用于检测HER-2基因扩增的FISH试剂 盒。 背景技术 0002 人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2， HER-2)基 因位于染色体17q12-q21， 是表皮生长因子受体(EGFR)家族成员， 其编码蛋白具有酪氨酸蛋 白激酶活性， 与EGFR高度同源。 研究证实， HER-2介导的信号传导与多种肿瘤的形成、 增殖、 转移、 侵袭及放化。
13、疗耐药有关。 以往其相关研究多集中于乳腺癌和卵巢癌。 近年的研究显 示， HER-2在胃癌中也存在高表达， 有望成为一个新的基因治疗靶点。 0003 体外细胞培养研究显示， 在乳腺癌细胞中， HER-2基因拷贝数明显增加， HER-2的过 度表达促进了乳腺癌的发生、 发展和恶性转化。 在HER-2过表达的乳腺癌中， 90以上具有 基因扩增， 提示基因扩增是多数乳腺癌HER-2过表达的前提。 最新研究表明， 2530的 原发性浸润性乳腺癌存在HER-2基因扩增和蛋白过表达的现象。 HER-2的高表达可提高乳腺 癌细胞的转移潜能， HER-2扩增和随后的基因产物过表达已经成为乳腺癌预后和治疗的标 。
14、记。 胃癌中存在HER-2基因过表达于1986年首次被报道。 在胃癌中， HER2过表达所占的比例 波动在635之间。 截至目前， 大量临床均证实HER2蛋白在胃癌中是重要的预后指标。 近年来， 随着医疗技术的进步， 以HER-2为靶点的靶向治疗药物曲妥珠单抗(罗氏制药， 中文商品名： 赫赛汀)。 该药物用于治疗HER-2高表达的乳腺癌患者， 不仅显著减少了肿瘤的 转移和复发率， 也提高了患者的生存质量。 随机对照临床研究已证实， 抗HER2单克隆抗体曲 妥珠单抗联合化疗在HER2过表达晚期胃癌中的疗效显著优于单纯化疗。 赫赛汀以HER-2为 治疗靶点， 若要筛选可受益于赫赛汀治疗的患者， 必。
15、须进行HER-2基因检测。 0004 目 前 ，临 床 上 检 测 H E R - 2 状 态 的 常 用 方 法 有 免 疫 组 织 化 学 法 (immunohistochemistry， IHC)和荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization， FISH)。 IHC是基于抗体在蛋白(基因产物)水平上检测HER-2的状态， 该法易 于开展， 已被广泛使用， 但技术本身受组织固定、 抗原修复、 一抗的灵敏度和特异度、 染色结 果评定等多种变量的影响， 使得结果不够准确和稳定， 尤其对HER-2轻、 中度表达的样本易 产生假阴性。 FISH是基于探针直接。
16、在DNA(基因)水平上检测HER-2的状态， 该法灵敏、 准确、 可靠， 结果具有高度的可重复性。 但FISH依赖于制作的探针的质量。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种用于检测HER-2基因扩增的FISH探针和试剂盒。 本试 剂盒基于荧光原位杂交原理， 采用双荧光探针技术， 用于检测人类HER-2基因扩增。 试剂盒 由HER-2/CSP17探针和DAPI复染液两种成分组成， HER-2基因由红色信号指示， 内对照CSP17 由绿色信号指示。 组织切片样本经过一系列预处理步骤后在杂交仪上与探针共变性、 杂交， 然后在荧光显微镜下实现对样本HER-2基因扩增状态的检测。 说明书 1/7。
17、 页 4 CN 105087769 B 4 0006 本发明HER-2/CSP17探针采用随机引物法分别标记HER-2DNA和CSP17DNA模板序列 而得， 为荧光原位杂交双色探针， 所述的探针标记时采用的HER-2DNA为克隆号为RP11- 2456M7的BAC克隆， 所述的探针标记时采用的CSP17DNA为17号染色体着丝粒特异的 -卫星 DNA， 其序列为： 0007 gggaaatatc ttcaaataaa aaccagacag aatcattctc agaaaattct ttgtgatgtg tgcgttcaac tcacatagtt taacctttct tttcatagag 。
18、cagtttggaa acactctgtt tgtaaagtct gcaagtggat atatggaccg cattgaggcc ttcgttggaa acgggatttc ttcatttcat gctagacaga agaattctca gtaacttctt tgtgctgtgt gtattcaact cacagagtgg aacgtccctt tgcacagagc agatttgaaa cactcttttt gtggaatttg caagtggaga tttcaagcga tttgatgcca acagtagaaa 0008 本试剂盒的组成详见表1。 0009 表1试剂盒组成 0010 。
19、0011 探针敏感性 0012 分析50个处于中期分裂相的细胞的100条17号染色体， 至少有98条(98)染色体 分别显示1个红色荧光信号(HER2位点)和1个绿色荧光信号(CSP17着丝粒位点)。 0013 探针特异性 0014 分析50个处于中期分裂相的细胞的100条17号染色体， 至少有98条(98)染色体 在HER2基因位点区域和着丝粒位点区域分别显示红色荧光信号和绿色荧光信号。 0015 本发明的有益效果是： 0016 本发明基于荧光原位杂交原理， 采用双荧光位点特异性探针技术， 可以快捷特异 地检出FFPE样本中的HER-2基因扩增状态， 可以间接辅助临床筛选出可受益于赫赛汀靶向。
20、 药物治疗的乳腺癌和胃癌患者， 可以大大地降低医疗成本和费用， 减少医疗资源的浪费， 延 长部分患者生存期， 提高患者生存质量。 本发明所用探针采用随机引物法标记， 比活性高， 信号强， 且本发明采用克隆号为RP11-2456M7的BAC克隆， 以及17号染色体着丝粒特异的 - 卫星DNA作为模板， 申请人意外发现以该这两个模板获得的HER-2/CSP17探针， 用于检测 FFPE样本的HER-2基因扩增时， 灵敏度、 准确性较国内同类产品高， 且结果稳定。 附图说明 0017 图1实施例3HER-2基因FISH检测阴性镜检图 0018 图2实施例3HER-2基因FISH检测阳性(点状扩增)镜。
21、检图 0019 图3实施例3HER-2基因FISH检测阳性(簇状扩增)镜检图 0020 图4实施例4HER-2基因FISH检测阳性(簇状扩增)镜检图 0021 图5实施例4HER-2基因FISH检测阳性(点状扩增)镜检图 说明书 2/7 页 5 CN 105087769 B 5 0022 图6实施例4HER-2基因FISH检测阴性镜检图 具体实施方式 0023 以下结合具体实施例， 对本发明进一步阐述。 应理解， 这些实施例仅用于本发明而 不用于限制本发明的范围。 除非另有定义或说明， 本专利所述的科学技术术语与本领域普 通技术人员所理解具有相同的含义。 0024 实施例1HER-2/CSP1。
22、7探针的制备 0025 使用Invitrogen BioPrime DNA Labeling System(Invitrogen 18094-011)试剂 盒， 采用随机引物标记法制备HER-2/CSP17探针， 包括以下流程： 0026 1.在避光环境下标记探针： 从-20取出试剂盒和相关试剂， 冰上解冻， 解冻后瞬 时离心， 然后放回冰上。 探针标记参考体系见表2。 0027 表2 探针标记参考体系 0028 体系10 L20 L25 L DNAN(40-80ng)N(80-160ng)N(100-200ng) 0029 2.5Buffer4 L8 L10 L dH2O1-N2-N2.5-。
23、N 缺C/T dNTP1.6 L3.2 L4 L Cy3-dCTP/FITC-dUTP3.2 L6.4 L8 L Klenow Fragment(40U/ L)0.2 L0.4 L0.5 L 0030 该探针标记时采用的HER-2BAC DNA为克隆号RP11-2546M7的BAC克隆， 0031 该探针标记时采用的CSP17 -卫星DNA序列为： 0032 gggaaatatc ttcaaataaa aaccagacag aatcattctc agaaaattct ttgtgatgtg tgcgttcaac tcacatagtt taacctttct tttcatagag cagtttgga。
24、a acactctgtt tgtaaagtct gcaagtggat atatggaccg cattgaggcc ttcgttggaa acgggatttc ttcatttcat gctagacaga agaattctca gtaacttctt tgtgctgtgt gtattcaact cacagagtgg aacgtccctt tgcacagagc agatttgaaa cactcttttt gtggaatttg caagtggaga tttcaagcga tttgatgcca acagtagaaa 0033 具体操作如下： 0034 1.一步(冰上) 0035 0036 吹打混匀后， 于。
25、PCR仪上95变性10min， 立即置于冰上5min， 然后瞬时离心。 0037 二步(冰上) 说明书 3/7 页 6 CN 105087769 B 6 0038 0039 注： 荧光素最后加， 剩余的荧光素于-20避光保存。 0040 吹打混匀后， 于PCR仪上37反应3h以上， 加入2.5 L Stop Buffer终止反应2- 3min， 醋酸钠、 乙醇沉淀和浓缩， 重悬于5 L ddH2O中2.瞬时离心后， 取5 L红色荧光探针、 5 L绿色荧光探针、 5 L 1mg/mL人类Cot-1DNA、 85 L杂交液(比例为1:1:1:17)， 即成HER2/ CSP17探针。 0041 2。
26、.-20避光保存。 0042 实施例2试剂配制 0043 (1)预处理液(pH 7.0)配制： 称22.6g Na2EDTA-2H2O和6.34g Tris于800mL去离子 水中， 溶解后调节pH至7.0， 并定容至1L。 2-8密封保存12个月， 若试剂出现混浊或污染， 请 立即丢弃。 0044 (2)20SSC溶液(pH 7.0)配制： 称88g柠檬酸钠和176g NaCl于800mL去离子水中， 溶解后调节pH至7.0， 并定容至1L。 2-8密封保存12个月， 若试剂出现混浊或污染， 请立即 丢弃。 0045 (3)2SSC溶液(pH 7.0)配制： 用去离子水将20SSC溶液稀释1。
27、0倍， 调节pH至 7.0。 2-8密封保存12个月， 若试剂出现混浊或污染， 请立即丢弃。 0046 (4)20mg/mL蛋白酶K母液配制： 称取100mg蛋白酶K干粉于5mL 2SSC溶液pH 7.0) 中， 轻轻摇动， 不要涡旋混合， 直至完全溶解。 按每管400 L的量进行分装， -20储存， 避免 反复冻融。 0047 (5)慢洗洗涤液配制： 取40 L NP-40于40mL 2SSC溶液(pH 7.0)中， 充分混匀。 现 配现用。 0048 快洗洗涤液配制： 取120 L NP-40于40mL 2SSC溶液(pH 7.0)中， 充分混匀。 现配 现用。 0049 (6)70、 8。
28、5乙醇配制： 分别将700mL、 850mL无水乙醇用去离子水稀释至1000mL， 室温密封保存。 试剂配制1个月后或用于处理20张玻片后应丢弃， 若试剂出现混浊或污染， 请立即丢弃。 0050 实施例3 0051 应用一种用于检测FFPE样本中HER-2基因扩增的FISH试剂盒检测临床样本 0052 取2014年2月2014年8月送我公司的80例临床乳腺癌石蜡包埋组织切片样本进 行HER-2基因扩增FISH检测。 检测包括以下步骤： 0053 1、 对FFPE样本进行预处理， 具体包括以下步骤： 0054 (1)烤片 0055 (2)二甲苯脱蜡 0056 (3)梯度乙醇水化 0057 (4)。
29、预处理液处理20min 说明书 4/7 页 7 CN 105087769 B 7 0058 (5)蛋白酶K消化5-15min。 0059 (6)梯度乙醇逐步脱水 0060 2、 在避光条件下， 将探针与玻片上的待测组织进行变性、 杂交， 具体包括以下步 骤： 0061 (1)打开杂交仪， 设定或选择已保存的程序： 85变性5min， 37杂交过夜(12 16h)。 0062 (2)将杂交仪的湿条用水浸湿， 放入杂交仪中， 使杂交在一定的湿度条件下进行。 0063 (3)取10 L探针加在样本中心区域， 小心盖上盖玻片并压紧， 避免产生气泡， 然后 用封片胶(RUBBER CEMENT)封住盖玻。
30、片。 0064 (4)将玻片轻放于杂交仪中， 启动杂交程序。 0065 3、 在避光条件下， 对玻片进行洗涤， 具体包括以下步骤： 0066 (1)杂交结束后， 从杂交仪中取出玻片， 用镊子去掉封片胶。 0067 (2)室温下， 将玻片浸入2SSC溶液中， 浸泡5min， 脱去盖玻片。 0068 (3)慢洗方案步骤： 将玻片浸入预热至46的慢洗洗涤液中， 洗涤7min； 快洗方案 步骤： 将玻片浸入预热至72的快洗洗涤液中， 洗涤2min。 0069 (4)逐步脱水： 将玻片依次浸入70乙醇(1min)、 85乙醇(1min)、 无水乙醇 (3min)， 取出平放于超净工作台或通风橱中晾干。 。
31、0070 4、 在避光条件下， 使用复染液对玻片上的杂交区域进行复染， 具体包括以下步骤： 0071 (1)取10 L DAPI复染液加在样本中心区域， 小心盖上盖玻片并压紧， 避免产生气 泡。 0072 (2)室温下， 静置约15min。 0073 5、 在避光条件下， 使用荧光显微镜观察玻片的杂交区域， 进行结果判读， 具体包括 以下步骤： 0074 (1)在油镜(100)下， 对红、 绿荧光信号进行计数。 0075 (2)计数30个细胞， 分别计算Ratio值(Ratio值30个细胞核中红色信号总数/30 个细胞核中绿色信号总数)和每个细胞平均的HER-2信号数(HER-2信号数30个细。
32、胞核中 红色信号总数/30个细胞)。 0076 (3)根据结果判读依据得出结论。 0077 结果判读可依据2013年ASCO/CAPHER-2检测指南进行， 具体如下： 0078 a.Ratio2.0或Ratio2.0但HER-2信号数6.0为阳性结果， 提示该样本HER-2基 因发生扩增； 0079 b.Ratio2.0且HER-2信号数4.0为阴性结果， 提示该样本无HER-2基因扩增； 0080 c.Ratio2.0且4.0HER-2信号数6.0时为不确定结果， 需增加计数细胞至100 个， 或重做实验来判断最终结果。 0081 检测结果 0082 本次实验对80例乳腺癌的组织标本进行了。
33、HER-2基因扩增的FISH检测。 共检测出 19例发生扩增， 比例为23.8， 具体的扩增类型情况见表3， 相应镜检图如图13所示。 0083 表3 HER-2扩增类型与扩增例数 说明书 5/7 页 8 CN 105087769 B 8 0084 HER-2基因扩增类型扩增例数比例 点状扩增526.3 簇状扩增1473.7 合计19100 0085 实施例4 0086 对照试剂为获CFDA批准的国内某同类产品 0087 采用本发明试剂， 按照实施例3的方法对345例乳腺癌和胃癌进行检测， 结果如表4 0088 表4 临床样本HER-2基因扩增检测结果汇总表 0089 0090 本发明试剂与对。
34、照试剂的检测结果符合率 0091 在本临床试验中， 对于同一例肿瘤病理组织样本， 同时采用本发明HER-2基因扩增 检测试剂盒与对照试剂进行双盲对比检测试验。 0092 对于本发明HER-2基因扩增检测试剂盒与对照试剂均得到检测结果的395例浸润 性乳腺癌和胃癌样本， 两种试剂检测结果均为HER-2基因扩增阳性的样本数为122例； 本发 明HER-2基因扩增试剂盒检测为HER-2阳性， 而对照试剂检测为不确定的样本数为1例； 本发 明HER-2基因扩增试剂盒检测为HER-2阳性， 而对照试剂检测为HER-2阴性的样本数为4例； 本发明HER-2基因扩增试剂盒检测为不确定， 而对照试剂检测为HE。
35、R-2阳性的样本数为0例； 本发明HER-2基因扩增试剂盒与对照试剂同时检测为HER-2不确定的样本数为1例； 本发明 HER-2基因扩增试剂盒检测为不确定， 而对照试剂检测为HER-2阴性的样本数为0例； 本发明 HER-2基因扩增检测试剂盒检测为HER-2阴性， 而对照试剂检测为HER-2阳性的样本数为2 例； 本发明HER-2基因扩增检测试剂盒检测为HER-2阴性， 而对照试剂检测为不确定的样本 数为0例； 两种方法检测结果均为HER-2阴性的样本数为265例(表4)。 0093 表5 本发明试剂和对照试剂对乳腺癌和胃癌临床样本的检测结果对比情况 说明书 6/7 页 9 CN 10508。
36、7769 B 9 0094 0095 根据表5所列检测数据， 两种试剂对395例乳腺癌和胃癌临床肿瘤病理组织样本的 检测结果的符合率为： 0096 两种试剂检测的基因扩增阳性符合率为a/(a+d+g)98.4。 0097 两种试剂检测的基因扩增阴性符合率为i/(c+f+i)98.5。 0098 两种试剂检测结果的总符合率为(a+e+i)/(a+b+c+d+e+f+g+h+i)98.2。 0099 本发明试剂与对照试剂检测不一致样本的验证结果 0100 由于试剂灵敏度、 肿瘤异质性、 不同实验人员结果判读经验和标准等因素的影响， 不同试剂对同一例肿瘤病理组织样本的检测结果可能会不一致。 在本临床。
37、试验中， 对于同 一例肿瘤病理组织样本用本发明试剂和对照试剂检测结果不一致的7例样本(乳腺癌7例， 胃癌0例)， 选用其它手段验证。 本发明试剂与其它验证检测结果一致的为5例， 对照试剂与 其它验证检测结果一致的为2例(表5)， 说明本发明试剂与实际结果的符合率更高。 0101 表6 本发明试剂和对照试剂不一致样本验证结果 0102 样本编号本发明试剂对照试剂其他验证手段 XH037-+ XH038-+- XH050+-+ XH073+- XH177+-+ XH213+？+ XH333+-+ 0103 注： 表中 “+” 、“-” 、“？ ” 分别表示检测结果为阳性、 阴性、 不确定。 说明书 7/7 页 10 CN 105087769 B 10 0001 序列表 1/1 页 11 CN 105087769 B 11 图1 图2 图3 说明书附图 1/2 页 12 CN 105087769 B 12 图4 图5 图6 说明书附图 2/2 页 13 CN 105087769 B 13 。