技术领域
本发明涉及白杨素技术领域，特别涉及一种链烃白杨素衍生物的制备方法及其应用。
背景技术
白杨素是一类具有广泛药理活性的黄酮类天然产物。研究表明白杨素能够抑制肿瘤细胞增殖，能够抑制人未分化甲状腺癌细胞HTH7和KAT18，且呈剂量和时间依赖性，能诱导肺癌细胞凋亡，荧光定量RT-PCR反应、比色测定以及Wexternblotting分析结果表明，白杨素是通过下调Bcl-2家族蛋白的表达和激活caspase-3和-9来引发肺腺癌上皮细胞的凋亡，相关研究表明白杨素还能逆转肿瘤细胞多药耐药作用。但是白杨素水溶性和脂溶性都较差，肠道吸收甚少或者完全不吸收，且5，7位羟基在体内易被糖基化代谢而降低活性，从而限制其临床应用。因此，有必要对白杨素结构进行修饰改进，解决上述技术问题。
发明内容
鉴以此，本发明提出一种链烃白杨素衍生物的制备方法，解决上述技术问题。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种链烃白杨素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取白杨素，加入有机溶剂，水浴加热溶解后，冷却至35～45℃，制得白杨素溶液；
S2、用有机溶剂稀释酰氯，制得酰氯溶液，滴加至白杨素溶液，得反应液A；
S3、用有机溶剂稀释三乙胺，制得三乙胺溶液，滴加至反应液A中，反应25～35min；
S4、加入第一次水，搅拌，浓缩，加入乙酸乙酯，加入第二次水，萃取，有机层进行浓缩；
S5、浓缩后分别用乙醇、乙酸乙酯和石油醚洗涤，旋干，得目标化合物。
进一步的，所述酰氯为癸酰氯、正丁酰氯、正己酰氯、正辛酰氯、十二酰氯、十四酰氯中至少一种。
进一步的，所述有机溶剂为丙酮、四氢呋喃、二氧六环、氯仿中一种。
进一步的，在S1步骤中，白杨素和有机溶剂的质量体积比mg/ml为50：35～45，优选为50：40。
进一步的，在S2步骤中，白杨素和酰氯质量体积比mg/ml为50：0.15～0.2，优选为50：0.18；酰氯和有机溶剂的体积比为0.15～0.2：0.8～1.2，优选为0.18：1.0。
进一步的，在S3步骤中，白杨素和三乙胺的质量体积比mg/ml为50：0.08～0.12，优选为50：0.10；三乙胺和有机溶剂的体积比为0.08～0.12：0.8～1.2，优选为0.1：1.0。
进一步的，在S4步骤中，白杨素和第一次水、乙酸乙酯以及第二次水的质量体积比mg/ml/ml/ml为50：0.8～1.2：2～3：2～3，优选为50：1.0：2.5：2.5。
进一步的，在S1步骤中，冷却温度至40℃；在S3步骤中，反应时间为30min。
进一步的，在S4步骤中，搅拌时间为8～12min，优选为10min。
本发明提供一种链烃白杨素衍生物的制备方法制得的链烃白杨素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明链烃白杨素衍生物的制备方法，制得链烃白杨素衍生物纯度好、产率高，对癌细胞的半数抑制浓度小，抗癌活性高，可更好应用于制备抗癌药物。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
一种链烃白杨素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取白杨素，加入有机溶剂，水浴加热溶解后，冷却至35～45℃，优选为40℃，制得白杨素溶液；白杨素和有机溶剂的质量体积比mg/ml为50：35～45，优选为50：40；
S2、用有机溶剂稀释酰氯，制得酰氯溶液，滴加至白杨素溶液，得反应液A；白杨素和酰氯质量体积比mg/ml为50：0.15～0.2，优选为50：0.18；酰氯和有机溶剂的体积比为0.15～0.2：0.8～1.2，优选为0.18：1.0；
S3、用有机溶剂稀释三乙胺，制得三乙胺溶液，滴加至反应液A中，反应25～35min，优选为30min；白杨素和三乙胺的质量体积比mg/ml为50：0.08～0.12，优选为50：0.10；三乙胺和有机溶剂的体积比为0.08～0.12：0.8～1.2，优选为0.1：1.0；
S4、加入第一次水，搅拌8～12min，优选为10min，浓缩，加入乙酸乙酯，加入第二次水，萃取，有机层进行浓缩；白杨素和第一次水、乙酸乙酯以及第二次水的质量体积比mg/ml/ml/ml为50：0.8～1.2：2～3：2～3，优选为50：1.0：2.5：2.5；
S5、浓缩后分别用乙醇、乙酸乙酯和石油醚洗涤，旋干，得目标化合物；
上述有机溶剂为丙酮、四氢呋喃、二氧六环、氯仿中一种，优选丙酮。
本发明的白杨素与酰氯的反应通式如下：
实施例1
一种链烃白杨素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
S1、称量白杨素50mg于100mL单口圆底烧瓶，加入无水四氢呋喃35ml，水浴加热溶解后，冷却至35℃，制得白杨素溶液；
S2、用0.8mL无水四氢呋喃稀释癸酰氯0.15ml，滴加至白杨素溶液里，TLC分析，有新点出现，同时，发现有大量白杨素未反应和酰氯的气味，得反应液A；
S3、用0.8mL无水四氢呋喃稀释三乙胺0.12mL，滴加至反应液A中，反应25min后，TLC分析，白杨素原料消失，反应完毕；
S4、加入0.8mL水，搅拌8min，浓缩，加入乙酸乙酯2ml，加入水2ml，萃取，分为3层，有机层进行浓缩；
S5、浓缩后分别用乙醇、乙酸乙酯和石油醚洗涤，直到TLC分析该固体只显示一个点，旋干，得到淡黄色固体，并测试其抗肿瘤活性。
实施例2
一种链烃白杨素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
S1、称量白杨素50mg于100mL单口圆底烧瓶，加入无水二氧六环45ml，水浴加热溶解后，冷却至45℃，制得白杨素溶液；
S2、用1.2mL无水二氧六环稀释癸酰氯0.2ml，滴加至白杨素溶液里，TLC分析，有新点出现，同时，发现有大量白杨素未反应和酰氯的气味，得反应液A；
S3、用1.2mL无水二氧六环稀释三乙胺0.08mL，滴加至反应液A中，反应35min后，TLC分析，白杨素原料消失，反应完毕；
S4、加入1.2mL水，搅拌12min，浓缩，加入乙酸乙酯3ml，加入水3ml，萃取，分为3层，有机层进行浓缩；
S5、浓缩后分别用乙醇、乙酸乙酯和石油醚洗涤，直到TLC分析该固体只显示一个点，旋干，得到淡黄色固体，并测试其抗肿瘤活性。
实施例3
一种链烃白杨素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
S1、称量白杨素50mg于100mL单口圆底烧瓶，加入无水丙酮40ml，水浴加热溶解后，冷却至40℃，制得白杨素溶液；
S2、用1mL无水丙酮稀释癸酰氯0.18ml，滴加至白杨素溶液里，TLC分析，有新点出现，同时，发现有大量白杨素未反应和酰氯的气味，得反应液A；
S3、用1mL无水丙酮稀释三乙胺0.1mL，滴加至反应液A中，反应30min后，TLC分析，白杨素原料消失，反应完毕；
S4、加入1mL水，搅拌10min，浓缩，加入乙酸乙酯2.5ml，加入水2.5ml，萃取，分为3层，有机层进行浓缩；
S5、浓缩后分别用乙醇、乙酸乙酯和石油醚洗涤，直到TLC分析该固体只显示一个点，旋干，得到淡黄色固体，并测试其抗肿瘤活性。
一、根据实施例3的制备方法，将反应物癸酰氯替换正丁酰氯、正己酰氯、正辛酰氯、十二酰氯、十四酰氯，制备不同链烃白杨素衍生物，计算产率，检测其纯度，并测试产物对癌细胞的半数抑制浓度(IC50)，结果如下：
反应物 产物 产率 纯度 IC50(μmol/L) 实施例1 癸酰氯 正癸酸白杨素酯 82％ 99.8％ 17.84 实施例2 癸酰氯 正癸酸白杨素酯 83％ 99.7％ 17.56 实施例3 癸酰氯 正癸酸白杨素酯 85％ 99.9％ 17.23 实施例5 正丁酰氯 正丁酸白杨素酯 82％ 99.8％ 38.75 实施例6 正己酰氯 正己酸白杨素酯 86％ 99.7％ 26.37 实施例7 正辛酰氯 正辛酸白杨素酯 85％ 99.6％ 19.46 实施例8 十二酰氯 十二酸白杨素酯 71％ 99.8％ 14.79 实施例9 十四酰氯 十四酸白杨素酯 73％ 99.7％ 25.34 原料 —— 白杨素 —— —— 74.97
实施例1～9的产物均经核磁确证，结果如下：
上述结果，表明本发明链烃白杨素衍生物的制备方法，制得链烃白杨素衍生物纯度好、产率高，对癌细胞的半数抑制浓度小，抗癌活性高。应用于制备抗肿瘤药物的抗癌活性高。
其中，癸酰氯、正辛酰氯制得的癸酸白杨素酯以及辛酸白杨素酯产率较高且IC50值小，抗癌活性较高。
对比例1
本对比例与实施例3的区别在于：在S1步骤中，水浴加热溶解后，仅冷却至55℃。
对比例2
本对比例与实施例3的区别在于：在S3步骤中，反应时间为20min。
对比例3
本对比例与实施例3的区别在于：在S4步骤中，乙酸乙酯替换为丙酸乙酯。
对比例4
本对比例与实施例3的区别在于：在S5步骤中，仅使用乙酸乙酯进行洗涤。
二、将上述对比例1～4制得的链烃白杨素衍生物，计算产率，检测其纯度，并测试产物对癌细胞的半数抑制浓度(IC50)，结果如下：
产率 纯度 IC50(μmol/L) 实施例3 85％ 99.9％ 17.23 对比例1 56％ 87.4％ 21.46 对比例2 42％ 88.5％ 22.15 对比例3 38％ 86.3％ 25.37 对比例4 45％ 79.2％ 20.45
上述结果表明，本发明的采用的水浴加热后冷却处理，控制反应温度以及反应时间，以及采用乙醇、乙酸乙酯和石油醚结合进行洗涤纯化处理，使得本发明的链烃白杨素衍生物产率高、抗癌活性强，可更好应用于制备抗癌药物。
三、毒性动物实验
将本发明的各实施例制得的链烃白杨素衍生物进行毒性动物实验测试，测试结果表明本发明的链烃白杨素衍生物安全无毒。
综上，本发明链烃白杨素衍生物的制备方法，制得链烃白杨素衍生物纯度好、产率高，对癌细胞的半数抑制浓度小，抗癌活性高，可更好应用于制备抗癌药物。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。