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芳基-异*唑-4-基-咪唑并1,5-a吡啶衍生物.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101346377 B (45)授权公告日 2011.05.11 CN 101346377 B *CN101346377B* (21)申请号 200680049180.6 (22)申请日 2006.12.18 05112988.0 2005.12.27 EP C07D 471/04(2006.01) A61K 31/4188(2006.01) A61K 31/437(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (73)专利权人弗哈夫曼 - 拉罗切有限公司地址瑞士巴塞尔 (72)发明人 B布特尔曼 J董 B韩 H柯纳斯特 A托马斯 (74)专利代理机。

2、构北京市中咨律师事务所 11247 代理人黄革生林柏楠 WO 0134603 A2,2001.05.17, (54) 发明名称芳基 - 异唑 -4- 基 - 咪唑并 1,5-a 吡啶衍生物 (57) 摘要本发明涉及式 I 的芳基 - 异噁唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 5-a 吡啶衍生物及其可药用的酸加成盐，其中： R1为氢、卤素、羟基、低级烷基、苄氧基或 -O-(CH2)-(CO)- 五或六元杂芳基，所述杂芳基任选地被芳基和低级烷基取代； R2为氢、低级烷基或 -(CO)-Ra； R 3为氢、卤素、氰基、低级烷基或 -(CO)-Ra； R a。

3、为羟基、低级烷氧基、 NR R” ，其中 R和 R”各自独立地为氢、环烷基、五或六元杂环烷基、或者任选地被环烷基、氰基、五或六元杂环烷基或五或六元杂芳基取代的低级烷基。现已发现，这类化合物对 GABAA5 受体结合位点表现出高亲和性和选择性，并且可用作认知增强剂或用于治疗认知障碍如阿尔茨海默病。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2008.06.25 (86)PCT申请的申请数据 PCT/EP2006/069792 2006.12.18 (87)PCT申请的公布数据 WO2007/074089 EN 2007.07.05 (51)Int.Cl. 。

4、(56)对比文件审查员李士坤 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书 2 页说明书 8 页 CN 101346377 B1/2 页 2 1. 式 I 的芳基 - 异唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 5-a 吡啶衍生物及其可药用的酸加成盐：其中： R1为氢； R2为氢； R3为氢、氰基或 -(CO)-Ra； Ra为 C1-7烷氧基、 NR R” ，其中 R 和 R” 各自独立地为氢、五或六元杂环烷基、或者任选地被 C3-7环烷基取代的 C1-7烷基。 2. 如权利要求 1 所述的式 I 的芳基 - 异唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 2-a 。

5、吡啶衍生物，其中 R3为氢。 3. 如权利要求 1 所述的式 I 的芳基 - 异唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 2-a 吡啶衍生物，其中 R3为 -(CO)-Ra，其中的 Ra为 C1-7烷氧基或 NR R” ，其中 R 和 R” 各自独立地为氢、五或六元杂环烷基、或者任选地被 C3-7环烷基取代的 C1-7烷基。 4. 如权利要求 1 所述的式 I 的芳基 - 异唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 2-a 吡啶衍生物，其中所述化合物为 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲腈和 3-(5- 甲基 -3- 苯基。

6、- 异唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸甲酯。 5. 制备如权利要求 1 中所定义的式 I 化合物的方法，该方法包括将式 II 的化合物与亚硫酰氯反应得到式 III 的化合物，然后将式 III 的化合物与式 IV 的化合物反应权利要求书 CN 101346377 B2/2 页 3 得到式 V 的化合物，然后在合适的溶剂中将式 V 的化合物与脱水剂反应，得到式 I 的化合物，其中 R1、 R2和 R3具有如权利要求 1 中所述的定义。 6. 如权利要求 5 所述的方法，其中所述脱水剂为三氯氧化磷，所述溶剂为二氯乙烷。 7.包含如权利要求1-4。

7、中任意一项所述的一种或多种式I化合物和可药用赋形剂的药物。 8. 用作认知增强剂或用于治疗与 GABA A 5 亚基有关疾病的如权利要求 7 所述的药物，所述疾病选自认知障碍。 9. 用于治疗阿尔茨海默病的如权利要求 8 所述的药物。 10. 如权利要求 1-4 中任意一项所述的式 I 化合物在制备用作认知增强剂或用于治疗认知障碍的药物中的用途。 11. 如权利要求 1-4 中任意一项所述的式 I 化合物在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。权利要求书 CN 101346377 B1/8 页 4 芳基 - 异噁唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 5-a 吡啶衍生物 0001 。

8、本发明涉及式 I 的芳基 - 异噁唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 5-a 吡啶衍生物及其可药用的酸加成盐： 0002 0003 其中： 0004 R1为氢、卤素、羟基、低级烷基、苄氧基或 -O-(CH2)-(CO)- 五或六元杂芳基，所述杂芳基任选地被芳基和低级烷基取代； 0005 R2为氢、低级烷基或 -(CO)-Ra； 0006 R3为氢、卤素、氰基、低级烷基或 -(CO)-Ra； 0007 Ra为羟基、低级烷氧基、 NR R” ，其中 R 和 R” 各自独立地为氢、环烷基、五或六元杂环烷基、或者任选地被环烷基、氰基、五或六元杂环烷基或五或六元。

9、杂芳基取代的低级烷基。 0008 现已发现，该类化合物对GABA A5受体的结合位点表现出高亲和性和选择性，并且可用作认知增强剂或用于治疗认知障碍如阿尔茨海默病。 0009 主要的抑制性神经递质 - 氨基丁酸 (GABA) 被分为两大类： (1)GABA A 受体，该受体是配体门控离子通道超家族的成员；和(2)GABA B受体，该受体是G蛋白偶联受体家族的成员。GABA A 受体复合物是膜结合的异五聚体的蛋白聚合物，其主要由、和亚基组成。 0010 目前已经克隆并测序了GABA A受体的总共21个亚基。需要三种类型的亚基(、和)来构建重组的GABA A受体，。

10、该受体与来自哺乳动物脑细胞的天然GABA A受体在生物化学、电生理学和药理学功能上极为接近。有强有力的证据表明，苯二氮的结合位点位于和亚基之间。在重组 GABA A 受体中， 122 模拟了典型的 I 型 BzR 亚型的许多效应，而 222、 322 和 522 离子通道被称为 II 型 BzR。 0011 McNamara 和 Skelton 在 Psychobiology， 21 ： 101-108 中指出苯二氮受体的反相激动剂 -CCM 可以增强在 Morris 水迷宫中的空间学习能力。但是， -CCM 和其他常规的苯二氮受体反相激动剂是促惊厥剂或惊厥剂，。

11、从而妨碍了它们在人中用作认知增强剂。此外，这些化合物对 GABA A 受体亚基之间没有选择性，但是对于 GABA A1 和 / 或 2 和 / 或 3 受体结合位点相对而言没有活性的 GABA A5 受体部分或完全反相激动剂，则说明书 CN 101346377 B2/8 页 5 可以用于提供用来增强认知而减少或没有促惊厥活性的药物。也可使用对 GABA A1 和 / 或2和/或3受体结合位点没有活性、但对包含5亚基具有功能选择性的GABA A5 反相激动剂。然而，优选对 GABA A5 亚基有选择性并且在 GABA A1、 2 和 3 受体结合位点相对没有活性的 GABA 。

12、A5 反相激动剂。 0012 本发明的目标是式 I 的化合物及其可药用的盐、上述化合物的制备、含有它们的药物及其制备方法，以及上述化合物在控制或预防疾病、特别是上文所涉及的疾病或病症或在制备相应药物中的应用。 0013 按照本发明最优选的适应症是阿尔茨海默病。 0014 无论是单独出现还是组合出现，本说明书中所用的一般术语采用以下定义。 0015 本文所用的术语 “低级烷基” 表示含有 1-7 个、优选 1-4 个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。 0016 术语 “低级烷氧基” 表示通过氧原子连接的如上所定义的低级烷。

13、基基团。低级烷氧基的实例为甲氧基和乙氧基。 0017 术语 “芳基” 表示不饱和碳环，例如苯基、苄基或萘基。优选的芳基是苯基。 0018 术语 “卤素” 表示氯、碘、氟和溴。 0019 术语 “环烷基” 表示具有 3-7 个碳环原子的环状烷基环，例如环丙基、环戊基或环己基。 0020 术语 “杂环烷基” 表示含有 1-3 个杂原子如 N、 O 或 S 原子的饱和五或六元环。杂环烷基的实例为吗啉基或四氢吡喃基，以及在那些下文的实施例中具体举例说明的基团。 0021 术语 “杂芳基” 表示含有 1-3 个杂原子如 N、 O 或 S 原子的芳香族五或六元环。所述芳香族的杂芳基的。

14、实例为吡啶基、三唑基、异噁唑基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基或吡嗪基。 0022 术语 “可药用的酸加成盐” 包括与无机和有机酸如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐。 0023 优选的化合物具有低于100nM的结合活性(hKi)，并且对于GABA A5亚基有选择性，对 GABA A1、 2 和 3 受体结合位点相对没有活性。 0024 如上文所述，本发明化合物是式 I 的化合物及其可药用的酸加成盐，其中： 0025 R1为氢、卤素 ( 优选 Cl 和 Br)、羟基、。

15、低级烷基 ( 优选甲基 )、苄氧基或 -O-(CH2)-(CO)- 五或六元杂芳基 ( 优选异噁唑基 )，所述杂芳基任选地被芳基 ( 优选苯基 ) 和低级烷基 ( 优选甲基 ) 取代； 0026 R2为氢、低级烷基 ( 优选甲基或乙基 ) 或 -(CO)-Ra； 0027 R3为氢、卤素 ( 优选 Cl 或 Br)、氰基、低级烷基 ( 优选甲基或乙基 ) 或 -(CO)-Ra； 0028 Ra为羟基、低级烷氧基 ( 优选甲氧基或乙氧基 )、 NR R” ，其中 R 和 R” 各自独立地为氢、环烷基 ( 优选环丙基 )、五或六元杂环烷基 ( 优选吗啉基或。

16、四氢吡喃基 )、或者任选地被环烷基 ( 优选环丙基 )、氰基、五或六元杂环烷基 ( 优选吗啉基或四氢吡喃基 ) 或五或六元杂芳基 ( 优选吡啶基或呋喃基 ) 所取代的低级烷基。 0029 在某个本发明的式 I 化合物的实施方案中， R3为氢，例如以下化合物： 0030 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶。 0031 在某个本发明的式 I 化合物的实施方案中， R3为 -(CO)-Ra，其中的 Ra 为低级烷氧说明书 CN 101346377 B3/8 页 6 基或 NR R” ，其中 R 和 R” 各自独立地为氢、。

17、环烷基、五或六元杂环烷基、或者任选地被环烷基、氰基、五或六元杂环烷基或者五或六元杂芳基所取代的低级烷基，例如以下的化合物： 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲腈和 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸甲酯。 0032 式 I 的化合物及其可药用的盐可以通过本领域已知的方法，例如下述方法制备，该方法包括： 0033 将式 II 的化合物 0034 0035 与亚硫酰氯反应得到式 III 的化合物， 0036 0037 然后将其与式 IV 的化合。

18、物反应， 0038 0039 得到式 V 的化合物， 0040 说明书 CN 101346377 B4/8 页 7 0041 然后，将式 V 化合物在合适的溶剂如二氯乙烷中、与脱水剂如三氯氧化磷反应，得到式 I 的化合物 0042 0043 其中 R1、 R2和 R3如上所述，并且如果需要，将式 I 的化合物转化为可药用的盐。 0044 以下的反应流程更详细地描述了制备式 I 化合物的方法。 0045 流程图 1 0046 0047 在 0条件下，将 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酰氯 III 与 6- 氨基甲基 - 烟腈盐酸盐 IV( 流程图 1 中未显。

19、示 ) 在乙酸乙酯和水的混合物中反应，得到中间体酰胺 V-a，然后可以将其与三氯氧化磷在二氯乙烷中加热回流，得到式 I-a 的化合物。 0048 流程图 2 0049 说明书 CN 101346377 B5/8 页 8 0050 或者，在 0条件下，可以将 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酰氯 III 与 6- 氨基甲基 - 烟酸甲酯 IV( 流程图 2 中未显示 ) 在乙酸乙酯和水的混合物中反应，得到中间体酰胺V-b，然后可以将其与三氯氧化磷在二氯乙烷中加热回流，得到式I-b的化合物。随后，在甲醇、 THF、水的混合物中用氢氧化锂使该酯发生。

20、皂化反应，得到式I-c的酸，其可以用1-乙基 -3-(3 - 二甲氨基丙基 ) 碳二亚胺、 1- 羟基苯并三唑、三乙胺通过标准方法活化，接着与所选择的胺 (RNH2) 反应，得到式 I-d 的化合物。 0051 如前所述，式 I 化合物及其可药用的盐具有有价值的药理学特性。已发现本发明化合物是含有 5 亚基的 GABA A 受体的配体，并因此用于需要增强认知的治疗。 0052 按照下文给出的试验对这些化合物进行研究。 0053 膜的制备和结合试验 0054 通过与 3H 氟马西尼 (85Ci/mmol ；罗氏公司 (Roche) 竞争性结合表达大鼠 ( 稳定转染 ) 或人。

21、 ( 瞬时转染 ) 的受体 ( 包括成分 132、 232、 332 和 532) 的 HEK293 细胞来测定化合物对 GABA A 受体亚型的亲和性。 0055 将细胞碎片悬浮在 Krebs-tris 缓冲液 (4.8mM KCl， 1.2mM CaCl2， 1.2mM MgCl2， 120mM NaCl， 15mM Tris ； pH 7.5 ；结合试验缓冲液)中，在冰上用polytron匀浆约20秒，然后在 4下离心 60 分钟 (50000g ； Sorvall，转子： SM24 20000rpm)。将细胞碎片重悬在 Krebs-tris 缓冲液中并在冰上通过 polyt。

22、ron 匀浆约 15 秒。测定蛋白质 (Bradford 法，伯乐公司 (Bio-Rad)，将其制成 1mL 的小份并保存在 -80下。 0056 在 200mL 体积 (96 孔板 ) 中进行放射性配体结合试验，所述体积中含有 100mL 细胞膜、浓度为 1nM( 对于 1、 2、 3 亚基 ) 和 0.5nM( 对于 5 亚基 ) 的 3H 氟马西尼、以及 10-10-310-6M 范围内的待测化合物。非特异性的结合通过 10-5M 的地西泮来定义，其通常占总结合量的 5以下。试验在 4下孵育 1 小时以达到平衡，然后用 Packard 收集器通过过滤收集到GF/C 。

23、Uni-filter滤器(Packard)上，并用冰冷的洗涤缓冲液(50mM Tris ； pH7.5) 洗涤。干燥后，通过液体闪烁计数检测滤器上保留的放射性。利用 Excel-Fit( 微软公司 ) 来计算 Ki 值，该值是两次测定的平均值。 0057 将所附的实施例的化合物在上述试验中进行测试，发现优选的化合物具有 100nM 或更低的从大鼠 GABA A 受体 5 亚基置换 3H 氟马西尼的 Ki 值。在优选的实施方案中，说明书 CN 101346377 B6/8 页 9 相对于 1、 2 和 3 亚基，本发明的化合物对 5 亚基具有结合选择性。实施例 1 的化合物，。

24、即 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 - 咪唑并 1， 5-a 吡啶的 KinMh5 值为 77.9nM。 0058 式 I 化合物及其可药用的酸加成盐可以例如以药物制剂的形式用作药物。所述药物制剂可以例如以片剂、包衣片、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂或混悬剂的形式进行口服给药。然而，也可以例如以栓剂形式经直肠给药，或者例如以注射液的形式进行胃肠外给药。 0059 式 I 化合物及其可药用的酸加成盐可以与用于生产片剂、包衣片、糖锭剂和硬明胶胶囊的药用惰性的无机或有机赋形剂一起加工。可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂。

25、酸或其盐等作为例如片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的赋形剂。适合用于软明胶胶囊的赋形剂例如植物油、蜡类、脂肪、半固体和液体的多元醇等。 0060 用于制备溶液剂和糖浆剂的适宜的赋形剂例如水、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖等。 0061 用于注射溶液的适宜的赋形剂例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。 0062 用于栓剂的适宜的赋形剂例如天然的或硬化的油、蜡类、脂肪、半液体或液体多元醇等。 0063 此外，所述药物制剂还可以包含防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲液、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可。

26、以包含其他在治疗上有价值的物质。 0064 剂量可在较宽的范围内变化，当然，在每个具体病例中会根据个体需求进行调整。通常，在口服给药的情况下，每人约 10-1000mg 通式 I 的化合物的日剂量应当是适宜的，但在需要时也可超过所述上限。 0065 以下实施例是对本发明进行举例说明，而不是限制本发明。所有温度以摄氏度给出。 0066 实施例 A 0067 按照常规方式制备具有以下成分的片剂： 0068 mg/ 片 0069 活性物质 5 0070 乳糖 45 0071 玉米淀粉 15 0072 微晶纤维素 34 0073 硬脂酸镁 1 0074 片重 100 0075 实。

27、施例 B 0076 制备具有以下成分的胶囊： 0077 mg/ 胶囊 0078 活性物质 10 0079 乳糖 155 0080 玉米淀粉 30 说明书 CN 101346377 B7/8 页 10 0081 滑石粉 5 0082 胶囊填充重量 200 0083 将活性物质、乳糖和玉米淀粉首先在混合器中、然后在粉碎机中进行混合。将混合物重新回到混合器中，向其中加入滑石粉并充分混合。通过机器将该混合物填入硬明胶胶囊中。 0084 实施例 C 0085 制备具有以下成分的栓剂： 0086 mg/ 栓剂 0087 活性物质 15 0088 栓剂基质 1285 0089 总重 13。

28、00 0090 将栓剂基质在玻璃或钢容器中熔化，充分混合并冷却至 45。随后将活性物质的细粉加入其中，并搅拌到其完全分散。将混合物倾入适当大小的栓剂模型中，放置冷却，然后将栓剂从模型中取出并单个包装在蜡纸或金属箔中。 0091 以下实施例 1-5 用来举例说明本发明。不应该将它们视为对本发明的范围的限制，其仅仅是本发明的代表。 0092 实施例 1 0093 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 0094 a)5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酸 ( 吡啶 -2- 基甲基 )- 酰胺 0095 将 5- 甲基 -。

29、3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酸 (4.06g， 20mmol，可从商业上购买 ) 和亚硫酰氯 (5mL) 的混合物回流加热 3h。蒸发掉全部挥发物，得到黄色油状的 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酰氯 (4.4g， 93 )，其不经进一步纯化即用于下一步反应。向 2- 吡啶甲基胺 (0.182g， 1.68mmol) 在水 (2mL) 和乙酸乙酯 (4mL) 的水溶液混合物中一次性地加入碳酸氢钠 (362mg， 4.2mmol)。然后，在冰浴中保持 0并同时剧烈搅拌的条件下，滴加 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酰氯 (0.31g， 1。

30、.4mmol) 在乙酸乙酯 (2mL) 中的溶液。滴加完毕后，将反应混合物在室温下搅拌 18h。然后将所得的溶液用乙酸乙酯稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。然后将合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体状的标题化合物 (0.38g， 93 )。MS ： m/e ： 294.1M+H+。 0096 b)3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 0097 用注射器将三氯氧化磷 (0.47mL， 5mmol) 加入到 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺(0.293g， 1。

31、mmol)在二氯乙烷(5mL)的溶液中，并将所得混合物加热回流过夜。冷却至室温后，用二氯甲烷稀释该混合物。然后将冷的饱和碳酸氢钠(15mL) 缓慢加入，并将混合物用力搅拌 15min。分离有机层，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的萃取物用水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。用反相 0.1氨水 (25 ) 制备型 HPLC 进行纯化，得到橙色固体状的标题化合物 (0.13g， 47 )。MS ： m/e ： 276.1M+H+。 0098 实施例 2 0099 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲腈 0100 a)5- 甲基。

32、 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酸 (5- 氰基 - 吡啶 -2- 基甲基 )- 酰胺 0101 按照实施例 1a 所述的方法，用 6- 氨基甲基 - 烟腈盐酸盐 (0.17g， 1mmol) 代替说明书 CN 101346377 B8/8 页 11 2- 吡啶甲基胺，将 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酰氯 (0.266g， 1.2mmol) 转化为白色固体状的标题化合物 (296mg， 93 )。MS ： m/e ： 319.0M+H+。 0102 b)3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲腈。

33、0103 按照实施例 1b 所述的方法，将 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酸 (5- 氰基 - 吡啶 -2- 基甲基 )- 酰胺 (0.12g， 0.377mmol) 转化为浅黄色固体状的标题化合物 (60mg， 44 )。MS ： m/e ： 301.3M+H+。 0104 实施例 3 0105 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸甲酯 0106 a)6-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 羰基 )- 氨基 - 甲基 - 烟酸甲酯 0107 按照实施例1a所述的方法，用6-氨基甲基-烟酸甲酯。

34、(313mg， 1.88mmol)(J.Med. Chem.2002， 45， 5005-5022) 代替 2- 吡啶甲基胺，将 5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 甲酰氯 (0.5g， 2.26mmol)转化为白色固体状的标题化合物(0.56g， 85)。 MS ： m/e ： 352.0M+H+。 0108 b)3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸甲酯 0109 按照实施例 1b 所述的方法，将 6-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 羰基 )- 氨基-甲基-烟酸甲酯(0.56g， 1.6mmol。

35、)转化为黄色固体状的标题化合物(0.266g， 50)。 MS ： m/e ： 334.3M+H+。 0110 实施例 4 0111 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸环丙基甲基 - 酰胺 0112 a)3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸 0113 向 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸甲酯 (0.25g， 0.75mmol) 在水 (6mL) 和甲醇 (3mL) 中的混悬液中一次性加入一水。

36、合氢氧化锂 (0.21g， 5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌 4.5h。蒸发 ( 除去甲醇 ) 后，用乙醚萃取剩余的混合物。然后用 HCl 水溶液 (2N) 将水层酸化至约 pH5。过滤收集浅黄色的沉淀物，并用水洗涤，得到浅黄色固体的标题化合物 (0.2g， 83 )。MS ： m/e ： 320.1M+H+。 0114 b)3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸环丙基甲基 - 酰胺 0115 在室温下将含有 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶-6-甲酸(5。

37、8mg， 0.18mmol)、 1-乙基-3-(3 -二甲氨基丙基)碳二亚胺(52mg， 0.27mmol)、 1- 羟基苯并三唑 (24mg， 0.18mmol)、三乙胺 (60L， 0.45mmol) 和环丙基甲胺 (20mg， 0.27mmol) 的 DMF(1mL) 溶液搅拌过夜。用反相 (0.1氨水 (25 ) 制备型 HPLC 进行纯化，得到浅黄色固体状的标题化合物 (34mg， 50 )。MS ： m/e ： 373.3M+H+。 0116 实施例 5 0117 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸 ( 四氢 - 吡喃 -4- 基 )- 酰胺 0118 按照实施例 4b 所述的方法，用四氢吡喃 -4- 基胺 (28mg， 0.27mmol) 代替环丙基甲胺，将 3-(5- 甲基 -3- 苯基 - 异噁唑 -4- 基 )- 咪唑并 1， 5-a 吡啶 -6- 甲酸 (58mg， 0.18mmol)转化为浅黄色固体状的标题化合物(40mg， 55)。 MS ： m/e(ESI) ： 403.3M+H+。说明书。

摘要
申请专利号：	CN200680049180.6	申请日：	20061218
公开号：	CN101346377B	公开日：	20110511
当前法律状态：		有效性：	失效
法律详情：
IPC分类号：	C07D471/04,A61K31/4188,A61K31/437,A61P25/28	主分类号：	C07D471/04,A61K31/4188,A61K31/437,A61P25/28
申请人：	弗·哈夫曼-拉罗切有限公司
发明人：	B·布特尔曼,J·董,B·韩,H·柯纳斯特,A·托马斯
地址：	瑞士巴塞尔
优先权：	05112988.0
专利代理机构：	北京市中咨律师事务所	代理人：	黄革生;林柏楠
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内容摘要

本发明涉及式I的芳基-异噁唑-4-基-咪唑并[1，5-a]吡啶衍生物及其可药用的酸加成盐，其中：R1为氢、卤素、羟基、低级烷基、苄氧基或-O-(CH2)-(CO)-五或六元杂芳基，所述杂芳基任选地被芳基和低级烷基取代；R2为氢、低级烷基或-(CO)-Ra；R3为氢、卤素、氰基、低级烷基或-(CO)-Ra；Ra为羟基、低级烷氧基、NR’R”，其中R’和R”各自独立地为氢、环烷基、五或六元杂环烷基、或者任选地被环烷基、氰基、五或六元杂环烷基或五或六元杂芳基取代的低级烷基。现已发现，这类化合物对GABAAα5受体结合位点表现出高亲和性和选择性，并且可用作认知增强剂或用于治疗认知障碍如阿尔茨海默病。

权利要求书

1.式I的芳基-异唑-4-基-咪唑并[1，5-a]吡啶衍生物及其可药用的酸加成盐：其中：R为氢；R为氢；R为氢、氰基或-(CO)-R；R为C烷氧基、NR’R”，其中R’和R”各自独立地为氢、五或六元杂环烷基、或者任选地被C环烷基取代的C烷基。 2.如权利要求1所述的式I的芳基-异唑-4-基-咪唑并[1，2-a]吡啶衍生物，其中R为氢。 3.如权利要求1所述的式I的芳基-异唑-4-基-咪唑并[1，2-a]吡啶衍生物，其中R为-(CO)-R，其中的R为C烷氧基或NR’R”，其中R’和R”各自独立地为氢、五或六元杂环烷基、或者任选地被C环烷基取代的C烷基。 4.如权利要求1所述的式I的芳基-异唑-4-基-咪唑并[1，2-a]吡啶衍生物，其中所述化合物为3-(5-甲基-3-苯基-异唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲腈和3-(5-甲基-3-苯基-异唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯。 5.制备如权利要求1中所定义的式I化合物的方法，该方法包括将式II的化合物与亚硫酰氯反应得到式III的化合物，然后将式III的化合物与式IV的化合物反应得到式V的化合物，然后在合适的溶剂中将式V的化合物与脱水剂反应，得到式I的化合物，其中R、R和R具有如权利要求1中所述的定义。 6.如权利要求5所述的方法，其中所述脱水剂为三氯氧化磷，所述溶剂为二氯乙烷。 7.包含如权利要求1-4中任意一项所述的一种或多种式I化合物和可药用赋形剂的药物。 8.用作认知增强剂或用于治疗与GABA A α5亚基有关疾病的如权利要求7所述的药物，所述疾病选自认知障碍。 9.用于治疗阿尔茨海默病的如权利要求8所述的药物。 10.如权利要求1-4中任意一项所述的式I化合物在制备用作认知增强剂或用于治疗认知障碍的药物中的用途。 11.如权利要求1-4中任意一项所述的式I化合物在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。

说明书

本发明涉及式I的芳基-异噁唑-4-基-咪唑并[1，5-a]吡啶衍生物及其可药用的酸加成盐：

其中：

R1为氢、卤素、羟基、低级烷基、苄氧基或-O-(CH2)-(CO)-五或六元杂芳基，所述杂芳基任选地被芳基和低级烷基取代；

R2为氢、低级烷基或-(CO)-Ra；

R3为氢、卤素、氰基、低级烷基或-(CO)-Ra；

Ra为羟基、低级烷氧基、NR’R”，其中R’和R”各自独立地为氢、环烷基、五或六元杂环烷基、或者任选地被环烷基、氰基、五或六元杂环烷基或五或六元杂芳基取代的低级烷基。

现已发现，该类化合物对GABA Aα5受体的结合位点表现出高亲和性和选择性，并且可用作认知增强剂或用于治疗认知障碍如阿尔茨海默病。

主要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)被分为两大类：(1)GABA A受体，该受体是配体门控离子通道超家族的成员；和(2)GABA B受体，该受体是G蛋白偶联受体家族的成员。GABA A受体复合物是膜结合的异五聚体的蛋白聚合物，其主要由α、β和γ亚基组成。

目前已经克隆并测序了GABA A受体的总共21个亚基。需要三种类型的亚基(α、β和γ)来构建重组的GABA A受体，该受体与来自哺乳动物脑细胞的天然GABA A受体在生物化学、电生理学和药理学功能上极为接近。有强有力的证据表明，苯二氮的结合位点位于α和γ亚基之间。在重组GABA A受体中，α1β2γ2模拟了典型的I型BzR亚型的许多效应，而α2β2γ2、α3β2γ2和α5β2γ2离子通道被称为II型BzR。

McNamara和Skelton在Psychobiology，21：101-108中指出苯二氮受体的反相激动剂β-CCM可以增强在Morris水迷宫中的空间学习能力。但是，β-CCM和其他常规的苯二氮受体反相激动剂是促惊厥剂或惊厥剂，从而妨碍了它们在人中用作认知增强剂。此外，这些化合物对GABA A受体亚基之间没有选择性，但是对于GABA Aα1和/或α2和/或α3受体结合位点相对而言没有活性的GABA Aα5受体部分或完全反相激动剂，则可以用于提供用来增强认知而减少或没有促惊厥活性的药物。也可使用对GABA Aα1和/或α2和/或α3受体结合位点没有活性、但对包含α5亚基具有功能选择性的GABA Aα5反相激动剂。然而，优选对GABA Aα5亚基有选择性并且在GABA Aα1、α2和α3受体结合位点相对没有活性的GABA Aα5反相激动剂。

本发明的目标是式I的化合物及其可药用的盐、上述化合物的制备、含有它们的药物及其制备方法，以及上述化合物在控制或预防疾病、特别是上文所涉及的疾病或病症或在制备相应药物中的应用。

按照本发明最优选的适应症是阿尔茨海默病。

无论是单独出现还是组合出现，本说明书中所用的一般术语采用以下定义。

本文所用的术语“低级烷基”表示含有1-7个、优选1-4个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。

术语“低级烷氧基”表示通过氧原子连接的如上所定义的低级烷基基团。低级烷氧基的实例为甲氧基和乙氧基。

术语“芳基”表示不饱和碳环，例如苯基、苄基或萘基。优选的芳基是苯基。

术语“卤素”表示氯、碘、氟和溴。

术语“环烷基”表示具有3-7个碳环原子的环状烷基环，例如环丙基、环戊基或环己基。

术语“杂环烷基”表示含有1-3个杂原子如N、O或S原子的饱和五或六元环。杂环烷基的实例为吗啉基或四氢吡喃基，以及在那些下文的实施例中具体举例说明的基团。

术语“杂芳基”表示含有1-3个杂原子如N、O或S原子的芳香族五或六元环。所述芳香族的杂芳基的实例为吡啶基、三唑基、异噁唑基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基或吡嗪基。

术语“可药用的酸加成盐”包括与无机和有机酸如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐。

优选的化合物具有低于100nM的结合活性(hKi)，并且对于GABA Aα5亚基有选择性，对GABA Aα1、α2和α3受体结合位点相对没有活性。

如上文所述，本发明化合物是式I的化合物及其可药用的酸加成盐，其中：

R1为氢、卤素(优选Cl和Br)、羟基、低级烷基(优选甲基)、苄氧基或-O-(CH2)-(CO)-五或六元杂芳基(优选异噁唑基)，所述杂芳基任选地被芳基(优选苯基)和低级烷基(优选甲基)取代；

R2为氢、低级烷基(优选甲基或乙基)或-(CO)-Ra；

R3为氢、卤素(优选Cl或Br)、氰基、低级烷基(优选甲基或乙基)或-(CO)-Ra；

Ra为羟基、低级烷氧基(优选甲氧基或乙氧基)、NR’R”，其中R’和R”各自独立地为氢、环烷基(优选环丙基)、五或六元杂环烷基(优选吗啉基或四氢吡喃基)、或者任选地被环烷基(优选环丙基)、氰基、五或六元杂环烷基(优选吗啉基或四氢吡喃基)或五或六元杂芳基(优选吡啶基或呋喃基)所取代的低级烷基。

在某个本发明的式I化合物的实施方案中，R3为氢，例如以下化合物：

3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶。

在某个本发明的式I化合物的实施方案中，R3为-(CO)-Ra，其中的Ra 为低级烷氧基或NR’R”，其中R’和R”各自独立地为氢、环烷基、五或六元杂环烷基、或者任选地被环烷基、氰基、五或六元杂环烷基或者五或六元杂芳基所取代的低级烷基，例如以下的化合物：3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲腈和3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯。

式I的化合物及其可药用的盐可以通过本领域已知的方法，例如下述方法制备，该方法包括：

将式II的化合物

与亚硫酰氯反应得到式III的化合物，

然后将其与式IV的化合物反应，

得到式V的化合物，

然后，将式V化合物在合适的溶剂如二氯乙烷中、与脱水剂如三氯氧化磷反应，得到式I的化合物

其中R1、R2和R3如上所述，并且如果需要，将式I的化合物转化为可药用的盐。

以下的反应流程更详细地描述了制备式I化合物的方法。

流程图1

在0℃条件下，将5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酰氯III与6-氨基甲基-烟腈盐酸盐IV(流程图1中未显示)在乙酸乙酯和水的混合物中反应，得到中间体酰胺V-a，然后可以将其与三氯氧化磷在二氯乙烷中加热回流，得到式I-a的化合物。

流程图2

或者，在0℃条件下，可以将5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酰氯III与6-氨基甲基-烟酸甲酯IV(流程图2中未显示)在乙酸乙酯和水的混合物中反应，得到中间体酰胺V-b，然后可以将其与三氯氧化磷在二氯乙烷中加热回流，得到式I-b的化合物。随后，在甲醇、THF、水的混合物中用氢氧化锂使该酯发生皂化反应，得到式I-c的酸，其可以用1-乙基-3-(3’-二甲氨基丙基)碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、三乙胺通过标准方法活化，接着与所选择的胺(RNH2)反应，得到式I-d的化合物。

如前所述，式I化合物及其可药用的盐具有有价值的药理学特性。已发现本发明化合物是含有α5亚基的GABA A受体的配体，并因此用于需要增强认知的治疗。

按照下文给出的试验对这些化合物进行研究。

膜的制备和结合试验

通过与[3H]氟马西尼(85Ci/mmol；罗氏公司(Roche))竞争性结合表达大鼠(稳定转染)或人(瞬时转染)的受体(包括成分α1β3γ2、α2β3γ2、α3β3γ2和α5β3γ2)的HEK293细胞来测定化合物对GABA A受体亚型的亲和性。

将细胞碎片悬浮在Krebs-tris缓冲液(4.8mM KCl，1.2mM CaCl2， 1.2mM MgCl2，120mM NaCl，15mM Tris；pH 7.5；结合试验缓冲液)中，在冰上用polytron匀浆约20秒，然后在4℃下离心60分钟(50000g；Sorvall，转子：SM24＝20000rpm)。将细胞碎片重悬在Krebs-tris缓冲液中并在冰上通过polytron匀浆约15秒。测定蛋白质(Bradford法，伯乐公司(Bio-Rad))，将其制成1mL的小份并保存在-80℃下。

在200mL体积(96孔板)中进行放射性配体结合试验，所述体积中含有100mL细胞膜、浓度为1nM(对于α1、α2、α3亚基)和0.5nM(对于α5亚基)的[3H]氟马西尼、以及10-10-3×10-6M范围内的待测化合物。非特异性的结合通过10-5M的地西泮来定义，其通常占总结合量的5％以下。试验在4℃下孵育1小时以达到平衡，然后用Packard收集器通过过滤收集到GF/C Uni-filter滤器(Packard)上，并用冰冷的洗涤缓冲液(50mM Tris；pH7.5)洗涤。干燥后，通过液体闪烁计数检测滤器上保留的放射性。利用Excel-Fit(微软公司)来计算Ki值，该值是两次测定的平均值。

将所附的实施例的化合物在上述试验中进行测试，发现优选的化合物具有100nM或更低的从大鼠GABA A受体α5亚基置换[3H]氟马西尼的Ki值。在优选的实施方案中，相对于α1、α2和α3亚基，本发明的化合物对α5亚基具有结合选择性。实施例1的化合物，即3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基-咪唑并[1，5-a]吡啶的Ki[nM]hα5值为77.9nM。

式I化合物及其可药用的酸加成盐可以例如以药物制剂的形式用作药物。所述药物制剂可以例如以片剂、包衣片、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂或混悬剂的形式进行口服给药。然而，也可以例如以栓剂形式经直肠给药，或者例如以注射液的形式进行胃肠外给药。

式I化合物及其可药用的酸加成盐可以与用于生产片剂、包衣片、糖锭剂和硬明胶胶囊的药用惰性的无机或有机赋形剂一起加工。可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐等作为例如片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的赋形剂。适合用于软明胶胶囊的赋形剂例如植物油、蜡类、脂肪、半固体和液体的多元醇等。

用于制备溶液剂和糖浆剂的适宜的赋形剂例如水、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖等。

用于注射溶液的适宜的赋形剂例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。

用于栓剂的适宜的赋形剂例如天然的或硬化的油、蜡类、脂肪、半液体或液体多元醇等。

此外，所述药物制剂还可以包含防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲液、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以包含其他在治疗上有价值的物质。

剂量可在较宽的范围内变化，当然，在每个具体病例中会根据个体需求进行调整。通常，在口服给药的情况下，每人约10-1000mg通式I的化合物的日剂量应当是适宜的，但在需要时也可超过所述上限。

以下实施例是对本发明进行举例说明，而不是限制本发明。所有温度以摄氏度给出。

实施例A

按照常规方式制备具有以下成分的片剂：

mg/片

活性物质 5

乳糖 45

玉米淀粉 15

微晶纤维素 34

硬脂酸镁 1

片重100

实施例B

制备具有以下成分的胶囊：

mg/胶囊

活性物质 10

乳糖 155

玉米淀粉 30

滑石粉 5

胶囊填充重量 200

将活性物质、乳糖和玉米淀粉首先在混合器中、然后在粉碎机中进行混合。将混合物重新回到混合器中，向其中加入滑石粉并充分混合。通过机器将该混合物填入硬明胶胶囊中。

实施例C

制备具有以下成分的栓剂：

mg/栓剂

活性物质 15

栓剂基质 1285

总重1300

将栓剂基质在玻璃或钢容器中熔化，充分混合并冷却至45℃。随后将活性物质的细粉加入其中，并搅拌到其完全分散。将混合物倾入适当大小的栓剂模型中，放置冷却，然后将栓剂从模型中取出并单个包装在蜡纸或金属箔中。

以下实施例1-5用来举例说明本发明。不应该将它们视为对本发明的范围的限制，其仅仅是本发明的代表。

实施例1

3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶

a)5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺

将5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酸(4.06g，20mmol，可从商业上购买)和亚硫酰氯(5mL)的混合物回流加热3h。蒸发掉全部挥发物，得到黄色油状的5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酰氯(4.4g，93％)，其不经进一步纯化即用于下一步反应。向2-吡啶甲基胺(0.182g，1.68mmol)在水(2mL)和乙酸乙酯(4mL)的水溶液混合物中一次性地加入碳酸氢钠(362mg，4.2mmol)。然后，在冰浴中保持0℃并同时剧烈搅拌的条件下，滴加5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酰氯(0.31g，1.4mmol)在乙酸乙酯(2mL)中的溶液。滴加完毕后，将反应混合物在室温下搅拌18h。然后将所得的溶液用乙酸乙酯稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。然后将合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体状的标题化合物(0.38g，93％)。MS：m/e：294.1[M+H]+。

b)3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶

用注射器将三氯氧化磷(0.47mL，5mmol)加入到5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺(0.293g，1mmol)在二氯乙烷(5mL)的溶液中，并将所得混合物加热回流过夜。冷却至室温后，用二氯甲烷稀释该混合物。然后将冷的饱和碳酸氢钠(15mL)缓慢加入，并将混合物用力搅拌15min。分离有机层，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的萃取物用水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。用反相[0.1％氨水(25％)]制备型HPLC进行纯化，得到橙色固体状的标题化合物(0.13g，47％)。MS：m/e：276.1[M+H]+。

实施例2

3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲腈

a)5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酸(5-氰基-吡啶-2-基甲基)-酰胺

按照实施例1a所述的方法，用6-氨基甲基-烟腈盐酸盐(0.17g，1mmol)代替2-吡啶甲基胺，将5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酰氯(0.266g，1.2mmol)转化为白色固体状的标题化合物(296mg，93％)。MS：m/e：319.0[M+H]+。

b)3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲腈

按照实施例1b所述的方法，将5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酸(5-氰基-吡啶-2-基甲基)-酰胺(0.12g，0.377mmol)转化为浅黄色固体状的标题化合物(60mg，44％)。MS：m/e：301.3[M+H]+。

实施例3

3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯

a)6-{[(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-羰基)-氨基]-甲基}-烟酸甲酯

按照实施例1a所述的方法，用6-氨基甲基-烟酸甲酯(313mg，1.88mmol)(J.Med.Chem.2002，45，5005-5022)代替2-吡啶甲基胺，将5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-甲酰氯(0.5g，2.26mmol)转化为白色固体状的标题化合物(0.56g，85％)。MS：m/e：352.0[M+H]+。

b)3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯

按照实施例1b所述的方法，将6-{[(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-羰基)-氨基]-甲基}-烟酸甲酯(0.56g，1.6mmol)转化为黄色固体状的标题化合物(0.266g，50％)。MS：m/e：334.3[M+H]+。

实施例4

3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸环丙基甲基-酰胺

a)3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸

向3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯(0.25g，0.75mmol)在水(6mL)和甲醇(3mL)中的混悬液中一次性加入一水合氢氧化锂(0.21g，5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4.5h。蒸发(除去甲醇)后，用乙醚萃取剩余的混合物。然后用HCl水溶液(2N)将水层酸化至约pH5。过滤收集浅黄色的沉淀物，并用水洗涤，得到浅黄色固体的标题化合物(0.2g，83％)。MS：m/e：320.1[M+H]+。

b)3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸环丙基甲基-酰胺

在室温下将含有3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸(58mg，0.18mmol)、1-乙基-3-(3’-二甲氨基丙基)碳二亚胺(52mg，0.27mmol)、1-羟基苯并三唑(24mg，0.18mmol)、三乙胺(60μL，0.45mmol)和环丙基甲胺(20mg，0.27mmol)的DMF(1mL)溶液搅拌过夜。用反相(0.1％氨水(25％))制备型HPLC进行纯化，得到浅黄色固体状的标题化合物(34mg，50％)。MS：m/e：373.3[M+H]+。

实施例5

3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸(四氢-吡喃-4-基)-酰胺

按照实施例4b所述的方法，用四氢吡喃-4-基胺(28mg，0.27mmol)代替环丙基甲胺，将3-(5-甲基-3-苯基-异噁唑-4-基)-咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸(58mg，0.18mmol)转化为浅黄色固体状的标题化合物(40mg，55％)。MS：m/e(ESI)：403.3[M+H]+。